EB病毒潜伏膜蛋白1与鼻咽癌关系的研究进展

鼻咽癌的发生发展与EB病毒密切相关。EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）在细胞的恶性转化中起着重要的作用。本文就LMP1的结构、多态性、与鼻咽癌的相关性研究进行综述。     

鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1启动子的突变

 【目的】 检测EB病毒潜伏膜蛋白1 (LMP1) 远端启动子L1-TR在鼻咽癌(NPC)组织中的突变情况并探讨突变对启动子活性的影响。【方法】 用聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增出B95.8细胞和新鲜鼻咽癌组织细胞中EB病毒(EBV)的L1-TR片段,并测序比较其核苷酸序列的差异。构建含原型和突变型L1-TR启动子的荧光素酶报告质粒并分别转染HaCat细胞、B95.8细胞和C666-1细胞,比较两种启动子的活性。【结果】 和B95.8原型比较,鼻咽癌组织中的EB病毒L1-TR启动子区域有多处缺失。插入和点突变,且启动子活性明显降低(P < 0.05)。【结论】 鼻咽癌组织中LMP1启动子 L1-TR的活性与B95.8原型相比明显降低,这在EB病毒的免疫逃避机制中可能有一定的意义。     

EB病毒潜伏膜蛋白1的研究进展

EB病毒 (Epstein -BarrVirus,EBV)是一类全球性分布、人群感染率较高的单纯疱疹病毒家族成员之一 ,是一种线状双链DNA病毒 ,感染者体内终生潜伏存在 ,有致瘤性。编码LMP1的基因位于EB病毒基因组U5 -TR区的BNLF - 1基因 ,为BamHINhet区域 ,由ED-L1和L1-TR激活子所控制。LMP1是由     

EB病毒相关胃癌潜伏感染膜蛋白-1表达的研究

①目的探讨EB病毒阳性胃癌(EBVaGC)中潜伏感染膜蛋白-1(LMP-1)的表达状况。②方法原位杂交法检测胃癌患者石蜡包埋组织标本中EB病毒编码的小RNA(EBV encoded RNA,166bps,EBER-1);免疫组化法检测EBVaGC中LMP-1。③结果EBVaGC中无LMP-1表达。④结论EB病毒阳性胃癌中缺乏潜伏感染膜蛋白LMP1的表达。     

三种EB病毒潜伏膜蛋白基因转基因载体的构建

为制备ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）基因转基因小鼠,探讨ＬＭＰ的体内致瘤作用,本文构建了三种不同的ＬＭＰ基因转基因载体,即ｐＢＲ３２２ＭＴＬＭＰ,ｐＭｃｉ３ＬＭＰ和ｐＭＶＬＭＰｃｍｙｃ;并分别讨论了上述三种载体的特征及其应用前景     

EB病毒潜伏膜蛋白1的基础研究进展与临床意义

EB病毒的感染与B细胞及上皮细胞来源等肿瘤密切相关，其潜伏膜蛋白1的基础研究和临床应用也取得了一些颇具意义的进展，本文对此作一综述。     

应用RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白-1表达对鼻咽癌细胞生长的影响

目的探讨能否通过siRNA人工诱导RNA干扰,在EB病毒阳性的鼻咽癌细胞株C611中,选择性抑制潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,并了解LMP1抑制对鼻咽癌细胞生长的影响。方法利用脂质体转染的方法,将人工合成的双链siRNA导入鼻咽癌细胞,通过半定量RT-PCR检测LMP1 mRNA水平的变化。并采用MTT法和流式细胞仪检测LMP1表达抑制后,鼻咽癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果C611细胞转染siRNA可使LMP1 mRNA水平下降90%以上。LMP1基因抑制后,C611细胞增殖速度下降33%;流式细胞检测显示,C611细胞周期在G0-G1期受阻。结论本研究证明,全新的人工诱导RNA干扰技术,能够有效抑制LMP1基因的表达,并降低鼻咽癌细胞的增殖能力,为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新的思路。     

