γ-干扰素对培养人原代结膜及泪腺上皮细胞表达炎症相关因子的影响

目的 了解γ-干扰素(γ-IFN)对体外原代培养的人结膜上皮细胞及泪腺上皮细胞的细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1,CD54)、白细胞介素-1β(interl-eukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-1受体1(interleukin-1 receptor1,IL-1R1)表达的影响,以初步探讨γ-IFN对人结膜及泪腺上皮细胞炎症损伤的作用。方法 混合消化液培养法获得人原代结膜上皮细胞,组织块培养法获得人泪腺上皮细胞,免疫组织化学方法鉴定。在细胞培养液中加入γ-IFN,浓度分别为0、30、100、300U·mL~(-1),37℃培养24h后收集细胞,应用流式细胞学及Western blot检测CD54的表达,Western blot检测IL-1β及IL-1R1的表达。结果 在γ-IFN浓度分别为0、30、100及300U·mL~(-1)条件下,结膜上皮细胞表达CD54的平均荧光强度为4.67、24.1、27.4及31.9;泪腺上皮细胞表达CD54的荧光强度分别为2.50、10.2、21.4及25.6。Western blotting的结果与流式细胞仪检测的结果相符,正常人结膜和泪腺上皮细胞有少量CD54表达,加入IFN-γ后CD54的表达增加,且呈剂量依赖性。Western blot的结果显示正常人结膜上皮细胞有少量IL-1R1表达,加入γ-IFN后IL-1β及IL-1R1的表达明显增加,且呈剂量依赖性,泪腺上皮细胞未检出IL-1β及IL-1R1的表达。结论 γ-IFN可     

多西环素对培养的人结膜上皮细胞炎性反应及凋亡的影响

目的探讨多西环素对体外培养的人结膜上皮细胞细胞黏附分子1（ICAM-1,CD54）、人类白细胞抗原DR（HLA—DR）、白细胞介素1β（IL-1β）表达及凋亡的影响。方法混合消化液培养法培养人结膜上皮细胞,免疫组织化学方法进行细胞鉴定。培养至第3代或第4代,在细胞培养液中分别加入γ干扰素（IFN-γ）0U／ml、IFN-γ300U／ml、IFN-γ300U／ml＋多西环素10μg／ml、IFN-γ300U／ml＋多西环素20μg／ml、IFN-γ300U／ml＋多西环素40μg／ml、IFN-γ300U／ml＋地塞米松100μg／ml,24h后收集细胞,流式细胞学检测CD54、HLA—DR及IL-1β的表达,Western blot检测CD54的表达。72h后收集细胞,碘化丙啶（PI）染色,流式细胞学检测凋亡。结果培养的正常人结膜上皮细胞可以表达少许CD54和IL-1β,加入IFN-γ后表达明显增加,加入多西环素和地塞米松后CD54和IL-1β的表达下降（P〈0．01）。随着所加多西环素浓度的增加,CD54和IL-1β的表达逐渐降低（P〈0．01）。培养的正常人结膜上皮细胞未发现明显的HLA—DR的表达及凋亡的产生,加入IFN-γ及多西环素后HLA—DR的表达及凋亡水平无明显变化（P〉0．05）。结论多西环素可抑制培养的正常人结膜上皮细胞CD54和IL-1β等炎性相关因子的产生,提示多西环素对干眼等非感染性眼表炎性疾病的治疗可能具有一定的应用前景。（中华眼科杂志,2005,41：842-846）     

针刺对干眼兔泪腺形态学及泪腺上皮细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的 探讨针刺对干眼兔泪腺形态学及泪腺上皮细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,分析针刺对干眼的作用机制.方法 取健康新西兰白兔18只随机分为空白组、模型组、针刺组,每组6只,空白组不作任何处理;模型组皮下注射氢溴酸东莨菪碱,每天4次,每次2 mg·kg-1共24 d;针刺组在与模型组同样处理的基础上进行针刺,每天1次,共14 d.不同时段观察各组泪液分泌试验检测泪液量的结果,光镜、电镜观察泪腺形态学变化,免疫组织化学检测泪腺组织中凋亡相关基因蛋白的表达.结果 泪液分泌试验检测泪液量结果显示在针刺第4、7、14天同时段针刺组与模型组相比明显升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);在针刺第14天时,针刺组与实验前相比,差异无统计学意义(P＞0.05).光镜、电镜示针刺组泪腺上皮细胞胞浆丰富,排列紧密,活动良好,与空白组接近.免疫组织化学检测显示与模型组比较,针刺组泪腺导管及腺泡上皮细胞中Bax的阳性细胞半定量评分值明显低,差异有统计学意义(P ＜0.05);Bcl-2的阳性细胞半定量评分值亦低,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白组相比,针刺组Bax、Bcl-2评分值差异均无统计学意义(均为P＞0.05).与模型组比较,针刺组的泪腺导管及腺泡上皮细胞中Fas、FasL的阳性细胞半定量评分值明显低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与空白组相比,针刺组Fas、FasL评分值差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 针刺通过抑制干眼兔泪腺组织的细胞凋亡及腺体萎缩,促进兔干眼模型的泪腺代谢,从而达到增加泪液分泌的作用.     

