白细胞介素24基因抑制体内胶质瘤生长的机制研究

目的:探讨人白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因抑制胶质瘤生长的作用机制.方法:建立人胶质瘤裸鼠动物模型,瘤内注射含有IL-24基因的重组腺病毒Ad5F35-IL24,观察肿瘤生长情况, TUNEL 法检测肿瘤细胞凋亡率, Western印迹法检测肿瘤组织中IL-24、双链RNA激活的蛋白激酶(double-stranded RNA activated protein kinase,PKR)、p-PKR、p38-MAPK和p-p38-MAPK蛋白的表达情况.结果:Ad5F35-IL24重组腺病毒感染裸鼠胶质瘤组织后,IL-24蛋白呈现高表达,胶质瘤的生长受到明显抑制(P＜0.01);TUNEL法检测发现肿瘤细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);Western印迹法检测发现Ad5F35-IL24感染后PKR和p38-MAPK的蛋白表达及其磷酸化均较对照组显著升高(P＜0.01).结论:IL-24具有抑制胶质瘤生长和诱导其细胞凋亡的作用,其机制与上调并激活PKR和p38-MAPK蛋白途径有关.     

人脑胶质瘤逃避免疫监视机制的研究

为研究胶质瘤逃避免疫监视的机制，检测了胶质瘤体外细胞系培养上清（SN）抗PHA－P刺激正常人及胶质瘤患者外周血淋巴细胞增殖的作用。证实了胶质瘤可自分泌免疫抑制因子。经抗TGFβ2单抗中和SN试验，TGFβ2免疫组化染色及Northern杂交进一步表明该因子主要成分为TGFβ2并对胶质瘤患者血浆皮质醇，生长激素及儿茶酚胺含量及细胞免疫功能进行检测，发现血浆去甲肾上腺素显著降低，其水平与CD8亚群％呈负相关，与CD4／CD8比值及淋巴细胞增殖率呈正相关。初步提示存在胶质瘤的情况下，神经－免疫调控紊乱，可能起着抑制性调节作用。     

人脑胶质瘤组织中锌指样转录因子4的表达及其对肿瘤细胞活性的影响

目的:探讨人脑胶质瘤组织中锌指样转录因子4（KLF4）的表达及其对肿瘤细胞活性的影响。方法:收集2018年3月至2019年5月河南省南阳市第二人民医院收治的74例初发恶性胶质瘤患者术中切除的胶质瘤组织标本,收集同期手术切除的50例良性脑膜瘤组织,以及31例因头部外伤手术切除的正常脑组织。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-...     

瘦素通过激活STAT3信号通路促进人肺腺癌细胞增殖

目的:探讨瘦素(leptin)及其受体OB-Rb在人肺腺癌组织中的表达,并选用人肺腺癌A549细胞株探讨瘦素是否通过激活JAK2-STAT3信号通路发挥其促细胞增殖作用.方法:免疫组织化学法检测人肺腺癌及癌旁组织中瘦素及OB-Rb蛋白的表达情况,Western印迹法检测A549细胞中OB-Rb表达情况;MTT法检测A549细胞中瘦素对细胞增殖作用的影响,Western印迹法检测STAT3蛋白的活化程度.结果:人肺腺癌组织中瘦素及OB-Bb的阳性表达率分别为68.6%和48.6%,明显高于癌旁组织(P<0.05).人肺腺癌A549细胞中存在OB-Rb的表达,瘦素能明显促进A549细胞的增殖;在0～100 ng/mL范围内瘦素浓度越高,细胞的增殖效应越显著,并且经100 ng/mL瘦素处理后,STAT3的活化程度明显增高;而JAK酶抑制剂AG490能明显抑制瘦素对A549细胞的增殖作用.结论:瘦素和OB-Rb在肺腺癌组织中表达上调,表明其可能参与了肺腺癌的发生发展.瘦素可能通过激活JAK2-STAT3信号转导途径促进肺腺癌细胞的增殖.     

