敲低膜联蛋白A7对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的：：观察靶向敲低人乳腺癌MCF-7细胞膜联蛋白A7(AXNA7)的表达对MCF-7细胞凋亡的影响。方法：实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MCF-7细胞为siRNA干扰组,另设阴性对照组、空白对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染后MCF-7细胞ANXA7的表达情况,应用流式细胞术检测ANXA7低表达对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：转染后,siRNA干扰组细胞ANXA7的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);敲低ANXA7后,MCF-7细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡。     

Cofilin-1慢病毒载体的构建及其在Huh-7中的过表达

目的 构建Cofilin-1过表达的Huh-7细胞株. 方法 应用RT-PCR克隆出Cofilin-1的完整编码序列,将其亚克隆到慢病毒载体pWPT中,构建慢病毒载体表达质粒pWPT-Cofilin-1;将慢病毒表达质粒pWPT-Cofilin-1或pWPT-GFP与慢病毒包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T细胞,获得携带Cofilin-1完整编码序列的慢病毒和携带GFP基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞;通过Real-Time PCR和Western blot检测Huh-7细胞中的Cofilin-1的过表达情况. 结果 测序结果显示成功构建重组慢病毒表达质粒pWPT-Cofilin-1;慢病毒有效感染Huh-7细胞,依据GFP绿色荧光可测定感染有效率超过95％;Cofilin-1在Huh-7细胞中的mRNA量和蛋白水平都成功的过表达. 结论 本实验的完成,为进一步研究Cofilin-1基因在肝癌中的生物功能和作用机制奠定了基础.     

RNA干扰GPC3基因表达影响肝癌细胞Huh-7凋亡的机制研究

目的观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制。方法设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响;通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达。结果设计合成的GPC3siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72h的凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01),96h后两组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72h的表达高于未转染组,96h后两组间caspase3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关。进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

新藤黄酸对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的人表皮癌A431细胞株为研究对象,采用甲基噻唑基四唑检测GNA对A431细胞增殖活性的影响;倒置显微镜下观察GNA对A431细胞株细胞形态的影响;荧光显微镜下观察GNA对Hoechst 33342染色的A431细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙碇双染的A431细胞的凋亡率.结果 随着GNA剂量的增大,GNA对A431细胞增殖活性的抑制作用增强.倒置显微镜和荧光显微镜下观察显示,GNA作用的A431细胞形态发生明显的变化并出现显著的凋亡特征.流式细胞仪检测显示A431细胞凋亡率随着GNA作用剂量的增大而升高.结论 0.75～12.0 μmol/L GNA能够剂量依赖性地抑制A431的增殖.     

主要促进因子超家族成员MFSD2A对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探索主要促进因子超家族蛋白2A (major facilitator superfamily domain containing 2A,MFSD2A)对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 使用慢病毒载体构建差异表达MFSD2A的肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721,由qPCR及Western blotting法评估其转染效率;CCK-8法分析差异表达MFSD2A对细胞增殖的影响,流式细胞术测定转染后细胞的基础凋亡率的变化,Transwell小室细胞侵袭实验明确MFSD2A对细胞侵袭能力的影响。结果 在肝癌细胞中上调MFSD2A表达可以显著抑制细胞增殖、促进基础凋亡,同时还可降低细胞的侵袭能力;而下调MFSD2A则可导致相反的效应。结论 MFSD2A在肝癌的肿瘤进程中发挥抑癌基因的功能,这种功能主要是通过抑制细胞增殖并诱导凋亡实现的。     

溪黄草对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨溪黄草对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测溪黄草对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测对细胞凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax蛋白表达的情况。结果 不同浓度溪黄草能抑制肝癌细胞HepG2细胞的生长(P＜0.01),并具有浓度和时间依赖性。0.75g/μL的溪黄草作用于HepG2细胞3、6h后,结果表明溪黄草能显著促进细胞凋亡,具有时间依赖性,与阴性对照组比较有统计学差异(P＜0.05)。0.75g/μL溪黄草作用HepG2 细胞6h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组比较,亦具有统计学差异(P＜0.05)。结论 溪黄草能抑制HepG2细胞的体外增殖,且抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

HIV-1 Ta填核表达载体的构建及在Huh-7细胞中表达

目的构建1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)反式激活因子(Tat)基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1( ),构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入人体肝癌细胞系Huh-7细胞。RT-PCR检测其基因转录情况,Westernblot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质。结果成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT-PCR和Westernblot方法证实该质粒能在Huh-7真核细胞中有效表达HIV-1Tat目的蛋白质。结论成功构建了HIV-1Tat基因的真核表达质粒载体,并在Huh-7细胞中表达,为在Huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础。     

