胶质瘤中EGFR扩增、过表达及其与肿瘤增殖关系的研究

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）在胶质瘤中扩增、过表达及其在肿瘤增殖中的作用机制。方法应用SP免疫组化法、RT—PCR、Southern印迹法检测6例正常脑组织、50例不同级别胶质瘤及2个体外胶质瘤细胞系中在EGFR蛋白水平、mRNA水平、DNA水平的表达及扩增情况，以及与肿瘤增殖活性的相关性。结果不同级别的胶质瘤中，表达与扩增程度不同，Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤之间比较具有显著性差异：EGFR过表达与Ki-67在胶质瘤中的表达呈正相关．而EGFR过表达与扩增并不一致。结论EGFR过表达与胶质瘤的增殖活性增高有密切相关性，推测EGFR过表达是肿瘤进展中的早期事件而非进展期事件。     

表皮生长因子受体及其配体与胶质瘤

表皮生长因子受体及其配体是细胞增殖信号传导系统的一部分。在胶质瘤中有EGFR及其配体的异常表达。胶质瘤的发生、发展可能存在以下机制 :EGFR及其配体的自 /旁分泌机制 ;具有自身TK活性的突变EGFR的表达 ;肿瘤血管形成等。抑制EGFR信号传导为胶质瘤的治疗提供了新的方向     

中国人胶质瘤中表皮生长因子受体基因的扩增及对患者预后的影响

目的：了解国人胶质瘤中表皮生长因子受体基因（EGFR）的扩增情况及对患者预后的影响。方法：使用半定量的Differential PCR方法对113例福尔马林固定-石蜡包埋（FFEP）胶质瘤标本内的EGFR基因扩增情况进行了检测；对其中的83例进行了生存分析研究。结果：113例胶质瘤中存在EGFR基因扩增的有26例，其中低度恶性组中仅占3.5％，而在高度恶性组中占42.1％。生存分析显示：EGFR基因扩增对患者预后并无显著影响，而起病年龄、肿瘤病理分级、肿瘤生长部位及起病症状为失语对患者术后生存期有显著影响。结论：恶性胶质瘤中存在着较为广泛的EGFR基因扩增，但EGFR基因的扩增与胶质瘤患者预后之间并不存在显著关联。     

表皮生长因子受体靶向药物治疗脑恶性胶质瘤的研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）在多数恶性胶质瘤中存在过表达,对肿瘤发生、发展起着重要作用,其靶向药物在基础研究和临床实验中均表现出良好效果。分子靶向治疗可能成为除手术、放疗和化疗之外脑恶性胶质瘤治疗的重要手段。本文对EGFR靶向药物分类及治疗脑恶性胶质瘤的机制进行综述。     

人脑胶质瘤EGFR-AKT通路活性的研究

目的研究胶质瘤中细胞EGFR和磷酸化AKT(p-AKT)的表达以及EGFR与AKT活性的相互关系.方法用免疫组化方法观察6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR表达,并应用Western blot分析p-AKT的表达.结果EGFR在胶质瘤中的表达阳性率随肿瘤恶性程度增加而增加;其蛋白表达水平与病理分级呈正相关.Western blot分析发现在正常脑组织中p-AKT蛋白水平表达极低,胶质瘤中p-AKT的表达水平均随肿瘤恶性程度增加而明显上升,且与胶质瘤病理级别正相关;低恶度肿瘤与高恶度肿瘤有明显差异.EGFR的阳性表达率与AKT磷酸化水平显著相关.结论EGFR-AKT通路的活性状态在胶质瘤的恶性进展具有重要作用,该通路可能是胶质瘤恶性表型的责任通路.     

