SEB诱导活化的淋巴细胞及其细胞因子对乳腺癌细胞杀伤作用的研究

无菌分离10例原发性乳腺癌患者外周血淋巴细胞．将淋巴细胞与金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）在37℃、5％CO2孵箱中孵育6d，分别将活化的淋巴细胞和淋巴细胞上清液与乳腺癌细胞一起孵育5h，检测活化的淋巴细胞及其释放的细胞因子对肿瘤细胞的杀伤率；并与孵育0d时的杀伤率比较。结果孵育6d的淋巴细胞及其细胞因子对肿瘤细胞的杀伤率明显高于0d，P〈0．01。提示SEB诱导的淋巴细胞及其释放的细胞因子对乳腺癌细胞具有较强的杀伤作用。     

SEA联合热疗对Hep-2细胞体外生物学行为的影响及相关机制

目的探讨体外葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合热疗对人喉癌细胞株(Hep-2株)生长、增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同条件下对Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜检测亚细胞结构改变。结果单纯热疗组、单纯SEA组及联合组(SEA+热疗)对Hep-2细胞增殖抑制率分别16.5%、25%和45.4%,与对照组相比差别有显著意义;流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,且细胞凋亡率升高,组间比较差异显著(P0.05)。结论 SEA联合热疗能显著提高Hep-2细胞的增殖抑制率,抑制G1期细胞向S期细胞转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

凋亡素基因对人结肠癌细胞作用的研究

目的探讨凋亡素基因的导人对人结肠癌细胞的影响。方法将凋亡素基因VP3克隆人真核表达载体pEGFP-C2，构建成重组质粒pEGFP-VP3。用脂质体转染法将pEGFP-C2和pEGFP—VP3分组分别转染人类结肠癌细胞（Lovo）和小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3），通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同组细胞中的定位、表达及细胞的生长、凋亡情况，MTT法测定不同组细胞的生长曲线，并用AnnexinV—FITC流式细胞技术检测细胞的凋亡率。结果在Lovo／EGFP组和3T3／EGFP—VP3组细胞中，EGFP均匀分布于细胞中，细胞形态无明显变化，细胞凋亡率较非转染细胞组亦无明显增加。而在Lovo／EGFP-VP3组细胞中，EGFP-VP3以荧光颗粒形式集中在细胞核，并逐渐变粗，最后细胞碎裂成片状，流式细胞技术检测Lov0／EGFP-VP3组的细胞凋亡率明显高于其他对照组（P〈0．01）。结论pEGFP-VP3可诱导人类结肠癌细胞凋亡。     

SEA联合热疗对Hela细胞周期进程及凋亡的影响

目的探讨葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人宫颈癌细胞株(Hela)细胞生长、增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同条件下对Hela细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测Hela细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜检测Hela细胞超微结构改变。结果单纯热疗组、单纯SEA组及SEA联合热疗组对Hela细胞增殖抑制率分别为18.4%、26.4%及46.8%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M1期细胞相对增多,且细胞凋亡率升高,组间比较差异显著。结论 SEA联合热疗能显著提高Hela细胞的增殖抑制率,抑制G1期细胞向S期细胞的转化进程,诱导Hela细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

人端粒酶逆转录酶RNA干扰对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）RNA干扰对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响。方法将HCT116细胞分为转染组（转染重组质粒真核表达载体）、对照组（转染空载体质粒）和未转染组。PCR方法检测hTERT干扰序列,RT—PCR方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、细胞增殖和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞衰老,Annexin V／PI染色流式细胞光度术检测细胞凋亡。结果转染细胞内均存在hTERT干扰序列,hTERT干扰率为21．5％;与未转染细胞相比,转染细胞核质比明显缩小,增殖率显著下降（P〈0．05）,衰老细胞和G2-M期细胞明显增加（P〈0．05）。hTERT干扰显著增加结肠癌细胞凋亡（P〈0．05）,而对照细胞各指标均无显著变化。结论hTERT干扰显著影响结肠癌细胞的生物学行为。     

