两种偶联剂对胎盘型碱性磷酸酶层析行为的比较

本文分别选用两种偶联剂溴化氰和环氧氯丙烷活化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，以Ｌ－苯丙氨酸（Ｌ－ｐｈｅ）为配基合成亲和吸附剂纯化胎盘型性磷酸酶，并对二者层析行为进行比较。实验证明；用环氧氯丙烷活化合成的Ｌ－ｐｈｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ仅一次亲和柱层析就可得到用溴化氰两次亲和层析相近的结果，用环氧氯丙烷活化方法即简单又安全。     

胎盘型碱性磷酸酶的固相直接免疫测定法

本文介绍一种简单、敏感、特异的定量检测胎盘型碱性磷酸酶(PI—ALP)的固相直接免疫测定法。本法检测低限为0.01U/L,在PI—ALP活性为0.02～0.6U/L范围内呈线性关系,回收率>92％;与加热灭活法呈正相关(r=0.989)。     

孕妇尿液碱性磷酸酶及其胎盘型同工酶在妊娠中的变化

目的　观察孕尿碱性磷酸酶 (ALP)及其胎盘型同工酶 (PALP)随孕周的变化规律。方法　采用金氏法及EDTA抑制法监测孕妇尿液ALP及PALP变化。结果　 6 5例正常晚孕妇女尿液ALP、耐热ALP及ALP/Cr分别为 4 .10、0 .6 4和 6 .38,显著高于 6 0例非孕妇尿液 (分别为 0 .39、0 .0 0及 0 .4 6 ,P <0 .0 1) ;ALP、PALP、耐热ALP活力及其与肌酐比值与孕周为指数函数时相关性良好 ;当进入妊娠中期 (15周 )后 ,酶活性开始平稳上升 ,进入晚期 (30周后 ) ,酶活力突跃上升至 4 0周达高峰 ,4 1周急剧下降 ,产后恢复正常酶活性水平 ,这些变化主要由PALP的升降导致。结论　孕妇尿液中存在一种新的非孕尿液没有的胎盘型ALP ,它们随孕周的变化规律与血及羊水中ALP、PALP一致 ,可望用于胎盘功能的无创性监测     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶。２．方法 应用正丁醇抽提，丙酮沉淀，热处理，ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相层析鉴定其纯度；二十烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。     

人类胎盘碱性磷酸酶部分性质的研究

１．目的 探讨纯化的人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）的部分性质,为其结构与功能的研究积累资料。２．方法 应用分光光度法观察了温度、酸碱度及抑制剂对酶活力的影响;同时对其紫外吸收光谱进行了测定。３．结果 在实验条件下,酶的最适温度为６５℃,对热稳定,－２５℃冷浆后酶的活力明显下降,最适ｐＨ为１１．０,在ｐＨ７．０～１１．５之间稳定;以对硝基酶磷酸二钠为底物,其Ｋｍ值为０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ;Ｌ－苯丙氨酸     

铅对人类胎盘碱性磷酸酶活力与构象的影响

研究铅对人类胎盘性碱磷酸 的作用，以探讨铅影响台儿发育的分子机制。（２）方法应用分光光度法测定不同浓度Ｐｂ（ＮＯ３）２存在下的ＰＬＡＰ活力，用荧光法检测其荧光光谱的变化；用双倒数作图法确定Ｐｂ（ＮＯ３）２对该酶的抑制类型。     

磷酸盐对人胎盘碱性磷酸酶胍变性的影响

①目的　观察磷酸盐对人胎盘碱性磷酸酶 (HPAP)胍变性的影响 ,为酶活性部位的柔性理论提供证据。②方法　应用分光光度法测定有磷酸盐及无磷酸盐存在时 ,HPAP在胍变性过程中的活力变化。③结果　低浓度的盐酸胍 (<0 .5mol/L)使变性平衡态酶活力增强 ,在有磷酸盐存在时 ,酶活力增加的更为明显 ;随着盐酸胍浓度的增加 ,酶逐渐失活 ;当盐酸胍浓度 >2 .0mol/L时 ,酶活力迅速下降 ;当盐酸胍浓度为 3.0mol/L时 ,酶活力完全丧失。但有磷酸盐存在时 ,盐酸胍浓度达到 5 .0mol/L时 ,酶活力才完全丧失。④结论　磷酸盐对HPAP胍变性有保护作用 ,提示磷酸盐降低了酶活性部位的柔性     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和高压液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果ＰＬＡＰ的纯化倍数为１６１倍，比活力为１３８ｍｍｏｌ·ｓ－１／ｇ；纯化的ＰＬＡＰ经ＰＡＧＥ鉴定为单一区带，ＨＰＬＣ分析为单一对称峰；测得酶的亚基分子量为６４．６９ｋｕ．④结论纯化的ＰＬＡＰ已达电泳纯和层析纯，可用于其结构与功能的研究     

