纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响及纳洛酮的保护作用。方法取体外培养12天的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧加纳洛酮组,缺氧6 h后在常氧下继续培养24h。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧能诱导神经元细胞线粒体膜电位明显降低。纳洛酮组皮质神经元细胞在缺氧6 h及再复氧24 h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧组(P<0.01)。结论纳洛酮可改善缺氧诱导的大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位降低,对神经元细胞具有保护作用。     

黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的自由基机制

目的 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响及其抑制神经元损伤的机制.方法 原代培养8 d的大鼠海马神经元随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组.除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖.各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、48、72 h和120 h测定SOD活力、MDA含量,Western印迹检测caspase-3蛋白的表达,采用原位杂交检测海马神经元caspase-3 mRNA的表达.结果 各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元SOD活性均较正常对照组明显降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点SOD的活性、MDA含量无明显变化(P>0.05),而黄芪注射液组在各个时间点SOD的活性明显升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05).原位杂交结果显示:与正常对照组相比,除0 h和0.5 h之外,缺氧缺糖/复氧复糖组各时间点海马caspase-3阳性神经元数目、占神经元总数的百分率及平均光密度值均明显增多(P<0.05),于24 h达到高峰.黄芪注射液溶剂对照组以上指标的变化趋势与缺氧缺糖/复氧复糖组相一致.黄芪注射液组除0 h和0.5 h之外,各时间点以上指标均比缺氧缺糖/复氧复糖组显著减少(P<0.05).Western印迹检测结果显示:除0 h和0.5 h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3蛋白的平均灰度值均较正常对照组明显增加(P<0.05),24 h最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3蛋白的平均灰度值无明显变化(P>0.05),而黄芪注射液组除0 h和0.5 h外,在各个时间点caspase-3蛋白的平均灰度值明显降低(P<0.05).结论 黄芪注射液可通过减少自由基生成,抑制caspase-3的表达,进而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡.     

黄芪注射液与缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的关系

目的探讨黄芪注射液与缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3表达的关系。方法取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5h再复氧复糖。各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、48、72 h和120 h采用Western印迹检测caspase-3蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测caspase-3 mRNA的表达。结果除0 h和0.5 h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3蛋白的平均灰度值均较正常对照组明显增加(P0.05),复氧复糖24h平均灰度值最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3蛋白的平均灰度值无明显变化(P0.05),而黄芪注射液组除0h和0.5h外,在各个时间点caspase-3蛋白的平均灰度值明显降低(P0.05)。RT-PCR结果显示:除0h和0.5h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3 mRNA的平均光密度值均较正常对照组明显增加(P0.05),24h平均光密度值最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3 mRNA的平均光密度值无明显变化(P0.05),而黄芪注射液组在除0 h和0.5 h外的各个时间点caspase-3 mRNA的平均光密度值均明显降低(P0.05)。结论黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡作用,是通过抑制海马神经元凋亡相关基因caspase-3的表达来实现的。     

黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制

目的探讨黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的作用机制。方法取体外无血清原代培养8 d的大鼠海马神经元,采用随机数表法分为A组:正常对照组、B组:模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、C组:黄芪注射液溶剂对照组、D组:黄芪注射液组、E组:二甲基亚砜(DMSO)组、F组:Bax抑制剂组、G组:Bax激动剂组、H组:Bax抑制剂+黄芪注射液组、I组:Bax激动剂+黄芪注射液组。各组除A组均经0.5 h缺氧缺糖,分别采用免疫组化法和RT-PCR法对复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72、120 h的Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表达进行检测和比较。结果各组海马神经元除0 h外,其他时间点的Bcl-2水平均高于A组,且各组Bcl-2水平均随时间延长而增高,2 h达到顶峰。除0 h外,其他各时间点H组大鼠海马神经元的Bcl-2水平均显著高于其他组(P<0.05),其次为F组、D组、I组、G组、E组、B/C组、A组,且B组与C组无显著差异(P>0.05)。各组大鼠海马神经元除0 h外,其他各时间点的Bax水平均低于A、B组,且各组均随时间延长而增高,6 h达到顶峰,各组大鼠海马神经元除0 h外,其他各时间点的Caspase-3 mRNA阳性神经元百分率均高于A组,且各组均随时间延长而增高,24 h达到顶峰。除0 h外,其他各时间点B组Bcl-2水平和Caspase-3 mRNA阳性神经元百分率均显著高于其他组(P<0.05),其次为E组、G组、I组、D组、F组、H组,且B组与C组各时间点比较无显著差异(P>0.05)。结论黄芪注射液能够抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元Bax蛋白的表达,提高Bcl-2蛋白表达,抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡;且Bax激动剂能够加速缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡,Bax抑制剂能够减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡。     

