AG490对人外周血NK细胞活性及淋巴细胞转化功能的影响

目的　研究 AG490对正常人外周血 NK细胞杀伤活性及淋巴细胞转化功能的影响。方法　采用体外实验 ,MTT比色法检测细胞存活、NK细胞杀伤活性及细胞增殖情况。结果　 AG490能抑制 IL - 2及 PHA诱导外周血单核细胞增殖的作用 ,并抑制 NK细胞杀伤活性。结论　 AG490作为一种酪氨酸激酶抑制剂 ,能影响正常细胞的功能。     

西咪替丁对过敏性紫癜NK细胞数量及其杀伤活性的影响

目的：测定西咪替丁对HSP患儿NK细胞数及杀伤活性的变化,探讨西咪替丁对天然免疫的调节作用。方法：用流式细胞技术检测外周血NK细胞数,用LDH改良释放法测NK杀伤活性。结果：在HSP患儿NK细胞数下降, 杀伤活性降低。西咪替丁治疗后NK细胞杀伤活性增加,而数量无改变。结论：西咪替丁能增加NK细胞的杀伤活性,而这种增强作用不是通过增加NK细胞数量,而是通过影响其周围微环境所致。     

肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性影响研究

目的 探讨肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性的影响.方法 基因克隆建立稳定表达HLA-G抗原的肿瘤细胞株,以及通过基于CD107a标记的流式细胞术检测肿瘤细胞表达HLA-G前后对NK细胞杀伤功能的影响.结果HLA-G抗原在细胞表面获得不同程度的表达且能显著抑制NK对肿瘤细胞的杀伤活性(P＜0.05).HLA-G特异性抗体87G阻断或其受体KIR2DL4特异性抗体#33阻断后,均能明显恢复NK细胞对转染HLA-G肿瘤细胞的杀伤功能.结论 肿瘤细胞HLA-G表达量不同,均能抑制NK细胞的杀伤活性,提示HLA-G分子表达在恶性肿瘤细胞的免疫逃逸中起重要作用.     

体外抗体功能修饰抑制性KIR对人NK细胞的影响

目的:检测抗体封闭抑制性受体KIR2DL1和KIR2DL2/2DL3对人NK细胞功能的影响.方法:应用Rosettesep人NK分选试剂盒分选外周血NK细胞,观察抗体封闭KIR2DL1和KIR2 DL2/2DL3受体后,NK细胞对不同白血病细胞(人肿瘤细胞株NB4、Raji和K-562)及同种异体的成熟树突状细胞(DC)的杀伤活性;检测混合淋巴细胞反应中NK细胞对T淋巴细胞增殖的影响;检测细胞因子TGF-β1的表达水平.结果:任何一个抗体封闭KIR后,NK细胞杀伤NB4细胞活性均增强,并与抗体浓度呈现量效关系(P＜0.05),2个抗体联用能增强NK细胞的杀伤活性;对Raji细胞的杀伤活性则改变较小;NK细胞对K-562细胞具有很强的杀伤活性,但经抗体封闭后,这种活性并没有提高.经抗体封闭KIR后,NK细胞对成熟DC的杀伤活性明显增强,并与抗体浓度呈现量效关系(2.20%±1.10% vs 37.59%±5.06%),各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).经抗体封闭后的NK细胞在混合淋巴细胞反应中能明显提高对T细胞的增殖抑制(77.85%±8.31% vs 43.05%±5.95%,P＜0.05),上清液中细胞因子TGF-β1的含量增加.结论:以抗体修饰抑制性KIR受体有助于提高NK细胞杀伤肿瘤及同种异体成熟DC的能力,活化的NK细胞通过分泌TGF-β1,抑制T细胞的增殖、活化.     

聚肌胞对人外周血NK细胞活性的影响

干扰素可以增强NK细胞的活性。为了进一步证实干扰素诱导剂对NK细胞活性的影响,我们观察了多聚肌苷酸:胞苷酸(Poly I:C,Polyinosinic:Polycytidylic acid简称聚肌胞)体外对人外周血NK细胞杀伤功能的增强效应及所需作用时间。取13份成人外周血,采用泛影葡胺——     