肝细胞生长因子体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对肝癌细胞 HepG2 增殖和凋亡的影响. 方法: 人肝癌细胞株 HepG2加入不同浓度HGF(0, 1, 10, 50 μg/L) 培养2, 4, 6 d,应用MTT 法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡百分率的变化,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果: HGF 抑制 HepG2 细胞增殖呈剂量及时间依赖性,并诱导其凋亡[50 μg/L HGF,培养时间为4, 6 d,其抑制率: (30.7±10.2)%, (49.8±11.1)% vs 1 μg/L HGF: (10.7±11.2)%, (4.2±9.4)%; P《0.05, P《0.01]. 随着HGF浓度增大S期细胞明显减少[试验组10, 50 μg/L HGF: (7.5±4.4)%, (7.8±1.6)% vs对照组0 μg/L HGF: (16.6±2.8)%; P《0.05, P《0.01],同时可见G0/G1 期细胞累积现象[试验组10, 50 μg/L HGF: (80.5±3.2)%, (73.1±3.9)% vs对照组0 μg/L HGF:(59.6±6.2)%; P《0.05, P《0.01]. 试验组 G1 峰前出现明显的凋亡峰,凋亡率亦较对照组显著增加(P《0.05). 且试验组细胞 PCNA 表达明显高于对照组. 结论: HGF 对肝癌细胞 HepG2 有抑制增殖和诱导其凋亡的作用,诱导细胞 G0/G1 期阻滞为可能机制之一.     

RNA干扰A20基因的表达对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和迁移的影响

目的 利用 RNA 干扰技术靶向沉默 A20 基因,对MCF-7细胞株增殖、凋亡和迁移的影响进行研究,探讨A20基因作为乳腺癌治疗靶点的潜在价值. 方法 人工合成靶向A20基因的siRNA序列和阴性对照( NC) siRNA序列,利用脂质体转染技术将siRNA导入MCF-7细胞株,采用CCK-8细胞增殖实验、Annexin V、7-AAD双染流式细胞术检测凋亡实验和 Transwell 细胞迁移实验研究沉默 A20 基因对MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移的影响. 结果 靶向沉默A20基因表达能够有效抑制MCF-7 细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡的发生. 结论 A20基因在MCF-7细胞的增殖、凋亡和迁移过程中起重要作用,A20基因可能是针对乳腺癌抗肿瘤靶向治疗的潜在靶点.     

阿法替尼联合Mithramycin A对人肝癌 HepG2细胞增殖､凋亡及基因表达的影响

目的:观察阿法替尼(afatinib)联合Mithramycin A(MIT)对人肝癌 HepG2 细胞增殖?凋亡的作用以及相关因子表达的影响?方法:将afatinib与MIT单独或联合作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法测定药物对细胞生长的抑制率,并运用倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化;以流式细胞技术测定药物对细胞周期和凋亡的影响;以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR) 定量测定细胞内表皮生长因子受体(EGFR)?Sp1?Sp3以及增殖?凋亡相关因子 Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2?Caspase3?Caspase9和p53的表达变化?结果:afatinib与MIT均能有效抑制肝癌HepG2 细胞的生长,并且呈现时间依赖性,两药联合作用能明显增加抑制率(P均 < 0.05);联合用药48 h后,可诱导HepG2细胞产生G0/G1期阻滞并诱发凋亡,抑制作用及凋亡率均较单药组增高(P均 < 0.05);另外,给药72 h后,单药组均出现不同程度的Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2 mRNA 表达量下降,并伴有Caspase3基因上调?单用afatinib组同时出现Caspase9和p53的表达上调,MIT组检测到EGFR?Sp1和Sp3的同步减少,联合用药组以上改变较单药组明显(P均 < 0.05)?结论:afatinib联合MIT能有效抑制肝癌 HepG2 细胞增殖?促进凋亡,这可能与药物作用后Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2下调以及Caspase3?Caspase9和p53的表达上调相关?此项研究可能为以EGFR为中心的肝癌联合治疗提供新方向?     

