传染性非典型肺炎患者体液免疫特征初步研究

目的：探讨传染性非典型肺炎(severe acute respiratory syndrome，SARS)患者特异性体液免疫特征。方法：采用ELISA技术检测SARS患者血清中特异性IgG和IgM水平。结果：SARS患者住院期间血清特异性IgG水平持续升高，阳性检出率为77．3％；特异性IgM抗体水平住院3周内持续升高，第3周达到最高值，阳性检出率达60．O％，第4周则迅速下降。SARS患者血清IgM阳性出现时间早于IgG 1周。结论：SARS患者血清中均存在特异性IgG抗体，而特异性IgM只存在70％～80％患者血清中。SARS特异性抗体产生的时间和变化特点相似于其它传染性疾病。     

正常人群血清中SARS病毒特异抗体的检出

[目的]检测正常人群血清中抗体，了解SARS病毒非致病性感染状况。[方法]利用SARS病毒全病毒裂解液抗原酶联免疫法检测81例志愿者血清中的SARS病毒抗体IgG和IgM。[结果]81例血清中，抗SARS病毒IgG抗体阳性3例，阴性78例；IgM抗体均为阴性。[结论]大连地区正常人群可能有过sARS病毒或类似病毒的非致病性隐性感染。     

SARS-CoV抗体实验诊断中的假阳性原因分析

目的：探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体在SARS病原学诊断中的假阳性问题。方法：应用酶联免疫吸附试验(EUSA)和荧光定量RT-PCR技术检测了16l例非SARS患者SARS-Cov抗体的阳性率。结果：59例正常对照中，IgG抗体的阳性率为3．4％(2／59)；40例肿瘤患者中，IgG抗体阳性率为17．5％(7／40)；3l例自身免疫病患者中，IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为6．5％(2／31)和22．6％(7／31)，IgG抗体和IgM抗体同时阳性为6．5％(2／31)；3l例系统性红斑狼疮(SI正)患者中，IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为29．0％(9／31)和58．1％(18／31)，IgG抗体和IgM抗体同时阳性为22．6％(7／31)。IgM和IgG抗体诊断SARS的假阳性率分别为6．8％和21．1％，两种抗体同时诊断SARS的假阳性率为5．6％。经RT—PCR证实上述阳性均为假阳性。结论：两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率，提高诊断的特异性。出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。     

SARS病房工作的医护人员血清中特异抗体测定分析

目的检测密切接触SARS患者的医护人员血清中SARS病毒IgM及IgG抗体的水平,对SARS病毒有无隐性感染作初步调查.方法分别用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,ⅡFA)检测200例正常人,200例在SARS病房工作1个月的医护人员血清中SARS病毒IgM及IgG抗体的水平.结果正常人及医护人员血清中未检测到SARS病毒IgM及IgG抗体.结论不同于普通的流行性传染性疾病,SARS病毒可能不具有隐性感染性.     

张家口市SARS患者、疑似病例、留观及密切接触医护人员血清中IgG、IgM抗体测定

目的：为临床诊断及排除严重急性呼吸综合征(SARS)提供依据和对留观及密切接触医护人员有无感染作初步调查。方法：用酶联免疫吸附测定(ELISA)53例临床诊断病例、29例疑似病例、63例留观及114例密切接触医护人员的血清中SARS冠状病毒IgG、IgM抗体。结果：SARS临床诊断病例IgG抗体阳性21例，IgM抗体阳性18例，其中有17例IgG、IgM抗体均为阳性，总阳性率为41．5％；留观人员IgG抗体阳性1例；其他均为阴性。结论：ELISA测定血清抗SARS冠状病毒抗体阳性病例可确诊感染病毒，对于观察期后(一般为21d)人员，阴性结果可以排除感染。     