莲必治注射液(穿心莲内酯)对免疫功能的调节作用

目的 :研究穿心莲内酯对免疫功能的影响 ,探索其发挥作用的免疫机制。方法 :采用生物活性法和ELISA法检测用有效成分为穿心莲内酯的莲必治注射液处理人外周血单个核细胞上清中的IFN α、IFN γ、TNF α、IL 8含量 ;用单核巨噬细胞巨噬鸡红细胞来研究其促吞噬功能以及用LDH释放法检测其对NK细胞杀伤活性的影响。结果 :和空白对照组比 ,莲必治注射液作用外周血单个核细胞能显著诱导IFN α、IFN γ、TNF α产生 (P <0 .0 5 ) ,但对IL 8诱生无明显影响 ,甚至轻度抑制。莲必治注射液能提高豚鼠腹腔单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率 (P <0 .0 5 )及提高人外周血中NK细胞杀伤K5 6 2细胞的活性 (P <0 .0 5 )。结论 :穿心莲内酯是一种具有调节机体非特异免疫功能的免疫刺激剂 ,通过对NK、MΦ及细胞因子分泌的影响而发挥免疫调节作用     

手术对NK细胞活性的影响(综述)

NK细胞(Natural Killer cells)是杀伤细胞中的一类,它不需要抗体存在,也不需经抗原致敏,就能迅速杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞,并参与骨髓移植排斥反应等。近年研究证实,麻醉及手术刺激可明显抑制机体的免疫功能。在手术中机体NK细胞的活性增加,但术后数日活性即下降,小手术时这种变化较轻。Tφnnesen发现,术前焦虑及麻醉均可使NK细胞活性增加,手术创伤后NK细胞活性进一步增加,术后3～6天活性下降,且低于术前水平。有人认为此变化是由于麻醉与手术影响内分泌系统所致,     

寿尔康对小鼠免疫功能的影响

应用免疫学技术研究寿尔康(SEK)对小鼠免疫功能的影响。研究发现SEK经口服给药可明显增加小鼠脾脏及胸腺重量,提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,增加ANAE~+淋巴细胞百分率,促进小鼠外周血溶血素的生成和脾脏抗体细胞分泌溶血素的功能,明显增加小鼠体内NK细胞的活性,使cpm值增大;在体外可提高小鼠NK细胞的杀伤活性;并能增加对小鼠体内YAC-1细胞的清除。提示SEK可增强小鼠特异性和非特异性免疫功能,提高NK细胞的杀伤活性。     

干扰素在体外对放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞功能的影响

自然杀伤(NK)细胞在体内可以抑制肿瘤的发生,发展和转移,是机体执行免疫监视功能的重要效应细胞。NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用受到很多因素影响和调节。最近Brovall等人报告,电离辐射在体外可以抑制人NK细胞的活性。为了解按受放疗的肿瘤病人NK细胞功能的改变,并寻找对这种变化进行调整的办法,我们进行了干扰素对放疗后鼻咽癌病人NK细胞功能影响的初步观察。     

白细胞介素2对自然杀伤细胞的调节作用(简报)

白细胞介素2(IL2)在免疫调节中起了重要的作用。现知多种细胞表面存在白细胞介素2受体,如T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞等。白细胞介素2能促进NK细胞的增殖及杀伤活性。IL2在体外能增强正常人外周血单个核细胞(PBMC)对K562细胞的杀伤作用,但对病人的PBMC是否有同样的作用未见报道。本文测定了正常人及病人PBMC的NK细胞活性,并用IL2分别处理正常人及病人的PBMC,比较IL2对两组NK细胞的活化作用。     

乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移中JAK抑制对ERK的作用及意义

目的:研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响,探讨JAK激酶对ERK信号转导通路的作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义.方法:以JAK激酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,MTT法检测AG490对细胞的生长抑制作用;MTT法检测AG490处理后细胞对人工基底膜Matrigel的黏附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和迁移实验,检测AG490处理后细胞侵袭、迁移能力变化;Western印迹法检测AG490处理后细胞中磷酸化ERK(P-ERK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平变化.结果:应用JAK酶抑制剂AG490后MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效-量效依赖关系;MDA-MB-231细胞黏附、侵袭、迁移能力降低,同时细胞中P-ERK、MMP-9蛋白减少.结论:JAK激酶可以通过改变ERK的磷酸化水平影响ERK信号转导通路的活化.JAK激酶抑制对ERK信号转导通路的激活有阻断作用,可以抑制MMP-9的表达及乳腺癌细胞的侵袭转移.     