淫羊藿甙对原代培养神经元缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 探讨淫羊藿甙对体外原代培养神经元缺氧缺糖损伤的作用。方法 原代培养大鼠乳鼠皮质神经元,在缺氧缺糖4、6、8 h时检测正常对照组、损伤模型组、淫羊藿甙处理组的神经元细胞噻唑蓝、乳酸脱氢酶(LDH)病理学指标变化。结果 模型组在缺氧缺糖4、6、8 h后噻唑蓝值明显低于相应对照组(P<0.01),LDH漏出率明显高于对照组(P<0.05或<0.01)。淫羊藿甙组与相应模型组比较,可提高缺氧缺糖的神经元生长能力,使噻唑蓝值有所上升;LDH漏出率有所下降;改善细胞形态。 结论 淫羊藿甙对体外原代培养神经元具有保护作用,可减轻神经元缺血性损伤。淫羊藿甙有利于缺血性脑血管疾病的治疗。     

缺氧复氧对大鼠神经细胞凋亡的影响

将原代培养的大鼠神经元分为正常对照组和缺氧复氧组,缺氧复氧组进行缺氧培养4 h后恢复有氧培养,并在复氧0、4、8、24 h分别取样.用MTT法、流式细胞仪分别检测大鼠神经细胞活力、细胞凋亡率和线粒体膜电位(MMP).结果 缺氧复氧组神经细胞线粒体损伤明显,神经细胞活性降低、凋亡数目增多,MMP明显下降甚至消散.认为缺氧复氧可诱导大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,随时间延长可进一步加重神经细胞损伤.     

大鼠海马神经元原代培养方法及缺糖缺氧再灌注损伤模型的建立

目的 探讨大鼠海马神经元原代培养方法,并建立缺糖缺氧再灌注损伤模型.方法 取新生48h内的大鼠海马组织进行体外原代培养,并进行神经元鉴定.神经元培养第8天,分为对照组、缺糖缺氧组及再灌注损伤组.对照组换Earle＇s液正常培养;缺糖缺氧组换无糖Earle＇s平衡盐缓冲液培养并放入缺氧盒内,持续3h缓慢通入95％的N2.再灌注损伤组经过与缺糖缺氧组相同处理后,换以完全培养基置入CO2培养箱孵育,模拟体内缺血再灌注的过程.倒置相差显微镜进行一般形态学的动态观察,采用MTT法测定神经元存活率.结果 经过分类计数,神经元约占97.35％,可认为是较纯的神经细胞培养.对照组神经元存活率为100％,缺糖缺氧组为75.25％士3.12％,再灌注损伤组再灌注12、24 h的神经元存活率分别为63.64％±2.25％、55.37％±1.04％;再灌注损伤组再灌注12、24 h的神经元存活率与对照组和缺糖缺氧组比较,P均＜0.05.结论 成功体外培养海马神经元,并建立大鼠缺糖缺氧再灌注损伤模型.     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2、bax及cyt-c蛋白形态学表达的影响

目的 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2、bax及cyt-c蛋白表达的影响,探讨黄芪注射液防治海马神经元凋亡的作用机制.方法 取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组.除正常对照组外,各组均进行缺糖缺氧0.5 h,再分别于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120 h采用细胞免疫化学法检测海马神经元bcl-2、bax、cyt-c蛋白的表达.结果 与正常对照组比,模型组bcl-2、bax、cyt-c蛋白表达明显升高,而bcl-2/bax比值下调(P＜0.05).与模型组相比,黄芪注射液组bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax比值升高,cyt-c、bax蛋白表达明显降低(P＜0.05);而黄芪注射液溶剂对照组bcl-2、bax、cyt-c蛋白表达及bcl-2/bax比值则无显著变化(P＞0.05).结论 黄芪注射液可提高缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax比值,抑制bax、cyt-c蛋白表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖引起的海马神经元凋亡.     

