甲基汞急性暴露大鼠脑中汞蓄积及胆碱能神经递质改变的研究

目的 研究低剂量甲基汞短期暴露的神经毒性作用,为进一步探讨甲基汞早期神经毒性机制提供实验依据。方法 采用SD大鼠腹腔注射甲基汞,剂量分别为0．05、0．50及5．00mg／kg,并设对照组,分别暴露20min、1、4、24h时测定大鼠脑组织总汞含量、乙酰胆碱(ACh)含量及乙酰胆碱酯酶(AChE)活力。结果 除0．05mg／kg剂量组外,其余两组大鼠脑组织中汞含量在暴露20min就显著升高;0．05mg/kg组大鼠暴露4h后,脑汞含量也出现显著升高。各剂量组大鼠脑组织ACh及AChE都在暴露20min后就出现显著变化,并显示一定的剂量——效应和时间——效应关系。结论 甲基汞低剂量(0．05mg／kg)短时间暴露(20min)时脑组织ACh和AChE的改变表明此时可能启动了中枢神经系统某种调控机制。随暴露剂量和暴露时间增加,甲基汞蓄积于大鼠脑组织中,可引起脑组织ACh含量和AChE活力显著变化。     

基因组学技术初步分析甲基汞神经毒性功能基因

目的探讨甲基汞神经毒性差异表达基因功能。方法利用基因芯片筛选大鼠暴露体重剂量为0·5mg/Kg的氯化甲基汞后脑中的差异表达基因,并利用基因组学技术分析其功能。结果基因表达谱中差异表达基因共有303条,其中上调基因为170条,下调基因为133条。发生显著性改变的功能基因主要涉及到①免疫应答及解毒作用;②遗传信息传递与表达;③细胞信号传导;④神经传导;⑤细胞增殖与分化;⑥细胞凋亡;⑦其它未知功能等7组。在暴露组样本中,脑中有关细胞信号传导和神经传导功能基因发生了特别显著的差异表达。结论甲基汞通过对信号传导过程的影响,发挥其神经毒性的作用。     

甲基汞对亲仔两代大鼠的神经行为毒性效应

目的探讨大鼠妊娠期甲基汞暴露的母体毒性及对仔代的神经行为毒性效应。方法Wistar孕鼠52只于妊娠第6～9天用甲基汞0.00、0.01、0.05、2.00mg/(kg·d)连续灌胃。分别观察母体毒性 ;常规致畸实验 ;记录205只仔鼠早期生理发育和神经行为发育指标 ;10周龄仔鼠32只进行程序控制行为测试 ;分娩后5周母鼠和10周龄仔鼠各24只进行脑组织形态学观察和单胺类神经递质的测定。实验遵循随机、双盲原则。结果未观察到母体毒性和仔代形态畸形 ;3个暴露组胎仔的体重、尾长低于对照组 (P<0.01) ;各暴露组仔鼠体重增长、早期生理及神经行为发育滞后于对照组 (P<0.05) ;程序控制行为学习成绩比对照组降低 (P<0.05) ,有剂量_效应关系 (rs= -0.7273 ,P<0.01) ;各暴露组母鼠和仔鼠脑组织无形态学改变 ,但单胺类神经递质含量均比对照组显著增高 (P<0.05) ,有剂量_效应关系 (rs=0.7124～0.9257 ,P<0.01)。结论本研究剂量的妊娠期甲基汞暴露未观察到对孕鼠的毒性效应 ,但有轻度胚胎毒性 ,影响仔鼠的神经系统发育 ,导致仔鼠学习记忆能力降低 ,亲仔两代大鼠脑组织中单胺类神经递质的含量增高     

甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)所致脑发育损伤及其与c fos表达的关系 ,采用光镜、电镜等形态学方法 ,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法 (SP法 )观察MMC对培养神经胶质细胞c fos表达的影响。结果表明 ,体外培养的胶质细胞接触MMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。MMC 0 0 2mmol L作用于神经胶质细胞 10min后 ,c Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化 :c Fos蛋白阳性细胞率 0 5h开始增高 ,2h达高峰 ,4～ 6h又逐渐减少。MMC 0 0 0 12 5、0 0 0 5、0 0 2、0 0 8和 0 32mmol L作用 10min后 ,0 32mmol L组的阳性率显著高于除0 0 8mmol L组外的其他各组 (P <0 0 1)。提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c fos表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c fos介导有关。     

