联胺对内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α的影响

目的观察联胺能否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达和分泌巨噬细胞炎性蛋白-1α (MIP-1α)及其意义.方法使内皮细胞暴露于不同浓度联胺4 h,以核酸酶S1保护分析法检测内皮细胞内MIP-1α mRNA,以细胞酶联免疫吸附实验测定内皮细胞的MIP-1α蛋白表达.同时收集内皮细胞条件培养基,用Boyden小室微孔滤膜法检测MIP-1α对外周血单核细胞的趋化活性.结果内皮细胞MIP-1α mRNA在5 μmol/L联胺组的表达是对照组的3.4倍, 差异具有显著性(t=8.70, P<0.05).1、5、10 μmol/L联胺组MIP-1α蛋白的表达分别是对照组的1.9倍、2.2倍、1.7倍,方差分析显示有统计学意义(F=35.65, P<0.05).趋化实验显示,5 μmol/L联胺组内皮细胞的条件培养基引起单核细胞的迁移距离[(99.50±4.31) μm]显著高于无联胺组[(66.47±3.25) μm]、化学促动组[(67.03±6.83) μm]和随机移动组[(65.40±3.36) μm,F=404.31, P<0.05],提示经联胺刺激的条件培养基内含有具趋化活性的物质.加入山羊抗人MIP-1α多克隆抗体后,联胺组条件培养基所致的单核细胞迁移距离降至(82.80±6.88) μm(F=192.25, P<0.05),说明经联胺刺激的条件培养基内含有具趋化活性的MIP-1α.结论脂质过氧化诱导剂联胺可促进内皮细胞产生高水平具趋化活性的MIP-1α, 并可能通过招引外周血单核细胞迁入动脉内膜, 而在动脉粥样硬化过程中发挥重要作用.     

氧化修饰极低密度脂蛋白对单核和巨噬细胞趋化蛋白1mRNA表…

近年来的研究发现，单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种极为强烈的单核细胞趋向因子。本研究着重观察了极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对单核细胞和巨噬ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的影响。在单核核和巨噬细胞的培养基中分别中入２５μｇ／ｍｌ的ＶＬＤＬ或ＯＸ－ＶＬＤＬ，培养２４ｈ提取单核细胞和巨噬细胞总ＲＮＡ用ＭＣＰ－１的寡核苷酸探针，进行Ｎｏｒｔｈｅｍｂｌｏｔ分析。结果显     

氧化修饰的低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白对单核细胞MCP-1表达的影响

为了研究氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ┐ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ┐ＶＬＤＬ）对单核细胞的单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ┐１）ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。在单核细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的ＬＤＬ、ＯＸ┐ＬＤＬ、ＶＬＤＬ和ＯＸ┐ＶＬＤＬ，培养２４小时后分别收集单核细胞及其条件培养基。参照异硫氰酸胍法提取单核细胞总ＲＮＡ，并用γ３２Ｐ末端标记ＭＣＰ┐１寡核苷酸探针，进行ｓｌｏｔｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。同时用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ┐１蛋白含量。结果显示单核细胞能表达ＭＣＰ┐１，ＯＸ┐ＬＤＬ和ＯＸ┐ＶＬＤＬ能明显增强单核细胞表达ＭＣＰ┐１。而ＬＤＬ和ＶＬＤＬ的作用却很轻微。说明单核细胞能通过表达ＭＣＰ┐１，从而进一步招引其它的单核细胞迁入内皮下间隙，而ＯＸ┐ＬＤＬ和ＯＸ┐ＶＬＤＬ能加强这种作用。     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白1α表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α。方法:在内皮细胞培养基中分别加入终浓度为0.1mmol/L、0.5mmol/L、和1mmol/L的同型半胱氨酸, 孵育8h, 用原位杂交法检测其巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA的表达, 用细胞酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白的表达。结果:原位杂交显示, 培养的人脐静脉内皮细胞能低水平表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA, 为胞质内紫蓝色颗粒。培养的内皮细胞暴露于梯度浓度的同型半胱氨酸后其胞质内的巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA明显增加, 并呈剂量依赖关系, 组间差异极为显著(P＜0.01);细胞ELISA显示, 随着同型半胱氨酸浓度的升高, 各实验组内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白的表达逐步升高, 组间差异亦极显著(P＜0.01)。结论:同型半胱氨酸能诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA和蛋白, 可能在单核细胞向动脉内膜的募集中起重要作用。     