我院对SARS患者、疑似病例及正常人群SARS病毒抗体的检测和追踪

目的了解广州地区各类人群的SARS病毒抗体的检出情况及SARS患者抗体产生的规律。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)对各类人群的血清进行SARS病毒抗体的检测，并对45例SARS患者追踪1年半。结果SARS病毒抗体阳性率分别是：临床确诊SARS患者44、5％(105／236)；临床SARS疑似病例和发热查因的其他病例7、4％(10／135)；正常体检人群1．0％(1／105)；其他疾病2．5％(2／80)；医院工作人员5．7％(29／505)。对45例SARS患者追踪1年半，SARS—IgG抗体的滴度仍维持较高的水平。5例SARS患者血清及她们的新生婴儿脐血清的SARS—IgG的滴度非常接近，出生3个月后，母亲SARS—IgG的滴度还维持在高水平，而婴儿的滴度下降较快，2例呈弱阳性，4例呈阴性。结论。SARS病毒IgM抗体消失较早，发病60天后检测不到，是近期感染的标志。IgG持续时间较长，1年半仍维持较高的水平，是近期或曾经感染的标志。暂未发现母婴垂直传播病例。医院的SARS感染率远高于正常人群，且可能存在隐性感染。     

中枢神经系统感染性疾病的病原学研究

目的：探讨中枢神经系统感染性疾病的病原学特点。方法：分别用双抗体夹心ELISA法和传统的细菌及真菌培养等方法检测患者血清IgM，IgG抗体和脑脊髓液中病原体。结果：823例中枢神经系统急症患者中有126例(15．3％)单纯疱疹病毒IgM和／或IgG阳性，其中10岁以下年龄为高峰。10(1．2％)例巨细胞病毒特异性IgM和／或IgG阳性；8(0.97％)例水痘-带状疱疹病毒特异性IgM和／或IgG阳性；7(0．85％)例为结核性脑膜炎；6(0．72％)例为新生隐球菌性脑膜炎；1(0.12％)例为脑膜炎球菌性脑膜炎。结论：病毒，特别是单纯疱疹病毒，是中枢神经系统感染性疾病的常见病原：结核杆菌和新生隐球菌感染也占一定比例。     

SARS病毒抗体效价测定方法的建立及应用

目的 :建立抗SARSIgG和IgM抗体效价定量测定方法。方法 :①在SARS冠状病毒抗体IgG诊断试剂盒和IgM诊断试剂盒的基础上 ,通过选择IgG、IgM标准血清样本 ,作系列稀释 ,建立效价和吸光度标准曲线 ,采用电子表格获得最佳拟合方程式 ,应用于标本血清效价计算。②应用该方法测定 80例康复期SARS患者血清SARSIgG、IgM抗体及其效价。 结果 :①取得了良好的拟合方程式 ,R2 均可大于 0 .99。② 80名康复期SARS住院患者血清中SARS病毒IgG抗体 6 1名阳性 ,效价为 31.9± 4 0 .0 (1.1～ 2 6 4 .0 ) ,偏度系数为 3.6 77;19例阴性。 80名康复期SARS住院患者血清SARS病毒IgM抗体 19名阳性 ,效价为 2 .5 9± 1.35 (1.1～ 5 .5 ) ,偏度系数为 0 .92 7。结论 :①SARS冠状病毒抗体定性诊断试剂盒具有良好的敏感性和特异性 ,在选择IgG、IgM标准血清和采用电子表格得出相应的最佳拟合方程式后 ,可计算出患者血清SARS病毒抗体效价。②SARS病毒抗体阳性的康复期SARS患者血清中的SARSIgG抗体呈偏态分散分布 ,无明显规律可循     

SARS患者血清特异性抗体的检测及临床诊断意义

目的 :评估临床诊断SARS患者血清特异性抗体产生规律对疾病诊断的意义。方法 :随机选取不同病程临床诊断为SARS的患者 15 6例 ,通过酶联免疫吸附的方法分别检测患者血清中特异性IgG型和IgM型抗体水平 ,分析SARS特异性抗体的产生与疾病病程的关系及对临床诊断的意义。结果 :血清IgG型抗体阳性 118例 ,阳性率为 75 .6 %。IgM型抗体阳性 6 5例 ,阳性率为 4 1.7%。IgG、IgM均为阴性 37例 ,占 2 3.7%。IgG型抗体产生阳性率随病程延长而逐渐增高 ,病程为 5 0～ 6 0d组阳性率最高达到了 94 .5 %。IgM型抗体阳性率也随病程延长而逐渐增高 ,但在病程 4 0～ 5 0d抗体阳性率即达最高 ,随后迅速下降。IgG与IgM抗体阳性率在其各自不同病程差异均十分显著 (P <0 .0 1)结论 :SARS患者血清特异性抗体检测可以作为SARS临床诊断的重要参考指标 ,但目前尚不宜作为诊断的金标准 ,SARS特异性IgG、IgM抗体同为阴性不能完全排除SARS诊断     

