小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨ｐ１６基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）发病中的作用,认识ｐ１６蛋白失活的分子机制。应用差异ＰＣＲ技术检测４２例初治、１７例缓解期小儿ＡＬＬｐ１６基因的纯合缺失及甲基化。结果４２例ＡＬＬ中ｐ１６基因纯合缺失率占３８．１％,Ｔ系ＡＬＬ占８０％,显著高于Ｂ系ＡＬＬ２２．５％,Ｐ〈００１。１７例缓解期ＡＬＬ均无基因缺失。９例ｐ１６基因纯 合缺失是小儿ＡＬＬ,尤其Ｔ系ＡＬＬ最常见的基     

急性淋巴细胞白血病p16基因及P16蛋白失活与临床相关性的研究

目的　探讨p16基因、蛋白失活在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的临床意义。方法应用免疫细胞化学方法检测 5 2例初治小儿ALLP16蛋白的表达水平。差异PCR技术检测 42例初治小儿ALLp16基因的纯合缺失。结果　p16基因总的纯合缺失率 38% (16 /4 2 ) ,p16基因缺失与T系表型、高白细胞总数 (>2 5× 10 9/L)、高肿瘤负荷、髓外浸润等影响预后的高危临床特征显著相关。高危型ALLp16基因缺失率 (6 7% )远高于标危型ALL(10 % ) ,P <0 .0 1。在预后好者中 ,p16基因纯合缺失率为 10 % (2 /19) ;在预后差者中 ,p16基因纯合缺失率为 5 4% (6 /11) ,二组差异有显著性 ,P <0 .0 5。P16蛋白表达缺失率为 5 8% (30 /5 2 ) ,P16蛋白缺失者除多见髓外浸润外 ,与其它临床高危因素及预后无关。结论　p16基因、蛋白失活在小儿ALL的发病过程中起重要作用。p16基因缺失者预后不良 ,与ALL复发可能有关 ,可作为评估预后 ,指导治疗的指标之一。     

p16抑癌基因与急性淋巴细胞白血病

p16抑癌基因的失活与急性淋巴细胞白血病（ALL）的发生发展十分密切。p16抑癌基因的纯合缺失及半合缺失在ALL，尤其是T细胞型ALL（T－ALL）中占有相当比例，p16蛋白表达缺失较基因缺失更常见。p16基因缺失可能与ALL的复发和死亡有关。通过转基因诱导p16表达是ALL的治疗方向之一。     

小儿先天畸形重点实验室小儿横纹肌肉瘤p16基因缺失及突变的研究

目的探讨小儿横纹肌肉瘤p16基因缺失及突变的临床意义.方法应用控制模板DNA量的银染PCR-SSCP技术检测18例小儿横纹肌肉瘤手术切除标本中p16基因第1外显子.结果18例中有7例发生纯合性缺失,其纯合缺失率为38.8%(7/18);1例发生突变,缺失,突变率为44.3%.结论p16基因的纯合性缺失是p16基因失活的主要机制,在小儿横纹肌肉瘤的发生和发展中起重要作用.     

儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究

为探讨p1 6基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病 (AL)发生、发展及预后的关系。用聚合酶链反应 (PCR)、DNA单链构象多态性 (SSCP)分析和DNA测序技术研究 5 3例初治和复发儿童AL及 30例对照组p1 6基因纯合子缺失和点突变的情况。结果 :儿童ALp1 6基因纯合子缺失及点突变为 2 8.30 % (1 5 /33例 ) ,对照组未发现缺失及突变。ALL组p1 6基因纯合子缺失为 35 .0 0 % (1 4/4 0例 ) ,其中HR—ALL为 47.0 6 % (8/1 7例 ) ,SR—ALL8.33% (1 /1 2例 ) ,复发ALL为 45 .45 % (5 /1 1例 ) ,未见点突变 ;ANLL组未见纯合子缺失 ,点突变 1例 ,为 7.6 9% (1 /1 3例 ) ,测序分析发现其位于第 2外显子 (exon2A) 49密码子 ,发生错义突变 ,由GCC突变为ACC ,由苏氨酸取代丙氨酸。结果表明 :①p1 6基因失活与儿童AL ,尤其与儿童ALL的发生、发展关系密切。②在儿童ALL中 ,p1 6基因纯合子缺失是基因失活的主要形式 ,点突变罕见。③在儿童ANLL中 ,p1 6基因纯合子缺失、点突变均罕见。④p1 6基因失活可能成为预测儿童AL病程进展、复发、预后的指标之一。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达的临床研究

