白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流密度的影响

目的:观察白藜三醇(RES)对培养的豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)密度的影响.方法:分离成年豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度RES孵育心室肌细胞不同时间的ICa-L密度.结果:①培养72 h时,RES 30 μmol/L和100μmol/L使ICa-L密度分别下降13%和27%,呈现浓度依赖性抑制趋势,且RES 100 μmol/L组与对照组比较有统计学差异(P<0.05);②RES 10 μmol/L,30 μmol/L和100μmol/L对ICa-L密度呈现时间依赖性抑制趋势.且RES 100 μmol/L在24 h和72 h之间有统计学差异(P<0.05);结论:白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流呈现浓度和时间依赖性抑制趋势.     

救心复脉注射液对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的：探讨救心复脉注射液(枳实提取液)有效成分辛弗林(311)、N-甲基酪胺(417)对豚鼠心室肌细胞膜L型钙通道电流（ICa-L）的影响。方法：用酶解法分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察辛弗林、N-甲基酪胺对豚鼠心室肌细胞膜ICa-L的影响。结果：用辛弗林（10,25,50,100 mmol/L)时能增大 ICa-L ,增加率分别为 8.27%,27.29%,41.01% 和 48.74% (P<0.05)。 用N-甲基酪胺（10,25,50,100 mmol/L） 时能增大 ICa-L ,增加率分别为 10.05%, 30.12%,43.05% 和51.90%(P<0.05)。辛弗林和N-甲基酪胺只改变电流幅度,不改变I-V曲线形状。结论：辛弗林和N-甲基酪胺有浓度依赖性的增大豚鼠心室肌细胞ICa-L,促进钙通道开放的作用。     

厄贝沙坦电生理作用的实验研究

目的:研究厄贝沙坦(Irbesartan)对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响.方法:应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位.结果:①厄贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L,10,100和1000 nmol/L的厄贝沙坦分别使ICa-L密度 (pA/pF)从 (-9.8±1.1)减少到(-6.7±0.9),(-4.2±0.8)和(-2.1±0.4)(n=5,P<0.05或P<0.01).②厄贝沙坦可使ICa-L I-V曲线上移,但不改变其激活的电压依赖性和反转电位.③厄贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L.④厄贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响,但可使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性失活,对照组V1/2和κ值分别为(-30±5)mV,(8.2±0.7),厄贝沙坦组为(-39±7) mV,(11.6±1.3)(n=5,P均<0.05).⑤厄贝沙坦100 nmol/L使ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)从对照组(62.5±2.3) ms延长至(126.4±2.6) ms(P<0.01).⑥厄贝沙坦对IK1和INa无明显影响.⑦厄贝沙坦(100 nmol/L)可使单个心室肌细胞动作电位时程(APD30,APD50,APD90)从(106±10),(125±16),(178±23)ms缩短至(82±16),(99±6),(122±18) ms(n=5,P<0.05),对静息电位、动作电位幅度无影响. 结论:厄贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L.     

M_3R介导的cAMP-PKA信号途径对L-型钙通道的调控作用研究

目的研究M3受体激动剂通过cAMP-PKA信号途径对L-型钙通道的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录M3受体激动剂胆碱对大鼠单个心室肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察细胞内钙离子的变化。结果胆碱使大鼠心室肌细胞ICa-L密度从(9.07±0.68)pA/pF减少至(5.58±0.62)pA/pF(n=4,与对照组相比,P<0.01),H89加胆碱组使ICa-L电流密度减少至(7.68±0.75),幅度明显高于胆碱组(n=4,与胆碱组相比,P<0.01)。胆碱抑制KCl除极诱导的心肌细胞[Ca2+]i的升高,从(2.83±0.08)降至(1.17±0.09)FI/FI0(n=30,与KCl组相比,P<0.01),胆碱与H89组可使[Ca2+]i降至(1.65±0.17)FI/FI0,幅度高于胆碱组(n=30,与胆碱组相比,P<0.05)。结论 M3受体激动剂胆碱通过抑制PKA活性调控L-型钙通道,使外钙内流减少,降低细胞[Ca2+]i,从而发挥抗心肌保护作用。     

