甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子受体及其酪氨酸蛋白激酶的作用

目的：研究甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）受体及其酪氨酸蛋白激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＴＰＫ）活性的影响。方法：应用受体的放射配基结合分析法（ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄｂｉｎｄｉｎｇａｓａｙｏｆｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＲＢＡ），比较实验组和对照组之间１２５ＩＥＧＦ与其受体的结合情况；受体酪氨酸蛋白激酶活性测定法，以大鼠肝细胞膜可溶性蛋白为酪氨酸蛋白激酶来源，比较实验组和阴性组之间受体蛋白自身磷酸化作用的差异。结果：２６ｎｍｏｌ·Ｌ－１～５．２ｍｍｏｌ·Ｌ－１的甜菜碱均能抑制正常大鼠肝细胞膜ＥＧＦ受体与其配基的结合，这种抑制作用为非竞争性抑制；１０与１００μｍｏｌ·Ｌ－１的甜菜碱可激活酪氨酸蛋白激酶活性，而１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的甜菜碱则抑制酪氨酸蛋白激酶活性。结论：甜菜碱可以抑制ＥＧＦ受体与其配基的结合并影响ＥＧＦ受体的酪氨酸蛋白激酶活性。     

人胎肝细胞生长刺激物质与酪氨酸蛋白激酶的关系

利用从人胎肝提取的肝细胞生长刺激物质（ｈＨｓｓ），以小鼠肝细胞质膜蛋白作为受体及内源性底物，以Ｐｏｌｙ（ＧｌｕＮａ，Ｔｙｒ）４：１作为外源性底物，通过磷酸化实验，对ｈＨＳＳ的作用及其与酪氨酸蛋白激酶活性之间的关系进行了研究。利用抗酪氨酸磷酸酯抗体免疫沉淀法，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显形及液体闪烁计数等方法进行测定。结果证明：ｈＨＳＳ可刺激并增强肝细胞膜受体的酪氨酸蛋白激酶的活性，后者可使膜蛋白某些组分及外源性底物磷酸化增强；ｈＨＳＳ的作用与酪氨酸蛋白激酶的活性密切相关。     

受体酪氨酸蛋白激酶的研究

酪氨酸蛋白激酶是细胞信号转导的主要信号酶之一，对细胞的生长、发育与功能调控起着重要的作用。受体型酪氨酸蛋白激酶是细胞内段具有酪氨酸激酶活性跨膜结构的酶蛋白受体，其胞外区与生长因子配体结合，然后激活胞内段的酶活性区启动信号转导，参与细胞的生长、增殖、转化及胚胎发育和肿瘤形成。主要介绍受体型酪氨酸蛋白激酶的结构、分类及其信号转导途径。     

烧伤后胰岛素受体信号传导缺陷机理的研究

目的：为了探索烧伤后胰岛素受体信号传递缺陷的机理，以阐明烧伤胰岛素抵抗的分子基础。方法：采用ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层杆纯化大鼠肝脏和肌肉细胞膜胰岛素受体，通过胰岛素受体蛋白γ－３２Ｐ磷酸化的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ放射自显影和外源底物磷酸化，观察烫伤大鼠早期胰岛素受体β－亚基自身磷酸化和受体酪氨酸蛋白激酶（ＩＲ－ＴＰＫ）活性变化。结果：３０％ＴＢＳＡⅢ°烫伤３ｄ大鼠肝和肌肉胰岛素受体β－亚基自身磷酸化能力明显下降；胰岛素受体ＴＰＫ活性亦明显降低并对胰岛素刺激的反应性明显减退。结论：胰岛素受体信号偶联障碍可能是烧（创）伤后胰岛素抵抗发生的分子基础。     

烧伤后胰岛素受体信呈传导缺陷机理的研究

目的：为了探索烧伤后胰岛素受体信号传递的缺陷的机理，以阐明烧伤胰素抵抗的分子基础，方法：采用ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层杆纯化大鼠肝脏和肌肉细胞膜胰岛纱受体，通过胰岛素受体蛋白γ－＾３２Ｐ磷酸化的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ放射自显影和外源底物磷酸化，观察烫伤大鼠早期胰岛素受体β－亚基自身磷酸化和受体酪氨酸蛋白激酶（ＩＲ－ＴＰＫ）活性变化，结果３０％ＴＢＳＡⅢ°烫伤３ｄ大鼠肝和肌肉胰岛素受体β－亚基自     