NF-κB、EGFR、PCNA在人脑胶质瘤细胞中的表达及其相关性研究

目的 探讨NF-κB在人脑胶质瘤中的表达及其与EGFR、PCNA的关系。方法 应用免疫组化方法对56例脑胶质细胞瘤、8例正常脑组织标本中NF-κB、EGFR、PCNA蛋白进行检测。结果 NF-κB在正常脑组织中未见表达，在脑胶质细胞瘤标本中的阳性率为67．9％，在病理级别较高的胶质瘤中的表达明显高于在较低级别胶质瘤中的表达。EGFR、PCNA蛋白在胶质瘤中均有异常高表达，且表达强度与胶质瘤病理级别有关。NF-κB与EGFR表达、PCNA LI呈明显正相关。结论 NF-κB在胶质细胞瘤组织中有异常高表达，其表达与胶质瘤EGFR、PCNA呈正相关。     

LRIG1、EGFR、E-Cadherin及N-Cadherin在胶质瘤中表达及其临床意义

目的研究富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、表皮生长因子受体(EGFR)、ECadherin及N-Cadherin在不同病理级别胶质瘤中表达差异,探讨LRIG1在胶质瘤恶性进展中可能的作用机制。方法收集74例胶质瘤患者手术标本,包含12对原发及复发配对胶质瘤标本,采用qRT-PCR检测LRIG1、EGFR、E-Cadherin、N-Cadherin基因的表达,并采用免疫印迹检测LRIG1、EGFR、E-Cadherin、NCadherin、Vimentin蛋白表达情况。结果随着胶质瘤病理级别的升高,LRIG1、E-Cadherin基因及蛋白表达水平降低,EGFR、N-Cadherin基因及蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(均P0.05)。WHOⅢ-Ⅳ组胶质瘤EGFR/LRIG1及N-Cadherin/E-Cadherin比值显著高于WHOⅠ-Ⅱ组(均P0.05)。EGFR/LRIG1与NCadherin/E-Cadherin变化之间存在正相关(r=0.56,P0.05)。对原发及复发配对胶质瘤标本的研究结果与上述一致。结论胶质瘤中EGFR/LRIG1表达失衡,可能通过诱导上皮间质转化(EMT)促进胶质瘤细胞的恶性进展。LRIG1可能成为胶质瘤治疗的新靶点。     

人脑胶质瘤表皮生长因子受体的研究

调控肿瘤(如胶质瘤)生长的一个重要因素是生长因子的作用。生长因子不仅引起细胞增殖,而且具有广范的生物学活性。目前有关胶质瘤生长中表皮生长因子(EGF)作用的主要研究焦点集中于表皮生长因子受体(EGFR)。本文就EGFR在人脑胶质瘤发生、发展中的作用作一综述。     

针对胶质瘤发生发展组织芯片中表皮生长因子受体基因表达分析

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因在针对胶质瘤发生，发展相关组织芯片中的表达及意义。方法采用事先制作好的布有不同恶性程度胶质瘤临床标本、裸小鼠移植瘤标本、体外细胞系球体、脑肿瘤干细胞球体和相应对照标本共118例的组织芯片，进行EGFR的SABC法免疫组化染色，分析其表达率及表达强度。同时运用荧光实时定量PCR技术检测芯片中包含的几个细胞系EGFRmRNA表达量，对芯片中蛋白水平的研究进一步验证。结果EGFR染色主要位于细胞胞膜。在71例人脑胶质瘤组织中，EGFR阳性表达率为46．5％，各级别人脑胶质瘤组织中EGFR阳性表达率分别为Ⅰ级11．1％，Ⅱ级28．0％，Ⅲ级60．9％，Ⅳ级78．6％；各级别阳性率比较差异有显著性意义（X^2=15．668，P=0．001）；并且EGFR的阳性表达率与病理级别呈直线正相关（r=0．991，P=0．009）。在正常人脑组织、正常裸小鼠骨髓及神经干细胞球体中EGFR均呈阴性表达；在裸小鼠皮下移植瘤、人脑胶质瘤体外细胞系球体及脑肿瘤干细胞球体中EGFR均呈阳性表达。荧光实时定量PCR检测显示EGFR mRNA在人脑胶质瘤体外细胞系球体及脑肿瘤干细胞球体中表达含量高，在神经干细胞球体中表达含量极低，与芯片中蛋白水平的检测相一致。结论EGFR在正常组织和神经干细胞中未见表达，而在肿瘤中特别是脑肿瘤干细胞中高表达，并且是随着肿瘤恶性程度的增高而表达量增加。因此可作为胶质瘤发生发展的分子病因作进一步研究。     