靶向RhoA基因的shRNA对结肠癌细胞黏附和迁移的影响

目的 研究RhoA小干扰RNA对人结直肠癌细胞LoVo生物学特性的影响.方法 构建针对RhoA mRNA的干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-shRNA-RhoA并将其转染LoVo细胞.实时定量RT-PCR和Western印迹检测RhoA mRNA和蛋白的表达量;肿瘤细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变及Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变.结果 LoVo细胞转染pshRNA-RhoA后,RhoA mRNA表达量明显下降,蛋白表达水平亦显著降低.细胞黏附实验和Matrigel侵袭实验结果显示,RhoA重组质粒转染组黏附率明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论 构建的靶向RhoA的pshRNA-RhoA真核表达载体可以有效、特异地阻断结直肠癌LoVo细胞中RhoA基因的表达,阻断RhoA基因的表达能显著降低其侵袭、黏附能力.     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞诱导凋亡作用的形态学观察

目的 探讨蛴螬提取物对人肺癌A549细胞诱导凋亡的形态学改变.方法 应用MTT法、HE染色、扫描电镜的方法 观察蛴螬提取物对体外培养的人肺癌A549细胞形态学影响.结果 蛴螬石油醚提取物对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05或P＜0.01).倒置显微镜下蛴螬石油醚提取物80 μg/ml作用后,早期细胞出现凋亡形态学变化,晚期细胞发生膜破裂坏死.HE染色和扫描电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化.结论 蛴螬提取物在体外对人A549肺癌细胞株有显著性抑制增殖和诱导凋亡作用.     

γ-干扰素对人结肠癌细胞增殖的影响

目的观察γ-干扰素(IFN-γ)对结肠癌细胞HT29增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法测定人结肠癌细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测凋亡,并定量检测对癌基因蛋白表达的影响。结果浓度≥100U/ml的IFN-γ能抑制HT29细胞增殖,作用呈时间依赖性,在24、48和72小时,抑制率分别为13%、32%和44%;IFN-γ可诱导细胞凋亡,降低癌基因蛋白c-myc、bcl-2表达而促进bax表达(P<0.01)。结论IFN-γ对HT29细胞的抑制作用可能是通过抑制癌基因蛋白c-myc、bcl-2表达,促进bax表达而诱导了凋亡及产生细胞周期阻滞。     

丁酸钠对人结肠癌细胞株SW480增殖及凋亡的影响及其机制

将2.85 mmol/L丁酸钠(NaB)体外作用于人结肠癌SW480细胞12、24、48 h分别用半定量RT-PCR法与Western-blot法检测p21基因mRNA及蛋白表达变化;并用FCM检测细胞周期变化.结果 p21基因mRNA 及p21蛋白表达随时间延长逐渐增加;结肠癌SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,S期比例明显减少,细胞增殖指数下降.认为NaB可诱导结肠癌细胞凋亡,其机制可能为细胞周期阻滞及p21蛋白高表达.     

H_2S对外源性LY294002预处理人结肠癌细胞凋亡的影响

目的研究H_2S对体外培养人结肠癌细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞,随机分为正常对照组、NaHS(100μmol/L)组、LY294002(2μg/ml)组、NaHS(100μmol/L)+LY294002(2μg/ml)组,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞凋亡的影响,Western印迹检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞中磷酸化Akt、非磷酸化GSK-3β蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,NaHS组人结肠癌细胞凋亡显著降低,p-Akt蛋白表达显著增加,而GSK-3β蛋白表达显著降低(均P<0.01)。LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达均显著增加(均P<0.01)。而与NaHS组比较,NaHS+LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达显著增加(均P<0.01)。结论 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能介导参与了H_2S对人结肠癌细胞凋亡的抑制作用。     

白细胞介素-15对脐血和成人外周血单个核细胞抗肿瘤活性的影响

目的：探讨白细胞介素—15(1L—15)对脐血单个核细胞(CBMNC)和成人外周血单个核细胞(PBMNC)抗肿瘤活性的影响。方法：采用MTT法分别检测静止的CBMNC和PBMNC对K562和HL—60细胞株的杀伤活性、经不同浓度的IL—15及不同效靶比条件下激活的CBMNC和PBMNC抗瘤活性，采用ELISA法测定培养上清中IFN—r及TNF—a水平，采用APAAP检测CD56、CD16表面抗原。结果：①静止CBMNC抗肿瘤活性显著低于PBMNC，经IL—15活化后，脐血NK活性显著增强，可达成人水平，脐血LAK活性显著高于成人血LAK活性。②活化后培养上清中的IFN—r及TNF—a水平均显著增强，但脐血培养上清中两种细胞因子的水平仍低于成人血。③活化前后脐血NK细胞CD56表达显著增强。结论：IL—15能显著提高CBMNC的抗肿瘤活性，为今后优选IL—15活化脐血进行肿瘤过继免疫治疗提供了理论依据。     