低浓度哇巴因升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度可能的信号转导途径

目的:观察哇巴因(ouabain,OUA)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的影响,并探讨低浓度OUA是否可通过Na ,K -ATPase的信号转导途径升高[Ca2 ]i.方法:分离豚鼠心室肌细胞,激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca2 ]i的荧光密度,另用不同浓度OUA孵育急性分离的豚鼠心室肌细胞后,分别取其沉淀用Western印迹检测观察OUA对酪氨酸蛋白(Src)磷酸化的影响.结果:在正常台氏液及无钙台氏液中,OUA(10-9,10-8,10-7,10-6mol·L-1)均可浓度依赖性地升高细胞内钙浓度(P《0.05或0.01),且在正常台氏液中升高更为显著(P《0.05).蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮(genistein,GST)(1、10、50、100 μmol·L-1)可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应.磷酸化Src包括相对分子质量120 000和70 000两个条带,各剂量OUA(10-4,10-6,10-8mol·L-1)均能使Src的两个磷酸化条带的密度较阴性对照组显著升高(P＜0.05),而GST(100 μmol·L-1)可显著抑制OUA的升高效应.结论:低浓度OUA可能通过使酪氨酸蛋白磷酸化,激活OUA/Na ,K ATPase/Src信号转导通路,促使钙通道开放及内钙释放,从而升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度.     

左—甲状腺素所致豚鼠肥厚心室肌细胞L—型钙电流的变化

观察左 -甲状腺素造成的豚鼠肥厚心室肌细胞 L-型钙电流变化及与血浆 T3、T4水平增高的关系。豚鼠 ip左 -甲状腺素 ( Levothyroxine,L-thy,0 .5mg/kg× 1 0 d) ,造成心肌肥厚模型之后 ,部分豚鼠 ip普萘洛尔( propranolol,pro,5mg/kg× 3d)。用全细胞膜片钳技术测定单个心室肌细胞 L-型钙电流的变化。结果 ,电流强度、电流密度在肥厚组增幅分别达 32 .95%和 35.2 4 % ( P<0 .0 1 ) ,用 pro治疗后接近正常值 ( P>0 .0 5)。血浆T3、T4含量 ,pro治疗后仍明显高于正常组 ,但肥厚有所消退 ,消退率为 66.1 2 %。结论 ,左 -甲状腺素造成的豚鼠肥厚心室肌细胞 L-型钙电流增强 ,此变化与血浆 T3、T4水平增高状态无关     

葱白提取物对充血性心力衰竭家兔心室相关电生理指标的影响

目的：探讨葱白提取物(FOB)对充血性心力衰竭(CHF)引起室性心律失常相关电生理的影响。方法健康成年雄性新西兰大耳白兔分为正常对照组(Control组,n=15)、CHF模型组(CHF,n=15)和CHF+FOB干预组(FOB组,n=15)。CHF模型制备经兔耳缘静脉注射异丙肾上腺素(0.3 mg· kg-1· d-1,连续注射3周)诱导,后继续喂养6个月成功完成。利用记录在体心脏左心室单相动作电位（MAP）相关静息膜电位（RMP）,动作电位幅度(APA)、最大上升速率(Maxdv/dt)、动作电位复极化恢复10%、20%、50%、90%(APD10、APD20、APD50、APD90)和短阵快速刺激观察心律失常刺激周长(BCL)、诱发率和持续时间在各组变化。酶解法分离单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术观察心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)在用药前后改变。结果与Control组比较,CHF组RMP、APA、Maxdv/dt显著减小, APD10、APD20、APD50和APD90明显延长,并且BCL、诱发率明显增加,持续时间更长(P均<0.01);与CHF组比较, FOB组RMP、APA、Maxdv/dt明显增加,各APD显著缩短,且BCL严重缩短,诱发率和持续时间均降低(P均<0.01)。FOB能明显抑制CHF心室肌细胞ICa-L电流密度(P<0.01),当钳制电压为+20 mV时,与Control组比较,CHF组ICa-L电流密度由(7.1±0.3) pA/pF增加为(10.9±0.5）pA/pF (P<0.01);当加入FOB作用CHF组心室肌细胞后,ICa-L减小为(6.4±0.2) pA/pF (P<0.01)。FOB能使CHF组ICa-L的I-V曲线明显上调,超过Control组。结论 FOB能显著改善CHF心室肌电生理易损性和室性心律失常的易感性,起到抗CHF室性心律失常作用。其机制可能与FOB抑制CHF心室肌细胞ICa-L有关。     