AG490对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及侵袭性的影响及机制

目的：探讨JAK2激酶（Januskinase2,JAK2）特异性抑制剂AG490（tyrphosin AG490）对人宫颈癌Hela细胞增殖,凋亡及侵袭转移能力的影响及其机制.方法：用不同浓度的JAK2激酶抑制剂AG490处理Hela细胞,MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Western Blot检测信号传导与转录激活因子3（Stat3）、磷酸化Stat3（P-Stat3）、基质金属蛋白酶-2（Mmp-2）和血管内皮生长因子（Vegf）蛋白的表达.结果：AG490能明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖,使细胞周期阻滞,促进宫颈癌Hela细胞凋亡,并可使P-Stat3,Mmp-2和Vegf的蛋白表达水平明显降低.结论：AG490通过阻断JAK2/STAT3信号通路活化,抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡,同时下调P-Stat3,Mmp-2和Vegf表达,抑制宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力.阻断JAKs/STATs信号转导通路可能成为治疗宫颈癌及抑制其侵袭转移的一种新的策略.     

抑制Jak3激酶活性诱导NALM—6白血病细胞凋亡

目的：研究Jak3的活化与急性淋巴细胞白血病（ALL）之间的关系。方法：在不同浓度的Jak3抑制剂AG490处理Jak3活化的ALL前B细胞株NALM－6细胞后，用流式细胞术及噻唑蓝法分析细胞的凋亡，增殖情况。结果：除5umol/L组外，经10，15，20umol/L，AG490处理后NALM－6细胞均有明显的亚G1峰，与DMSO对照相比，凋亡率均有显著增加（P＜0．05），噻唑蓝法示除5umol/L组外，与DMSO对照相比，10，15，20umol/LAG490均能显著抑制NALM－6细胞的增殖（P＜0．05），以上作用呈剂量依赖性关系。结论：Jak3抑制剂AG490能抑制NALM－6细胞的增殖并诱导凋亡，提示Jak3的活化与前B型ALL的发病相关。     

AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响

目的:观察AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抗癌机制。方法:DU145细胞分组培养,对照组单纯用DMEM高糖培养基培养,实验组给予终浓度为10、25、50及80μmol/L的AG490,分别培养24、48和72h后,采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率,Western blot检测作用72h后STAT3信号通路相关蛋白(p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL)。结果:AG490能够抑制DU145细胞的增殖,呈剂量(F=786.170,P<0.001)、时间依赖性(F=354.570,P<0.001)。AG490作用于DU145细胞72h后,p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL蛋白的表达均降低。结论:AG490能抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,其机制可能与阻断STAT3信号通路有关。     

熊果酸对活化型肝星状细胞NADPH氧化酶亚基p47Phox表达及ERK1/2信号通路活化的影响

目的 研究熊果酸（Ursolic acid ,UA）对瘦素诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）NADPH氧化酶（NOX）亚基p47Phox及ERK1/2信号通路活化的影响,并观察细胞增殖及I型胶原合成情况。方法 将培养激活的HSC-T6细胞株分为6组：正常对照组不加任何药物;瘦素组给予重组大鼠瘦素(100ng/ml)刺激细胞;各干预组分别给予UA、JAK抑制剂AG490、NOX抑制剂DPI、ERK抑制剂PD98059预处理30min,再加入瘦素刺激不同时间。采用Western blotting检测细胞膜移位的p47Phox蛋白、细胞总的p47Phox蛋白和磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;采用RT-PCR法检测I型胶原mRNA的表达。结果 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后细胞膜p47phox蛋白表达显著增高于正常对照组（0.68±0.09比0.44±0.11,P<0.01）,细胞内p-ERK1/2蛋白表达也随之增高（P<0.01）;UA、AG490及DPI干预后抑制了p47phox蛋白向细胞膜移位和细胞内ERK1/2蛋白磷酸化,PD98059抑制p47phox蛋白膜移位的作用较弱。瘦素刺激HSC-T6细胞12h后I型胶原的mRNA表达较正常对照组升高（P<0.01）,UA干预后I型胶原的mRNA表达明显低于瘦素组（0.57±0.18比1.02±0.5,P<0.01）,AG490、DPI及PD98059干预后I型胶原mRNA的表达均低于瘦素组（P<0.01）。瘦素刺激HSC-T6细胞12h、24h、48h后细胞增殖率高于正常对照组（均P<0.01）;UA、AG490、DPI及PD98059干预不同时间点的细胞增殖率均低于瘦素组（均P<0.01）,UA的抑制作用稍弱于DPI。结论：UA能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖及I型胶原表达,机制可能与抑制NOX亚基p47phox向细胞膜移位及下游信号通路ERK1/2的激活有关。     