人结膜上皮细胞的培养鉴定及液氮冻存

目的：探索人眼结膜上皮细胞体外培养和细胞保存的最佳方法,建立人结膜上皮细胞,进一步研究人结膜的病理、生理特点及为毒理试验提供可靠的细胞模型。方法：分别用组织块培养法、机械分离法及混合消化液培养法体外培养正常成年人结膜上皮细胞,通过观察细胞形态、生长特性并用原位免疫组化方法鉴定培养细胞;收集第３代和第４代融合的细胞液氮冻存,保存３０天后复苏,观察复苏成功率。结果：３种取材方法中,混合消化液培养法细胞     

γ—干扰素及肝素抑制兔晶体上皮细胞生长的实验研究

目的:研究γ—干扰素及肝素对体外培养的兔晶体上皮细胞(RLEC)的生长抑制作用,探讨后发性白内障的防治方法。方法:RLEC原代细胞来自正常健康的新西兰大白兔。胰酶消化法传代。第三代细胞分别与0.1～10000u/ml剂量的γ—干扰素及100～5000u/ml的肝素孵育48小时,用MTT法检测γ—干扰素及肝素对晶体上皮细胞生长的抑制作用效果。结果:0.1～100u/ml剂量组的γ—干扰素对体外培养的RLEC无明显的抑制作用,1000u/ml及10000u/ml剂量组的γ—干扰素则对RLEC有较明显的抑制作用,其增殖抑制率分别为27％及38％。100～5000u/ml剂量组的肝素对RLEC均有明显的抑制作用。结论:一定浓度的γ—干扰素及肝素对兔晶体上皮细胞生长具有直接抑制作用。眼科学报1997;13:167—169。     

几丁聚糖对兔结膜上皮细胞和结膜成纤维细胞增殖的影响

目的　研究几丁聚糖对兔结膜上皮细胞和结膜成纤维细胞增殖的影响。方法　采用消化法培养结膜上皮细胞 ,组织块法培养结膜成纤维细胞。通过MTT比色法和细胞计数法测定几丁聚糖对两种细胞增殖的影响。结果　几丁聚糖在浓度 >0 0 3 %时能促进结膜上皮细胞的增殖 ,浓度为 0 12 %时促进作用最明显。结膜成纤维细胞在几丁聚糖浓度 >0 0 3 %时其增殖即受到抑制 ,抑制作用呈浓度依赖性。结论　几丁聚糖有望用于预防睑球粘连     

INF-γ和TGF-β1对视网膜色素上皮细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨不同浓度的干扰素-γ(interferon-γ，INF-γ)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-βl，TGF—β1)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞端粒酶活性的影响。方法 使用不同浓度的INF-γ和TGF—βl处理RPE细胞24h后，采用端粒重复序列扩增法定性、定量检测上述细胞因子作用下的RPE细胞端粒酶活性。结果 随着上述细胞因子浓度的增加，RPE细胞端粒酶活性逐渐降低，且呈剂量依赖性，2种细胞因子具有协同作用。结论 INF-γ和TGF—βl对RPE细胞端粒酶活性具有抑制作用，细胞因子有可能成为治疗增生性玻璃体视网膜病变的新靶点。     

