雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究

目的:检测雄黄诱导白血病细胞凋亡的能力,并探讨其分子机制。方法:应用形态学观察检测细胞凋亡,应用检测流式细胞仪白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达。结果:雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,白血病细胞有bcl-2强表达,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性的下降。白血病细胞有较弱的Fas蛋白表达,随着雄黄与白血病细胞作用时间的延长,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达从而导致白血病细胞发生凋亡是其治疗白血病的重要分子机制。     

雄黄诱导白血病细胞凋亡及其bcl-2蛋白表达的研究

目的检测雄黄诱导白血病细胞凋亡能力,探讨分子机制。方法应用形态学观察细胞凋亡,计算细胞凋亡率,免疫组化方法检测白血病细胞bcl-2蛋白表达。结果雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性下降。结论雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达,从而导致白血病细胞发生凋亡,这是其治疗白血病的重要分子机制。     

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其分子机制的研究

【目的】观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其过程中某些凋亡相关分子表达的变化,探讨其诱导凋亡作用的分子机制。【方法】采用MTT法检测阿霉素对Tca8113细胞的增殖作用;以光镜、荧光纤维镜、流式细胞仪和Annexin V-FITC标记法检测细胞凋亡;以蛋白印迹法分析阿霉素对Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达的影响。【结果】阿霉素以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞增殖;光镜及荧光显微镜下可见明显凋亡细胞;流式细胞仪检测显示细胞停滞于G1或S期,有明显凋亡峰出现;Annexin V-FITC标记法定量检测证实阿霉素可诱导细胞凋亡发生;蛋白印迹检测表明阿霉素可使Bax表达升高,Bcl-2和Survivin表达下降。【结论】阿霉素可显著抑制Tca8113细胞增殖,可通过调节Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达来实现致凋亡作用。     

BMT-1抑制急性B淋巴母细胞瘤细胞增殖活力及其机制研究

目的 探讨苯并咪唑衍生物BMT-1对急性B淋巴母细胞瘤细胞增殖活力的影响及其相关机制.方法 采用CCK-8方法测定BMT-1对Daudi、Nalm-6的细胞毒性;采用流式细胞技术方法检测BMT-1对Daudi细胞凋亡及线粒体膜电位的影响;采用Western Blot方法检测Daudi细胞凋亡相关蛋白PARP的表达情况.结果BMT-1对Daudi、Nalm-6细胞具有较强的细胞毒性;BMT-1可诱导Daudi细胞凋亡,引起Daudi细胞线粒体膜电位下降,并可使得Daudi细胞产生PARP蛋白剪切体.结论 BMT-1对B淋巴母细胞瘤具有细胞毒性作用,其关键机制为诱导细胞凋亡和引起线粒体膜电位下降,为BMT-1治疗急性淋巴细胞白血病提供了理论基础.     

孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.     

TSA促U937细胞凋亡机理的初步研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂曲古菌素A（trichostatin A,TSA）诱导白血病细胞株U937细胞凋亡的规律及初步研究其作用的分子机理。方法应用细胞培养、Annexin V/PI双标流式细胞术观察TSA对U937细胞诱导细胞凋亡的效应及规律,用Western blot检测TSA作用U937细胞一定时间后蛋白表达的变化。结果TSA能以时间、剂量依赖性方式诱导U937细胞凋亡。400nmol/L的TSA处理24h后,U937细胞Bcl-2蛋白表达开始下降。TSA作用48h后,该蛋白表达下降更明显。这与TSA诱导U937细胞凋亡的时间规律相一致。结论TSA能诱导U937细胞凋亡。TSA对U937细胞的杀伤机制可能与抗凋亡蛋白Bcl-2的下调有关。     

四硫化四砷诱导急性早幼粒细胞凋亡的机制

目的:研究四硫化四砷在抗急性早幼粒细胞白血病中诱导细胞凋亡的分子机制.方法:应用cDNA微矩阵技术检测四硫化四砷作用前后NB4细胞基因表达图谱.筛选出有差异表达的与细胞凋亡相关蛋白类基因,合成相应的引物,用RT-PCR方法检测口服四硫化四砷的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者缓解前后外周血细胞凋亡相关蛋白类基因的表达,分析四硫化四砷诱导早幼粒细胞凋亡的途径.结果:通过基因微矩阵技术分析发现,四硫化四砷作用NB4细胞有差异表达的细胞凋亡相关蛋白类基因包括编码凋亡蛋白酶活化因子基因(Apaf1),比值为2.910;编码细胞凋亡相关蛋白PNAS-2基因,比值为0.420.RT-PCR检测口服四硫化四砷APL患者缓解前后外周血Apaf1比值2.33,caspase-9比值3.21,PNAS-2比值0.99.结论:四硫化四砷对NB4细胞的细胞凋亡效应主要涉及两个基因表达的改变:细胞凋亡蛋白酶活化因子(Apaf1)基因的表达上调和细胞凋亡相关蛋白PNAS-2基因表达的下调.APL患者PNAS-2基因表达没有明显的改变,可能与使用其他药物的影响有关.Apaf1和caspase-9表达相应的增高提示,四硫化四砷诱导APL细胞凋亡可能是通过以线粒体介导的凋亡通路为主的活化途径,而不是通过死亡受体途径.     

口虾蛄提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 用MTT比色法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的改变.结果 口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞的增殖有显著抑制作用,且可诱导细胞凋亡;随着口虾蛄乙酸乙酯提取物浓度升高,Bax蛋白的表达逐渐增多,而Bcl-2蛋白表达改变不明显.结论 口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞有显著抗增殖及诱导凋亡作用,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制与凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白比值下降有关,但诱导凋亡不是主要机制.     

抗菌肽LL-37通过激活p53信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡

目的 探讨抗菌肽LL-37对人胃癌细胞系AGS细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 不同浓度(0、10、20、40μmol/L)LL-37处理胃癌AGS细胞24 h,采用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术法检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测细胞中p53 mRNA表达水平,免疫荧光法检测细胞中p53蛋白定位,Western blot法检测细胞核中p53蛋白表达以及细胞中Cleaved-caspase-3、PUMA、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达;干扰p53基因表达验证LL-37通过激活p53信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡.结果 LL-37可剂量依赖性抑制胃癌AGS细胞增殖,提高细胞凋亡率,上调p53 mRNA和蛋白表达水平并促进p53蛋白核转位,同时促进凋亡蛋白Cleaved-caspase-3、PUMA和Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达.干扰p53基因表达可抑制LL-37诱导的AGS细胞凋亡.结论 LL-37可诱导胃癌AGS细胞凋亡,其机制可能与激活p53表达有关.