miR-7沉默表皮生长因子受体对胶质瘤细胞周期的影响

目的 研究miR-7阻遏脑胶质瘤细胞增殖周期由G1期向S期转化的内在机制.方法 脂质体转染miR-7表达质粒进入人脑胶质瘤细胞株U251,原位杂交和RT-PCR方法检测外源miR-7基因的整合效果;流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot方法检测EGFR、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6、P16、P21和P27的蛋白表达;SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 RT-PCR结果显示miR-7基因被成功整合入U251胶质瘤细胞,原位杂交结果示miR-7主要定位于细胞核和细胞质;转染后瘤细胞增殖速度减慢,且大部分阻滞于G1期,处于分裂期S期的细胞比例明显减少(P＜0.05);miR-7转染组EGFR、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4和CDK6蛋白表达水平均有不同程度下降(P＜0.05),其中EGFR、CyclinD1、CDK4和CDK6的降低程度更为显著(P＜0.01),P16水平显著升高(P＜0.01),P21和P27的表达没有明显变化(P＞0.05).结论 miR-7可能通过有效沉默癌基因EGFR的表达途径,抑制细胞周期G1期调节蛋白复合体CyclinD1/CDK4/6的活性,并接受P16的协同作用,共同阻遏胶质瘤由G1期向S期转化,进而抑制肿瘤增殖;miR-7有望成为一种新的胶质瘤治疗候选药物.     

脑胶质瘤ADAM17与EGFR的表达及临床意义

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)与表皮生长因子受体(EGFR)在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义。方法选择2014年2月至2016年8月手术切除68例新鲜脑胶质瘤标本,其中高级别胶质瘤42例,低级别胶质瘤26例。另选择同期颅脑损伤内减压术获取的正常脑组织标本10例为对照组。采用免疫印迹法和免疫组化染色检测ADAM17和EGFR表达。结果高级别胶质瘤ADAM17和EGFR表达水平均明显高于低级别胶质瘤(P0.05),而低级别胶质瘤ADAM17和EGFR表达水平均明显高于对照组(P0.05)。胶质瘤表达水平呈明显正相关(r=0.444,P0.001)。结论随着脑胶质瘤恶性程度的增加,EGFR和ADAM17表达水平明显升高,提示EGFRA、DAM17可作为脑胶质瘤恶性程度的评估指标。     

人脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及与增殖和侵袭相关性的研究

目的 探讨胶质瘤细胞EGFR基因表达以及和肿瘤细胞增殖及侵袭性生长的相互关系。方法 应用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR、Ki67、MMP2和MMP9表达。结果 EGFR、Ki67、MMP2和MMP9在胶质瘤中的表达不同,正常脑组织和WHOⅡ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤和体外细胞系之间的表达差异显著,且四者间的表达水平两两相关。结论 EGFR过表达可以引起Ki67、MMP2和MMP9的过表达,从而促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