Leptin促进人脑胶质瘤U87MG细胞的迁移和侵袭

目的:探讨瘦素(leptin)对人脑胶质瘤U87MG细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制。方法:Leptin处理U87MG细胞,采用细胞划痕实验检测U87MG细胞的迁移能力,Transwell实验检测U87MG细胞的侵袭能力,RT-PCR及Western blot-ting法检测U87MG细胞中MMP-2及MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结果:Leptin明显促进U87MG细胞迁移能力[(152.42±3.29)vs(83.24±2.61)μm,P<0.05]和侵袭能力[(31.78±5.04)vs(17.03±2.41)个细胞,P<0.05],leptin能显著上调U87MG细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA[(0.76±0.04)vs(0.35±0.02),(0.84±0.02)vs(0.41±0.06);均P<0.05]及蛋白[(0.79±0.03)vs(0.23±0.01),(0.81±0.05)vs(0.39±0.03);均P<0.05]的表达。MMP抑制剂GM6001(10μmol/ml)可以逆转leptin对U87MG细胞迁移[(82.05±2.98)vs(81.76±3.25)μm,P>0.05]和侵袭能力[(19.23±2.46)vs(18.02±1.98)个细胞,P>0.05]的影响。结论:Leptin可以促进人脑胶质瘤U87MG细胞的侵袭及迁移,其机制可能与上调MMP-2、MMP-9的表达有关。     

下调miR-93表达抑制人脑胶质瘤细胞生长和侵袭的研究

目的 验证下调miR-93表达对人脑胶质瘤细胞株的生长和侵袭抑制作用.方法 合成miR-93抑制物,应用脂质体转染人脑胶质瘤细胞以抑制其表达,实时定量PCR检测转染后miR-93表达情况,流式细胞术检测、四甲基偶氮噻唑法(MTT)试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长变化,tran-swell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染miR-93抑制物后,细胞中miR-93高表达被明显抑制,细胞周期进展迟滞,S期细胞减少,生长速度减慢,克隆形成能力减弱,穿过matrigel胶的细胞数减少,侵袭能力被抑制.结论 下调miR-93表达可抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭.     

神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间STAT3信号的交互作用

目的： 探讨神经胶质瘤细胞（A172/U251）与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell, HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用。方法：建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌IL-6的影响,Western blotting检测HBMEC与A172/U251细胞共培养30 min时HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态p-STAT3的影响,CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞增殖和侵袭的影响。结果：VEGF(50 ng/ml) 组和共培养组（HBMEC分别和A172,U251细胞共培养） HBMEC的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。共培养30 min时,A172/U251细胞的IL-6(50 ng/ml)组、共培养组及（共培养+AZD1480）组的STAT3/p-STAT3蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01),（共培养+AZD1480）组的胶质瘤细胞STAT3/p-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。IL-6(50 ng/ml)组,共培养组及（共培养+AZD1480）组的A172/U251细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01),（共培养+AZD1480）组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。结论：神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间存在信号交互作用,且与JAK2/STAT3信号通路密切相关。     

敲低Yes相关蛋白表达对人脑胶质瘤细胞SNB19生长的抑制作用

目的：探究敲低Yes相关蛋白（YAP）对人脑胶质瘤细胞SNB19细胞生物学特征的影响。方法采用YAP干扰RNA（YAPsiRNA）敲低SNB19细胞中YAP的表达,Western blot法鉴定肿瘤细胞中YAP是否已被敲低;噻唑蓝（MTT）比色法测定YAP敲低后胶质瘤细胞的增殖能力;Transwell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的变化;流式细胞术和AnnexinⅤ标记法分别检测胶质瘤细胞周期及凋亡的变化。应用统计软件SPSS18．0进行统计学处理。结果 Western blot证实转染 YAPsiRNA 可有效敲低SNB19细胞中Yes相关蛋白的表达;敲低Yes相关蛋白的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖活性,细胞存活率由（100．00±0．00）％下降为（52．32±3．10）％（F＝33．00,P＜0．01）,细胞周期阻滞于G0-G1期（F＝8．76,P＜0．01）,细胞侵袭能力明显受抑,穿膜细胞数由（163．20±10．10）个下降至（37．71±2．52）个（F＝282．05,P＜0．01）,凋亡增加,凋亡率由（3．56±0．35）％增加至（18．99±0．66）％（F＝931．99,P＜0．01）。结论敲低胶质瘤细胞SNB19中YAP表达可抑制肿瘤细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡;YAP可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在靶点。     