The effects of indomethacin on in vitro peripheral blood mononuclear cell reactivity in human schistosomiasis

The peripheral blood mononuclear cell (PBMN) proliferative responses of cells from patients with schistosomiasis were studied in the presence and absence of indomethacin in the culture medium. PBMN cultures were exposed to antigenic extracts of either adult S. mansoni worms (SWAP) or cercariae (CAP), and assayed for the incorporation of tritiated thymidine. More than 70% of the 48 patients studied with SWAP and the 40 patients studied with CAP, were not substantially effected by the addition of indomethacin to the cultures. The remainder (less than 30%) was augmented more than 50% by indomethacin and comprise a group which gave initially low responses to these antigenic preparations. Further analysis indicated that in some schistosomal patients the effect of an adherent suppressor cell population may, in part, be based on a prostaglandin-mediated, indomethacin-sensitive suppressive mechanism. However, the majority of patients, most of whom display adherent suppressor cells, are unaffected by indomethacin. Apparently, other adherent cell suppressor mechanisms are responsible for the regulation observed.     

外周血单核细胞五聚蛋白-3在急性冠脉综合征中的意义

目的观察急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血单核细胞五聚蛋白-3(pentraxin-3,PTX-3)的浓度变化,探讨其对ACS早期诊断的意义。方法将90例ACS患者分为不稳定型心绞痛(unstable angina group,UAP)组47例,急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)组43例;另外,选同期相匹配的稳定型心绞痛(stable angina group,SAP)组42例和健康体检者33名作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组外周血单核细胞PTX-3浓度。结果 UAP组、AMI组外周血单核细胞PTX-3浓度均高于SAP组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且AMI组明显高于UAP组,差异有统计学意义[(8.32±2.79)μg/L vs.(5.37±1.83)μg/L,P<0.01];SAP组与健康对照组比较,差异无统计学意义[(4.28±1.70)μg/L vs.(3.69±3.02)μg/L,P>0.05]。结论 ACS患者外周血单核细胞中可检测PTX-3的存在,且外周血单核细胞PTX-3浓度可以作为识别和判断ACS发作的临床指标。     

IL-2I、L-21诱导人外周血单个核细胞及其抗肿瘤作用

目的探讨IL-2I、L-21对人外周血单个核细胞（PBMC）的诱导增殖和表型改变的影响及其体外抗瘤作用。方法取PBMC细胞,调整浓度为1×10^6个/ml,分为四组I,L-2组加入IL-2 100 IU/mlI,L-21组加入IL-21 100IU/ml,联合组加入IL-2 50 IU/ml和IL-21 50 IU/ml,对照组加入0.1 ml生理盐水,台盼蓝染色法计数各组活细胞,流式细胞仪检测各组PBMC表型;以上述四组为效应细胞（E）,以对数生长期的4种肿瘤细胞（人胃癌细胞系M85,胃癌细胞系BGC823,结肠癌细胞系HCT116,结直肠腺癌细胞系HCT8）为靶细胞（T）,稀释靶细胞5×10^3个/孔,E∶T为1∶1和2∶1,MTT法测定细胞毒性（杀伤率）。结果联合组活细胞计数高于IL-2组I、L-21组、对照组,P均〈0.05;联合组I、L-2组和IL-21组CD3^-/CD56^＋、CD3^＋/CD56^＋水平高于对照组,P〈0.05或0.01;联合组对4种肿瘤细胞的杀伤率均高于其余三组I,L-2组I、L-21组高于对照组,P均〈0.05。结论 IL-2联合IL-21的协同刺激作用,可有效地刺激PBMC的增殖和表型改变,对4种消化道肿瘤细胞株均有较强的杀伤力。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞对HBV不同区抗原的增殖反应

