骆驼蓬多糖提取及对秀丽隐杆线虫多聚谷氨酰胺聚集毒性的影响

目的探讨骆驼蓬多糖提取方法及对秀丽隐杆线虫株AM141肌肉细胞中多聚谷氨酰胺(Poly Q)聚集的影响。方法采用水提分级醇沉法对骆驼蓬多糖进行提取,并用苯酚-硫酸法对其进行含量测定。将骆驼蓬多糖加入培养基中,取样统计成虫肌肉细胞中Poly Q-YFP聚集所形成荧光点数目,以此评价骆驼蓬多糖对秀丽隐杆线虫株AM141中Poly Q聚集的影响。对活性较好的60%乙醇沉淀组分用大孔树脂进行纯化和活性再评价。结果 30%、60%、80%乙醇沉淀骆驼蓬多糖质量分数分别为20.07%、21.80%、19.98%,对秀丽隐杆线虫株AM141 Poly Q-YFP聚集所形成荧光点的抑制率分别为7.9%、17.00%和-1.72%。60%乙醇沉淀部分用大孔树脂纯化后,质量分数较高的10%、20%乙醇洗脱液中多糖质量分数分别为49.76%、38.26%,抑制率分别为35.25%和18.03%。结论利用秀丽隐杆线虫株AM141模型来评价骆驼蓬多糖对Poly Q聚集毒性的影响,方法简便,稳定可靠。且发现60%乙醇沉淀骆驼蓬多糖对秀丽隐杆线虫株AM141中Poly Q聚集的抑制作用最强,并有一定的量效关系。     

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

acs-20；acs-22双突变线虫对低渗溶液及小分子药物的敏感性研究

目的分析acs-20;acs-22双突变线虫是否适合经皮肤渗透吸收的小分子化合物的体内效应研究,为建立药物筛选的生物新模型提供线索。方法野生型秀丽隐杆线虫N2作为对照,PCR验证acs-20;acs-22双突变线虫2个突变基因（acs-20和acs-22）的缺失。将2种线虫浸泡于低渗溶液（双蒸水）中,记录2种线虫浸后20、40、60min时间点的生存率,对比2种线虫对液体渗透压的敏感性。分别用10、20μg／mL的阿霉素（DOX）处理线虫,记录2种线虫在药物处理后12、24、48h时间点的生存率,对比2种线虫对毒性药物的敏感性。结果PCR结果显示：与野生型秀丽隐杆线虫N2相比,在acs-20;acs-22双突变线虫DNA序列中确实存在acs-20和acs-22基因缺失,acs-20;acs-22双突变线虫对低渗液体环境和DOX更为敏感。结论与野生型秀丽隐杆线虫相比,acs-20;acs-22双突变线虫更适合观察经皮肤渗透吸收的小分子化合物的体内效应,可以发展成为一种新的药物筛选生物模型。     

基于秀丽隐杆线虫的中医药抗衰老研究

衰老以及与衰老相关的疾病是当今社会日趋严重的医学问题和社会问题。秀丽隐杆线虫是一种很好的衰老模式生物,具有寿命短、世代周期短、易于培养与观察等特点。中医药抗衰老有明确疗效,多种中药提取物及中药复方可基于秀丽隐杆线虫模型,调控衰老基因、调节氧化应激水平、抑制Aβ1-42沉积等方面抗衰老及治疗衰老相关疾病。     

秀丽隐杆线虫作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型研究

目的采用秀丽隐杆线虫Ras/有丝分裂原蛋白活化酶(MAPK)信号通路上的过度激活系列突变体研究该模式生物作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型的可行性及其分子机制。方法采用96孔板将索拉菲尼和依托泊苷作用于L1期秀丽隐杆线虫(每孔80~100条),并设空白对照,每个处理设3个重复。培养秀丽隐杆线虫4~5 d后,于倒置生物显微镜下观察秀丽隐杆线虫野生型和突变体数目。与空白对照比较,野生型比例越高,说明药物效果越好。结果索拉菲尼能够剂量依赖性地逆转let-60/ras(gf)和mek/erk(gf)双突变体多阴门表型,对其下游转录因子lin-1(lf)和lin-31(gf)多阴门突变体几乎没有影响;依托泊苷对信号通路上游因子let-60/ras(gf)及下游转录因子突变体lin-31(gf)均有明显的抑制作用,不依赖细胞信号通路。结论秀丽隐杆线虫模型不但能够筛选靶向Ras/MAPK信号通路的抑制剂,还能评价肿瘤细胞毒药物。     