儿童狼疮性肾炎患者中 EB 病毒潜伏膜蛋白1的表达

目的：通过实时定量逆转录 PCR(RT-PCR)、肾脏免疫组化和 ELISA 3种方法研究儿童狼疮性肾炎(LN)中 EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)的表达,试图探讨 LMP-1在儿童 LN 中的致病机制。方法41例 LN 患儿和12例健康对照组,分别用 RT-PCR 法、免疫组化法、ELISA 法检测两组外周血单核细胞(PBMCs)、肾脏组织及血清中 LMP-1的表达。结果① RT-PCR 法、免疫组化法、ELISA 法检测 LN患儿和健康对照者的阳性率分别为65．9% vs 8．3%,95．1%vs 16．7%,22．0% vs 8．3%,差异有统计学意义(P <0．05);②3种方法检测 LMP-1的表达,免疫组化法检测阳性率高于其他两种方法,差异有统计学意义(P <0．05)。结论儿童 LN 中存在 EBV 潜伏期基因 LMP-1表达异常,其中肾脏组织中表达阳性率最高,提示 LMP-1可能参与了儿童 LN 的发病。     

EB病毒潜伏膜蛋白对鼻咽上皮细胞生物学表型的影响

EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是一种全球性分布、人群感染率颇高的具有致瘤潜能的DNA疱疹病毒,90％以上的人群建立了EBV终生潜伏状态感染。目前的研究发现其致瘤谱越来越广,除与传染性单核细胞增多症相关外,还与某些恶性淋巴瘤（Burkitt淋巴瘤,霍奇金病,某些T、B细胞源性非霍奇金淋巴瘤如血管中心性淋巴瘤、间变性大细胞性淋巴瘤、Lennert淋巴瘤、器官移植后及免疫缺陷者淋巴瘤等）、鼻咽癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、喉癌、宫颈癌等恶性肿瘤相关。     

Epstein－Barr病毒潜伏膜蛋白基因免疫的实验研究

利用基因免疫技术，将重组质粒ｐＢｓ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ注入ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌中，于第２、４、８周用间接免疫荧光法检测鼠血清中ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）特异抗体。结果：所有免疫小鼠（５／５）均产生特异抗体，平均抗体滴度第２周为１／１６，第４周为１／３２，第８周为１／４４．８，质粒注射８周后的肌细胞中仍可扩增出目的基因ＤＮＡ序列。提示：目的基因至少可在受体组织中存在并表达到第８周，质粒ＤＮＡ１次性免疫后抗体滴度随时间变化逐渐增高。     

EB病毒LMP1基因和蛋白在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及与预后的关系

目的从蛋白和DNA两个水平初步检测成都地区结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中LMP1的表达,并探讨与预后的关系。方法应用免疫组化和PCR技术检测67例结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤LMPl的表达,并应用Kaplan—Meier曲线分别比较LMP1蛋白和LMP1DNA阳性表达组与阴性表达组的生存率。结果LMP1蛋白阳性表达10例(14．93％),LMP1DNA阳性表达56例(83．58％),LMP1总检出率83．58％。LMP1蛋白(P=0．678)和LMP1DNA(P=0．943)表达均与预后无明显关系。结论LMP1与成都地区结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤关系密切;结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中LMP1蛋白水平和DNA水平表达不一致;LMP1的表达与预后无明显关系。     

EB病毒潜伏膜蛋白1的研究进展

EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)是EB病毒编码的一种主要蛋白,它能通过其C末端的3个功能结构域CTAR1、CTAR2及CTAR3启动一系列信号途径,包括核因子κB、PI3K-Akt/PAB、MAPK及JAKs/STATs,从而调节其宿主细胞的生长、增殖、分化、凋亡等多种细胞生物学功能,本文就这方面的研究进展及其自身调节的机制综述如下。     

LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响

目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1（LMP1）羧基末端第三活性区在鼻咽上皮细胞生长中的作用。方法采用逆病毒感染的方法,建立稳定表达野生型LMP1（LMP1^WT）和突变型LMP1（LMP1^△232-351）的鼻咽上皮细胞（NP69）系,然后通过细胞生长曲线、平皿克隆形成与软琼脂集落实验、细胞周期与抗凋亡检测等方法,观察LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响。结果LMP1^△232-351体外促转化细胞生长能力较LMP1^WT明显降低（P〈0.01）;NP69-LMP1^△232-351细胞的凋亡与细胞G1期分布均较NP69-LMP1^WT细胞增加（P〈0.01）。结论LMP1羧基末端第三活性区可能通过调节细胞周期与凋亡而影响鼻咽上皮生物学特性。     