8-溴-7-甲氧基白杨素对Huh-7细胞系肝癌干细胞样细胞自我更新的影响

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)抑制源自人肝细胞癌Huh-7细胞系细胞肿瘤球形成细胞即肝癌干细胞样细胞(LCSLCs)自我更新作用。方法:体外培养人肝癌Huh-7细胞系细胞,干细胞条件培养基悬浮培养法富集和扩增LCSLCs。MTT比色法测定细胞活性;肿瘤球形成法检测自我更新能力;FITC-CD133标记FCM分析CD133表达。结果:干细胞条件培养基悬浮培养6天,Huh-7细胞形成非粘附、三维生长的肝癌球体细胞即LCSLCs。与Huh-7细胞相比,BrMC抑制LCSLCs细胞活性作用更强(P<0.05),并以浓度依赖性方式减少肿瘤球数目(P<0.05),降低CD133蛋白表达(P<0.05)。结论:干细胞条件培养基悬浮培养能分离和富集LC-SLCs;BrMC具有抑制LCSLCs细胞自我更新能力作用,其作用机制与降低干细胞标记物CD133蛋白的表达相关。     

桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究桃儿七对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制.方法:应用MTT法检测桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,倒置显微镜、HE染色及电镜观察细胞形态学改变,FCM分析细胞周期及凋亡率,免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达.结果:桃儿七提取物可明显抑制MCF-7细胞的增殖,1,2,3 mg/L桃儿七作用72 h后,细胞生长抑制率分别为43.0%,54.9%,78.5%,抑制作用呈时间及浓度依赖性.形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征,伴有多核细胞形成.FCM分析发现桃儿七阻断MCF-7细胞生长于细胞周期的G2/M期,凋亡诱导作用呈时间及浓度依赖性.免疫细胞化学结果显示,2 mg/L桃儿七作用48 h后,PCNA,Bcl-2蛋白表达分别由154.78±0.16,85.56±0.09降至78.46±0.15,40.43±0.07,P＜0.01;而p21WAF1/CIP1和c-Myc蛋白由92.32±0.12,114.48±0.14增至125.54±0.09,156.52±0.08,P＜0.01.结论:桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,G2/M期阻滞并诱导凋亡.该作用与p21WAF1/CIP1表达增加及PCNA表达降低有关,通过下调Bcl-2和上调c-Myc表达诱导乳腺癌细胞凋亡.     

泰索帝对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制效应研究

目的研究泰索帝对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制效应。方法应用流式细胞仪和免疫荧光法观察MCF-7细胞经不同剂量泰索帝作用(24 h、48 h)后,细胞凋亡率、细胞周期、微管结构的变化。结果免疫荧光染色显示0.1、1.0μg/ml泰索帝作用48 h细胞凋亡最为明显(凋亡率为37.5%,37%),5.0μg/ml作用凋亡率较以上低浓度组有所下降(22%)。流式细胞仪测定表明,泰索帝作用使大量MCF-7细胞阻滞于G2/M期,48 h后阻滞作用有所减弱。微管蛋白抗体荧光示泰索帝促进细胞内微管聚合成束,随着泰索帝剂量的增加、时间的延长,微管的聚集越明显。结论本实验结果显示泰索帝对MCF-7人乳腺癌细胞增殖有抑制作用、促进肿瘤细胞凋亡,随着剂量的增加,作用时间的延长,坏死可能成为肿瘤的主要死亡形式。     

S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响

目的 研究S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 将胃癌SGC-7901细胞分为3组:未转染组、对照siRNA组和S100A7 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和S100A7 siRNA.利用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分析检测各组胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达;采用CCK-8和Boyden小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化.最后采用蛋白质印迹分析法检测3组胃癌细胞中cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达.结果 S100A7 siRNA能下调胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达.S100A7 mRNA和蛋白表达下调抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达.结论 S100A7表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1、Cdk2和MMP-2表达的下调密切相关.     

MMP-7反义寡核苷酸抑制肺腺癌A549细胞体外增殖活性的实验研究

目的 观察基质溶解素(matrilysin,MMP-7)反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞体外增殖活性的影响. 方法采用硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN),通过脂质体导入肺腺癌A549细胞后免疫组化法检测A549细胞MMP-7表达,MTT法检测A549细胞增殖,FCM检测A549细胞周期.结果 相差显微镜下观察A549细胞转染ASODN后细胞体积变小,数目减少.MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制A549细胞的增殖,抑制作用在48 h最强.免疫组化SABC法检测提示转染ASODN后A549细胞MMP-7蛋白表达水平明显降低.FCM检测显示MMP-7 ASODN可以抑制A549由G0/G1期进入S期.结论 MMP-7 ASODN可以特异性地抑制肺腺癌A549细胞株MMP-7蛋白的表达,调控细胞周期,抑制细胞增殖.     

