重组核衣壳蛋白用于肾综合征出血热病人IgG抗体检测

目的检测肾综合征出血热病人的IgG抗体及发现在我国可能存在的新的血清型。方法 用五种血清型汉坦病毒核衣壳重组蛋白作抗原建立间接ELISA法,检测HFRS病人血清中特异性IgG。结果检测了91份病人血清,发现我国山东、北京地区的汉坦病毒感染以HTN血清型群为主(56.1％);首次检测到2份疑似DOB型病毒感染血清。结论我国有可能存在DOB病毒血清型。     

自身抗原OGDC-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

目的 基因工程重组表达2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2（OGDC-E2）融合蛋白。方法 用PCR方法扩增得到OGDC-E2的基因片段，插入表达载体pET28a（＋），构建重组表达载体pET28a（＋）-OGDC-E2，测序正确后在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。结果 获得OGDC-E2融合蛋白，经SDS-PAGE分析，相对分子质量与预期大小一致；经免疫学鉴定，重组抗原片段具有抗线粒体抗体二亚型（AMA-M2）的免疫原性。结论 基因重组表达的融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化（PBC）的实验诊断。     

化学发光免疫定量检测狂犬病毒抗体方法的建立

目的建立化学发光免疫法检测人血清中狂犬病毒抗体。方法以纯化抗原包被固相,配以碱性磷酸酶标记抗原及金刚烷胺作为发光底物,采用双抗原夹心法检测血清中抗体。结果该方法的敏感性为0.2 IU/m l,线性范围为0~200 IU/m l,变异系数<10%,回收率在90%~110%之间。结论化学发光法定量测定人血清中狂犬病毒抗体是一种灵敏、准确、重复性好,操作简单的方法,适用于临床检测。     

低浓度戊二醛灭活伪狂犬病毒中和剂选择与灭活效果的研究

目的研究低浓度戊二醛对伪狂犬病毒的灭活效果。方法采用细胞感染法进行低浓度戊二醛中和剂选择试验和对伪狂犬病毒灭活效果的实验研究。结果经中和剂及中和产物处理的PK-15细胞,接种伪狂犬病毒后出现细胞病变;经中和剂及中和产物处理的伪狂犬病毒对细胞的感染滴度与对照组基本一致,所用中和剂及中和产物对细胞和病毒无影响。用含量3000mg/L碱性戊二醛消毒液作用30min,对悬液内伪狂犬病毒可达到完全灭活。结论低浓度戊二醛可有效灭活伪狂犬病毒。     

GⅡ型诺如病毒衣壳蛋白抗原表位预测及单克隆抗体的制备

目的原核表达诺如病毒衣壳蛋白VP1,制备抗诺如病毒衣壳蛋白VP1的单克隆抗体,并研究其抗原表位特性。方法 PCR扩增GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白基因,将目的基因克隆至载体pET28a(+),转化至大肠埃希菌原核表达。纯化表达产物免疫BALB/c小鼠,将成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合。用Modeller9.9为诺如病毒GⅡ型湖州株VP1蛋白构建三维模型,构建好的三维模型提交到SEPPA在线B-cell空间表位预测软件,对GⅡ型湖州株VP1蛋白进行空间表位预测。用预测的表位序列来筛选阳性克隆,得到对应这些表位的单克隆抗体。结果成功构建重组表达载体pET28a(+)-Noro-VP1并在大肠埃希菌中获得表达,重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,用预测的抗原表位多肽筛选,获得10株杂交瘤细胞株。与重组蛋白的ELISA结果显示1E8、1P10、2C15和2L16四株反应性最强,其他几株反应性较弱。Western blotting结果显示只有2K10、1K16、1E8三株能与重组蛋白很好的结合。结论成功制备了抗GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白的单克隆抗体,抗原表位位于衣壳蛋白的P2区,为制备诺如病毒快速免疫诊断试剂盒及抗原表位的研究提供基础。     