同型半胱氨酸促进内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

单核细胞迁入动脉内皮下问隙是动脉粥样硬化(AS)发生的早期事件。巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)对单核细胞有趋化作用。高同型半胱氨酸血症是AS的一个独立危险因子。我们观察同型半胱氨酸(HCY)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达MIP-1α,探讨HCY在AS形成中的作用。     

阿魏酸钠拮抗氧化型脂蛋白(a)对人动脉平滑肌细胞的作用

目的:研究脂蛋白(a)氧化前后致人动脉平滑肌细胞(SMC)增殖及细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i)的变化,观察阿魏酸钠(SF)对其的影响。方法:Lp(a)经体外Cu²⁺氧化法氧化,硫代巴比妥酸(TBARS)比色法检测氧化程度,培养的人动脉SMC中分别加入不同浓度SF,作用12h后再与天然和氧化型Lp(a)共同孵育,以MTT比色法、流式细胞仪检测细胞增殖状况,采用荧光探针Fura-2/AM检测细胞[Ca²⁺]_i。结果:氧化型Lp(a)促人动脉SMC增殖的同时亦明显增加了[Ca²⁺]_i水平,作用较天然Lp(a)明显,SF(40,80mg/L)可显著抑制氧化型Lp(a)所致的细胞增殖和[Ca²⁺]_i增加,并呈剂量效应关系,而对天然Lp(a)所致的细胞增殖和[Ca²⁺]_i增加无明显影响。结论:氧化型Lp(a)通过升高[Ca²⁺]_i而显著促动脉SMC增殖可能是其致动脉粥样硬化的机制之一,SF拮抗这种作用可能与其抗氧化能力有关。     

糖基化终产物对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的: 探讨糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白表达的影响。方法: 将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)用不同浓度(100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0 h、12 h、 24 h及36 h。采用原位杂交方法及Western blot检测巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白的表达水平。结果: BSA组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α呈弱表达;100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA 表达的平均积分吸光度值分别为18.76±3.17、26.58±1.61及34.23±2.25(BSA组为13.83±1.24,P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的平均积分吸光度值分别为22.67±1.46、34.23±2.25及42.28±3.14(0 h组为12.56±1.24,P<0.05)。100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为BSA组的1.34倍、1.87倍及2.46倍(P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为0 h组的1.82倍、2.71倍及3.34倍(P<0.05)。结论: 糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞巨噬细胞炎性蛋-1α mRNA及蛋白的表达。     

内毒素脂多糖诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α

目的了解内毒素脂多糖是否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)。方法使培养的HUVEC暴露于不同浓度的脂多糖,用地高辛标记的MIP-1αcDNA探针与HUVEC的总。RNA进行斑点杂交,并与HUVEC进行原位杂交,同时用HUVEC的总RNA与MIP-1α引物的混合物进行逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR),以检测HUVEC的MIP-1αmRNA的表达;再者,将培养的HUVEC用MIP-1α单克隆抗体进行细胞酶联免疫吸附试验(ELISA),以检测其MIP-1α蛋白表达。结果斑点杂交显示,暴露于浓度为1μg／,ml和10μg／,ml脂多糖时HUVEcmRNA在硝酸纤维素膜上斑点的积分吸光度(A)值分别为1．490和3．310,分别为对照组(0．775)的1．97倍和4．38倍。原位杂交显示,当HUVEC暴露于浓度为1μg／,ml脂多糖后,其MIP-1α mRNA表达与对照组相比有明显增加,方差分析表明,差异有非常显著性(F=142．83,P＜0．01)。但当其暴露于10μg／ml脂多糖后,其MIP-1α mRNA表达则较低。RT-PCR显示,暴露于浓度为1、5和10μg／ml脂多糖时HUVEC的MIP-1α mRNA表达分别为对照组的1．65倍、2．86倍和1．26倍。细胞ELISA显示,各组HUVEC暴露于脂多糖后,其MIP-1α蛋白表达均明显增加,尤以5μg／ml脂多糖组最为显著。方差分析表明,差异有显著性(F=15．36,P＜0．05)。结论内毒素脂多糖可诱导培养的HUVEC表达高水平的MIP-1αmRNA和蛋白,从而在动脉内膜的单核／巨噬细胞的募集起重要作用。     