转染连接蛋白基因对人脑胶质瘤细胞间隙连接通讯及其生长变化的研究

目的 研究连接蛋白（Cx)基因对人脑胶质瘤细胞的细胞间隙连接通讯（GJIC）及其增殖的抑制作用,探索以Cx43基因治疗胶质瘤的可行性。方法 将含Cx43cDNA的质粒,以脂质体介导转染Cx43表达缺失的TJ905人胶质母细胞瘤细胞,通过Northern印染杂交、原位杂交及免疫组化染色检测Cx43mRNA及蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪技术（SLDT）检测GJIC,MTT法测定细胞增殖率,核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR)染色检测细胞增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 转染后TJ905细胞有不同程度的Cx43mRNA和蛋白表达及GJIC恢复。Cx43表达水平高的克隆细胞增殖明显下降,细胞凋亡并未增加。结论 Cx43基因及GJIC在恶性胶质瘤的发生发展过程中起重要作用,可能成为恶性胶质瘤基因治疗的优选靶的之一。     

瘦素诱导乳腺癌细胞的凋亡抵抗及其分子机制

Objective To explore the apoptosis resistance induced by Leptin and its mechanism in breast cancer cells in vitro.Methods The leptin-mediated reduction of docetaxel-induced apoptosis in human breast cancer T47D cells was evaluated by TransAM ELISA,MTT and caspase-9 assay.The leptinpromoted survivin expression was analyzed by Western-blot and RT-PCR.The reversing effect of STAT3 knockdown on leptin-induced survivin upregulation was measured by Western-blot and RT-PCR.Results Leptin promoted T47D cells proliferation and the inhibitory rate was-63.6%.It reduced docetaxel-induced apoptosis in T47D cells by 31.9%.Leptin at different concentrations promoted survivin protein and mRNA expression in T47D cells.The expression of survivin mRNA was 4.6 fold compared with the T47D cells not treated with leptin(10 nmol/L).The expression of survivin mRNA in T47D cells was 0.55±0.15 fold after transfected with small interfering RNA(siRNA)of STAT3.The expression of survivin mRNA in STAT3 siRNA group and mock transfected group were 0.56±0.18 fold and 1.61±0.22 fold after treated by leptin,respectively.The survivin protein level of T47D mock transfected cells was increased after treated by leptin,but the protein level of T47D transfected with STAT3 siRNA cells were not changed significantly.Conclusion Leptin/STAT3 signaling is a novel pathway for up-regulation of survivin expression in breast cancer cells.     

血管内皮生长因子在人脑胶质瘤侵袭中的作用

 目的　研究血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)在脑胶质细胞瘤中的表达情况 ,探讨其表达与肿瘤的恶性程度、肿瘤侵袭及预后的关系。方法　采用免疫组织化学染色检测 5 2例脑胶质瘤标本 ,4例垂体腺瘤 ,5例正常脑组织的VEGF表达水平。结果　在正常脑组织中未见VEGF免疫组化染色阳性细胞 ,垂体腺瘤偶有表达 ,脑胶质瘤组织中均有VEGF表达 (P <0 .0 5 )。随着脑胶质瘤恶性程度的增加 ,VEGF的表达增高 (P <0 .0 1)。生存期 <3年者VEGF的表达显著高于生存期 >3年者 (P <0 .0 1)。结论　VEGF的表达与胶质瘤的恶性程度和侵袭性等有关 ,并对其预后有一定的意义     

Expression of hepatocyte growth factor and matrix metalloproteinase-2 in human glioma