肺癌组织MMP-7表达及其反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的 检测非小细胞肺癌患者基质溶解素（matrilysin,MMP-7）的表达,探讨重组基质溶解素（rMMP-7）和脂质体-MMP-7反义寡核苷酸（antisense oligonucleotde of matrilysin by liposome transfection,LIPO-MAON）对肺腺癌A549细胞和人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖的影响。方法 ①免疫组化法检测NSCLC患者癌组织MMP-7表达;②MMT法和半定量RT-PCR法检测rMMP-7和LIPO-MOAN作用下A549和HUVEC的增殖及MMP-7-mRNA表达。结果 57例肺癌组织47例MMP-7表达为阳性,阳性表达率为82．5％,与正常对照组相比P〈0．01。rMMP-7能促进肺腺癌A549细胞的增殖,LIPO-MAON对AM9细胞增殖则有明显抑制作用。对HUVEC增殖,仅高浓度的rMMP-7（0．75、1．0μg／ml）有促进作用,而LIPO—MAON对其增殖无抑制作用。RT-PCR结果表明,HUVEC不表达MMP-7-mRNA;rMMP-7能增加A549细胞MMP-7-mRNA的表达,LIPO-MAON可降低其表达（P〈0．05）。结论 非小细胞肺癌患者MMP-7表达阳性率为82．5％,MMP-7反义寡核苷酸能抑制肺腺癌细胞的增殖及MMP-7-mRNA表达,对正常血管内皮细胞增殖无抑制作用。MMP-7能促进肺腺癌细胞增殖。     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖和凋亡的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中Ki67的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC-7721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0．05）,Ki67表达水平下调（P〈0．05）,细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论EGCG可能通过增加细胞凋亡,抑制Ki67表达达到抗癌作用。     

喷他脒对人宫颈癌细胞株 Hela 细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的:研究抗肺孢子虫类药物喷他脒对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌机制。方法:应用MTT法检测不同浓度喷他脒对Hela细胞的生长抑制作用,光镜观察其形态学变化,流式细胞仪及流式细胞仪间接免疫荧光技术检测其细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl-2蛋白的表达。结果:Hela细胞经不同浓度(分别为0.10μmol/L、1.00μmol/L、10.00μmol/L、100.00μmol/L)的喷他脒处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,10.00μmol/L、100.00μmol/L喷他脒作用72 h后抑制率分别达到89.32%和97.26%。倒置显微镜和光学显微镜可观察到细胞增殖情况的形态学改变。流式细胞仪分析,实验组G0/G1期上升,S期下降,凋亡率上升,细胞内bcl-2蛋白表达率明显降低,并呈剂量依赖性。结论:喷他脒对Hela细胞生长的抑制作用呈明显的时间及浓度依赖性,并诱导其凋亡,同时可使抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达下降。     

Microwave induces apoptosis in A549 human lung carcinoma cell line

Background  Microwaves have other biological effects on cancer as well besides killing tumor cells by coagulation. Some studies showed that microwaves may induce apoptosis in some tumor cells. The apoptotic effect of microwaves may help in clinic to remove residual malignant cells nearby the primary lesion and avoid relapse subsequently. However, there is little evidence on this subject from lung cancer. We studied the effect of microwaves on inducing apoptosis in the human lung carcinoma cell line A549 cells, aiming to identify its effect on apoptosis.

Methods  A549 cells were radiated by various intensities and durations of microwaves. Apoptosis induction in A549 cells was analyzed by morphological observations, tetrazolium blue color method (MTT) assays, flow cytometery, immunohistochemistry, and image analyses.

Results  Morphological changes in A549 cells, including cell shrinking and nuclear pycnosis, were observed after microwave radiation. Microwaves significantly inhibited metabolic activities and induced apoptosis in A549 cells. The results of the MTT assay showed a significant decrease of cell activities in all the radiation groups compared with the normal control (P <0.01). The low point of cell activities often appeared at 6–12 hours after radiation. Apoptosis was also confirmed by flow cytometery. The early stage apoptotic rate reached 6.10%–17.98% and the advanced stage apoptotic rate + necrosis rate reached 8.04%–44.06% at 6 hours after microwave irradiation, in contrast to 2.32% and 4.10% in the respective control groups. Down-regulation of Bcl-2 expression and up-regulation of p53 expression were observed by immunohistochemistry after radiation. In most treated groups, the down-regulation of Bcl-2 expression reached its lowest level at 3–6 hours after radiation (integrated optical density (IOD)-6 hours: 2.13±0.08–5.14±0.13 vs. control: 5.79±0.10, P <0.01) and the up-regulation of P53 expression peaked at about 3 hours (IOD-3 hours: 2.61±0.13–8.07±0.11 vs. control: 1.29±0.07, P <0.01). Cell damage, apoptosis, and protein expression levels in the samples differed depending on the radiation intensity and duration.

Conclusions  Microwaves can promote apoptosis in A549 cells. The effect depends on the duration and dosage of microwave radiation. Bcl-2 and p53 proteins may be involved in the apoptotic process of A549 cells induced by microwaves.