五氯酚对人类胎盘碱性磷酸酶的抑制

（１）目的：探讨五氯酚（ＰＣＰ）对人类胎盘碱性碱酸酶（ＰＬＡＰ）的作用，为ＰＣＰ中毒的防治提供理论依据。（２）方法：应用比色法分别测定有ＰＣＰ和无ＰＣＰ存在下ＰＬＡＰ的酶活力，根据其活力变化求出酶的相对活力；用双倒数作图法，确定ＰＣＰ对ＰＬＡＰ的抑制类型并求其抑制常数（Ｋ１）（３）结果：ＰＣＰ的存在抑制下了酶活力，当ＰＣＰ的浓度在６ｍｍｏｌ／Ｌ之内，随其浓度的增加而酶活力逐渐降低，当ＰＣＰ的浓度为     

底物及偶联剂浓度对碱性磷酸酶染色灵敏度的影响

中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色对鉴别诊断血液病具有重要价值.Kaplow偶氮偶联法NAP染色具有快速、步骤少、结果稳定等优点.1 mg/ml浓度固蓝RR盐、固蓝BB盐、固蓝B盐分别用于Kaplow偶氮偶联法NAP染色,固蓝RR盐组积分(灵敏度)最高[1].本文探讨底物α-磷酸萘酚钠(1-萘磷酸-钠盐)及偶联剂固蓝RR盐的不同浓度对NAP染色灵敏度的影响.     

人类胎盘碱性磷酸酶部分性质的研究

目的探讨纯化的人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）的部分性质,为其结构与功能的研究积累资料。②方法应用分光光度法观察了温度、酸碱度及抑制剂对酶活力的影响;同时对其紫外吸收光谱进行了测定。③结果在该实验条件下,酶的最适温度为６５℃,对热稳定,－２５℃冷冻后酶的活力明显下降;最适ｐＨ为１１．０,在ｐＨ７．０～１１．５之间稳定;以对硝基酚磷酸二钠为底物,其Ｋｍ值为０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ;Ｌ－苯丙氨酸是ＰＬＡＰ的反竞争性抑制剂,其抑制常数为２．３５ｍｍｏｌ／Ｌ,而ＮａＨ２ＰＯ４是ＰＬＡＰ的竞争性抑制剂,其抑制常数为０．９９ｍｍｏｌ／Ｌ;酶蛋白的最大紫外吸收波长为２８０ｎｍ．④结论了解纯化ＰＬＡＰ的上述性质,有助于其结构与功能的研究。     

强的松龙对Eca 109细胞胎盘型碱性磷酸酶的诱导作用机制研究

人食管癌上皮细胞系Ｅｃａ１０９可以表达癌胚基因产物胎盘型碱性磷酸酶，并且ＰＬＡＰ活性在强的松龙诱导下升高，蛋白质合成抑制剂环己亚胺在强的松龙作用的初始阶段及强的松致ＰＬＡＰ活性快速升高阶段时加入，均表现对强的松龙效应的抑制。而ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ与强的松龙同时作用于细胞时，则抑制强的松龙的诱导效应，但在强的松龙作用后ＰＬＡＰ活性快速升高阶段加入放线菌素Ｄ时，至少在２４小时内不产生对强的松龙效     

骨肿瘤手术前后骨型碱性磷酸酶的变化及临床意义

目的 检测骨肿瘤患者手术前后血清中总碱性磷酸酶(TALP)和骨型碱性磷酸酶(BALP)的活性,研究TALP和BALP在骨肿瘤手术治疗前后的变化及治疗监测.方法 采用法国临床化学推荐的酶联免疫吸附(ELISA)方法测定BALP和速率法测定TALP水平.结果 恶性骨肿瘤组和转移性骨肿瘤组血清TALP和BALP明显高于正常对照组(P＜0.01);手术治疗后1、2、3周血清TALP和BALP水平明显下降(P＜0.01).结论 血清TALP和BALP均为骨肿瘤临床诊断、病情监测又一灵敏、简便的生化指标,且血清BALP的灵敏度和特异性高于血清TALP.     

两种常用固定剂碱性磷酸酶染色的灵敏度比较

中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色对鉴别诊断血液病具有重要价值.该染色常用10%甲醛甲醇或95%乙醇作固定剂[1].两种固定剂分别用于Kaplow偶氮偶联法NAP染色,结果显示两者NAP积分相差甚远,应引起高度重视,以减少误诊误治.     

两种厂家碱性磷酸酶性能评估

目的 通过测定灵敏度、信号值、临床相关性比较3种碱性磷酸酶（AP）标记抗-抗体工艺的优劣。方法 用同一种常用的蛋白质标记方法,将碱性磷酸酶和抗促甲状腺激素（TSH）的单抗进行偶联,进一步制成TSH的化学发光法定量测定试剂盒。结果 对用同种标记工艺获得的不同试剂的各项性能指标进行考察,结果厂家S的AP性能最好,信号值最高;而厂家C的两种AP性能较差。结论 从构建的磁微粒TSH检测试剂盒各项性能来看,厂家S的AP经过是本研究推荐的一种可用于化学发光免疫分析的标记物。     

麦芽凝集素分离和测定骨型碱性磷酸酶

介绍一种用麦芽凝集素分离和测定骨型碱性磷酸酶的新方法，该法操作简便，实验结果较稳定，且重复性较好，适用于一般实验室。