目的进一步明确外周血细胞免疫在ＨＢＶ感染过程中的作用。方法对２０例急性乙型肝炎（乙肝）患者、２３例慢性乙肝患者、２０例正常献血员进行了研究,用氮蓝四唑实验（ＭＴＴ）测定乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对ＨＢＶ不同区抗原的增殖反应。结果在急性乙肝患者ＰＢＭＣ对抗原的增殖反应大于慢性乙肝患者及正常对照,ＰＢＭＣ对ＨＢｃＡｇ的增殖反应最高,ＨＢｅＡｇ次之,而对ＨＢｓＡｇ的反应均较弱。另外,无论在急性、慢性患者,其ＰＢＭＣ对抗原的增殖反应水平与血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的变化无明显相关性。血清ＨＢＶＤＮＡ阴性、ＨＢｅＡｇ阴性的慢性肝炎或慢性肝炎急性发作患者,其ＰＢＭＣ对ＨＢＶ抗原的增殖反应较弱,在血清ＨＢＶＤＮＡ或ＨＢｅＡｇ阳性患者,增殖反应较强,而当血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ均阳性时,增殖反应最强,表明外周细胞免疫与ＨＢＶ的复制及清除相关。结论ＨＢＶ感染后,外周血中存在对ＨＢＶ抗原的细胞免疫,这种细胞免疫可能与乙肝的发病及ＨＢＶ的清除有关。     

PDCD5在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中表达的初步研究

目的研究程序性死亡因子5（PDCD5）在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达情况,探讨其可能作用机制。方法应用免疫细胞化学和蛋白免疫印迹法检测45例SLE活动期患者、22例稳定期患者和50例健康对照者PBMC中PDCD5蛋白的细胞定位和表达情况。结果SLE活动期患者PDCD5蛋白的阳性表达率高于正常对照组（P〈0.01）;活动期患者PDCD5蛋白的表达水平高于稳定期患者和正常对照,稳定期患者高于正常对照（P〈0.01）。SLE活动期患者PBMC中PDCD5的表达与SLE疾病活动指标SLEDAI、补体C3、抗ds-DNA抗体滴度具有相关性。结论PDCD5可能作为淋巴细胞凋亡的正性调控基因,在SLE发生和发展中具有重要意义。     

扩张型心肌病患者外周血单个核细胞白细胞介素-35表达及分泌的初步研究

目的:观察白细胞介素-35(IL-35)在扩张型心肌病(DCM)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中表达和血浆水平变化,探讨其在DCM发病中的作用。方法:选择对象为30例DCM的患者(DCM组),24例心力衰竭的患者(HF组)及30例健康体检者为正常对照组。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定PBMCS的IL-35特异性亚基EB病毒诱导基因3(EBI3)mRNA的表达。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中IL-35水平。结果:①DCM组PBMCs表达IL-35的EBI3mRNA水平(0.15±0.03)明显降低于HF组(0.34±0.08)及正常对照组(0.33±0.07)(均P0.01),而HF组及正常对照组间差异无统计学意义(P0.05);②DCM组(24.08±4.40)血浆IL-35的水平明显低于HF组(53.03±5.04)和正常对照组(43.89±8.01)(均P0.01),而HF组及正常对照组间差异无统计学意义(P0.05);③DCM组血浆中IL-35含量与射血分数呈正相关(r=0.449,P0.05),与心功能NYHA分级呈负相关(r=-0.839,P0.01)。结论:DCM患者的IL-35表达下调,提示IL-35可能在DCM的免疫发病机制中起了一定作用。     

低剂量T-2毒素与脱氧雪腐镰刀菌烯醇单独及联合染毒对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的观察