探讨p16蛋白表达及DNA含量在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的临床意义。应用S P免疫组化法检测 3 1例小儿ALL白血病细胞的p16蛋白表达水平 ,流式细胞术检测白血病细胞DNA含量。结果 ,3 1例ALL的p16蛋白表达缺失率为5 4 8% ( 17 3 1) ,p16蛋白缺失与高白细胞数 ( >2 5× 10 9 L)、肝脾肿大等高危临床特征显著相关 ;高危型ALL的p16基因缺失率 ( 70 5 % )远高于标危型ALL( 3 5 7% ) ,两组差异有显著性 (P <0 0 1)。小儿ALL异倍体发生率为 3 8 7% ,p16蛋白表达阴性者17例中DNA异倍体 9例 ( 9 17) ,p16蛋白表达阳性者中异倍体 4例 ( 4 14 ) ,比较差异无显著性 ( χ2 =1 10 6,P >0 0 5 )。结果表明 :p16蛋白失活在小儿ALL的发病过程中起重要作用 ,p16蛋白表达阴性者DNA异倍体的发生率高 ,与临床高危因素有关 ,p16蛋白缺失者可能与ALL复发有关     

巢式PCR法检测肝母细胞瘤中p15和p16基因启动子异常甲基化

目的：DNA甲基化被认为是反映细胞内DNA转录状态的重要遗传学标记。该研究旨在对小儿肝母细胞瘤中p15和p16基因5′启动子区CpG岛异常甲基化的相关性进行评估,并分析其与小儿肝母细胞瘤发生发展的关系。方法：采用甲基化特异性PCR法,对30例小儿肝母细胞瘤、癌旁和远癌正常组织进行巢式PCR扩增,经凝胶电泳和测序方法检测目的片段。结果：30例小儿肝母细胞瘤组织中p15和p16基因5′CpG岛有30%(9/30)和67%(20/30)、癌旁组织中有20%(6/30)和57%(17/30)、远癌正常组织有13%(4/30)和33%(10/30)异常甲基化。在肝母细胞瘤中发现1例p15E2纯合缺失,缺失率为3%(1/30),E1和部分I1区域未见缺失;p16E2和部分I2区域中3例杂合缺失,缺失率为10%(3/30),E1和部分I1区域未见缺失。结论：p15和p16基因5′启动子区CpG岛的异常甲基化可能在肝母细胞瘤发生发展中扮演了重要角色,其主要机制可能是启动子区CpG岛甲基化抑制了基因的转录。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达及DNA含量与临床相关性研究

目的探讨 p16蛋白表达及 DNA含量在小儿急性淋巴细胞白血病( ALL)中的临床意义.方法应用 S-P免疫组化法检测 31例 ALL患儿的 p16蛋白表达水平,流式细胞术检测白血病细胞 DNA含量.结果 31例 ALL的 p16蛋白表达缺失率?54.8%( 17/31例), p16蛋白缺失与高白细胞数( >2.5× 109/L)、肝脾肿大等高危临床特征显著相关;高危型 ALL的 p16基因缺失率( 70.5%)远高于标危型 ALL( 35.7%),两组比较差异有显著性( P=0.0459).小儿 ALL异倍体发生率为 41.8%, p16蛋白表达阴性者 17例中 DNA异倍体 9例, p16蛋白表达阳性者中异倍体 4例,两组差异无显著性( P=0.2749).结论 p16蛋白失活在小儿 ALL的发病过程中起重要作用, p16蛋白表达阴性者 DNA异倍体的发生率高,与临床高危因素有关, p16蛋白缺失者可能与 ALL复发有关.     