SARS流行期间高暴露医护人员SARS病毒抗体检测分析

目的探讨在2003年SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome)流行期间,曾经参加救治SARS病例的医护人员(高暴露人群)SARS冠状病毒(SARS-CoV)抗体产生情况,为防范SARS提供指导意义。方法运用酶联免疫(ELISA)方法,同时检测95例SARS患者、313例高暴露人群和90例正常对照组血清SARS病毒抗体,包括IgM和IgG。结果95例临床确诊的SARS患者IgM抗体总阳性率为91.6%,IgG抗体总阳性率为97.9%,所有高暴露人群和正常对照组抗SARS-CoVIgM和抗SARS-CoVIgG均为阴性。结论对SARS流行期间不同人群SARS病毒血清抗体检测表明,313名医护人员和90名正常健康人中,未发现隐性感染者,SARS病毒抗体检测,可以为临床诊断、预防和流行病学调查等提供指导意义。     

SARS patients-derived human recombinant antibodies to S and M proteins efficiently neutralize SARS-coronavirus infectivity

Objective To develop a specific SARS virus-targeted antibody preparation for emergent prophylaxis and treatment of SARS virus infection. Methods By using phage display technology, we constructed a naive antibody library from convalescent SARS patient lymphocytes. To obtain the neutralizing antibody to SARS virus surface proteins, the library panning procedure was performed on purified SARS virions and the specific Fab antibody clones were enriched by four rounds of repeated panning procedure and screened by highthroughput selection. The selected Fab antibodies expressed in the periplasma of E. coli were soluble and further purified and tested for their binding properties and antiviral function to SARS virus. The functional Fab antibodies were converted to full human IgG antibodies with recombinant baculovirus/insect cell systems and their neutralizing activities were further determined. Results After four rounds of the panning, a number of SARS-CoV virus-targeted human recombinant Fab antibodies were isolated from the SARS patient antibody library. Most of these were identified to recognize both natural and recombinant SARS spike （S） proteins, two Fab antibodies were specific for the virus membrane （M） protein, only one bound to SARS-CoV nucleocapsid protein. The SARS-CoV S and M protein-targeted Fab or IgG antibodies showed significant neutralizing activities in cytopathic effect （CPE） inhibition neutralization test, these antibodies were able to completely neutralize the SARS virus and protect the Vero cells from CPE after virus infection. However, the N protein-targeted Fab or IgG antibodies failed to neutralize the virus. In addition, the SARS N protein-targeted human Fab antibody reacted with the denatured N proteins, whereas none of the S and M protein specific neutralizing antibodies did. These results suggested that the S and M protein-specific neutralizing antibodies could recognize conformational epitopes which might be involved in the binding of virions to cellular receptors and the fusion activity of the virus Conclusion The SARS-CoV spike protein and membrane proteins are able to elicite efficient neutralizing antibodies in SARS patients. The neutralizing antibodies we generated in this study may be more promising candidates for prophylaxis and treatment of SARS infection.     

Evaluation by indirect immunofluorescent assay and enzyme linked immunosorbent assay of the dynamic changes of serum antibody responses against severe acute respiratory syndrome coronavirus

Background Severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) is a newly emerging virus that gives rise to SARS patients with high rates of infectivity and fatality. To study the humoral immune responses to SARSCoV, the authors evaluated lgG and IgM specific antibodies in patients‘ sera.Methods Two methods, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescent assay (IFA) , were used to detect specific serum IgG and IgM against SARS-CoV in 98 SARS patients and 250 controls consisting of patients with pneumonia, heahh-care professionals and healthy subjects. The serum antibody profiles were investigated at different times over one and a half years in 18 of the SARS patients.Results The sensitivity and specificity of ELISA for detecting IgG against SARS-CoV were 100.0% and 97.2% and for IgM 89. 8% and 97.6% respectively; the figures using IFA for IgG were 100.0% and 100.0% and for IgM 81.8% and 100.0% respectively. During the first seven days of the antibodies trace test, no IgG and IgM were detected, but on day 15, IgG response increased dramatically, reaching a peak on day 60,remaining high up to day 180 and decreasing gradually until day 540. On day 15,IgM was detected, rapidly reached a peak, then declined gradually until day 180 when IgM was undetectable.Conclusion The detection of antibodies against SARS virus is helpful in the clinical diagnosis of SARS.     