1-磷酸鞘氨醇对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响

目的： 观察1-磷酸鞘氨醇（S1P）对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响,探讨S1P在室性心律失常中的作用。方法： Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为正常对照组、S1P(2.2 μmol·L^-1)组及S1P(2.2 μmol·L^-1)+Suramin（200 μmol·L^-1）组。应用细胞贴附式记录方式记录心室肌细胞延迟整流钾电流（I_K）。结果：细胞贴附式记录及通道动力学分析 ,S1P组心室肌细胞通道开放时间及开放概率明显低于正常对照组(P<0.05),关闭时间明显高于正常对照组（P<0.05）;S1P+Suramin组通道开放时间、开放概率以及关闭时间与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论： S1P抑制心室肌细胞延迟整流钾电流外流,该作用通过缩短开放时间、延长关闭时间、降低开放概率实现,且通过膜受体介导。     

乳酸司帕沙星对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的影响

目的:观察乳酸司帕沙星(SPX)对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)的影响.方法:采用酶消化方法分离单个豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IK,观察不同浓度SPX(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和1 000 μmol/L)对IK的影响.结果:除0.1 μmol/L外,SPX浓度分别为1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L、1 000 μmol/L时IK的脉冲电流和尾电流较正常心室肌细胞脉冲电流和尾电流均减少(P＜0.05或0.01).SPX明显抑制了IK的脉冲电流和尾电流(P＜0.05),SPX的量效关系曲线显示SPX的IC50为14.89 μmol/L. 结论:SPX能浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞IK,提示高浓度SPX有引发心律失常的潜在不良反应.     

心力衰竭患者抗β1肾上腺素能受体自身抗体阳性血清对心肌细胞L-型钙通道的影响

目的探讨心力衰竭患者抗β1肾上腺素能受体自身抗体(Abs)阳性血清对豚鼠心室肌细胞膜上L型钙电流(IGa-L)的影响.方法应用全细胞钳制技术,定量观察并比较β1肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素(Iso)和心力衰竭患者Abs阳性血清对豚鼠单个心室肌细胞的ICa-L电流强度的影响.结果β1肾上腺素能受体激动剂Iso可使基础ICa-L峰值电流强度和标准电流密度从(997.09±227.5)pA和(8.20±0.86)pA/pF增大到(2 241.01±348.5)pA和(18.98±1.18)pA/pF(P＜0.01),而β1肾上腺素能受体阻滞剂艾司洛尔(Esm)可以阻断这一作用.同样,心力衰竭患者Abs阳性血清可使基础ICa-L峰值电流强度从(963.57±207.56)pA增大到(1 382.41±241.36)pA,标准电流密度从(8.14±0.72)pA/pF增大到(11.70±1.03)pA/pF(P＜0.01),Esm也可阻断此作用.结论人类心脏Abs阳性血清对心肌细胞受体有异丙肾上腺素样激动剂效应,可能参与了心力衰竭时心肌细胞的病理生理过程.     

枳实提取液对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

OBJECTIVE: To determine the effect of citrus aurantium extract (CAE) on L-type calcium currents (ICa-L) in ventricular myocytes of guinea pigs. METHODS: Single myocytes were dissociated by enzymatic dissociation method. The whole-cell patch-clamp recording technique was used to record the change of calcium current after the administration of CAE. RESULTS: 1. CAE 4 x 10(-3), 2 x 10(-2), 4 x 10(-2), and 1 x 10(-1) g/ml increased the ICa-L by 15.89%, 29.01%, 52.03% and 59.76% (P < 0.05), respectively. 2. CAE 2 x 10(-1) and 4 x 10(-1) g/ml decreased the ICa-L by 16.61% and 30.87% (P < 0.05), respectively. CAE changed the ICa-L significantly, but did not change the shape of I-V curves. CONCLUSIONS: CAE 4 x 10(-3)-1 x 10(-1) g/ml can increase the L-type calcium current in guinea pig ventricular myocytes significantly in a concentration-dependent manner, and promote the opening of calcium channel. CAE 2 x 10(-1)-4 x 10(-1) g/ml may inhibit the L-type calcium channels of ventricular myocytes, and depress the opening of calcium channel.     