EGCG对血小板源性生长因子-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

 目的  研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对血小板源性生长因子-BB (platelet-derived growth factor BB, PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能的机制。方法  组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉VSMC, 用RTCA (real time cellular analysis)仪器检测EGCG (10、50、100 μmol/L)和Jak2特异性抑制剂AG490 (50 μmol/L)对PDGF-BB (10 ng/mL)诱导的VSMC增殖和迁移的影响; 运用 Western blot检测Jak2、Stat3、Cyclin D1蛋白质水平及Stat3磷酸化水平。结果  RTCA检测结果显示, 10~100 μmol/L的 EGCG及50 μmol/L的AG490均能抑制PDGF-BB诱导的VSMC的增殖和迁移(P＜0.001)。Western blot检测结果显示, 50 μmol/L的EGCG能明显下调PDGF-BB刺激上调的VSMC的Jak2、Stat3、Cyclin D1蛋白质水平及Stat3磷酸化(p-Stat3)水平(P＜0.001), 且与其他两个浓度组相比较下调更为明显(P＜0.001); 50 μmol/L的AG490也能明显下调上述蛋白质水平(P＜0.001), 且50 μmol/L 的EGCG下调Jak2、Stat3、p-Stat3 蛋白质水平与AG490组比较无明显差异。结论  EGCG抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和迁移可能通过抑制Jak2/ Stat3信号转导通路而实现。     

外源性IL-6 通过STAT3 通路促进卵巢癌细胞对顺铂 耐药

目的:探讨外源性白细胞介素-6（IL-6）诱导卵巢癌（OvCa）对顺铂（Cisplatin）耐药的作用。方法:6孔板接种A2780 细胞, 分为对照（Control）组、AG490 组、重组人IL-6（rhIL-6）组和rhIL-6+AG490 组,应用Western 印迹检测rhIL-6 对A2780（顺铂敏 感OvCa 细胞株）的磷酸化信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达的影响。96 孔板接种A2780 细胞,分为Control 组、 AG490 组、顺铂（Cisplatin）组、AG490+Cisplatin 组、rhIL-6 组、rhIL-6+AG490 组、rhIL-6+Cisplatin 组和rhIL-6+AG490+Cisplatin 组,CCK8 实验检测rhIL-6 对A2780 细胞增殖的影响。12 孔板接种A2780 细胞, 分为Control 组、AG490 组、Cisplatin 组、 AG490+Cisplatin 组、rhIL-6 组、rhIL-6+AG490 组、rhIL-6+Cisplatin 组和rhIL-6+AG490+Cisplatin 组, 细胞凋亡实验检测rhIL-6 对A2780细胞顺铂耐药的影响。以36 只雌性裸鼠为研究对象,随机分为Control 组、rhIL-6 组、Cisplatin 组、AG490 组、rhIL-6+ Cisplatin 组和rhIL-6+AG490+Cisplatin组, 每组6只。腹腔注射A2780细胞, 给药4 周后颈椎脱臼处死小鼠, 检测rhIL-6 对 OvCa 腹腔种植瘤耐药的影响。结果:Western 印迹结果显示,与Control 组相比,rhIL-6 组p-STAT3 蛋白表达显著增加（t=6.55, P<0.01）;CCK8 实验结果显示,与Control 组相比,rhIL-6 组细胞增殖增加（t=4.148,P<0.05）;细胞凋亡实验发现,与Cisplatin 组 相比,rhIL-6+Cisplatin 组细胞凋亡显著降低（t=20.03,P<0.001）,与rhIL-6+Cisplatin 组相比,rhIL-6+Cisplatin+AG490 组细胞凋 亡显著增加（t=22.16,P<0.001）;小鼠体内实验结果发现,与Cisplatin 组相比,rhIL-6+Cisplatin 组瘤结节数量和重量显著增加（t= 2.783,P<0.05）,与rhIL-6+Cisplatin组相比,rhIL-6+Cisplatin+AG490 组瘤结节数量和重量显著降低（t=3.306,P<0.05）。结论:外 源性IL-6通过STAT3通路诱导OvCa 对顺铂耐药。     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.