VHL抑制剂对鱼藤酮所致帕金森病秀丽隐杆线虫模型的影响

为了研究VHL(von Hippel-Lindau)抑制剂对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis ele?gans,C.elegans,简称线虫)模型的影响,采用鱼藤酮诱导PD线虫模型,并使用VHL抑制剂VH298进行干预.以不同浓度的鱼藤酮对转基因线虫zc...     

桑葚多糖T3-3分离及秀丽隐杆线虫抗衰老活性研究

[目的]研究桑葚多糖T2提取工艺优化,并对其抗衰老活性进行分析。[方法]以秀丽隐杆线虫为模型,用寿命、移动力分析、吞咽频率、产卵量和肠脂褐质综合评价不同剂量范围的桑葚多糖(T3-3)抗衰老活性。通过正交和优化实验确定最优提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间2 h,提取次数3次,料液比1∶30,提取率最高达8.48%。[结果]抗衰老活性研究表明,150 mg/L的T3-3能增强秀丽隐杆线虫的抗衰老能力。[结论]该提取工艺1)延长了秀丽隐杆线虫的寿命,秀丽隐杆线虫平均寿命延长了10.38%(P0.05),最大寿命延长了28.57%(P0.05),50%存活率对应天数延长了0.91%。2)秀丽隐杆线虫吞咽频率增加,吞咽频率比对照组高18.78%。3)产卵量无统计学差异。4)减少秀丽隐杆线虫肠脂褐质的产生量,比对照组平均荧光强度低11.14%(P0.05),实验末期,对照组的平均荧光强度增大了12.47%。     

秀丽隐杆线虫-多重耐药鲍曼不动杆菌感染模型的建立

目的 采用线虫液体培养法,建立秀丽隐杆线虫-多重耐药鲍曼不动杆菌(multidrug resistance acinetobacter baumannii,MDRAB)感染模型.方法 利用临床分离的MDRAB对线虫进行感染,通过考察线虫的存活率,探讨感染线虫模型所需的细菌浓度;感染后取不同时间点将感染线虫裂解,对上清液进行线虫肠道细菌鉴定及菌量计数,以验证模型的成功建立.结果 细菌浓度在1.20×109cfu/mL 的MDRAB组线虫的生存率明显低于E.coli OP50及空白对照组,差异有统计学意义(X2=112.75,P<0.001).实验所得上清液经细菌鉴定及药敏测试证实为MDRAB;MDRAB感染线虫4、8、12、24 h后,线虫体内菌量分别为(0.22±0.02)×105、(0.54±0.03)×105、(1.69±0.02)×105、(3.22±0.60)×105cfu/mL,采用One-Way ANOVA分析,不同时间点感染线虫肠道内菌量差异有统计学意义(F=27.32,P<0.001).结论 本实验成功建立了秀丽隐杆线虫-多重耐药鲍曼不动杆菌液体感染模型.     

白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其初步机制研究

目的：探讨不同浓度白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制。方法：观察25、50、100 µmol·L-1白藜芦醇处理的秀丽隐杆线虫野生型N2与daf-2、daf-16突变体的寿命变化。结果：与对照组比较,25、50、100 µmol·L-1白藜芦醇处理均可以显著延长三种秀丽隐杆线虫的寿命。结论：白藜芦醇可以显著延长秀丽隐杆线虫的寿命,其对寿命的影响不依赖于DAF-2/胰岛素样信号传导通路。     

秀丽隐杆线虫中与衰老相关的DAF-2/IGF-1信号通路研究进展

衰老是诸多疾病发生的关键因素之一。目前,生物学界关于衰老遗传学的大部分知识和信息都来自于对秀丽隐杆线虫的研究。秀丽隐杆线虫在抗衰老研究中发挥着先锋和主力的作用。DAF-2/IGF-1信号通路是第一个为人类所认识的衰老基因调控机制。该文综述了秀丽隐杆线虫作为模式生物在DAF-2/IGF-1信号通路研究进程中的引领和推动作用,为抗衰老研究提供可借鉴的科研思路和方法。     