应用程序控制行为测试研究甲基汞和微波对仔鼠神经行为的影响

[目的]应用程序控制行为测试分别评价妊娠期暴露于氯化甲基汞、频率1800MHz低强度微波辐射对F1 代大鼠的神经行为毒性。[方法]Wistar大鼠以雌雄2∶1合笼交配 ,受孕母鼠随机分组。实验1:于孕鼠妊娠第6～9d给予氯化甲基汞 ,0、0.01、0.05、2.00mg/(kg·day)连续灌胃染毒。随机选择32只F1 代大鼠 (雌雄各半 )于10周龄时进行程序控制行为测试。实验2:于孕鼠妊娠第1～20d暴露于频率为1800MHz,功率密度为0.5、1.0mW/cm2 的微波辐射 ,对照组为虚拟暴露 ;随机选择48只F1 代大鼠 (雌雄各半 )于10周龄时进行程序控制行为测试。[结果]实验1:甲基汞3个剂量组大鼠的学习成绩在两种程序均比对照组降低 (P<0.05或P<0.01) ,存在剂量_反应关系 (高频度差别强化率rs= -0.7273 ,P<0.01;低频度差别强化率rs= -0.2238,P>0.05)。实验2:1800MHz、功率0.5mW/cm2 微波组雄性仔鼠在高频度差别强化率 (DRH8/4)的成绩比对照组降低 (P<0.05)。[结论]胚胎期暴露于低剂量甲基汞对大鼠可产生神经行为毒性 ,表现为学习记忆功能异常 ;出生前暴露于频率1800MHz微波对仔鼠神经行为发育的影响尚不能确定。     

铅对大鼠脑细胞凋亡及癌基因表达的影响

目的 通过对醋酸铅诱导大鼠脑细胞凋亡及对fos、jun癌基因表达影响的研究，为进一步揭示铅的神经毒作用机制，预防和治疗铅中毒提供科学依据。方法 取成年SD大鼠，每组6只，醋酸铅染毒剂量分别为25，50，100mg／kg体重，连续染毒5d，经升主动脉灌注4％多聚甲醛内固定后分别取海马、皮层部位脑组织，制备石蜡切片。用原位末端标记法观测细胞凋亡，用免疫组化方法分别测定海马、皮层组织中fos、jun的蛋白含量以检测其表达情况。结果 (1)醋酸铅染毒后各剂量组大鼠海马、皮层组织凋亡细胞数量明显增加。显高于对照组，并和染铅剂量有较好的剂量反应关系。(2)大鼠脑组织海马、皮层fos、jun阳性细胞数显增加，表达强度并升高趋势。(3)相关分析表明，铅诱导的神经细胞凋亡与fos、jun的表达呈正相关。结论 (1)醋酸铅可以诱发大鼠皮层、海马细胞的凋亡，且和染铅剂量呈正相关。(2)醋酸铅可以促进大鼠海马、皮层细胞中fos、jun基因的表达，并有良好的剂量反应关系，提示fos、jun可能作为凋亡的调控因子参与了铅对中枢神经系统损害的毒性过程。     

基因芯片检测三唑磷染毒大鼠肝脏基因表达

[目的]研究低剂量暴露于有机磷农药三唑磷的慢性毒性分子机制。[方法]用Affymetrix RT-U34基因芯片技术,分析以含100mg/kg三唑磷的饲料喂养6个月后的大鼠亚慢性毒性试验差异基因表达,同时作其病理检查。[结果] 三唑磷平均摄入剂量为5.21 mg/(kg·d)的100 mg/kg剂量组与对照组相比,有30个基因和表达序列发生2倍以上变化, 涉及代谢酶、免疫、DNA损伤修复、应激和细胞结构成分。诱导I相代谢酶P450IIC13和II相代谢酶GSTA2、SULTLE2和促进DNA修复GADD45A基因表达上调,部分代谢酶、免疫、应激有关基因表达下调。细胞结构基因表达变化支持了病理结果。[结论]三唑磷农药亚慢性毒性可能累及代谢酶、免疫、应激和细胞结构成分等方面的变化。     