自身抗原gp210融合蛋白的重组表达及其临床应用研究

目的 重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化（PBC）的临床诊断和病情监测。方法 针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a（＋）,构建重组表达载体PET28a（＋）-gp210,转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋白,进一步经Ni2＋亲合层析柱纯化。应用重组gp210融合蛋白建立间接ELISA,检测PBC患者血清中的抗gp210抗体。结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PET28a（＋）-gp210重组质粒。经SDS-PAGE、Western-blot鉴定,获得了具有免疫原性的重组gp210融合蛋白。经ELISA检测,PBC患者中抗gp210抗体的阳性率为40.5%,与疾病对照组及正常对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。PBC患者临床资料分析表明,抗gp210阳性患者中IgM浓度显著高于抗gp210阴性患者;经UDCA治疗后,28位PBC患者中,3例抗gp210抗体由阳性转为阴性,9例抗gp210抗体持续阳性,1例抗gp210抗体由阴性转为阳性,16例抗gp210抗体持续阴性;其他临床症状与抗gp210抗体无显著相关。结论 应用重组gp210融合蛋白建立ELISA检测自身抗体,对PBC诊断具有较好的特异性,为PBC的临床诊断和病情监测提供了有力依据。     

HBOV病毒VP1蛋白的重组表达及在感染检测中的应用

[目的]建立检测HBOV感染的免疫学检测方法和进行儿童人群中感染调查。[方法]采用PCR扩增克隆HBOV病毒VP1核衣壳蛋白部分基因，将其基因克隆至PET32a，构建原核表达重组质粒，在大肠杆菌中以包涵体形式获得表达。诱导表达后采用凝胶电泳切胶纯化目的蛋白。用重组蛋白作包被抗原建立了间接酶联免疫检测方法。[结果]病人血清及献血员血清均以1：50稀释。经检测北京和深圳的85份标本，阳性6人，阳性率7．06％，而正常献血员150人均为阴性，人群中感染率较低。[结论]成功重组表达了VP1蛋白，建立了检测抗体的ELISA方法。国内存在该病毒感染，被调查的人群中HBOV感染率较低。     

云南省禄丰县家犬狂犬病毒带病毒率及阳性犬分布情况的调查

目的 分析云南省禄丰县自然状态家犬狂犬病毒携带阳性率及阳性犬分布情况,为制定狂犬病防制对策提供依据。 方法 2012年3月12 18日在全面扑杀8个自然村疫区的犬只过程中,采犬脑标本检验,调查家犬狂犬病毒携带阳性率,分析阳性犬分布情况;全面扑杀犬只3个月、6个月和1年后开展3次农户恢复养犬情况调查。 结果 8个自然村扑杀1103只家犬,采集犬脑标本542只(份),检测阳性24只,阳性率4.43%,阳性犬呈离散性分布,阳性率最高的自然村达9.09%;全面扑杀犬只1年后养犬户和养犬数分别恢复到扑杀前的80.38%和61.92%,户均养犬恢复到0.56只(扑杀前0.90只)。 结论 禄丰县家犬狂犬病毒带病毒率不高,阳性犬呈离散性分布,阳性率与疫点距离远近不存在比例关系。扑杀后农户恢复养犬较快,犬只来源较为复杂,狂犬病等疫源输入的危险因素增加。 科学抽样监测动物狂犬病带病毒动态,以免误杀健康犬只,可避免大面积扑杀犬只带来的社会慌恐和经济损失。     

SARS-CoV 核衣壳蛋白表达方法的研究进展

2012年引起中东呼吸综合征的新型冠状病毒 hCoV-EMC,与2003年引起广东暴发性流行的严重急性呼吸综合征的 SARS-CoV 同属于β群冠状病毒,两种病毒存在许多相似之处。研究表明 SARS-CoV 核衣壳蛋白（SARS-CoV N 蛋白）可诱导产生强烈的体液和细胞免疫,是主要的抗原分子和临床诊断的最佳靶标。获得重组 SARS-CoV N 蛋白,是进一步研究 SARS-CoV、hCoV-EMC 以及其他可能出现的新型人冠状病毒 N 蛋白之间关系的前提。本文将目前研究SARS-CoV N 蛋白的重组表达体系、表达蛋白的特性及存在问题等进行了综述。     

