人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建,表达和其 …

目的 为提高人重组炷细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ｒｈＧ－ＧＳＦ）的稳定性和活性,对ｒｈＧ－ＧＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法 利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,ＤＮＡ序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ     

人G—CSF新型高效表达克隆的构建与鉴定

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，自人的脾脏单核细胞ｍＲＮＡ扩增出人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）结构基因，ＤＮＡ序列分析表明与天然ｈＧ－ＣＳＦ一致，将其克隆于表达载体ｐＪＧＷ１中，在大肠杆菌中进行诱导表达研究。结果表明：ｈＧ－ＣＳＦ重组蛋白表达率在２５％以上，并具有与天然ｈＧ－ＣＳＦ一致的生物学活性。     

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。     

直接从中国人胎肝染色体DNA中克隆粒细胞集落刺激因子（G－CSF）外显子及其在大肠杆菌中的高效表达

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，直接从正常人胎肝染色体ＤＮＡ库中分离克隆了中国人粒细胞集落刺激因子（ｃ－ＣＳＦ）外显子，全长５３７ｂｐ，它包括除信号肽氨基酸外的所有编码区，为了使克隆的Ｇ－ＣＳＦ外显子在大肠杆菌中高效表达，对其５’端进行了修饰，去除第１个编码Ｔｈｒ的密码子，在不改变氨基酸的前提下，变换为ＡＴ丰富的密码子；并将某些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。对于每段目的ＤＮＡ所进行的２次独立的ＰＣＲ反应所获得的产物分别进行了核苷酸序列测定。结果完全一致，证明所克隆的Ｇ－ＣＳＦ外显子的序列是可靠的，与国外发表的Ｇ－ＣＳＦ外显子序列相比，未发现变异。将上述人Ｇ－ＣＳＦ外显于基因插入ｐＢＶ２２０表达载休，构建了ｐＢＶ２２０／Ｇ－ＣＳＦ质粒，将其转化入ＤＨ５ａ菌，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明其表达量约占菌体总蛋白量的２０％，用依赖性细胞系ＮＦＳ－６０进行测定，活性为５ｘ１０ｖＩＵ／Ｌ。     

G-CSF、GM-CSF的临床应用现状

粒细胞集落刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ, Ｇ－ＣＳＦ）、粒巨噬细胞集落刺激因子（ Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ＧＭ－ＣＳＦ）分别是促粒系、粒－单系造血祖细胞增殖、分化及成熟,并增强其成熟细胞功能的特异造血调控生长因子。重组ＤＮＡ技术的发展,使得利用基因工程方法大量生产细胞因子成为可能。目前,Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ基因重组产品已广泛应用于临床。在血液病的治疗,造血干细胞移植及恶…     

一种N端缺失的rhGM-CSF(7～127)在大肠杆菌中的表达与调控

在ｈＧＭ－ＣＳＦ结构与功能研究的基础之上，通过应用ＰＣＲ介导的缺失与突变和基因重组等技术，构建了表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的三种原核表达载体ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＧＡ，ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＡＡ和ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ。在三种载体内，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）ｃＤＮＡ的５′端均缺失６个氨基酸，３′端则分别为天然终止密码ＴＧＡ，突变终止密码ＴＡＡ和ＴＧＡ加３′ＵＴＲ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明三种载体表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的水平分别为２１％，１８．８％和２５％。经过用ＰＣｇｅｎｅ软件和Ｚｕｌｃｅｒ算法分析ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）－３′ＵＴＲｍＲＮＡ的二级结构，表明３′ＵＴＲ在终止密码ＴＧＡ附近形成两个茎－环结构，它可能与ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ载体高表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）有关。表达产物ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）经弱阴离子ＤＥＡＥ交换层析纯化后，纯度达到９２％，比活性为８×１０７Ｕ／ｍｇ。     

人胰岛素样生长因子1的真核细胞表达及其鉴定

目的 构建人胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）的真核细胞表达质粒。方法 用ＰＣＲ方法从人的肝细胞ｃＤＮＡ文库中克隆出ＩＧＦ－１ｃＤＮＡ,然后定向插入真核细胞表达载体ｐｃＤＮＡ３中,并用脂质体方法转染ＣＯＳ７细胞。用ＥＬＩＳＡ法和人胚肺纤维母细胞以及ＮＩＨ３Ｔ３纤维细胞增殖法分别测定转染细胞上清液中ＩＧＦ－１的含量和生物活性。结果 重组的真核细胞表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＩＧＦ－１所含的ＩＧＦ－１ｃＤＮＡ序列和插入方向均正确,其转染的ＣＯＳ７细胞分泌较高浓度的ＩＧＦ－１,并且具有明显促进纤维细胞增殖的能力。结论 本实验所构建的重组真核细胞表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＩＧＦ－１能够高效表达有活性的ＩＧＦ－１,对进一步研究ＩＧＦ－１体内表达的生理和病理作用有一定意义。     

G－CSF测定在新生儿疾病诊断中的应用

应用ＥＬＩＳＡ法对本科住院的１０５例新生儿进行了粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的检测。结果为６０例细菌感染性疾病的新生儿Ｇ－ＣＳＦ阳性检出率为９９％，２５例非细菌感染的新生儿Ｇ－ＣＳＦ阳性率为８％，２０例正常新生儿Ｇ－ＣＳＦ检测全部为阴性。表明Ｇ－ＣＳＦ检测可用于新生儿感染性疾病的鉴别诊断，并对临床应用抗生素有较大的指导意义。     