白藜芦醇抑制U251人胶质瘤细胞增殖及其相关机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇（Res）对U251胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法 将不同浓度Res作用于U251胶质瘤细胞系，相差显微镜下观察其形态的变化，MTT法检测其对细胞生长增殖的抑制作用，流式细胞术（FCM）检测其对细胞周期的影响，用蛋白印迹（Western blot）检测Res处理前后U251细胞表皮生长因子受体（EGFR）、p53、p21、CDK4、CyclinD1、Bcl-2及caspase-3的表达，免疫组化分析MMP9、NFKB、P-AKT及AKT2的表达。结果 U251细胞经Res处理后，细胞形态发生一定变化，U251胶质瘤细胞的增殖被抑制，呈浓度和时间依赖性，细胞周期被阻滞在S期，Western blot检测显示EGFR、CyclinD1、CDK4、Bcl-2的表达降低，p21、p53、caspase-3蛋白表达升高，免疫组化检测显示MMP9，NFKB、P-AKT及AKT2的表达降低。结论 Res有可能通过调节EGFR及p53信号通路而抑制U251胶质瘤细胞的增殖和侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡。     

靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的RNA干涉(RNAi)技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U251的EGFR表达后,在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA(shRNA)表达载体psiRNA-2400的构建,并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平,应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达,MTT法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68%;与对照组和psiRNA-scr转染组比较,细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G_0～G_1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.7%～13%,而进入G_2期细胞则增加了10.5%～11.7%。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长,而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达,在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此,shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。     

白藜芦醇对C6鼠胶质瘤细胞抑制生长和诱导凋亡的作用

白藜芦醇（resveratrol，Res）是一种广泛存在于植物中的植物补体，Res不但可以作为一种抗氧化剂，有防治心血管疾病的功效。而且具有抗炎和抗癌的作用，它可以在肿瘤的起始、发生、进展等各个阶段通过多种途径起到抑制肿瘤的作用。近年来有关胶质瘤的大量研究证实，表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的基因扩增和过表达是恶性胶质瘤发生、发展的重要始动事件之一，其介导的信号转导通路发挥着关键的作用旧J。本实验进一步就Res对C6鼠脑胶质瘤细胞生长增殖的抑制、诱导细胞凋亡及其与胶质瘤增殖、凋亡相关的EGFR等重要基因变化进行了探讨。     

叶酸/聚酰胺一胺介导miR -7抑制胶质瘤U251恶性表型的研究

目的 研究叶酸/聚酰胺-胺( FA/PAM AM)作为miR -7载体治疗胶质瘤U251的效果。方法将FA/PAMAM/miR -7络合物转染胶质瘤细胞株U251,绘制细胞生长曲线,检测细胞周期和细胞凋亡情况,Transwell体系检测瘤细胞迁移能力,软琼脂克隆实验检测细胞致瘤性;qRT - PCR方法检测miR -7水平,Western blot方法检测EGFR、PI3K和AKT2的蛋白表达。结果 获得稳定转染的U251细胞增殖速度减慢,细胞周期延长,凋亡细胞比例增多,细胞迁移能力、软琼脂克隆形成能力均有明显降低(P＜0.05);miR -7水平明显提高,EGFR、PI3K和AKT2蛋白水平均有一定程度降低(P＜0.05)。结论 FA/PAMAM能够高效投递miR -7基因至胶质瘤细胞,发挥肿瘤生长抑制作用。     

靶向表皮生长因子受体psiRNA抑制人脑胶质瘤细胞系U251生长的体外研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)RNA干扰(RNAi)技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251EGFR表达后,在体外对细胞增殖活性和侵袭能力的抑制作用。方法应用流式细胞术、Annexin V法、MTT法、Matrigel细胞外基质生长实验和Transwell细胞侵袭实验评价由脂质体Lipofectamine 2000介导转染的人脑胶质瘤细胞系U251转染前后细胞增殖活性和侵袭能力的变化;Western blotting检测EGFR和PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质的表达水平。结果与对照组和psiRNA-scr组比较,psiRNA-EGFR组EGFR以及PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质表达水平降低(均P=0.000)。转染后,psiRNA-EGFR组细胞阻滞于G0和G1期,S期细胞数目减少(均P=0.000);其细胞凋亡率为(9.60±0.26)%,高于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.000);自培养第2天其细胞增殖速率即呈下降趋势,且低于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.001)。结论靶向表皮生长因子受体RNAi技术可以序列特异性地抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞表皮生长因子受体表达,在体外对U251细胞生长具有明显抑制作用。靶向表皮生长因子受体psiRNA基因治疗可能成为脑胶质瘤治疗的新策略。     