下丘脑弓状核微量注射NMDA受体拮抗剂和蛋白激酶抑制剂对神经病理性痛觉过敏的抑制作用

目的观察大鼠下丘脑弓状核（ARC）内微量注射NMDA受体拮抗剂及受体后蛋白激酶抑制剂对神经病理性痛觉过敏的影响,探索脊髓上水平痛觉过敏的中枢敏感化机制。方法建立大鼠坐骨神经部分结扎（PSL）神经病理性疼痛模型,采用压爪缩腿法和辐射热缩腿法测定大鼠的机械痛阈和热痛阈,观测ARC内微量注射MK801（NMDA受体非竞争性拮抗剂）、APV（NMDA受体竞争性拮抗剂）、PP2（Src家族蛋白酪氨酸激酶抑制剂）、GF109203X（蛋白激酶C抑制剂）后70min内PSL模型大鼠痛阈的变化。结果 PSL模型大鼠术后数小时痛阈即明显降低（P〈0.05）,出现机械痛敏和热痛敏。ARC内微量注射MK801（5nmol）、APV（1.5nmol）后,大鼠机械痛阈和热痛阈明显升高,痛敏现象明显减轻（P〈0.05）;ARC内注射PP2（5nmol）、GF109203X（0.04nmol）后,痛阈升高幅度更大,痛敏现象也明显减轻（P〈0.05）。结论下丘脑弓状核内的NMDA受体及受体后蛋白酪氨酸激酶、蛋白激酶C在痛觉过敏的脊髓上中枢敏感化的形成和维持过程中可能起重要的作用。     

受体酪氨酸蛋白激酶Tyro3在大鼠脑的表达及定位分析

目的：分析受体酪氨酸蛋白激酶（receptor tyrosine kinases,RTKs）亚家族TAM（Tyro3、Axl和Mer）在大鼠脑中的表达模式及细胞定位,并进一步探讨TAM在脑中表达的意义。方法：分别提取出生后3、9、15、30及52 d龄SD大鼠脑组织总RNA和总蛋白,实时定量PCR（real time quantitative PCR）检测TAM mRNA水平的表达,Western blotting检测TAM蛋白水平的表达,免疫组织化学染色检测Tyro3蛋白在大鼠脑中的定位。结果：Tyro3 mRNA在脑的表达水平显著高于Axl及Mer,从生后15 d龄开始有明显表达,随后呈现明显上调趋势,至生后52 d龄Tyro3 mRNA的表达量达到15 d的3.2倍。Tyro3蛋白的表达水平也呈明显上调趋势,从生后15 d龄开始到52 d龄,Tyro3蛋白的表达量显著增高,生后52 d龄Tyro3 蛋白的表达量是15 d龄的1.3倍;免疫组织化学染色结果显示Tyro3蛋白主要分布于皮层细胞,梨状皮层和海马区细胞内有Tyro3蛋白的强阳性着色;在亚细胞水平,Tyro3蛋白存在于锥体神经元的胞质和树突部分。结论： TAM受体酪氨酸蛋白激酶家族Tyro3基因及其编码产物在大鼠脑组织发育过程中呈阶段性上调表达,并且Tyro3蛋白在海马神经元胞体及轴突有显著高表达,提示Tyro3蛋白可能通过受体酪氨酸蛋白激酶信号转导途径参与了脑突触功能的调控。     

酪氨酸类似物对早孕大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量的影响

目的 研究酪氨酸类似物对早孕大鼠子宫胞浆雌二醇受体一的影响及其机制。方法 宫腔注射酪氨酰肼及甘氨酰酪氨酸，检测早孕大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量。结果 酪氨酰肼和甘氨酰酪氨酸使妊娠第１，３，５天大鼠子宫胞浆雌二雌受体含量分别下降３８．４％，３２．２％，３３．４％和２１．７％，１６．４％，１２．３％；去卵巢大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量也有下降。结论酪氨酰肼及甘氨酰酪氨酸直接作用于子宫，使子宫胞浆雌二醇受体     

去甲肾上腺素及血管紧张素Ⅱ对大鼠心肌细胞胰岛素受体及胰岛素受体底物1酪氨酸磷酸化的综合效应

目的:初步探讨去甲肾上腺素（NE）与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠心肌细胞胰岛素受体β亚基（Ins-Rβ）及胰岛素受体底物1（IRS-1）酪氨酸磷酸化的综合效应,以及心肌胰岛素抵抗的机制。方法:培养新生大鼠心肌细胞。按照浓度梯度,将相同浓度的NE与AngⅡ的混合液加入培养基中,培养72 h后,采用Western blotting法检测胰岛素信号分子蛋白表达水平。另于每个实验组中加入AngⅡ受体阻断剂氯沙坦,分别观察NE与AngⅡ的独立效应。结果:相同浓度的NE与AngⅡ混合液可引起心肌细胞Ins-R、IRS-1及葡萄糖转运体4（GLUT4）等蛋白表达减少,Ins-Rβ亚基酪氨酸磷酸化等蛋白表达减少,IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表达增加（P<0.05）。1 μmol/L氯沙坦对Ins-Rβ亚基酪氨酸磷酸化蛋白表达无显著影响（P>0.05）,可减少IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表达（P<0.05）。结论:相同浓度的NE与AngⅡ的共同作用可降低大鼠心肌细胞Ins-Rβ酪氨酸磷酸化水平,升高IRS-1酪氨酸磷酸化水平。NE为引起Ins-Rβ酪氨酸磷酸化水平降低的主要原因,AngⅡ升高为IRS-1酪氨酸磷酸化水平升高的主要原因。     