大鼠皮质及海马神经元体外缺氧缺糖模型建立

目的建立体外培养大鼠皮质及海马神经元缺氧缺糖模型。方法取培养10—12d的皮质及海马神经元，用古连二亚硫酸钠1mmol／L的无糖Earle液取代正常含血清培养基，分别培养2、4、8、12、24及36h后，MTr法检测细胞活力，并测定培养液中LDH活力。结果连二亚硫酸钠1mmol／L合并基质缺糖2—36h，大鼠皮质及海马神经元细胞活力均显著降低（P〈0．01），并呈时间依赖性下降，至培养36h时细胞存活率分别仅为25．4％和24．2％；培养液LDH活力则均显著升高（P〈0．01）。并呈时间依赖性上升；且皮质及海马神经元培养液LDH活力变化与其细胞活力变化均呈高度负相关（r=-0．983，-0．992，P〈0.01）。结论连二亚硫酸钠合并基质缺糖可建立体外培养大鼠皮质及海马神经元缺氧缺糖模型。     

激肽释放酶对氧糖剥夺皮层神经元线粒体运动调节蛋白的影响

目的研究激肽释放酶（TK）对氧糖剥夺皮层神经元线粒体运动调节蛋白的影响。方法将培养7d的大鼠皮层神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋TK组（C＋TK组）、氧糖剥夺组（OGD组）、氧糖剥夺＋TK组（OGD＋TK组）。C组正常培养方法培养;C＋TK组在正常培养的神经元培养液中加入TK使其终浓度为100nmol／L后按正常培养24h;OGD组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理;OGD＋TK组神经元用100nmol／LTK处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理。对各组进行神经元纯度鉴定,细胞存活率、细胞Caspase-3相对活性检测,并且Western Blot测定线粒体运动调节蛋白Miro1、Miro2和Milton的表达。结果TK可明显改善OGD损伤后神经元的存活率,降低细胞Caspase-3相对活性,并可以显著逆转OGD所导致的神经元线粒体运动调节蛋白Miro1、Miro2、Milton的表达变化。结论TK具有明显的拮抗OGD损伤皮层神经元的作用,其机制可能和TK干预线粒体运动调节蛋白表达有关。     

阿司匹林对急性脑梗死患者血浆一氧化氮及血小板α颗粒膜蛋白的影响

目的　探讨阿司匹林对急性脑梗死患者血浆一氧化氮 (NO)及血小板α颗粒膜蛋白 (GMP 14 0 )的影响。方法　 2 0 0 2 - 0 5～ 2 0 0 3- 0 8广东江门市人民医院 78例急性脑梗死患者随机分为 4 0例治疗组和 38例对照组 ,采用硝酸酶还原法和双抗体夹心酶联免疫吸附法分别测定治疗组和对照组的血浆NO及GMP 14 0的含量。治疗组患者经过阿司匹林治疗后 2周 ,再次测定治疗组和对照组的血浆NO及GMP 14 0的含量。结果　治疗组治疗后患者血浆NO及GMP 14 0水平较对照组治疗后明显下降 (P <0 0 1) ,治疗组治疗后的ESS分值高于对照组治疗后的ESS分值 (P <0 0 1)。结论　阿司匹林能通过降低急性脑梗死患者血浆NO及GMP 14 0的水平 ,从而减轻缺血性脑损伤 ,起到脑保护作用。     

Melatonin ameliorates ischemic-like injury-evoked nitrosative stress: Involvement of HtrA2/PED pathways in endothelial cells