不同人群抗SARS冠状病毒特异性抗体血清学检测与分析

目的 :探索不同人群中抗SARS冠状病毒特异性抗体的发生、发展及分布规律 ;评价间接ELISA方法检测SARS冠状病毒IgG、IgM特异性抗体试剂盒及改进方法。 方法 :分别获取SARS流行前无偿献血者标本 3990份 ,一线抗SARS医务人员标本 397份和临床确诊的SARS患者标本 15 7份 ,采用ELISA方法进行SARS冠状病毒特异性抗体检测。结果 :SARS流行前无偿献血者标本 3990份共检出IgG抗体阳性标本 16份 ,阳性率为 0 .4 0 % ;IgM抗体阳性标本 0份 ,阳性率为 0 %。一线抗SARS医务人员标本 397份 ,共检出IgG抗体阳性标本 2份 ,阳性率为 0 .5 0 % ;IgM抗体均为阴性。临床确诊的SARS患者标本 15 7份 ,共检出IgG抗体阳性标本 119份 ,阳性率为 75 .79% ;IgM阳性标本 6 8份 ,阳性率为 4 3.31%。结论 :一线抗SARS医务人员与SARS流行前无偿献血者IgG、IgM抗体阳性率无显著差异 (P =0 .76 >0 .0 5 ) ;采用该SARS冠状病毒 (变异株 )IgG抗体试剂盒检测SARS流行前无偿献血者人群存在一定的阳性率 ,说明该试剂盒包被的抗原与其它免疫球蛋白 (IgG)有交叉反应 ,有待进一步改进     

SARS病毒S1蛋白N端片段在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定

目的:获得纯化的重组SARS病毒S1蛋白N端部分,研究其与机体产生针对SARS病毒免疫应答的规律和机制.方法:将编码SARS病毒S1蛋白N端334个氨基酸残基的基因进行克隆,并在原核表达系统中表达,获得了纯化的重组蛋白.利用SARS患者恢复期已知的SARS抗体阳性血清,鉴定纯化的重组S1蛋白片段.结果:克隆表达的重组蛋白基因序列与公布的SARS病毒S1蛋白N端的基因序列相同,所表达的重组蛋白相对分子质量约为64 000.3份SARS患者恢复期的血清均与重组蛋白反应,在相对分子质量64 000处形成特异性的反应条带,而来自SARS流行前的正常人对照血清则不能与重组蛋白反应.结论:获得的重组蛋白与SARS病毒抗体呈现特异性的反应,为进一步研究SARS病毒感染免疫应答机制和制备SARS病毒的重组疫苗奠定基础.     

SARS相关抗肺自身抗体产生机制的初步研究

目的:检测严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中抗SARS病毒抗体与肺组织的反应性.方法:采用酶联免疫吸附法检测SARS患者恢复期血清中抗SARS病毒抗体,并采用肺组织与抗体共同孵育的方法,吸附抗SARS病毒抗体中同肺组织反应的SARS相关抗体.结果:与肺组织共同孵育后,抗SARS病毒抗体被部分中和,中和率为13.6％～32.2％.结论:部分抗SARS病毒抗体可以与肺组织反应,SARS病毒抗原同肺组织抗原有部分同源性.机体对SARS病毒抗原和肺组织的交叉免疫性可能是SARS相关抗肺自身抗体产生的原因.     