姜黄素对大鼠心室肌细胞快钠流和L型钙流的影响

目的：研究姜黄素对大鼠心室肌细胞快钠流（INa）和L型钙流（ICa-L）的影响。方法：采用急性酶解分离法获得大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录快钠流（INa）和L型钙流（ICa-L）,观察50μmol/L姜黄素对INa和ICa-L的影响。结果：50μmol/L姜黄素对INa和ICa-L的抑制率分别是71.9%±6.3%（P〈0.01）和-1.7%±13.1%（P〉0.05）。它使INa电流密度-电压曲线上移,但不改变激活电位和反转电位,对ICa-L的电流密度-电压曲线无明显影响。结论：50μmol/L姜黄素对大鼠心室肌细胞INa有较强抑制作用,对ICa-L无明显影响。     

间羟胺对大鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙电流的影响

目的观察α肾上腺素能受体激动剂间羟胺对大鼠心室肌动作电位及L-型钙电流的影响。方法采用全细胞膜片钳方法,记录离体大鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙电流。结果 200μmol/L间羟胺可使心室肌细胞L-型钙电流增大（P〈0.05）,动作电位时程（APD）明显延长（P〈0.01）,动作电位复极50%和90%时间（APD50and APD90）明显延长（P〈0.01）。100μmol/L酚妥拉明可使增大的的L-型钙电流和APD、APD50、APD明显恢复。结论间羟胺可明显延长大鼠心室肌动作电位时程,而酚妥拉明可不同程度地拮抗此效应。     

维拉帕米对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及机制

目的 观察维拉帕米(Ver)对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(L/R)后心功能,细胞内[Ca2+]i及L-型钙电流(ICa-L)影响,探讨其防治糖尿病心肌I/R损伤的作用和机制.方法 链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠后的第6～14周龄给予Ver(8 mg·kg-1·d-1)灌胃,Langendorff系统复制大鼠心肌I/R模型,观察不同实验组的心功能变化,双酶法急性分离各组心肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜加Fluo-3/AM荧光染色技术和全细胞膜片钳技术分别观察心肌细胞内Ca2+荧光强度和ICa-L大小.结果 (1)与糖尿病组相比,Ver糖尿病组的左心室发展压(91.3±4.6)mm Hg(1 mm Hg=0.133kPa)、舒张末压(1535±280)mm Hg、收缩压最大上升速率(5833±256)mm Hg/s、冠状动脉流量(13.7±0.9)ml/min均明显增加(P<0.01),收缩压最大下降速率(3504±319)mm Hg/s明显减少(P<0.01).(2)Ver糖尿病组心肌细胞内Ca2+荧光强度(155.6±10.9)nmol/L与糖尿病组(245.2±17.5)nmoL/L相比明显减弱(P<0.01).(3)当指令电位为+20 mV时,Ver糖尿病组心肌细胞ICa-L为(-6.81±0.76)pA/pF,与正常对照组[(-8.17±2.07)pA/pF]相比减小(P<0.05),与糖尿病组[(-3.21±0.54)pA/pF]相比增加(P<0.01),与Ver对照组[(-7.14±2.17)pA/pF]相比减少(P>0.05).Ver糖尿病组的I-V曲线显著低于糖尿病组,最大峰值在+20 mV.结论 Ver可以明显改善I/R损伤引起的糖尿病大鼠心功能下降,其机制可能是Ver调控心肌细胞膜上ICa-L内流大小,优化心肌细胞内[Ca2+]i平衡,避免I/R时心肌细胞内Ca2+超载.     

M3 受体激动剂对慢性心衰大鼠心肌ICa-L及[Ca2+]i的影响

目的 研究M3 受体激动剂胆碱( choline)对慢性心力衰竭( CHF)大鼠心肌的保护作用及可能的机制. 方法CHF大鼠Ⅱ型胶原酶消化分离单个心肌细胞,全细胞膜片钳技术记录L-型钙电流( ICa-L )变化;激光扫描共聚焦技术观测细胞内钙([Ca2+]i)变化. 结果 膜片钳实验结果显示,与CHF组比较,choline组ICa-L电流密度明显增高( n=6,P<0. 01);预敷U73122后加入choline,与choline组比较, ICa-L电流密度明显下降(n=6,P<0. 01). 共聚焦实验结果显示,与CHF组比较,choline组[ Ca2+] i 明显升高( n=80,P<0. 01);与 choline 组比较,U73122 与 choline 共同孵育组[Ca2+]i 升高幅度不明显(n=80, P<0. 01). 预先给予4-DAMP可部分逆转choline升高ICa-L及[ Ca2+] i 的作用. 结论 M3 受体对CHF大鼠的心肌保护作用可能是通过Gq/11-PLC途径开放L-型钙通道,促进Ca2+内流,使[ Ca2+] i 增加.     

藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞离子电流的作用

目的:观察藻酸双酯钠(Polysaccharide sulfate,PSS)对豚鼠单个心室肌细胞离子流的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶分离单个豚鼠心室肌细胞的方法,利用全细胞膜片箝记录技术,在不同箝制条件下,记录并分析了PSS对L-型Ca2+电流(ICa,L)、内向整流K+电流(IK1)的影响。结果:①PSS使ICa,L的激活时间常数变大,电流幅度减小,Ⅰ-Ⅴ曲线上移。在箝制电位为+10 mV时,PSS在6-9 min内使ICa,L的激活时间常数从(0.92±0.10)ms增加到了(1.15±0.11)ms(n=5,P<0.052);ICa,L的电流幅度从(16.80±1.71)pA/pF下降至(13.86±1.67)pA/pF(n=5,P<0.01)。②PSS可使IK1的内向成分和外向成分均增加。当箝制电位在-170 mV时,PSS能使IK1内向电流幅度从(224±16.17)pA／pF增加至(257±17.36)pA／pF(n=7,P<0.01);箝制电位在-50 mV时,PSS使IK1的外向电流幅度从(8.89±0.86)pA／pF增加至(10.38±1.18)pA／pF(n=7,P<0.05)。在反转电位附近时(-70--120 mV),PSS的作用不明显。PSS能使IK1的激活时间常数减小,当箝制电位在-160 mV时,激活时间常数从加药前的(1.05±0.11)ms减小到了加药后的(0.78±0.90)ms(n=7,P<0.01);同时,IK1的电导值变大,从(2.53±0.17)nS／pF增加到了(2.82 ±0.20)nS／pF(n=7,P<0.05)。结论:PSS对L-型Ca2+电流有抑制作用,对内向整?     

M 3受体激动剂对急性缺血性心肌的保护作用

目的：研究 M 3受体激动剂胆碱对大鼠急性缺血性心肌的保护作用其可能的机制。方法用低 pH 值（pH 6．8）乏氧液来模拟缺血环境,全细胞膜片钳技术记录 L-型钙电流（ICa-L ）变化;激光扫描共聚焦技术观测细胞内钙变化,探讨胆碱对细胞内钙及钙库的影响。结果在膜片钳实验结果显示,与正常组比较,缺血组 ICa-L 电流密度明显增高,应用胆碱后 ICa-L 下降,差异有统计学意义（P＜0．01）;共聚焦实验结果显示,与正常组比较,缺血组细胞内钙升高明显（P＜0．01）,胆碱组细胞内钙升高幅度不明显;预先给予4-DAMP 可部分逆转胆碱抑制细胞 ICa-L 及细胞内钙升高的作用。结论 M3受体参与保护缺血心肌的可能机制为通过抑制缺血心肌细胞 ICa-L ,从而抑制细胞内钙超载。     

大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

 目的分离大鼠心室肌细胞,记录大鼠心室肌细胞的单通钙电流,并分析其基本电生理学性质。方法胶原酶法分离大鼠心室肌细胞;应用膜片钳技术细胞贴附式和内膜向外式记录L-型钙通道的电流,并用pClamp10分析软件进行分析。结果分离得到了大鼠心室肌细胞,细胞存活形态良好,呈杆状或柱状,具有清晰的横纹。记录到的L-型钙通道单通道电流,平均电流幅度为（1.13±0.01）pA,电导为19pS,平均开放时间常数为（1.35±0.03）ms,平均关闭时间常数为（46.75±10.04）ms。此外,还记录到了L-型钙通道的Run-down现象。结论本实验分离得到的大鼠心室肌细胞适用于膜片钳单通道记录模式;记录到的L-型钙通道的基本电生理学性质与文献报道相符。     

细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

【目的】观察细辛和细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响,探讨其抗心律失常的作用机制。【方法】连续给药7 d后制备大鼠含药血清,采用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞L型钙通道电流。【结果】细辛和细辛配伍附子含药血清均能增加大鼠心室肌L型钙通道电流,在0 m V钳制电压下,细辛含药血清使电流增加约(28.36±0.37)%,细辛配伍附子含药血清使电流增加(75.07±0.28)%。细辛含药血清使激活曲线、失活曲线左移,对恢复曲线无明显作用;细辛配伍附子含药血清使激活曲线、失活曲线左移,使失活后恢复时间延长。【结论】细辛配伍附子较单味细辛含药血清对心肌细胞L型钙通道的激活作用更强,表明药物配伍可增加疗效。