Peroxynitrite contributes to diverse cellular stresses in the pathogenesis of ischemic complications. Here, we investigate the downstream effector signaling elements of nitrosative stress which regulate ischemia-like cell death in endothelial cells and protective effect of melatonin. When the mitochondrial membrane potential (ΔΨm) of oxygen-glucose deprivation (OGD)-treated cells was assessed using the fluorescent probe 5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazol -carbocyanine iodide, we observed spontaneous changes in peroxynitrite formation. Concomitantly, western blot and confocal microscopy analyses indicated that prolonged OGD exposure initiates the release of mitochondrial HtrA2 and dramatically decreases phosphoprotein enriched in astrocytes (PED or PEA-15) protein levels. Consistently, cultured endothelial cells treated with peroxynitrite (1-50 μm) exhibited a concentration-dependent release of mitochondrial HtrA2 and concomitant PED degradation in vitro. Notably, HtrA2 activation coincided with increased nitrotyrosine immunoreactivity in microvessels of rats following microsphere embolism. Additionally, the protective effect of PED overexpression in OGD-induced apoptosis was abolished by transfection with the PED(S104A/S116A) mutant. Furthermore, the effect of melatonin, an potential antioxidant, on endothelial apoptotic cascade was examined in OGD-evoked nitrosative stress. Our data showed that the application of melatonin provided significant protection against OGD-induced peroxynitrite formation and mitochondrial HtrA2 release, accompanied with a decrease in degradation PED and x-linked inhibitor of apoptosis protein, which is associated with activation of the caspase cascade. Taken together, the protective effect of melatonin is likely mediated, in part, by inhibition of peroxynitrate-mediated nitrosative stress, which in turn relieves imbalance of mitochondrial HtrA2-PED signaling and endothelial cell death.     

Melatonin protects against Nickel‐induced neurotoxicity in vitro by reducing oxidative stress and maintaining mitochondrial function

Abstract: Nickel is a potential neurotoxic pollutant. Oxidative stress is supposed to be involved in the mechanism underlying nickel‐induced neurotoxicity. Melatonin has efficient protective effects against various oxidative damages in nervous system. The purpose of this study was to investigate whether melatonin could efficiently protect against neurotoxicity induced by nickel. Here, we exposed primary cultured cortical neurons and mouse neuroblastoma cell lines (neuro2a) to different concentrations of nickel chloride (NiCl₂) (0.125, 0.25, 0.5, and 1 mm ) for 12 hr or 0.5 mm NiCl₂ for various periods (0, 3, 6, 12, and 24 hr). We found that nickel significantly increased reactive oxygen species production and caused the loss of cell viability both in cortical neurons and neuro2a cells. In addition, nickel exposure obviously inhibited the mitochondrial function, disrupted the mitochondrial membrane potential (ΔΨm), reduced ATP production, and decreased mitochondrial DNA (mtDNA) content. However, each of these oxidative damages was efficiently attenuated by melatonin pretreatment. These protective effects of melatonin may be attributable to its roles in reducing oxidative stress and improving mitochondrial function in nickel‐treated nerve cells. Our results suggested that melatonin may have great pharmacological potential in protecting against the adverse effects of nickel in the nervous system.     

rt-PA在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对神经细胞保护的研究

目的 观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)在体外血脑屏障氧糖剥夺模型中对神经细胞的影响,探讨rt-PA对脑缺血神经元的保护作用.方法 利用Transwell培养小室为支架,构成以人血管上皮细胞为基础的体外血脑屏障模型;利用厌氧培养箱及无糖培养液,建立体外缺血缺氧模型;在体外缺血缺氧模型基础上,采用组织培养技术,培养神经细胞,并在缺血缺氧条件下,使用MTT法进行检测不同剂量rt-PA对神经细胞活性的影响.结果 分别在氧糖剥夺实验(OGD)及非OGD条件下,在不同rt-PA药物的浓度作用下,低浓度(0.312 5 μg/mL)对非OGD条件下神经细胞的生长有促进作用,在OGD条件下,低浓度(0.625 μg/mL,0.312 5 μg/mL)对神经细胞同样具有保护作用.结论 rt-PA可能对脑缺血后神经细胞存在保护作用,并与rt-PA的剂量相关,在OGD条件下,低剂量rt-PA对神经细胞的保护作用更为显著.     

丹皮酚对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元EAA、NMDA受体表达的影响及机制探讨

目的观察丹皮酚对缺糖缺氧（OGD）再灌注损伤大鼠海马神经元兴奋性氨基酸（EAA）、N．甲基．D．天门冬氨酸（NMDA）受体表达的影响,探讨该药的神经保护作用机制。方法原代培养新生大鼠海马神经元8～12d后随机分为4组,其中对照组正常换液培养;模型组、丹皮酚组、地佐环平（MK-801）组均制备OGD再灌注损伤模型,在此基础上丹皮酚组于每个再灌注时间点前分别加入丹皮酚,MK-801组则加入MK-801溶液;倒置相差显微镜下观察神经元一般形态学变化,用MTr法测定神经元存活率,分别采用放射配基结合实验及RT-PCR法测定NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达,以氨基酸分析仪检测EAA含量。结果模型组神经元肿胀或变形,突起缩短并逐渐消失,胞质内颗粒变性明显、甚至完全崩解;丹皮酚组及MK-801组神经元形态改变均较模型组减轻,胞体完整,突起较清楚,基本保持完整。与对照组比较,模型组神经元存活率明显降低,NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达及E从含量明显升高,而丹皮酚组及MK_801组上述指标均较模型组明显改善（P均〈0．05）。结论丹皮酚对离体培养的大鼠海马神经元OGD再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制EAA及NMDA受体表达有关。     