EB病毒潜在膜蛋白在胃贲门腺癌组织中的表达

应用Ｓ－Ｐ免疫组化方法对８０例贲门腺癌进行抗ＥＢ病毒潜在膜蛋白单克隆抗体的检测。结果显示：癌组织阳性１４例，阳性部位主要位于癌细胞膜和胞浆内。对ＥＢＶ感染病例的形态学特征进行描述，并讨论ＥＢＶ与癌发生的联系。     

结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型LMP1蛋白检测及全长基因克隆分析

目的 研究LMP1基因和蛋白在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤移植瘤模型传代组织中的稳定性和变异性。方法 利用PCR和Western Blot方法检测已建立的结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型传代组织以及供体肿瘤组织中LMP1的全长基因和蛋白表达，并将扩增测序的LMP1全长基因序列与野生型B95．8和缺失型CAO细胞株序列进行比较分析。结果 移植瘤模型传代组织均检测到LMP1基因和蛋白表达，LMP1全长序列与供体肿瘤组织同源性为99．76％。序列分析发现此LMP1基因与CAO细胞株基因序列相似，碱基序列既具相对保守性，又存在一定的特异性。结论 LMP1的基因和蛋白在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型传代组织中稳定存在，提示可能与该淋巴瘤的维持与发展有关。该裸鼠移植瘤模型为深入研究LMP1与此类淋巴瘤相关性提供了重要的体内实验平台。     

埃泼斯坦-巴尔病毒潜伏膜蛋白2A特异性细胞毒性T淋巴细胞的体外诱导研究

目的：利用含埃泼斯坦-巴尔病毒(Epstein—Barr virus，EBV)潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒(rVV—LMP2A)感染的人树突状细胞(DC)体外诱导EBV—LMP2A特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法：rVV—LMP2A感染的DC分别在培养第1、8天刺激相同MHC背景的人外周血单个核细胞(PBMC)，在IL-2作用下体外诱导EBV特异性CTL。培养第15天乳酸脱氢酶法检测CTL的特异性杀伤活性。结果：诱导的CTL对rVV—LMP2A感染的靶细胞在效靶比为5：1、10：1和15：1时，特异性杀伤率分别为63．5％、65．5％和67．9％。结论：rVV—LMP2A感染的DC刺激相同MHC背景的PBMC可诱导出较高杀伤活性的EBV特异性CTL。     

含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测

目的：构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体，并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法：用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后，克隆到毕氏酵母载体PICZαA中，构建重组表达质粒pPICαA—LMP2A。pICZαA—LMP2A经SAC Ⅰ酶切线性化，采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115，经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株，用PCR鉴定阳性酵母转化子，并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达，表达产物进行SDS—PAGE电泳和westem—b10tting分析。结果：重组质粒pPICZαA—LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS—PAGE电泳和west-em-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54Kda，与预计值相同。结论：构建了LMP2A毕氏酵母表达载体，并在酵母细胞中成功表达。     

仙台病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白。方法根据GenBank上发表的仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白基因序列,设计并合成一对引物,通过RT-PCR扩增出核衣壳蛋白全长cDNA序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,于37℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达,大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约60×103处出现一新蛋白带,与预期目的蛋白分子量相符。结果Western blot检测表明,表达产物能与兔抗SV阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带,表明其具有免疫原性。结论为建立以重组NP蛋白为诊断抗原检测SV奠定基础。     

利用PCR技术优化人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因

本研究利用ＰＣＲ技术将人单核细胞趋化蛋白－１基因（ＭＣＰ－１）５′端翻译起始区进行优化改构。结果表明，改构后的ＭＣＰ－１基因克隆入大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中，ＤＮＡ测序证实正确。上述结果为进一步研究ＭＣＰ－１的高效表达奠定了基础。