Hepatocyte growth factor (HGF) has a stimulatory effect on the synthesis of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), which is involved in glioma invasion. In this study, to clarify the correlation between the expression of HGF and MMP-2 in glioma tissues, immunohistochemical analysis of HGF and MMP-2 was performed in 11 cases of astrocytoma, 10 cases of anaplastic astrocytoma, and 9 cases of glioblastoma. As a result, expression of HGF and MMP-2 was correlated with the grade of malignancy (P=0.0181 and 0.0001, respectively), and a significant correlation between the immunoreactivity of HGF and that of MMP-2 was observed (P<0.05). Immunofluorescence study revealed the concomitant expression of HGF and MMP-2 in glioma tissue. In cultured glioma cell lines (SNB-19, U87MG, and U373MG), exogenous recombinant HGF effectively acted on the production of the active and latent forms of MMP-2 protein in a dose-dependent manner. Active MMP-2 increased more effectively than the latent form. Taken together, these results suggest that HGF may promote glioma invasion in vivo by production of MMP-2.     

长链非编码RNA PSMA3-AS1在人胶质瘤细胞中的表达及作用研究

目的探究胶质瘤组织中lncRNA PSMA3-AS1的表达情况,以及其对胶质瘤细胞(U251、LN229、T98G和A172)增殖和侵袭能力的影响。方法使用qRT-PCR实验检测35对胶质母细胞瘤组织和癌旁组织中PSMA3-AS1表达;结合TCGA数据库分析PSMA3-AS1表达与胶质瘤恶性程度及患者预后的关系;采用U251和T98G胶质瘤细胞系进行细胞增殖能力和侵袭能力检测;使用Western blot实验检测侵袭相关蛋白MMP-2/9表达水平。结果 TCGA数据库分析提示PSMA3-AS1在胶质瘤组织中呈高表达状态,结合35对胶质瘤组织和细胞系中PSMA3-AS1的表达,提示PSMA3-AS1在胶质瘤中表达明显上调(P<0.05)。同时发现PSMA3-AS1表达与肿瘤直径有关(P=0.007),而PSMA3-AS1高表达的胶质瘤患者生存期较短(P=0.042)。敲低PSMA3-AS1表达后,胶质瘤细胞内PSMA3-AS1的表达水平及细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制,侵袭相关蛋白(MMP-2/9)表达水平明显降低(P<0.05)。结论 PSMA3-AS1在胶质瘤中呈高表达状...     

恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体表达及其活化后促瘤细胞增殖和血管生成因子产生的作用

背景与目的:趋化因子受体在多种病理过程中发挥重要作用,通过促进肿瘤细胞增殖、迁移或血管生成过程,进而在肿瘤发生、演进和转移中发挥极为重要的作用.本研究拟探讨甲酰化肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤细胞中的表达和激活后的功能活性.方法:以人恶性胶质瘤细胞U87和FPR-siRNA-U87细胞为研究对象,采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测人恶性胶质瘤细胞FPR的表达和定位;用FPR配体甲酰-甲硫酰-亮氨酰-苯丙氨酰胺(formy-Met-Leu-Phe,fMLF)激活FPR后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双抗夹心酶联免疫(ELISA)吸附法检测细胞分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)水平,RT-PCR法检测细胞IL-8 mRNA的水平.结果:恶性胶质瘤细胞U87有FPR表达,定位于细胞膜,FPR-siRNA-U87细胞不表达FPR:FPR激动剂fMLF对人恶性胶质瘤细胞具有明显的促增殖作用,U87细胞fMLF刺激组A值较对照组显著升高(P＜0.05),FPR-siRNA-U87细胞fMLF刺激组A值与对照组相比无显著性差异(P＞0.05);fMLF作为FPR的激动剂,在12 h、24 h、36 h和48 h等各时相点U87细胞的VEGF和IL-8蛋白水平均显著增加,以处理36 h为观察时间点,U87细胞VEGF蛋白水平[(3.13±0.23)ng/ml]较对照组显著增加(P＜0.05),IL-8蛋白分泌量为(7.54±0.53)ng/ml,较对照组显著增加(P＜0.05);FPR-siRNA-U87细胞VEGF和IL-8蛋白分泌量分别为(1.26±0.05)ng/ml和(1.54±0.05)ng/ml,较对照组无明显改变(P＞0.05);fMLF能显著上调U87细胞IL-8 mRNA的表达,较对照组显著升高(P＜0.05),FPR-siRNA-U87细胞IL-8 mRNA水平与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论:人恶性胶质瘤细胞膜存在功能性FPR受体,其活化后具有促瘤细胞增殖和分泌血管生成因子的作用.     