模式生物线虫在药物复杂体系活性评价中的应用

虽然线虫只是代表了一类简单的生物体,但是线虫在现代生物医学研究,尤其是药物靶点研究方面具有巨大的潜在应用价值。其功能完善的细胞结构、与其他高级生物的保守性使得线虫成为一个操作简单、经济有效的高通量体内研究模型。本文总结了模式生物线虫在药物活性评价中的应用。初步探讨了线虫在药物复杂体系活性评价的可行性,以及线虫为从整体水平观察和研究中药复方的药效及机制的前景。     

解脲支原体的病原学诊断方法初探

目的:研究液体培养解脲支原体后加做固体培养的必要性。方法:将180例不孕不育患者标本先接种解脲支原体液体培养基进行液体培养24 h后,再分别转种解脲支原体固体培养基培养,同时取124例液体培养液变红的标本做普通细菌培养和真菌培养。结果:液体培养阳性率为51.11%,固体培养阳性率为46.11%,差异无统计学意义(P>0.05)。但液体培养阳性而固体培养阴性的标本占19.6%,液体培养法判断为阴性的污染标本中28.1%固体培养阳性。普通细菌培养和真菌培养共检出13株产脲酶菌和40株不产脲酶菌。结论:采用单一的液体培养法进行临床检测解脲支原体易出现假阳性或假阴性。确切的诊断仍要靠液体培养初筛后加做固体培养。     

部分中草药促凝作用筛选的实验研究

目的从药典已有记载或文献报道凝血效果较好的20多种促凝中草药,筛选出凝血时间最短,促凝效果最好的中草药.方法用家兔体外凝血实验,对20余种具有止血作用的中药和民间草药初提物及有机溶剂萃取提取物的对比研究,观察了凝血时间(CT)(凝血板法,试管法)、凝血酶原时间(PT)、血浆复钙时间(RT)等指标.结果发现采自云贵高原的一种多年生草本植物(简称HB)初提物及其氯仿萃取纯化后的水相提取物的凝血时间、凝血酶原时间、血浆复钙时间与空白对照组比较显著缩短(P<0.01),并且凝血时间比研究中的其它中草药初提物和对比物明显缩短(P<0.01).结论 HB及氯仿萃取纯化后的水相提取物有明显的体外促凝血作用,氯仿萃取纯化后的水相提取物是其有效部位.     

陈意教授中西医六异解析

[目的]解析陈意教授所论的中西医六大差异,回归中医本源,呼吁继承。[方法]从理论、思维、文化、治法、药物、疾病认知这六方面解析陈意教授所提出的中西医差异,归纳总结陈意教授对中医继承、发展与创新的独到见解。[结果]陈意教授的中西医六异观点认为中医的理论以原则为基础,采用宏观调控思维,扎根在中华文化之中,注重辨证,以一方治一证,以药性理论驾驭中药,并认为健康的标准是和谐;西医的理论以现实为基础,采用微观因果思维,建立在西方文化之上,注重辨病,以一药治一病,用分子式说明西药,对抗病原或病灶。[结论]陈意教授解析中西医六大差异,强调中医当在继承的基础上发展创新,这在方法论上具有启示意义。     

嗜酸乳杆菌高密度培养工艺条件的优化及其评价

目的：探讨嗜酸乳杆菌培养条件,研制出一种菌活性高、密度大、操作简便、易于生产应用的发酵工艺,阐明乳酸菌直投式发酵剂的生产和应用。方法：选取嗜
酸乳杆菌中国株为菌种,根据培养基成分的配比不同,分为实验组和对照组,优化培养条件以及MRS液体培养基的配方,通过紫外分光光度计检测菌液的吸光度（A650）值和活菌数量变化,筛选出最优的工艺过程。结果： 通过筛选确定嗜酸乳杆菌的最佳培养条件是接种量1%,初始pH值6.2,37℃恒温厌氧培养23 h;最适培养基配方为3.5%蛋白胨、0.5%酵母提取物、2%葡萄糖、0.2%柠檬酸铵、0.088%磷酸氢二钠、0.6%乙酸钠、0.025%硫酸锰、0.06%硫酸镁、1%营养因子和0.1%吐温80;由最适培养工艺培养得到的菌种数可达1.43×¹¹ cfu.mL^-1,较传统培养方案相比菌种数增长约1×10¹¹ cfu.mL^-1,且工艺简便易行。结论：实现对嗜酸乳杆菌培养条件和培养基配方的优化,得到嗜酸乳杆菌最优培养工艺条件,菌种的高密度培养可用于
乳酸菌直投式发酵剂的制备和应用。     