辛德比斯病毒和伪狂犬病毒制备方法的优化

目的优化辛德比斯病毒(Sindbis virus)和伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的培养和制备方法,建立高效价病毒制备方法。方法从选用不同宿主细胞、不同的宿主细胞培养方式、以及不同的病毒悬液收集方式3方面考察病毒效价。病毒效价测定采用细胞病变法,按Karber氏法计算病毒效价。结果用非洲绿猴肾(Vero)细胞培养的Sindbis病毒效价(8.63±0.45)明显高于用幼仓鼠肾(BHK)细胞培养的病毒效价(7.63±0.30)(P<0.05);用Vero细胞培养的PRV效价(8.13±0.59)也明显高于用BHK细胞培养的病毒效价(6.94±0.71)(P<0.05);宿主细胞长满单层后继续换液培养或再传代培养2种提高病毒效价的方式所制备的病毒效价(7.69±0.98vs 7.54±0.69)的差异无统计学意义(P>0.05),可任选其一;收获病毒时,直接收集培养悬液离心组(直收-冻组)病毒效价(8.66±0.83)较先冻融2次再离心组(冻-收-冻组)病毒效价(8.14±0.91)高(P<0.05)。结论建立了制备高效价Sindbis病毒和PRV的方法;制备Sindbis病毒和PRV宜选用Vero细胞;病毒培养悬液直接离心分装即可,既简化操作又可获高效价病毒。     

金湖县1999～2003年狂犬病疫苗免疫效果分析

目的了解人群接种狂犬病疫苗后机体血清学免疫效果。方法对金湖县1999-2003年狂犬病病毒抗体检测结果进行统计分析。结果狂犬病病毒抗体总阳性率为94.16%,各年间血清学免疫效果不同;注射浓缩苗的阳性率低于注射精制苗的标本;不同季节阳性率不同,春夏季低于秋冬季;不同性别之间血清学免疫效果差异无显著性;各年龄组血清学免疫效果不同,小于10岁年龄组阳性率最高,70岁以上年龄组阳性率最低;青少年组、中年组、老年组三者中,中年组阳性率最低。结论国产狂犬病疫苗质量比较稳定,免疫效果可靠,而且精制苗的保护作用更为明显。     

汉滩病毒重组核蛋白的克隆构建和活性初探

目的制备新型高效的基因工程重组抗原,用于汉滩病毒的快速诊断和分型诊断。方法聚合酶链反应（PCR）扩增得到汉滩病毒S基因的截短片段,将该片段克隆入原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,将包涵体进行胶上回收,Western blotting分析其抗原性。结果纯化得到相对分子质量约为46×10^3的重组蛋白,可与肾病综合征出血热（HFRS）阳性血清发生反应,健康人血清为阴性对照。结论研究得到的重组核蛋白在HFRS的血清学诊断中具有一定的应用价值。     

狂犬病诊断的研究进展

近年来狂犬病在我国的流行呈上升趋势,严重威胁着畜牧业的发展和人类的健康,狂犬病的诊断具有重要的公共卫生意义。为此,就近年来有关狂犬病的诊断研究进展进行综述。     

2013-2017年广东省广州市狂犬病暴露监测结果分析

目的分析广东省广州市狂犬病监测数据,掌握狂犬病发生情况及狂犬病暴露流行特征;并探讨狂犬病防治工作存在的问题,提出有效的防治措施。方法收集2013-2017年广州市狂犬病暴露预防处置门诊接诊的所有暴露者相关数据信息和狂犬病病例个案调查资料,进行描述性分析。结果 2013-2017年广州市狂犬病暴露率分别为823.64/10万、822.86/10万、901.72/10万、988.30/10万和1 187.20/10万,暴露率水平呈逐年上升趋势(P<0.05)。各年暴露时间均以夏秋季为主(6-10月),占当年暴露总例数的45.17%~48.41%。致伤动物以犬伤为主,占65.53%。从伤口分级来看,各年均以Ⅱ级暴露病例为主,占当年全部暴露预防处置人数的56.16%~61.02%,Ⅲ级暴露人数占28.61%~31.38%。暴露人群均接种了狂犬病疫苗,但被动免疫制剂接种率较低,2013-2017年狂犬病被动免疫制剂注射率分别为15.06%、6.91%、7.30%、5.38%和7.06%。结论广州市狂犬病暴露人数较多,同时,Ⅲ级暴露者狂犬病被动免疫制剂的接种率低。急需建立有效措施加强犬只管理,加强狂犬病宣传教育,提高狂犬病被动免疫制剂的接种率。     