小儿横纹肌肉瘤p16基因缺失及突变的研究

目的;探讨小儿横纹肌肉瘤P16基因缺失及突变的临床意义,方法：应用控制模板DNA量的银染PCR－SSCP技术检测18例小儿横纹肌肉瘤手术切除标本中P16基因第1外子,结果,18例中有7例发生纯合性缺失,其纯合缺失率为38．8％（7／18）,1例发生突变,缺失,突变率为44．3％,结论：P16基因的纯合性缺失是P16基因失活的主要机制,在小儿横纹肌肉瘤的发生和发展中起重要作用。     

疑似脊髓性肌萎缩症患儿338例的运动神经元存活基因分析

目的 研究儿童脊髓性肌萎缩症(SMA)运动神经元存活基因SMN1缺失和诊断的意义.方法 根据国际诊断标准、病例随访和基因分析结果对338例疑似SMA的患儿进行诊断和分型.应用PCR-酶切方法分析患儿SMN1基因外显子7和外显子8的纯合缺失.应用等位基因特异PCR结合变性高效液相色谱分析(DHPLC)方法分析患儿的SMN1基因拷贝数,确定杂合缺失.结果 (1)确诊SMA 267例,其中Ⅰ型143例,Ⅱ型82例,Ⅲ型42例,分别占53.6%、30.7%和15.7%.(2)267例SMA患儿的SMN1基因缺失分析显示:SMN1基因外显子7和8均纯合缺失为183例,占68.5%(183/267),仅外显子7纯合缺失,外显子8不缺失为34例,占12.7%(34/267),外显子7杂合缺失为33例,占12.4%(33/267),非缺失为17例,占6.4%(17/267),未见SMN1基因外显子8的单独缺失.(3)Ⅰ型和Ⅱ型SMN1基因缺失率相近.Ⅲ型SMN1基因纯合缺失率较低于Ⅰ型和Ⅱ型,杂合缺失率较高于Ⅰ型和Ⅱ型.结论 (1)我国儿童SMA的SMN1基因纯合缺失和杂合缺失频率提示,SMN1基因突变存在种族异质性,SMN1基因内微小突变需要研究.(2)SMN1基因诊断具有特异性和无创性,80%SMA患儿通过SMN1基因纯合缺失分析得到诊断.(3)Ⅲ型SMA的临床诊断和基因分析需要进一步研究.     

Loss at 12p detected by comparative genomic hybridization (CGH): association with TEL-AML1 fusion and favorable prognostic features in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). A multi-institutional study.

BACKGROUND: Genetic aberrations provide prognostic information in childhood ALL. The proportion of patients with detectable aberrations can be increased by combining G-banding with comparative genomic hybridization (CGH). PROCEDURE: We studied 79 children with ALL by CGH and G-banding, and explored the relationship of these findings to clinical features and outcome. RESULTS: CGH revealed DNA copy number changes in 57 patients (72%), 9 of whom had normal karyotype by G-banding. Gains were more frequent than losses, and changes of whole chromosomes more frequent than partial aberrations. Two frequent partial losses were found; at 9p and 12p. The 9 patients with loss at 12p were studied for the deletion of TEL (ETV6) gene and the fusion of TEL and AML1 genes by fluorescent in situ hybridization (FISH). Eight out of the 9 children with loss at 12p harbored the TEL-AML1 translocation and all 9 had the deletion of a nontranslocated TEL allele. All 9 had precursor-B phenotype and L1 morphology, and 8/9 had WBC below 50 x 10(9)/liter. All children were treated according to Nordic ALL protocols, had a good response to treatment based on day 15 bone marrow morphology, and 7 out of the 9 survived in continuous complete remission (median follow-up 74 months). CONCLUSIONS: CGH is a valuable tool in screening for genetic aberrations in childhood ALL. DNA copy number losses detected at 12p associate with TEL-AML1 fusion as well as with favorable prognostic features.     

p73基因在儿童急性淋巴细胞白血病的表达

目的探讨p73基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及其与临床特征、疗效的关系。方法采用逆转录—聚合酶链反应,对31例ALL、10例ALL缓解(CR)患儿骨髓单个核细胞进行p73 mRNA检测,并进行p73表达与临床特征的相关分析;10例非肿瘤患儿为对照组。结果31例初发ALL p73 mRNA表达阳性率为64.5%,强度为0.316;10例ALL-CR组阳性率90.0%,强度0.641;10例对照组患儿均表达p73 mRNA,强度0.685。CR组和对照组阳性表达率和相对表达强度均明显高于ALL组(P0.05),CR组和对照组的表达差异无统计学意义(P0.05)。p73阴性表达与高危年龄(≥10岁)、外周血高白细胞数(≥50×109/L)、T细胞型、高危临床分型、早期诱导缓解治疗反应差等临床特征相关(P0.05),与性别、FAB分型无关(P0.05)。结论儿童ALL患者p73 mRNA的表达率较低,p73 mRNA的阴性表达可能与儿童ALL的发生发展有关;儿童ALL p73基因阴性表达者可能预后不良;p73基因检测对儿童ALL临床治疗、估计预后有意义。     