γ—干扰素对人晶体上皮细胞增殖和胶原合成的影响

为研究干扰素γ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎγ，ＩＦＮ－γ）对人晶体上皮细胞（ＨＬＥＣ）增殖及胶原合成的影响，采用ＭＴＴ比色法和３Ｈ－脯氨酸参入法研究了不同浓度的γ－干扰素对ＨＬＥＣ增殖活性及胶原合成的作用。结果ＩＦＮ－γ（１００—１０００ｕ）能明显抑制ＨＬＥＣ的增殖和胶原合成，１０００—１００００ｕ能显著对抗１０％小牛血清对ＨＬＥＣ的促增殖作用。结论ＩＦＮ－γ或许可以为临床筛选预防后发性白内障的药物提供依据     

体外培养人角膜上皮细胞中CD44的表达及IFN-γ和雷公藤多甙对其的影响

目的探讨黏附分子CD44在角膜上皮细胞中的表达及干扰素-γ（IFN-γ）和雷公藤多甙对角膜上皮细胞中CD44表达的影响。方法采用细胞培养和流式细胞技术,分别观察同一培养时间（24h）不同IFN-γ含量和同一IFN-γ含量不同培养时间对人角膜上皮细胞CD44表达的影响及0.03%雷公藤多甙对角膜上皮细胞中CD44表达的影响。结果体外培养的人角膜上皮细胞可基础表达一定量的CD44（1.944±0.237）,IFN-γ可上调CD44的表达,其上调作用呈量和时间依赖性（P〈0.05）。雷公藤多甙可以使角膜上皮中CD44的表达降低（P〈0.01）。结论IFN-γ可以使角膜上皮细胞中CD44的表达升高,使排斥反应加剧;雷公藤多甙可以抑制角膜上皮细胞中CD44的表达,从而抑制角膜移植排斥反应。     

丙酸睾酮对泪腺上皮细胞保护作用的实验研究

目的 研究雄激素对泪腺上皮细胞的保护作用.方法 酶消化法培养的兔泪腺上皮细胞,经不同剂量丙酸睾酮（10×10^-9mol·L^-1、100×10^-9mol·L^-1、1×10^-6mol·L^-1、10×10^-6mol·L^-1）作用24 h以及过氧化氢作用60 min后,分别采用MTT法检测细胞活性和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 加入不同剂量的丙酸睾酮（10×10^-9 mol·L^-1、100×10^-9 mol·L^-1、1×10^-6 mol·L^-1、10×10^-6 mol·L^-1）,泪腺上皮细胞的活性分别为0.376±0.013、0.398±0.018、0.418±0.023和0.439±0.015;泪腺上皮细胞的凋亡率分别为（13.94±0.73）%、（12.51±0.91）%、（10.63±0.78）%和（8.19±0.85）%,与H2O2组[（0.354±0.022）%和（15.15±1.05）%]比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）,并在一定浓度范围内表现出剂量依赖性.结论 丙酸睾酮可以抑制泪腺上皮细胞的凋亡,保护泪腺上皮细胞.     

“去上皮”羊膜对体外培养的结膜上皮细胞的作用

目的：探讨羊膜基底膜对结膜上皮细胞形态功能的影响。方法：把“去上皮”羊膜按照基底膜或实质面向上分为两组,接种结膜上皮细胞,同样条件下培养,取培养14天的两组标本进行组织学（HE和PAS染色）,透射电镜,以及免疫组化检查（包括抗角蛋白和抗波形蛋白染色）。结果：细胞72小时内贴附在羊膜上,基底膜面接种的上皮细胞顶端见微绒毛,单层排列,细胞间有丰富桥粒,基底膜完整,可见半桥粒,抗角蛋白染色阳性,抗波形蛋白染色阴性;实质面接种的上皮细胞浆内有大量脂滴,表面未见微绒毛,细胞松散堆积,与羊膜连接不紧密,未见桥粒和半桥粒,抗角蛋白染色弱阳性,抗波形蛋白染色强阴性。结论：羊膜基底膜是结膜上皮细胞体外培养的良好载体,有利于上皮细胞生长,黏附,分化,并能减缓上皮细胞老化。     