广西2000～2004年狂犬病流行病学特征分析

目的分析狂犬病流行病学特征,探讨广西狂犬病防制的重点策略和措施。方法收集广西狂犬病大疫情资料和流行病学调查资料,用SPSS10.0统计分析软件进行分析。结果广西狂犬病疫情呈现发病率持续快速增长、地区分布不断扩展的趋势,疫情也由经济落后的桂西山区向经济较发达的桂东南、桂北地区扩散。发病时间与季节有关。88.5%的病例为狗伤所致,暴露后没有及时对伤口进行冲洗、消毒、清创的分别为68.0%、88.5%、91.5%,只有5.9%的病例暴露后全程接种狂犬疫苗,使用狂犬抗血清的只有1.7%。从广西抽查的狂犬疫苗中,80%不符合规定;收集89份健康犬的犬脑标本,检出病毒携带率为13.5%。结论广西狂犬病增长迅速,卫生部门应该将加强农村地区宣教、加强疫苗管理和开展狂犬暴露前免疫作为防控工作的重点。     

狂犬病疫苗接种者抗狂犬病病毒中和抗体影响因素分析

目的探讨狂犬病疫苗接种后体内抗狂犬病病毒中和抗体产生的影响因素。方法采集2018年1-8月山东、江苏、河南、河北、湖南和安徽6省疑似狂犬病Ⅱ/Ⅲ级暴露后接种狂犬病疫苗的暴露者血清标本,快速荧光灶抑制实验(RFFIT)检测抗狂犬病病毒中和抗体(RVNA)水平,采用SPSS 19.0软件进行数据统计分析。结果全程接种狂犬病疫苗的血清样本为498份,RFFIT检测结果显示,RVNA几何平均滴度(GMT)为4.94 IU/ml,血清阳性率为96.18%(479/498)。不同组别抗体阳性率分析结果显示,免疫时间各组阳性率之间差异有统计学意义(χ^2=7.888,P=0.039),30~90 d组抗体阳性率高于91~180 d组,其他各组比较差异均无统计学意义。多因素分析结果显示年龄、免疫时间是RVNA水平的重要影响因素,其中年龄与RVNA水平呈正相关,免疫时间与RVNA水平呈负相关。免疫时间对RVNA水平的影响最大,影响重要性为0.62。结论接种狂犬病疫苗后能产生可靠的免疫效果,年龄、免疫时间等因素对抗体阳性率及RVNA水平有一定影响。暴露后在及时进行规范完整的暴露后处置外,应对经常暴露于狂犬病的高危人群、免疫力低下者或患有免疫抑制性疾病的人群定期检测血清抗体,对于RVNA滴度小于0.5 IU/ml的接种者应及时进行加强免疫,补接种疫苗,从而有效预防狂犬病。     

1270例注射人用狂犬病纯化疫苗者免疫效果观察

目的了解目前使用的人用狂犬病纯化疫苗的免疫效果,指导犬伤患者的免疫接种。方法对1270例暴露后自愿到灵川县卫生防疫站疾控科门诊部接种人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞疫苗)的人群,采用酶联免疫检测方法进行注射后狂犬病毒抗体检测,若抗体阳性表示接种成功,有保护性抗体产生;阴性则表示未产生抗体或抗体达不到保护水平。同时对检测结果进行统计分析。结果共检测犬伤患者1270例,狂犬病毒抗体阳性者1086例,总阳性率为85.51%;其中男性阳性率为84.83%;女性阳性率为86.38%;经x2检验,男女抗体阳性率差异无显著性(字2=0.6054,P>0.05)。检测发现,不同年龄组的抗体阳性率不同,15岁以下组与15～59岁组抗体阳性率,经x2检验,差异有显著性(字2=30.01,P0.05)。结论个体自身年龄对狂犬病毒抗体的形成有一定影响,但总的抗体保护水平可达85.51%。全程、规范地注射人用狂犬病纯化疫苗是预防狂犬病发生的最经济、最安全、最有效的手段。