RNAi沉默STAT3基因表达对膀胱癌细胞T24及5637生长影响的实验研究

目的 探讨应用RNA干扰(RNAi)技术沉默信号转导子与转录活化子(STAT3)基因对膀胱癌细胞株T24及5637细胞的影响.方法 针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,转染人类膀胱癌细胞株T24及5637细胞.通过半定量RT-PCR、Western blotting法检测STAT3基因不同水平的表达情况,采用流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.结果 成功构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,并成功转染T24及5637膀胱癌细胞;半定量RT-PCR、Western blotting结果显示,重组质粒转染组细胞的STAT3基因表达在RNA及蛋白水平上显著低于对照组(P<0.05);流式细胞仪的结果显示,重组质粒转染组细胞明显受到抑制并出现凋亡现象.结论 pGeneSil-1-shRNK-STAT3转染膀胱癌细胞株T24及5637细胞后,可有效抑制STAT3的表达,并抑制膀胱癌细胞的生长.     

Reduced growth of human sarcoma xenografts in hosts homozygous for the lit mutation

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Prior studies have shown that sarcoma growth can be stimulated by insulin-like growth factor-I (IGF-I). To extend this line of research, we carried out in vivo growth studies of primary human sarcoma in immunosuppressed control and IGF-I-deficient mice. METHODS: Human sarcoma specimens (one osteosarcoma and seven soft tissue sarcomas) were harvested in the operating room and implanted in immunosuppressed mice. Second-generation sarcomas were transplanted to control (GH replete lit/+ mice) and to experimental (GH/IGF-I-deficient lit/lit) animals. When tumors reached 1,000 mm(3) in one group, average tumor size was compared in the two groups. IGF-I receptor expression was measured by RT-PCR and IGF-I receptor binding sites were assayed by radiolabeled IGF-I. RESULTS: Five of eight sarcomas demonstrated reduced growth in the GH/IGF-I-deficient lit/lit animals. In four of the five sarcomas that demonstrated growth inhibition, IGF-R was elevated relative to placenta or a positive control cell line (MCF-7, which is known to be responsive to IGF-I in vitro and in vivo). In three of the five sarcomas that demonstrated growth suppression, IGF-R was elevated twofold after implantation in the experimental IGF-I-deficient animals. CONCLUSIONS: The GH-IGF axis may be an important stimulator of tumor growth in sarcomas. These experiments suggest that IGF suppression may inhibit sarcoma growth in vivo.     

VEGF及其受体Flt和KDR水平变化与胶质瘤关系及临床意义

 目的 探讨胶质瘤患者血清血管内皮生长因子（VEGF）及其受体Flt-1和KDR水平变化，为评价胶质瘤治疗效果，判断预后寻找一种科学的生物学标志物。方法 收集治疗前后胶质瘤患者、脑转移癌患者和健康对照者血清，进行VEGF，Flt-1和KDR水平的检测，SPSS11.5统计软件包对数据进行t检验和相关分析。结果 （1）治疗前脑胶质瘤和脑转移瘤患者血清VEGF水平明显高于健康对照组； 脑胶质瘤患者组和脑转移瘤患者组血清Flt-1水平明显高于健康对照组；脑胶质瘤患者组血清KDR水平明显高于健康对照组； 治疗后缓解的胶质瘤患者组VEGF和Flt-1水平明显低于治疗前。差异均有统计学意义。（2） VEGF与Flt-1和KDR有显著的相关性。结论 胶质瘤患者血清中VEGF及其受体的检测，可作为胶质瘤辅助诊断、治疗效果监测和预后判断的重要生物学指标。