儿童血浆促酰化蛋白的测定及意义

目的：介绍一种简易、快速、特异性高的人血浆促酰化蛋白(acylationstimulatingprotein,ASP)的检测技术,并阐明ASP测定意义。方法：161例研究对象,其中健康儿童98例,单纯性肥胖症患儿63例,年龄2～6岁,ELISA方法测定血浆ASP的浓度,波长490nm。结果：该方法最佳线性范围:ASP浓度0.5～10ng/mL,平均批内和批间变异系数(CV)分别为8.17%和9.72%。正常学龄前儿童血浆ASP浓度为69.14±25.58nM;单纯性肥胖症儿童血浆ASP浓度为95.64±36.24nM,明显高于健康儿童(P<0.001);ASP与BMI呈正相关。结论：该检测方法能简易、快速对血浆ASP进行准确定量,在ASP基础和临床相关疾病的研究中有重要的意义。     

p16 inactivation associated with aggressive clinical course and fatal outcome in TEL/AML1-positive acute lymphoblastic leukemia

The authors describe a 7-year-old boy with TEL/AML1-positive pre-B acute lymphoblastic leukemia, with hemizygous 9p21 deletion at presentation and no p16(INK4A) protein expression. Despite an initial response to a standard chemotherapy regimen, the patient suffered two hematologic relapses and died 34 months after diagnosis. The authors discuss the possibility that complete p16(INK4A) gene inactivation may adversely modify the prognostic significance of TEL/AML1 fusion in childhood acute lymphoblastic leukemia, and present evidence from clinical and in vitro observations in favor of this assumption.     

儿童急性白血病p16基因甲基化研究

为探讨p1 6基因甲基化与儿童急性白血病 (AL)的发生、发展、预后的关系 ,采用酶切加PCR技术研究 33例初治儿童AL ,1 5例复发儿童AL及 30例对照组p1 6基因甲基化情况 ,并观察p1 6基因甲基化与化疗结果的关系。结果 33例初治AL有 3例、1 5例复发AL有 6例、30例对照组中 0例存在p1 6基因甲基化。可评价疗效的 31例初治AL中 ,3例甲基化患者未缓解 ;2 8例非甲基化者中 3例获完全缓解 ,2 3例部分缓解 ,2例未缓解 (总有效率 92 .86 % )。结果表明 :(1 )在初治儿童AL中p1 6基因甲基化率低 ,可能不是儿童AL的主要发病机制 ;(2 )p1 6基因甲基化率儿童AL复发病例显著上升 ,值得重视 ,同时对指导治疗及预测病程和预后具有重要意义。     

高超二倍体核型儿童急性淋巴细胞白血病的临床特征及预后——福建省多中心回顾性研究

目的 检测儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）患儿骨髓单个核细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA及蛋白水平表达和基因甲基化状态,探讨E-cadherin在儿童ALL的意义及甲基化状态与预后的关系。 方法 采集42例初次确诊的ALL患儿确诊时（治疗前组）及诱导化疗第33天（治疗后组）的骨髓血5 mL,应用RT-qPCR、Westerm blot及甲基化特异性PCR法检测骨髓单个核细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达和E-cadherin基因甲基化水平,并比较治疗前后各指标的变化。 结果 治疗后组E-cadherin mRNA及蛋白的表达水平均高于治疗前组（P<0.05）;治疗后组E-cadherin基因甲基化阳性率较治疗前组下降（P<0.05）;至试验终点时,甲基化阴性者总生存率和无事件生存率均高于甲基化阳性者（P<0.05）。 结论 E-cadherin表达与儿童ALL发展相关,表达降低及甲基化水平增高可能提示预后不良。