甲基汞对培养大鼠脑神经细胞损伤的影响

目的 通过体外实验探讨氯化甲基汞(methylmerculy chloride，MMC)所致脑发育损伤及其与c—fos表达的关系。方法 采用形态学试验方法，观察MMC对体外培养大鼠脑神经细胞的损害作用，并应用免疫细胞化学方法观察MMC对神经元、神经胶质细胞c—fos表达的影响。结果 体外培养的神经细胞接触0．3μmol／L MMC后，出现胞浆浓缩、轴突回缩，染色质边聚、固缩等现象，呈凋亡的典型形态。神经细胞培养体系中加入0．3μmol／L MMC持续作用后，神经元和神经胶质细胞中c—fos阳性细胞率在0．5h开始增高，并随时间的延长而增加，2h以后维持较高水平。培养细胞接触MMC 10min、2h、6h后，实验组神经元c—fos阳性表达率分别为8．78％，68．26％，64．96％，神经胶质分别为7．74％，66．61％，72．52％。结论 MMC可诱导体外培养大鼠脑神经细胞c—fos高表达，并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c—fos介导有关。     

妊娠期甲基汞暴露对大鼠的母体毒性

目的　探讨妊娠期甲基汞暴露对大鼠的母体毒性效应。方法　用不同剂量甲基汞〔0 .0 0、0 .0 1、0 .0 5、2 .0 0mg/ (kg·d)〕于 Wistar大鼠孕 6～ 9天时连续 4天灌胃染毒 ,观察母鼠妊娠期、哺乳期的各种生理、生育过程 ,脑组织形态学和单胺类神经递质 (去甲肾上腺素、多巴胺、5 -羟色胺 )等指标。结果　与对照组相比 ,暴露组母鼠脑组织中单胺类神经递质的含量明显增高 (P<0 .0 1) ,呈现出剂量 -效应关系 (等级相关系数 rs分别为 0 .712 ,0 .90 3,0 .92 6 ) ,P均 <0 .0 1;其余指标未见明显异常。结论　本实验剂量下 ,妊娠期甲基汞暴露对大鼠的母体毒性尽管十分微弱 ,但母体脑组织的化学损伤已经发生。     

金耳菌丝体多糖降血糖作用研究

目的:研究金耳菌丝体多糖(TMP)的降血糖作用,并对降糖机制进行初步探讨。方法:采用正常小鼠和四氧嘧啶诱导的高血糖大鼠模型,灌胃给药,监测血糖,测定肝糖原、乳酸及脂代谢相应指标。结果:腹腔注射75 mg/(kg·d)剂量的TMP 12 d可降低正常小鼠的血糖水平。以50、100、200 mg/(kg·d)三种剂量灌胃给药7 d,均可显著降低四氧嘧啶致高血糖大鼠的血糖水平,各剂量间无明显差异。连续给予100 mg/(kg·d)TMP 23 d,大鼠血糖得到控制,血糖和血清甘油三酯比对照组显著降低;肝糖原含量、血乳酸水平均与对照无明显差异。结论:TMP可有效降低糖尿病模型鼠的高血糖水平,对高血糖引发的高血脂有一定防护作用。     

氯化甲基汞对大鼠脑神经细胞c-fos表达的影响

目的通过体内与体外实验相结合的方法研究氯化甲基汞(MMC)对脑神经细胞c-fos表达的影响,探讨甲基汞所致脑发育损伤的机制.方法体外实验中,应用免疫细胞化学方法观察MMC对培养神经元c-fos表达的影响.体内实验中,Wistar妊娠大鼠于妊娠7～10d连续灌胃,每日给予MMC4mg/kg.取出生后第1、3、5、7、10和15d仔鼠大脑组织制备常规组织切片.采用免疫组织化学方法检测c-fos表达.结果体外培养的神经元中加入0.3μmol/LMMC持续作用后,神经元中c-Fos阳性细胞率在0.5h开始增多,并随时间的延长而增加.培养神经元接触MMC10min和2、6h组,细胞阳性率分别为(6.97±2.86)%、(66.86±5.32)%、(64.49±3.09)%.体内实验中,对照组和实验组中仔鼠大脑皮层中c-Fos蛋白阳性细胞率随发育时间延长逐渐减少,但实验组均高于相应对照组,实验组第1、3天组c-Fos阳性率分别为(47.01±3.79)%和(46.71±1.96)%,与对照组的(35.86±3.04)%和(33.35±1.06)%相比,差异有非常显著性.结论MMC可诱导脑神经细胞c-fos的过表达,这可能是MMC所致脑发育损伤的机制之一.     