新型小分子靶向药物F90对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44生长抑制作用

目的探讨新型小分子靶向药物F90在体外对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44的生长抑制作用。方法采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]方法,集落生成试验探讨F90对SHG-44细胞的生长抑制作用,采用蛋白免疫印迹(Immunoblotting,West-ernblot)方法检测F90对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号传导通路及凋亡相关蛋白的影响。结果 F90抑制SHG-44细胞的生长,并且呈一定的剂量相关性。MTT试验及集落生成试验的半数有效抑制浓度(50% inhibitory concentration,IC50)分别为(5.08±1.21)μmol/L和(0.14±0.03)μmol/L。F90抑制EGFR及其下游通路信号蛋白的磷酸化,上调P53蛋白的表达,并下调BCL-2蛋白的表达。结论 F90可能通过干扰EG-FR通路,体外抑制胶质瘤细胞株SHG-44的生长。     

LRIG1相关功能片段对EGFR活性和胶质瘤细胞增殖的影响

目的 探讨人多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）相关功能片段对表皮生长因子受体（EGFR）下游信号通路的影响及对人脑胶质瘤细胞增殖活性的影响。方法 构建缺失LRIG1胞内段（LRIG1-ET）的和缺失LRIG1胞外段（LRIG1-TC）的真核表达质粒,将这两个质粒及LRIG1全长（LRIG1-FL）质粒分别转染脑胶质瘤U251细胞系和原代星形胶质细胞瘤细胞,用蛋白质印迹技术检测EGFR下游信号蛋白有丝分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK/MEK）的磷酸化水平,用MTT法检测转染细胞的增殖活性。结果 全长LRIG1、LRIG1胞外段、LRIG1胞内段对人脑U251细胞和原代胶质瘤细胞的增殖活性均有抑制作用;全长LRIG1蛋白的抑制作用最强,其次为胞内段,再次为胞外段。全长LRIG1、LRIG1胞外段、LRIG1胞内段均使原代星形胶质细胞瘤细胞的MEK蛋白磷酸化水平下降。结论 LRIG1全长、胞外段、胞内段均能通过抑制EGFR下游信号抑制U251细胞和原代星形胶质瘤细胞的细胞增殖;LRIG1胞外段和胞内段具有独立的功能,均有可能对人脑胶质瘤的治疗发挥重要作用。     

人脑胶质瘤中表皮生长因子受体表达的研究

目的：探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）基因表达与胶质瘤恶性程度的关系。方法：采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及免疫组织化学技术从ｍＲＮＡ及蛋白水平检测了５０例人脑胶质瘤、４个体外恶性胶质瘤细胞系及８例正常脑组织的ＥＧＦＲ的基因表达。结果：免疫组化检测高恶度胶质瘤（ＷＨＯⅢ－Ⅳ级）ＥＧＦＲ表达６９％（２０／２９），而低恶度胶质瘤（ＷＨＯⅠ－Ⅱ级）表达率为３３％（７／２１），差异显著（Ｐ＜０．０１）；４例细胞系阳性表达１００％；８例正常脑组织无ＥＧＦＲ蛋白表达。ＷＨＯ分级与ＥＧＦＲ蛋白表达呈正相关（ｒ＝０．５５９７，Ｐ＜０．００１）。对５０例胶质瘤进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交，其结果与免疫组化检测结果一致，ＥＧＦＲｍＲＮＡ也随胶质瘤恶性程度的增加而表达增高。结论：ＥＧＦＲ可能在恶性胶质瘤的发生发展中起重要作用，ＥＧＦＲ过表达与胶质瘤分级相关性为从分子水平评估肿瘤的恶性程度及选择基因治疗的靶基因提供了参考。