钙通道阻滞剂对巨噬细胞源性生长因子刺激平滑肌细胞增生的抑制作用

培养的家兔腹腔巨噬细胞分泌巨噬细胞源生长因子(macrophage-derived growth factor,MDGF),可刺激平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMC)增生,经用钙通道阻滞剂作用于被MDGF刺激的SMC,则其增生反应即被明显抑制(P<0.05)。     

消斑肽加速氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞凋亡

目的：我们已经发现消斑肽能逆转平滑肌源性的泡沫细胞,阻抑C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化斑块的形成,对已形成的斑块有消退作用。本文主要探讨消斑肽的作用机制。方法：体外培养的猪主动脉平滑肌细胞,先与15 mg/L的氧化低密度脂蛋白孵育72 h,再与0.1 mg/L消斑肽孵育24 h,应用荧光染色技术、激光共聚焦显微技术和流式细胞术,观察消斑肽对平滑肌细胞的作用。结果：氧化低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞发生凋亡;消斑肽能加速氧化低密度脂蛋白诱导的细胞凋亡。结论：综合以前的实验,消斑肽可能是通过加速斑块中细胞的凋亡发挥抗动脉粥样硬化效果。     

巨噬细胞炎性蛋白1α对人牙周膜干细胞生物学行为的影响

背景：目前大量研究集中于炎症因子对人牙周膜干细胞的影响,然而关于趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)在人牙周膜干细胞中的表达,国内外相关文献报道较少。目的：探究不同质量浓度MIP-1α对人牙周膜干细胞增殖、凋亡及迁移的影响及与Notch信号通路的相关性。方法：将12-25岁患者(均签署知情同意书)拔下的健康正畸减数前磨牙,通过组织块法联合酶消化法分离培养人牙周膜干细胞。将第3代对数生长期人牙周膜干细胞分为对照组和1,10,100 mg/L MIP-1α组,干预第1,3,5,7天采用CCK-8法检测细胞增殖能力,干预48 h采用流式检测细胞凋亡能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,ELISA检测分泌肿瘤坏死因子α水平,qRT-PCR、Western blot检测Notch1、Hes1mRNA和蛋白表达量。结果与结论：(1)1 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞生物学行为无明显影响,10 mg/L MIP-1α显著促进人牙周膜干细胞的增殖及迁移,而100 mg/L MIP-1α显著促进人牙周膜干细胞的...     

同型半胱氨酸对培养的人单核细胞株THP-1 表达巨噬细胞炎性蛋白-1α的影响

目的: 探讨同型半胱氨酸对人单核细胞株THP-1细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA和蛋白的影响。 方法:在体外培养的THP-1单核细胞培养基中加入终浓度为0.05 mmol/L、0.1 mmol/L和0.2 mmol/L的同型半胱氨酸,孵育8 h;或加入终浓度0.1 mmol/L的同型半胱氨酸,分别孵育4、8、16 h。用逆转录聚合酶链反应检测THP-1单核细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA,并测序;用免疫细胞化学法检测巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达。结果:对照组THP-1单核细胞表达较低水平的巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA,加同型半胱氨酸后巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达随浓度增加而增强;在浓度为0.1 mmol/L时,巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达于4 h开始升高,8 h后逐渐降低。反应产物真实性经测序反应证实。免疫细胞化学图像分析结果显示,各组细胞平均吸光度值随浓度和时间递增而增加(P＜0.01)。结论:同型半胱氨酸能诱导THP-1单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA和蛋白。     

血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂抑制动脉损伤后中膜平滑肌细胞血小板源性生长因子的表达及细胞迁徙

目的： 研究球囊导管损伤后早期血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1）拮抗剂对损伤后大鼠动脉中膜平滑肌细胞血小板源性生长因子（PDGF）的表达及细胞迁徙影响。方法： 12周雄性Wistar大鼠颈动脉用球囊导管损伤，分成实验组和对照组，分别于术前2 d给予血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂CV-11974（5 mg·kg-1·d-1）和溶剂，术后2 d、3 d、5 d和14 d处死。用原位杂交、免疫组织化学和病理组织学进行研究。结果： 实验组术后第2 d、3 d和5 d中膜平滑肌细胞PDGF-A mRNA和PDGF-A、PDGF B、PDGF-α（R）、β（R）阳性细胞率以及迁徙率明显低于对照组（P<0.01）。实验组的中膜平滑肌细胞表型处于收缩型。结论： 血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂明显抑制损伤后动脉中膜平滑肌PDGF及其受体的表达和平滑肌迁徙。     