严重急性呼吸综合征病毒基因检测和特异性抗体检测的诊断意义分析

目的探讨严重急性呼吸综合征病毒基因检测和特异性抗体检测的诊断意义和价值。方法采用巢式反转录PCR和ELISA法分别检测健康人、普通发热患者、SARS密切接触医务人员及不同时期SARS患者痰标本中SARS病毒核酸和血清标本中特异性抗体IgG和IgM。结果SARS患者住院1～58d期间,采用巢式RT-PCR检测痰SARS病毒基因,52例患者中33例阳性,阳性率63.5%;而采用间接ELISA检测血清抗SARS病毒抗体,52例患者中30例阳性,阳性率为57.7%。2种方法均阳性的有15例,均阴性的有6例。2种病原学诊断方法检测20例正常人、15例发热非SARS患者和20例SARS密切接触医务人员,结果均为阴性。住院1～13d组(92.9%)巢式RT-PCR基因阳性率明显高于ELISA特异性抗体阳性率(7.1%);住院37～58d组巢式RT-PCR基因阳性率(47.4%)则明显低于ELISA特异性抗体阳性率(94.7%)(P<0.01)。结论痰中SARS病毒基因检测可用于SARS的早期诊断,这对于提前确诊和治疗SARS患者,尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

SARS病毒基因和特异性抗体检测效果评估

目的 :评估严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒基因检测和特异性抗体检测效果。方法 :采用巢式反转录PCR检测健康人、普通发热患者、不同时期 SARS患者痰标本中的 SARS病毒核酸即 RNA;采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)法检测上述几组血清标本中的特异性抗体 Ig G和 Ig M。结果 :SARS患者住院 6 d～ 5 7d期间 ,采用巢式 RT-PCR检测痰 SARS病毒基因 ,5 6例患者中 34例阳性 ,阳性率 6 0 .7% ;而采用间接 EL ISA检测血清抗 SARS病毒抗体 ,5 6例患者中 32例阳性 ,阳性率为 5 7.1%。两种方法均阳性的有 15例 ,均阴性的有 6例。2种病原学诊断方法检测2 0例正常人和 15例发热非 SARS患者 ,结果均为阴性。住院 6 d～ 13d组 (92 .3% )巢式 RT- PCR基因阳性率明显高于 EL ISA特异性抗体阳性率 (7.7% ) ;住院 >35 d组巢式 RT- PCR基因阳性率 (36 .8% )则明显低于 EL ISA特异性抗体阳性率 (94 .7% ) (P<0 .0 1)。结论 :痰中 SARS病毒基因检测可用于 SARS的早期诊断 ,这对于提前确诊和治疗SARS患者 ,以及尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查 ,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

严重急性呼吸综合征患者血清中存在抗肺组织抗体

目的：建立特异性的检测严重急性呼吸综合征(SARS)相关抗体的血清学方法。方法：制备SARS患者肺组织包被抗原，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SARS患者血清中特异性抗体。结果：SARS患者血清中存在SARS相关的抗人肺组织抗体，其阳性率达92．86％(26／28)，正常献血员为11．43％(12／105)，统计学分析表明，SARS相关抗体的检出率在患者和献血员之间存在明显差异。结论：SARS患者血清中存在抗肺组织抗体，该抗体的存在提示机体免疫反应可能参与了疾病病理损伤过程；检测该抗体可能有助于SARS的早期诊断。     

院内感染SARS医护人员特异性IgG抗体水平的影响因子

目的探讨院内感染严重急性呼吸道综合征(SARS)医护人员特异性IgG抗体水平的影响因素。方法回顾性收集20例院内感染SARS医护人员的人口特征、流行病学史、临床表现、实验室检查和主要治疗措施等资料作为研究因素,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例SARS患者在发病后第1～36周的血清特异性IgG抗体。分类变量的研究因素比较不同结局患者之间抗体水平采用方差分析;通过一元线性回归、逐步回归分析和偏相关分析数值变量的研究因素与抗体水平之间的关系。结果SARS特异性IgG抗体水平在女性患者高于男性患者,结果有统计学意义(P=0.044);与患者在病程中的最高中性粒细胞计数呈中等程度负相关(偏相关系数=-0.636,P=0.008);与病毒唑治疗的总剂量呈高度正相关(偏相关系数=0.811,P=0.000)。结论SARS特异性IgG抗体水平的影响因素可能与病毒在体内被抑制、病毒血症的持续时间和患者发病后的中性粒细胞反应水平有关,SARS特异性IgG抗体水平与性别的关系值得进一步探讨。