C-erbB2基因在恶性肿瘤中的研究进展

C-erbB2基因又称neu基因，位于17号染色体长臂，编码为一种具有酪氨酸蛋白激酶（TPK）活性的物质，其表达产物是一种分子量为185kD的细胞膜受体，简称P185蛋白。研究发现P185蛋白与表皮生长因子受体（EGFR）有高度的同源性，它可能与未知配体结合后，通过增加蛋白激酶的活性，促进细胞的分裂、增殖和转化。该基因扩增或过表达见于某些肿瘤组织，提示参与肿瘤的发生和发展过程。随着C-erbB-2检测技术的不断改进，其在肿瘤的诊断、预后监测中的价值越来越大。     

钒酸钠改善严重烫伤大鼠肌细胞胰岛素受体TPK活性的研究

探讨钒酸钠改善创伤后胰岛素抵抗和糖代谢紊乱的机制。方法用钒酸钠胃饲３０％ＴＢ－ＳＡⅢ度烫伤大鼠,观察血糖,胰岛素,肌细胞膜胰岛素受体结合特性和胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的改变。结论钒酸钠可不通过胰岛素受体介导而直接刺激ＩＲ－ＴＰＫ活性,改善靶组织对胰岛素的敏感性。     

大鼠骨骼肌胰岛素受体的部分纯化及其特征

目的：对大鼠骨骼肌胰岛素受体的结构和特征进行分析。方法：采用麦胚凝集素琼脂糖凝胶（ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）部分纯化骨骼肌胰岛素受体；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、胰岛素结合实验以及受体自身磷酸化和外源性底物磷酸化实验，分析受体的结构，并研究其特征。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明骨骼肌胰岛素受体由两处分子量分别为１３５×１０３ｕ和９５×１０３ｕ亚基组成；受体结合实验经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图分析表明受体与胰岛素结合呈负协同效应，最大结合容量为（０．９６±０．３４）ｐｍｏｌ／ｍｇ，受体β－亚基能自身磷酸化，且能激活受体内在酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性，并呈胰岛素剂量依赖关系。结论：ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ纯化的骨骼肌胰岛素受体纯度和活性较好，其结构和特征与其他组织胰岛素受体相同     

胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶在重度烫伤大鼠胰岛素抵抗中作用的研究

以３０％体表面积背部皮肤全层烫伤大鼠为模型，通过建立肝细胞膜和骨骼肌细胞膜外源性底物磷酸化的分析方法，观察烫伤后３ｄ胰岛素刺激的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶海性的改变，探讨创伤后胰岛素抵抗的分子机理。     

PKC及蛋白酪氨酸磷酸化信号通路对血管平滑肌细胞表型转化过程中容积调节性氯通道的作用

[目的]比较蛋白激酶C (PKC)及蛋白酪氨酸磷酸化信号通路对大鼠股动脉平滑肌细胞(femoral artery smooth muscle cells,FASMC)和股静脉平滑肌细胞(FVSMC)上容积调节性氯通道的调节作用的差异,同时观察这一调节作用在动静脉平滑肌细胞表型转化过程中的变化.[方法]分别选取FASMC和FVSMC的原代,四代和八代作为观察血管平滑肌细胞表型转化的模型.采用全细胞膜片钳技术记录血管平滑肌细胞表型转化过程中容积调节性氯通道(VRCC)的变化以及蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂genistein、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)抑制剂sodium orthevanadate和蛋白激酶C激动剂PDBu对这一变化的调节作用.[结果]低渗溶液在动脉和静脉平滑肌细胞均可激活VRCC,且动脉平滑肌细胞的VRCC活性大于静脉平滑肌细胞.PTK抑制剂genistein对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有明显抑制作用且随着培养代数增加而逐渐增强;PTP抑制剂sodium orthevanadate对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有增强作用但逐渐减弱;PKC激动剂PDBu对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有抑制作用且逐渐增强.与同代的FASMC相比,genistein,sodium orthevanadate和PDBu对FVSMC的VRCC活性的调节作用更强.[结论]蛋白酪氨酸激酶、酪氨酸磷酸酶和蛋白激酶C对股静脉平滑肌细胞VRCC的调节作用强于股动脉平滑肌细胞.且随着血管平滑肌细胞由收缩型向合成型转化,VRCC的活性及酪氨酸蛋白的磷酸化调节作用均有逐渐增强的趋势,而蛋白激酶C对VRCC的抑制作用增强.     