人CASK/LIN-2下游信号分子的初步研究

目的：揭示人类新基因ＣＡＳＫ／ＬＩＮ－２的生物学功能,运用酵母要效ＬｅｘＡ系统寻找与ｈＣＡＳＫ的鸟苷酸激酶结构域（ｇｕａｎｙｌａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ－ｌｉｋｅ,ＧＫ）相互作用的蛋白信号分子。方法：将ｈＣＡＳＫ的ＧＫＤＮＡ片段亚克隆ｐＬｅｘＡ融合表达质粒,得到的重组质粒ｐＬｅｘＡ－ＧＫ转化酵母ＥＧＹ４８。经证实该重组质粒无转录活性并能进入胞核,结合ＬｅｘＡ操纵基因。将人胎脑文库质粒转化ＥＧＹ４８（ｐＬｅｘＡ－ＧＫ,ｐ８０ｐ－ｌａｃＺ）,在Ｇａｌ／Ｒａｆ ｈｉｓ－ｔｒｐ－ｕｒａ－ｌｅｕ－和Ｇａｌ／Ｒａｆ ｈｉｓ－ｔｒｐ－ｕｒａ－Ｘ－ｇａｌ条件下筛选ｌｅｕ＋和ｌａｃＺ＋酵母克隆,提取上述阳性酵母质粒转化大肠杆菌ＫＣ８,分离出文库质粒;再将这些文库质粒转化ＥＧＹ４８（ｐＬｅｘＡ－ＧＫ,ｐ８０ｐ－ｌａｃＺ）,     

一种N端缺失的rhGM—CSF（7～127）在大肠杆菌中的表…

在ｈＧＭ－ＣＳＦ结构与功能研究的基础之上，通过应用ＰＣＲ介导的缺失与突变和基因重组等技术，构建了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的三种原核表达载体ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＧＡ，ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＡＡ和ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ。在三种载体内，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）ｃＤＮＡ的５′端块缺失６个氨基酸，３′端则分别为天然终止密码ＴＧＡ，突变终止密码ＴＡＡ和ＴＧＡ加３′ＵＴＲ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表     

Economical and rational in vivo and in vitro diagnosis in Basedow hyperthyroidism

Immunogenic hyperthyroidism (Graves' disease) is a life-long ailment. A widespread diagnostic evaluation is essential for unbiased initial values prior to therapy. The major goals of initial investigation are to determine a functional disturbance of the organ, its pathogenesis and morphology. Even a suppressed ultrasensitive bTSH value represents no evidence of overt hyperthyroidism; a positive diagnosis can only be established by the additional presence of increased parameters of circulating free thyroid hormones (fT3, fT4). Evidence of any immunogenic pathogenesis is given by positive thyroid antibody values (TRAK, MAK, TAK). Moreover, the use of sonography (with poor diffuse echo and increased thyroid depth) as well as Tc-99m scan indicating primary autonomy, thyroxine induced hyperthyroidism or painless thyroiditis) may both prove rather useful in a rational and economical diagnosis of Graves' disease.     

高校组织学与胚胎学课程思政研究状况

<正>为了解我国高校组织学与胚胎学课程思政的开展情况。通过检索中国科学引文数据库、维普信息资源系统和万方数据库获得相关文献,从课程思政的基本概念和意义、组织学与胚胎学课程思政状况和展望3个方面进行了归纳。课程思政的提出,目的是为高校思想政治教育改革探索新模式。目前组织学与胚胎学课程思政工作主要从课程思政的目标、思政元素、方法、存在的问题和解决方法等方面开展了探索和研究。     

Participation in extracurricular activities and emotional and behavioral adjustment in middle childhood in Spanish Boys and Girls

This study examined the concurrent relationship between participation in extracurricular activities and externalizing and internalizing problems and social school behavior in a Spanish community sample, separately for boys (n=439) and girls (n=428), enrolled in 2nd, 4th, or 6th grades. Weekly participation in extracurricular activities was related to better emotional and behavioral adjustment and social competence. Overall, the relations were low and different according to gender, type of activity, and informant. Better adjustment was more related to participation in sports activities in boys and to participation in nonsports activities in girls. Size effect was higher for girls and decreased for both boys and girls when parental education and parenting practices were considered. Findings supported previous results obtained in American adolescents. © 2010 Wiley Periodicals, Inc.     

Imaging beta-cell mass and function in situ and in vivo

Glucose-stimulated insulin secretion (GSIS) from pancreatic beta-cells is critical to the maintenance of blood glucose homeostasis in animals. Both decrease in pancreatic beta-cell mass and defects in beta-cell function contribute to the onset of diabetes, although the underlying mechanisms remain largely unknown. Molecular imaging techniques can help beta-cell study in a number of ways. High-resolution fluorescence imaging techniques provide novel insights into the fundamental mechanisms underlying GSIS in isolated beta-cells or in situ in pancreatic islets, and dynamic changes of beta-cell mass and function can be noninvasively monitored in vivo by imaging techniques such as positron emission tomography and single-photon emission computed tomography. All these techniques will contribute to the better understanding of the progression of diabetes and the search for the optimized therapeutic measures that reverse deficits in beta-cell mass and function.