高糖对THP-1细胞及平滑肌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体4表达的影响

目的：探讨高糖对单核/巨噬细胞系THP-1细胞及人主动脉平滑肌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体4(TRAIL-R4)表达的影响。方法：用PMA孵育THP-1细胞，诱导其分化成为巨噬细胞。流式细胞仪检测成功诱导的巨噬细胞粘附分子CD11b及CD11c。采用不同糖浓度干预THP-1细胞，用Western blotting技术检测TRAIL-R4的表达。用25 mmol/L 高糖培养液在不同时点孵育人主动脉平滑肌细胞，观察TRAIL-R4蛋白表达的变化。用PKC激动剂干预THP-1细胞后，用Western blotting技术检测TRAIL-R4的表达。结果：佛波酯(PMA)孵育THP-1细胞48 h可诱导其分化成为巨噬细胞。20 mmol/L 高糖明显上调人THP-1细胞TRAIL-R4的表达。高糖对人主动脉平滑肌细胞TRAIL-R4表达上调的影响随着刺激时间的增加而增加。PKC激活后THP-1细胞TRAIL-R4的表达明显上调。结论：高糖上调TRAIL-R4蛋白表达，TRAIL-R4通过抑制巨噬细胞及平滑肌细胞的凋亡促进动脉粥样硬化。     

嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸对动脉平滑肌细胞迁移的影响

目的：血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）迁移在血管成形术后再狭窄的发生中起着关键作用。ｃ－ｍｙｃ是对多种刺激ＳＭＣ迁移的生长因子作出迅速早期反应的基因。推测采用与ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ互补的寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）的反义战略可达到抑制ＳＭＣ迁移的目的。方法：将嵌合性硫代磷酸修饰的反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入ＳＭＣ后,采用改良的Ｂｏｙｄｅｎｃｈａｍｂｅｒ方法检测ＳＭＣ的迁移率。结果：反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ作用的ＳＭＣ对１０％ＦＢＳ的化学趋化活性明显减弱,反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ显著抑制了ＳＭＣ迁移。而正义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ和错配ｃ－ｍｙｃＯＤＮ处理的ＳＭＣ,与对照组相比,迁移率无差别。结论：（１）反义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ对体外ＳＭＣ迁移的抑制具有序列特异性;（２）ｃ－ｍｙｃ基因表达在ＳＭＣ迁移的信号通路中起关键作用;（３）本研究为采用ｃ－ｍｙｃＯＤＮ的战略抑制ＳＭＣ迁移进而防止血管成形术后再狭窄的发生奠定了基础     

反义Gαq/11亚基ODNs对平滑肌细胞DNA合成和PC蛋白表达的影响

目的：探讨Ｇｑ蛋白介导血管活性多肽对ｖＳＭＣＤＮＡ合成及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。方法：用硫代修饰的Ｇαｑ／１１亚基反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ），以６μｍｏｌ／Ｌ的浓度加入含１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＴ－１刺激无血清ＤＭＥＭ培养基中体外培养ｖＳＭＣ。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ｖＳＭＣＤＮＡ合成、免疫细胞化学技术检测ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白表达。结果：Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ可明显抑制ｖＳＭＣＤＮＡ的合成，在１２ｈ，２４ｈ时抑制率分别为８４２％和８５３％；Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ亦明显降低ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白的表达。而相同浓度的正义Ｇαｑ／１１ＯＤＮｓ只呈现少量抑制作用。结论：本实验提示Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能进一步应用于由血管活性多肽刺激引起的ｖＳＭＣ增生性疾病如经皮冠脉腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的防治的研究     

巨噬细胞炎症蛋白1-α、解整合素样-金蛋白酶8、12 和CD68蛋白在颌骨巨细胞病变及长骨骨巨细胞瘤中的表达

目的检测巨噬细胞炎症蛋白1-α(MIP-1α)、解整合素样-金属蛋白酶(ADAM)8、12和CD68在颌骨巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的表达,探讨其在这两种巨细胞病变中的多核巨细胞发生中的作用.方法采用免疫组织化学SP法检测24例颌骨中心性巨细胞病变,24例长骨骨巨细胞瘤石蜡组织中的MIP-1α、ADAM8、ADAM12和CD68蛋白的表达.结果 MIP-1α在24例颌骨中心性巨细胞病变和24例长骨骨巨细胞瘤中的血管、类骨质和新骨形成区中强表达,而在多核巨细胞和圆形单核细胞中为阴性;ADAM8、ADAM12和CD68在颌骨中心性巨细胞肉芽肿和长骨骨巨细胞瘤中几乎所有多核巨细胞和部分圆形单核基质细胞均为阳性.结论颌骨中心性巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的多核巨细胞可能由CD68+的圆形单核基质细胞融合而成,这些圆形单核细胞可能是由骨微环境中的趋化因子,募集外周血中循环的单核细胞到病变局部分化而成的具有破骨细胞前体细胞性质的细胞,继而在某些融合蛋白作用下发生融合,成熟为多核破骨样巨细胞.     