C-erbB-2和PCNA在乳腺癌中的表达

癌基因C-erbB-2编码，是一个具有酪氨酸蛋白激酶的细胞膜受体，近年来研究证实，乳腺癌常有C-erbB-2基因扩增及蛋白产物过度表达；增殖细胞核抗原(PCNA)能有效反映细胞增殖功能。本通过免疫组化法，研究了C-erbB-2与PCNA在癌周及癌组织中的表达特征，并探讨了其与乳腺癌生物学行为的关系。     

硫化氢对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护效果研究

目的 探讨硫化氢（H2S）干预处理对大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血性再灌注损伤（CIRI）模型大鼠脑及神经功能的保护作用及其机制。方法 选取48 只成年雄性SD 大鼠，采用随机数字表法分为假手术组、模型组和实验组，每组16 只（复制模型过程中如死亡则补足），假手术组和实验组采用线栓法结扎大鼠左侧大脑中动脉复制模型，实验组于栓线后10 min 腹腔注射25μmol/kg 硫氢化钠NaHS 生理盐水，假手术组和模型组仅给予等体积生理盐水。结果 实验组大鼠的死亡率为23.81%，低于模型组的44.83%，两组比较，差异有统计学意义（P <0.05）；3 组大鼠的脑梗死体积百分比比较，差异有统计学意义（P <0.05）。模型组和实验组大鼠的脑梗死体积百分比高于假手术组；实验组的脑梗死体积百分比低于模型组；3 组大鼠的海马CA1 区的PI3K、p-Akt、Caspase 蛋白水平比较，差异有统计学意义（P <0.05），模型组大鼠海马CA1 区的p-Akt、Caspase 蛋白高于假手术组，实验组大鼠海马CA1 区的Caspase 蛋白低于于模型组，实验组大鼠海马CA1 区的PI3K、p-Akt 蛋白高于假手术组和模型组。结论 H2S 干预处理对大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注损伤模型大鼠有脑脊神经缺损功能保护作用，其作用机制可能与激活PI3K、p-Akt 通路，抑制凋亡相关蛋白Caspase 有关。     

脑源性神经营养因子在预缺血模型神经保护中的作用

目的研究脑源性神经营养因子（BDNF）在预缺血模型中的表达水平及作用,以探讨缺血耐受形成的分子信号机制。方法制备SD大鼠大脑四动脉结扎模型及预缺血模型,采用免疫印迹、免疫沉淀等技术,检测各实验组中BDNF表达、其受体酪氨酸激酶受体B（TrkB）和下游蛋白胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）磷酸化的水平变化。结果预缺血组BDNF的表达、TrkB和ERK1/2磷酸化水平较缺血/再灌注组升高（P〈0.05）,而TrkB受体的拮抗剂K252 a可以降低其升高的激活水平（P〈0.05）。结论预缺血激活BDNF-TrkB-ERK1/2信号通路实现其神经保护作用。     

酪氨酸类似物对早孕大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量的影响

①目的研究酪氨酸类似物对早孕大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量的影响及其机制。②方法宫腔注射酪氨酰肼及甘氨酰酪氨酸，检测早孕大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量。③结果酪氨酰肼和甘氨酰酪氨酸使妊娠第１，３，５天大鼠子宫胞浆雌二雌受体含量分别下降３８．４％，３２．２％，３３．４％（ｔ＝２．３１３～３．３１２，Ｐ＜０．０５～０．０１）和２１．７％，１６．４％，１２．３％（ｔ＝２．１８７～３．１７４，Ｐ＜０．０５～０．０１）；去卵巢大鼠子宫胞浆雌二醇受体含量也有下降（ｔ＝６．８７６，５．１８４，Ｐ＜０．０１）。④结论酪氨酰肼及甘氨酰酪氨酸直接作用于子宫，使子宫胞浆雌二醇受体含量下降。     

瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的观察瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响。方法分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠肝脏细胞,与瘦素共同孵育12 h、24 h及36 h,提取蛋白后用Western blot法检测瘦素受体的蛋白水平的变化,用RT-PCR法检测大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA水平,用免疫共沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。结果大鼠肝细胞的瘦素受体的蛋白水平在与瘦素共同孵育12 h、24 h和36 h后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA表达在孵育12 h后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),孵育24 h及36 h后,与对照组及孵育12 h时相比,mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。经瘦素作用12 h后,对大鼠肝脏细胞瘦素受体酪氨酸磷酸化无显著影响(P>0.05),但孵育24 h及36 h后,大鼠肝脏细胞瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度与对照组及瘦素作用12 h后相比均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论瘦素可促进大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA表达并增强其酪氨酸磷酸化程度。