γ-干扰素对实验性青光眼滤过术瘢痕形成的影响

目的探讨γ-干扰素（γ-interferon，γ-IF）在实验性青光眼滤过术中抗结膜下瘢痕形成的效果。方法16只家兔随机分为对照组和用药组，每组8只16眼。均行小梁切除术，用药组于术毕即刻、术后第3天、第7天、第14天结膜下注射γ-IF500×10^3 IU，对照组注射生理盐水。分别作眼压（intraocular pressure，IOP）、滤过泡及透射电镜和光镜观察。结果IOP：2组术后IOP均较术前下降，但2组间术后IOP无差异。功能性滤过泡：用药组14眼，对照组6眼。电镜观察：术后21d，用药组纤维排列整齐；对照组纤维排列紊乱。光镜观察：术后21d，用药组结膜下组织疏松，可见纤维间隙，成纤维细胞较少；对照组结膜下被纤维组织填充，成纤维细胞较多。结论γ-IF可有效防止滤过泡瘢痕化及巩膜瘘道阻塞，提高滤过术成功率，有临床应用价值。【眼科新进展2007；27（2）：99-101]     

miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的 研究miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法 将体外培养的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞随机分为对照组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液培养)、损伤组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+光损伤)、过表达组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+光损伤)、阴性组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics NC+光损伤)、PI3K/Akt阻断剂组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+LY294002+光损伤)。使用光照强度为(16 500±200) lx的LED冷光灯建立ARPE-19细胞光损伤模型，利用TransIntro EL Transfection Reagent转染液行细胞转染。采用qRT-PCR法检测各组ARPE-19细胞...     

白内障超声乳化吸出术对泪膜及结膜上皮细胞的影响

目的探讨白内障超声乳化吸出联合人工晶状体植入术对泪膜及结膜上皮细胞的影响。方法年龄相关性白内障31例（38眼）。年龄54-76岁。男13例（15眼）,女18例（23眼）。行超声乳化吸出术联合后房折叠型人工晶状体植入术。分别在术前和术后第1、7、30 d测定泪膜破裂时间（BUT）、Sch irm erⅠ试验（SIT）及角膜荧光素（F l）染色,并应用免疫印迹细胞化学染色方法检测结膜上皮细胞凋亡诱发因子bax和抑制因子bc l-2的表达。结果术后第1、7天BUT值缩短、F l染色增强,二者分别与术前比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,第30天时二者与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后第1天SIT与术前比较差异有统计学意义（P〈0.05）,而第7、30 d时与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后第1、7天结膜上皮细胞中凋亡诱发因子bax的表达增强、凋亡抑制因子bc l-2的表达降低,与术前比较差异有统计学意义（均P〈0.05）,而第30天时两者与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论白内障超声乳化吸出联合人工晶状体植入术对术眼结膜上皮细胞和泪膜功能有短期的损伤,部分患者引起干眼。     

雌二醇及丙酸睾酮对H2O2诱导泪腺上皮细胞凋亡的抑制作用

背景性激素在干眼症的发病过程中起着重要的作用,尤其是对泪腺的功能起到非常重要的调控作用,但其对泪腺上皮细胞凋亡作用的机制尚不完全明确。目的探讨雌二醇及丙酸睾酮对H2O2诱导的兔泪腺上皮细胞的凋亡作用。方法分离2～3月龄雄性普通级新西兰兔的泪腺组织,用组织块培养法体外培养兔泪腺上皮细胞,用细胞角蛋白（CK）抗体对培养的细胞进行免疫细胞化学鉴定。取对数生长期的细胞,以5×10^-5个／ml接种于96孔板培养44h后,培养基中分别加入1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8mol／L的雌二醇或丙酸睾酮培养24h,再加入1×10^-4 mol／L H2O2培养1h诱导细胞凋亡,仅用H2O2作用的细胞作为凋亡对照组,常规培养的细胞作为空白对照组。MTT比色法检测各组细胞570nm处泪腺上皮细胞活性的吸光度（A570）值,流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测各组细胞的凋亡情况。结果培养的细胞呈不规则多边形,其中80％以上的细胞对CK呈阳性反应。MTT比色法检测表明,与空白对照组比较,凋亡对照组、不同浓度雌二醇组和丙酸睾酮组的A。值均明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．01）,1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7mol／L雌二醇组和1×10^-6mol／L丙酸睾酮组的A570值均明显高于凋亡对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。与相应浓度丙酸睾酮组相比,雌二醇组A570值均明显增高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。与凋亡对照组比较,丙酸睾酮组和雌二醇组早期及晚期细胞凋亡率均明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;与丙酸睾酮组相比,雌二醇组早期及晚期的细胞凋亡率明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）。结论雌二醇及丙酸睾酮可抑制H2O2诱导的泪腺上皮细胞的凋亡,雌二醇的抑制作用强于丙酸睾酮。雌二醇对泪腺上皮细胞凋亡的抑制作用呈一定的剂量依赖性。     