M-CSF和staurosporine促进小鼠腹腔巨噬细胞巨涎蛋白摄取ox-LDL

目的：探讨巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和蛋白激酶C抑制剂(STA)对小鼠腹腔巨噬细胞（MPM）巨涎蛋白摄取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的影响。 方法： M-CSF与蛋白激酶C抑制剂STA预处理MPM后制备膜蛋白，开展SDS-PAGE电泳及配体印迹试验，测定不同条件下巨涎蛋白结合［125I］ox-LDL的值。 结果： MPM膜蛋白经唾液酸酶预处理后，巨涎蛋白与［125I］ox-LDL的结合值为(2.45±0.46)μg/g细胞蛋白，显著低于对照组的(58.38±1.78)μg/g细胞蛋白。用M-CSF与STA预处理MPM后，处理组与对照组巨涎蛋白结合配体［125I］ox-LDL呈现一趋向饱和的浓度曲线，经线性回归得两类似平行的直线，M-CSF组Bmax(453.59±15.39)μg/g蛋白，显著高于对照组的Bmax(322.77±12.54)μg/g蛋白，而Kd值变化不大。STA处理组Bmax=(362.40±15.31)μg/g蛋白，Kd值为(15.10±2.67)mg/L，对照组Bmax为(264.76±11.29)μg/g蛋白，Kd值为(17.43±2.98)mg/L。 结论： 巨涎蛋白接受M-CSF和STA的上调作用，通过增加其在MPM表面数目而促进对ox-LDL的摄取，促进泡沫细胞的形成。     

动脉粥样斑块中内皮素和一氧化氮合成酶的表达及拮抗作用

目的为探讨动脉硬化斑块的发生机制,对内皮素（ＥＴ）和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的参与和拮抗作用进行研究。方法用兔主动脉硬化模型和培养的正常兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）进行ＥＴ和ＮＯＳ的原位杂交、反转录ＰＣＲ和ＮＯＳ细胞化学检测。结果粥样斑块中ＥＴｍＲＮＡ转录增多,ＮＯＳｍＲＮＡ转录减少;与正常主动脉相比,斑块中ＥＴ基因表达增加１．２倍,而ＮＯＳ基因表达降低２２．２％;细胞化学图像分析表明,ＥＴ多肽异常增多可抑制ＳＭＣ内ＮＯＳ蛋白合成;ＥＴ－Ａ型受体拮抗剂抑制ＥＴ的作用;从而防止细胞内ＮＯＳ蛋白减少。结论ＥＴ与ＮＯＳ的平衡失调即ＥＴ异常增加和／或ＮＯＳ明显减少,与动脉粥样硬化斑块的形成有一定的关系。     

肥大细胞改变THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量及抑制胆固醇流出

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，探讨肥大细胞（MC）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量、分配和流出的影响及机制。方法： THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在MC颗粒释放物存在或缺乏下与高密度脂蛋白3（HDL₃）共育。高效液相色谱检测泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和酯化胆固醇(EC)含量，用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出，运用逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平，采用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL₃及apoA-Ⅰ的降解。结果： MC组泡沫细胞内TC、FC明显高于对照组（TC对照组为527.3 mg/g，MC组为917.9 mg/g）；EC/TC比值低于对照组（7.6% vs 47.5%）；细胞内胆固醇流出少于对照组(26.92％±2.6％ vs 40.98％±3.4％,P<0.05)；而泡沫细胞ABCA1的mRNA水平与对照组无明显差异。MC颗粒释放物处理HDL₃后，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，约有28%的apoA-Ⅰ被降解，在分子量26 kD左右处出现了新的条带，产生了1个26 kD的小多肽。结论：肥大细胞可通过降解HDL₃及apoA-Ⅰ抑制细胞内胆固醇流出而增加细胞内胆固醇蓄积，这个作用与ABCA1表达无直接关系。