目的 观察低剂量T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的特点及其程度,探索亚临床剂量下的毒性作用.方法 3周龄雌性Balb/c小鼠80只,体质量(14.0±1.5)g.将小鼠按体质量随机分为对照组、T-2毒素组、DON组、T-2+DON联合组,每组20只.经腹腔注射感染毒素,染毒剂量:T-2毒素5 μg·kg-1·d-1,DON 20 μg·kg-1·d-1;对照组给予等量生理盐水.染毒至16周和21周,分别取小鼠尾血,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)观察小鼠末梢血有核细胞拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量变化.结果 ①T-2毒素组,尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:(27.71±15.85)%、(13.67±5.56)μm、4.26±3.83;21周:(28.38±15.57)%、(13.83±5.47)μm、4.37±3.82]均增加,与对照组[16周:(11.87±4.61)%、(10.59±6.70)μm、1.34±0.98;21周:(11.31±3.94)%、(10.83±7.05)μm、1.29±1.01]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);②DON组拖尾率、尾DNA含量、尾动量[16周:5.62%、(28.13±13.31)%、3.39±2.35;21周:7.71%、(29.17±15.12)%、5.70±4.17]均增加,其中仅拖尾率与对照组(16周:4.34%;21周:4.38%)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);③T-2+DON联合组拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:6.21%、(30.14±15.48)%、(16.93±6.58)μm、5.54±4.22;21周:8.17%、(30.85±15.76)%、(17.21±6.45)μm、5.70±4.17]均增加,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05);与T-2毒素或DON组比较,尾DNA含量和尾长均增加(P均<0.05).结论 低剂量T-2毒素和DON均可对小鼠未梢血有核细胞DNA产生明确损伤;T-2和DON联合染毒较单独染毒的损伤作用更明显.     

慢性肝囊型包虫病患者外周血单核细胞的表型及其功能状态研究

目的探讨慢性肝囊型包虫持续感染患者外周血单核细胞的亚群组成及其功能状态。方法囊型包虫病患者(CE组)和健康者(NC组)各15例,采集外周血单核细胞(PBMC)后分成两部分,一部分应用流式细胞术分析其表面CD14、CD16的阳性表达率;另一部分分为未干预组和重组抗原B(rAgB)干预组,干预后ELISA法检测上清中IFN-γ、IL-12p70、IL-10、IL-4的浓度。结果 PBMC占外周血白细胞的比例在CE组、NC组分别为(13.42±3.90)%和(6.23±1.39)%,差异有统计学意义(t=6.17,P<0.05);CD14阳性表达率分别为(19.90±6.96)%和(45.61±14.25)%,差异有统计学意义(t=6.28,P<0.05);CD16阳性表达率分别为(22.75±8.99)%和(22.83±6.77)%,差异无统计学意义(t=0.03,P>0.05)。除NC组rAgB干预后的IL-4与未干预对照相比差异无统计学意义外,来源于NC组、CE组rAgB干预后的4种细胞因子浓度与未干预对照相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。CE组与NC组相比,rAgB干预下的IFN-γ、IL-12p7...     

人外周血单核细胞人白细胞抗原-DR表达和细胞因子水平的增龄性改变

目的研究人外周血单核细胞（PBMC）人白细胞抗原DR的表达和单核细胞体外分泌细胞因子水平的增龄性改变。方法352例不同年龄的体检者按年龄分为A组120例（20-69岁）、B组85例（70-79岁）、c组98例（80-89岁）、D组49例（90～102岁）。用流式细胞仪检测PBMC表面人白细胞抗原（HLA）-DR的表达;每组随机抽取10人,用ELISA方法检测经内毒素（LPS）N激前后PBMC分泌肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素（1L）-6、IL-10等细胞因子的水平,并比较各年龄组PBMC表面HLA—DR表达的变化以及分泌TNF-α、IL-6、IL-10等细胞因子水平的变化。结果A,B,C,D各组之间PBMC表面HLA—DR的表达有显著性差异（F=159．712,P=0．000）,且不同年龄组人群PBMC表面HLA—DR的表达呈随龄性增加（r=0．744,P=0．000）;LPS刺激前各年龄组人群PBMC分泌TNF-α,IL-6,IL-10细胞因子的水平无显著性差异（P〉0．05）;LPS刺激后各年龄组人群PBMC分泌TNF-α,IL-6,IL-10细胞因子的水平较LPS刺激前均有明显增高（P〈0．05）;将LPS刺激后各组PBMC分泌细胞因子的水平进一步行组内比较发现,与A组相比,B,C,D各组分泌TNF-α、IL-6的水平明显减低（P〈0．05）,分泌IL-10的水平明显增高（P〈0。05）。结论人PBMC细胞免疫功能呈随龄性改变,其表面HLA—DR的表达呈随龄性增加;LPS刺激前各年龄组人群PBMC分泌TNF-α,IL-6,IL-10细胞因子的水平无显著性差异;而LPS刺激后,70岁以上老年人PBMC分泌TNF-α和IL-6的水平明显减低,分泌IL-10的水平明显增高。