"去上皮"羊膜对体外培养结膜上皮细胞的作用

目的 :探索羊膜基底膜对结膜上皮细胞形态功能的影响。方法 :把“去上皮”羊膜按照基底膜或实质面向上分为两组 ,接种结膜上皮细胞 ,同样条件下培养。取培养 14天的两组标本进行组织学 (HE和PAS染色 ) ,透射电镜 ,以及免疫组化检查 (包括抗角蛋白和抗波形蛋白染色 )。结果 :细胞 72小时内贴附在羊膜上。基底膜面接种的上皮细胞顶端见微绒毛 ,单层排列 ,细胞间有丰富桥粒 ,基底膜完整 ,可见半桥粒 ,抗角蛋白染色阳性 ,抗波形蛋白染色阴性 ;实质面接种的上皮细胞胞浆内有大量脂滴 ,表面未见微绒毛 ,细胞松散堆积 ,与羊膜连接不紧密 ,未见桥粒和半桥粒 ,抗角蛋白染色弱阳性 ,抗波形蛋白染色强阳性。结论 :羊膜基底膜是结膜上皮细胞体外培养的良好载体 ,有利于上皮细胞生长、粘附、分化 ,并能减缓上皮细胞老化。     

苯扎氯铵对人结膜上皮细胞黏蛋白MUC1表达的影响

目的 探讨防腐剂苯扎氯铵(BAC)对体外培养的人结膜上皮细胞黏蛋白MUC1表达的影响及毒性作用.方法 采用培养的3～5代人结膜上皮细胞,将不同浓度(0.0100%、0.0050%、0.0010%、0.0005%、0.0001%)的BAC单次作用于结膜上皮细胞15 min,分别于处理细胞后0、6、12、24、48、72 h提取RNA及蛋白,采用RT-PCR及Western杂交方法检测MUC1表达水平.结果 0.0100%和0.0050%BAC作用后12～72 h可观察到结膜上皮细胞MUC1基因表达下调,0.0010%和0.0005%BAC作用后,24～48 h出现MUC1基因表达的下调,72 h恢复.0.0100%BAC作用后6～72 h检测到MUC1蛋白表达下降,而0.0050%BAC作用后12～72 h MUC1蛋白表达下降,0.0010%BAC作用后72 h MUC1蛋白表达减少.结论 BAC具有下调人结膜上皮细胞MUC1表达的作用,其下调作用具有时间依赖性和剂量依赖性.     

曲安奈德对培养的人视网膜色素上皮细胞的毒性作用

目的探讨曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对视网膜色素上皮细胞可能潜在的毒性作用。方法质量浓度0mg·L-1、10mg·L-1、30mg·L-1、300mg·L-1TA分别作用ARPE19细胞24h和72h后通过TUNEL和电镜观察2种方法从形态和功能方面观察TA对ARPE19细胞生长的影响。结果(1)TUNEL法:质量浓度10mg·L-1TA不影响ARPE19细胞的生长,但是随着质量浓度增大,细胞凋亡程度逐渐增强(t=2.921,P<0.01),随着时间延长,ARPE19细胞的凋亡指数逐渐增大(t=2.306,P<0.01);(2)电镜:质量浓度10mg·L-1TA作用后ARPE19细胞状态良好,但是随着质量浓度增加,细胞走向凋亡的形态越明显,微绒毛消失,核染色质边集,凋亡小体形成。结论一定浓度的TA能够诱导视网膜色素上皮细胞的凋亡,而且这种凋亡效应呈浓度和时间依赖关系。因此,TA对视网膜色素上皮细胞可能有潜在毒性。     

干扰素α-2b对结膜下成纤维细胞生长形态的影响

目的：探讨干扰素α－２ｂ对体外培养的牛结膜下成纤维细胞是否具有抑制作用及其作用机制。方法：采用光镜、电镜观察该细胞在含不同浓度干扰素α－２ｂ培养液中的生长形态和粘附移动能力。结果：干扰素α－２ｂ能够使该细胞生长密度降低、伪足收缩、细胞变圆、移动能力减弱。结论：干扰素α－２ｂ具有抑制结膜下成纤维细胞粘附和移动生长的能力,提示可用于翼状胬肉、青光眼滤过术后,以减少结膜下瘢痕形成导致的手术失败。