模式生物斑马鱼在中药活性筛选和毒性评价中的应用进展与展望

斑马鱼作为一种非哺乳类模式生物,因其具有体积小、易饲养、发育快速、繁殖力强、便于观察等优势,在医药研究领域得到了广泛应用。近年来,随着技术和方法的不断改进,模式生物斑马鱼在中药领域的应用也逐渐深入,特别是对中药复杂的有效成分、活性物质以及毒性的评价与筛选。斑马鱼作为一种整体动物模型,能够较为客观地对中药活性物质以及毒性进行评价,实现快速有效的高通量筛选。通过对近年来国内外相关文献的查阅与归纳整理,综述了模式生物斑马鱼在中药活性筛选和毒性评价中的应用进展,主要从抗炎、抗血管生成、促血管生成、抗骨质疏松、抗酒精性肝损伤、抗神经性疾病等活性成分筛选以及肝毒性和胚胎毒性等方面进行总结分析,以期为中药安全性与有效性评价提供新的方法和技术。      

检测中草药提取物中黄曲霉毒素的高灵敏方法

目的建立中草药提取物中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的高灵敏测定方法。方法样品经提取和过滤后用免疫亲和柱净化和衍生,然后采用不同比例(15%~30%)乙腈/水梯度洗脱,用具荧光检测器的高效液相色谱仪检测。结果检出限:黄曲霉素G1为0.09 ppb;B2为0.02 ppb;B1为0.03 ppb;G2为0.04 ppb,均低于文献报道的检出限,样品加标回收率为90%~103.2%。结论该方法简单、快速、准确、灵敏度高,可用于中药中黄曲霉毒素含量的测定。     

半夏内生菌的分离培养与鉴定

目的从恩施产半夏植株体内分离培养有益的内生细菌,为制备半夏益生菌提供菌株。方法取半夏植株样品经前处理后,接种至牛肉膏蛋白胨固体和液体培养基培养48 h后选择目的菌落,经纯化培养后,涂片革兰氏染色,油镜观察,并进行各种生化反应。结果三类标本的培养特征：在固体培养基上,菌落呈圆形,灰白色,直径3~4 mm,边缘整合,中央凹陷,呈肚脐状;在液体培养基中培养24 h后呈沉淀生长,上液澄清,革兰氏染色阳性,菌体呈直杆状,成链状排列,菌体长5~10μm,宽1~2μm,培养48 h后可见芽胞形成,位于菌体中央,呈柱状,结合生化反应结果,所分离的半夏内生菌菌株符合地衣芽胞杆菌特征。结论半夏内存在多种内生菌,从半夏植株内能分离出地衣芽孢杆菌,对研究制备半夏益生菌制剂提供了重要的理论依据。     

中药复杂提取物无定形态转晶现象及其对溶出行为的影响研究——以葛根总黄酮为例

为保障中药产品质量，研究了中药复杂提取物的转晶现象及固态形式对理化性质的影响。以葛根总黄酮提取物为模型药物，通过不同条件下放样使其转晶，并进行特性溶出试验。发现环境应力条件下湿度是诱导葛根总黄酮转晶的关键因素，湿度越高，转晶越快；转晶后，葛根总黄酮溶出速率最高下降了96.51%。进一步模拟葛根总黄酮的制剂工艺后发现，引入了水分后的湿法制粒过程也将导致转晶行为并降低溶出速率。转晶样品的溶出速率与转晶量之间存在反比例关系。中药提取物在储存和制剂过程中均存在转晶风险，其转晶行为会对溶出速率产生显著影响，进而影响中药产品质量。本研究发现了无定形态中药复杂提取物的转晶现象，并系统研究了转晶现象对溶出行为的影响，为保障中药产品质量、促进中药制剂水平的提高提供了新的研究思路。