Effect of paracetamol (acetaminophen) on gastric ionic fluxes and potential difference in man.

Paracetamol has replaced aspirin as the analgesic of choice in many situations. The major reason is the damaging effect of aspirin on gastric mucosa. Alterations in gastric ionic fluxes and potential difference provide measures of aspirin-induced structural damage. We studied the effect of large doses of paracetamol (acetaminophen 2-0 g) on gastric ionic fluxes in man. In addition, the effect of 2-0 g paracetamol on gastric potential difference was compared with that of 600 mg aspirin. In contrast with salicylates, paracetamol caused no significant alteration in movement of H+ and Na+ ions over control periods. Aspirin causes a significant fall in transmucosal potential difference (PD) across gastric mucosa of 15 mv, while paracetamol cuased no significant change. Paracetamol in a dose four times that recommended does not alter gastric ionic fluxes or potential difference. These studies support choice of paracetamol as analgesic over aspirin where damage to gastric mucosa may be critical.     

纳洛酮对缺血再灌注海马细胞线粒体功能保护作用的研究

目的观察缺血再灌注期间海马细胞内游离钙离子、线粒体膜电位的变化以及纳洛酮对细胞的保护作用。方法20只新西兰大白兔随机分成4组对照组、缺血组、再灌注组、纳洛酮组,每组5只,然后以荧光染色流式细胞仪检测各实验组海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位的变化。结果缺血组、再灌注组海马细胞内游离钙离子浓度显著高于对照组和纳洛酮组;其线粒体膜电位则低于对照组和纳洛酮组;再灌注组游离钙离子浓度明显高于缺血组;其线粒体膜电位则低于缺血组;对照组与纳洛酮组间各指标无显著差异。结论纳洛酮对缺血再灌注引起的海马细胞内钙离子浓度升高有抑制作用,对线粒体膜电位下降有一定的保护作用。     

Effect of aspirin upon experimental coronary and non-coronary thrombosis and arrhythmia

The effect of aspirin upon platelet function led to speculation on the potential effects of salicylates upon arterial thrombogenesis, in which platelets play a primary role. Aspirin was given by mouth or intravenously before attempting induction of coronary or femoral artery thrombosis in dogs by means of a catheter electrode. The incidence of thrombus formation in all animals receiving aspirin was comparable to that of the control groups. Although in several animals of coronary thrombus group receiving aspirin, the thrombus was smaller than in the controls, this was not statistically significant. An unexpected finding was the distinct decrease in incidence of arrhythmias and ventricular fibrillation in the coronary thrombus group treated with aspirin. The reason for the differences is not clear at this time.     

低分子肝素治疗不稳定心绞痛疗效观察

目的:探讨低分子肝素(LMWH)治疗不稳定心绞痛(UAP)的临床疗效。方法:选择UAP 716例患者为观察对象。患者被随机分为4组:A组:阿司匹林组,B组:阿司匹林+氯吡格雷组,C组:阿司匹林+LMWH组,D组:阿司匹林+氯吡格雷+LMWH组。观察指标:治疗前、后的心绞痛,血脂、凝血系列状况,心电图(ECG)。结果:阿司匹林+氯吡格雷+LMWH疗效最佳,可显著减少心肌缺血时间(P<0.01),改善血脂、Holter ECG异常(P<0.01)。LMWH能提升高密度脂蛋白水平,降低低密度脂蛋白和胆固醇水平。阿司匹林、氯吡格雷、LMWH对APTT均无影响。阿司匹林、氯吡格雷可使PTINR显著延长,LMWH对PTINR无显著影响。结论:阿司匹林+氯吡格雷+LMWH治疗UAP临床疗效最佳,LMWH对凝血系列无显著影响。