铅对大鼠不同脑区IEG表达的影响

为了研究即刻早期基因（ＩＥＧ）在铅的神经毒性机制中的作用,本实验应用ＦＯＳ和ＪＵＮ蛋白免疫组织化学方法对腹腔注射染铅１３ｍｇ／ｋｇ及１３０ｍｇ／ｋｇ的大鼠不同脑区ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达水平进行了观察。图像分析及统计检验结果表明,急性染铅２小时后,大鼠脑组织皮层、海马ＣＡ３区及小脑的ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达的阳性面积比［Ａａ（％）］、平均灰度或阳性细胞个数等参数与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,即染铅组ＩＥＧ表达高于对照组。这一结果提示第三信使ＩＥＧ作为转录调控因子可能参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。这对深入阐明铅神经毒性的分子机制提供了一定的实验依据。     

p38 MAPK/AP-1信号通路在1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿形成中对iNOS表达的上调作用

目的探究p38 MAPK/AP-1信号通路在小鼠1?2-二氯乙烷(1?2-DCE)中毒性脑水肿形成过程中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其对脑水肿的影响。方法选取40只雌性昆明种小鼠随机分为对照组、染毒组、低剂量以及高剂量p38抑制剂组。染毒小鼠于染毒柜中1.2 mg/L 1?2-二氯乙烷染毒3.5 h/d,连续染毒3 d,低、高剂量抑制剂组小鼠于染毒前1 h腹腔注射200μl 3.75、15 mg/kg的p38 MAPK抑制剂(SB202190)。染毒结束次日取材,测定各组小鼠脑含水量及HE病理观察脑水肿,Western Blot检测各组小鼠脑组织中磷酸化p38、激活蛋白1(AP-1)两个亚基c-fos、c-jun的磷酸化形式表达水平以及iNOS的蛋白表达,Real-Time RT-PCR检测iNOS mRNA表达水平。结果单纯染毒组的小鼠出现抱爪现象,SB202190干预能够明显改善1?2-DCE中毒小鼠的抱爪症状。染毒组小鼠脑组织含水量与对照组小鼠相比明显增加,SB202190干预能够有效缓解小鼠出现脑水肿。单纯染毒组小鼠脑组织中p-p38蛋白、磷酸化c-jun和c-fos表达水平明显上调,iNOS蛋白和mRNA表达水平也显著增加,而SB202190能够显著降低iNOS、磷酸化c-jun和c-fos的表达水平。结论小鼠脑组织iNOS mRNA和蛋白表达水平在1?2-DCE中毒性脑水肿形成过程中显著上调。p38 MAPK/AP-1信号通路参与iNOS表达增多的调控过程。     

The effect of pyridostigmine and physostigmine on acute toxicity of diisopropyl fluorophosphate in rats

Diisopropyl fluorophosphate (DFP) given to rats in lethal concentration (100 mg/m3, by inhalation for 40 min) significantly inhibited acetylcholinesterase activity in the blood, lung, liver and brain, and induced hyperglycaemia and glycogen mobilization in the liver, diaphragm and brain. Pretreatment (maximum sign-free dose) with carbamates, pyridostigmine (0.075 mg/kg, i.m.) or physostigmine (0.1 mg/kg, i.m.) 15 min before exposure to DFP, modified the inhibited acetylcholinesterase activity only in peripheral tissues. However, the hyperglycaemia and glycogen depletion induced by DFP inhalation were not modified by carbamate pretreatment. The time of survival of DFP exposed animals increased after pretreatment with carbamates, more after physostigmine (81 min) than after pyridostigmine (59 min). The animals exposed to DFP exhibited severe tremors and convulsions as compared to the animals pretreated with carbamates.     

低剂量镉对肾脏SOD基因表达其活力的影响

目的　探讨镉对肾氧化损伤的作用机制。方法　Wistar大鼠皮下注射CdCl2水溶液,每次剂量分别为0.65和2.28mg/kg,连续染毒5d,观察染毒后不同时间肾超氧化物歧化酶(SOD)活力及其mRNA表达水平变化,同时检测肾皮质镉含量、肾脏超微结构的改变。结果　染毒组肾近曲小管上皮细胞线粒体最早受到损伤,同时观察到SODmRNA表达明显低于对照组,斑点印迹扫描积分高剂量、低剂量组分别为35400±5900、35919±7361,与对照组(70928±7698)比较,差异均有显著性(P<0.01)。SODmRNA的表达在停止染毒后有恢复的趋势,低剂量组染毒后72h已基本恢复到对照组水平。SOD活力下降在形态改变和mRNA转录受抑制之后才出现。结论　SOD基因表达受抑制可能是镉性肾损伤的重要原因之一,低剂量镉引起的上述肾损伤有可能恢复。     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠血清雌二醇水平的影响及其机制研究

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对青春期雌性大鼠雌二醇(E2)合成的影响及相关机制。方法将32只21日龄SPF级SD雌性大鼠按体重随机分为对照组(玉米油)和低(250mg/kg)、中(500mg/kg)、高剂量(1000mg/kg)DBP染毒组,每组8只。采取灌胃方式进行染毒,染毒剂量为5ml/kg,每天1次,连续灌胃染毒8周。染毒结束后,处死处在动情前期的动物,采用放射免疫法检测血清中E2的水平,实时荧光定量RT-PCR检测大鼠卵巢甾体激素合成过程中关键酶细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,P450arom)mRNA表达水平。结果与对照组比较,中剂量DBP染毒组雌性大鼠体重较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各剂量DBP染毒组雌性大鼠血清中E2水平和卵巢P450arom mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论DBP可使青春期雌性大鼠血清中E2水平升高,其作用机制可能与卵巢甾体激素合成过程中的关键酶P450arom mRNA表达升高有关。     

极低频电磁场对小鼠脑和肝脏c-fos mRNA水平的影响

目的　研究极低频电磁场暴露对小鼠脑和肝组织c fosmRNA水平的影响。方法　将小鼠暴露于 5 0Hz、0 .2mT及 5 0Hz、6 .0mT的电磁场中 ,持续 2周或 4周 ;采用竞争性RT PCR方法检测小鼠脑和肝脏c fosmRNA水平。结果　 5 0Hz、0 .2mT及 5 0Hz、6 .0mT电磁场暴露 2周后 ,小鼠脑组织c fosmRNA的水平上升为 ( 0 .0 178± 0 .0 0 76 )amol 12 0ngcDNA和 ( 0 .0 0 92± 0 .0 0 4 2 )amol 12 0ngcDNA ,与对照组 [( 0 .0 0 12± 0 .0 0 0 5 )amol 12 0ngcDNA]比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;肝组织c fosmRNA的水平上升为 ( 0 .0 117± 0 .0 0 5 5 )amol 12 0ngcDNA和 ( 0 .0 14 8± 0 .0 16 2 )amol 12 0ngcDNA ,与对照组[( 0 .0 0 0 5± 0 .0 0 0 5 )amol 12 0ngcDNA]比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 0 .2mT和 6 .0mT电磁场暴露4周后 ,小鼠脑组织c fosmRNA的水平上升为 ( 0 .0 10 0± 0 .0 0 5 4 )amol 12 0ngcDNA和 ( 0 .0 198±0 .0 0 79)amol 12 0ngcDNA ,与对照组 [( 0 .0 0 15± 0 .0 0 0 8)amol 12 0ngcDNA]比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;肝组织c fosmRNA的水平分别上升为 ( 0 .0 173± 0 .0 12 2 )amol 12 0ngcDNA和 ( 0 .0 133±0 .0 0 90 )amol 12 0ngcDNA ,而对照组无表达。结论　 5 0Hz电磁     

邻苯二甲酸二异丁酯对小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号转导通路的影响

目的观察邻苯二甲酸二异丁酯(DiBP)对小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号通路的影响。方法 30只雄性昆明小鼠适应性喂养3天后,按体重随机分为一个对照组和4个实验组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。对照组小鼠灌胃给予玉米油溶剂;实验组小鼠灌胃给予含DiBP的玉米油溶液,剂量分别为:50、250、500、1000mg/kg BW。实验周期8周,普通饲料喂饲,自由饮水。实验结束后冰浴条件下取海马,采用酶联免疫法测定环磷酸腺苷(cAMP)含量;蛋白印迹法测定磷酸化蛋白激酶A(P-PKA C)、磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白(P-CREB)表达水平;实时荧光定量PCR法测定CREB、脑源性神经营养因子(BDNF)、c-fos和c-jun的mRNA表达水平。结果第Ⅳ组海马组织中cAMP含量和P-PKA C蛋白表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);各剂量组P-CREB蛋白表达量均低于对照组,其中第Ⅱ组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),同时CREB、BDNF、c-fos和c-jun的mRNA表达水平与对照组相比都呈不同程度的下调。结论小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号通路中多种信号分子的表达异常,可能是DiBP导致小鼠认知损伤的重要机制之一。