促凋亡蛋白NIX的研究进展

细胞凋亡又称为程序性细胞死亡,是多细胞生物维持生长发育和组织形态所特有的,由多种基因参与表达、精密调控的细胞主动死亡过程.NIX是近年来发现的隶属于Bcl-2家族中的BH3-only促凋亡家族成员.虽然具有Bcl-2家族特征性的BH3域和羧基末端跨膜结构域(TM),也能与Bcl-2形成二聚体,但NIX的促凋亡活动明显不同于其他Bcl-2家族成员,本文通过对NIX的促凋亡功能机制以及其在细胞自噬、线粒体自噬、肿瘤及心肌疾病发病机制等方面的研究进展作一综述.     

MitoQ通过NIX介导的线粒体自噬对肺腺癌A549细胞迁移及凋亡的影响

目的 探讨Mitoquinone(MitoQ)通过NIX介导的线粒体自噬对人肺腺癌A549细胞迁移及凋亡的影响.方法 不同浓度的MitoQ诱导A549细胞12 h,利用CCK-8检测细胞存活率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测NIX、p62及Bax等线粒体自噬及凋亡相关蛋白表达.结果 与对照组...     

前列腺素E2对大鼠肺泡巨噬细胞内皮素生成的调控

采用放射免疫分析法观察大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）的内皮素（ＥＴ）生成。结果显示：①未受刺激的ＡＭ存在ＥＴ的基础分泌；②脂多糖（ＬＰＳ）、佛波醇酯（ＰＭＡ）和Ｃａ＾２＋导入剂Ａ２３１８７均可显著促进ＡＭ的ＥＴ生成；③钙调蛋白（ＣａＭ）抑制剂Ｗ７可阻断ＰＭＡ的促ＥＴ生成效应；④外源性前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）可抑制ＬＰＳ和ＰＭＡ的促ＥＴ生成效应，消炎痛可增强ＬＰＳ的作用。结果显示，ＡＭ具有产生ＥＴ的功能，     

非通气侧肺持续中低流量给氧对患者肺泡巨噬细胞凋亡及自噬的抑制作用

目的 探讨单肺通气(OLV)时非通气侧肺持续中低流量给氧对老年患者肺泡巨噬细胞(AM)凋亡及自噬的影响.方法 择期行胸腔镜下肺癌根治术的老年患者60例,年龄65～80岁,分成研究组和对照组,每组30例.OLV后研究组患者非通气侧肺给予1～4 L/min的持续性中低流量给氧,对照组患者非通气侧肺不给予持续性中低流量给氧....     

HMGB1下调的作用：通过抑制神经元细胞自噬和凋亡减轻大鼠脑出血后的神经元损伤

目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在大鼠脑出血后对神经元细胞自噬和凋亡的作用机制。方法 将20只Wistar大鼠随机分为4组（5只/组）：假手术组（Sham组）、脑出血组、HMGB1中和抗体治疗（anti-HMGB1）组、control IgG组。模型组选择颅内纹状体注射0.2 U/mL胶原酶Ⅳ建立脑出血大鼠模型。Sham组颅内注射2 μL生理盐水,术后尾静脉注射PBS,6 h后再次注入等量PBS;anti-HMGB1组术后尾静脉注射1 mg/kg anti-HMGB1单克隆抗体,6 h后再次注入等量抗体;control IgG组术后尾静脉1 mg/kg anti-IgG单克隆抗体,6 h后再次注入等量抗体。采用改良神经损害程度（mNSS）评分评估大鼠神经功能和损伤程度。TUNEL染色检测纹状体神经元凋亡。Western blot检测血肿周围脑组织神经元细胞HMGB1、自噬蛋白（Beclin-1、LC3-II和LC3-I）和凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3）的表达。免疫组化检测纹状体组织中HMGB1阳性表达。ELISA检测血清HMGB1含量变化。结果 造模成功后,脑出血组中mNSS评分增加（P<0.05）,给予anti-HMGB1单克隆抗体后,mNSS评分减少（P<0.05）。与 Sham 组相比,脑出血组大鼠纹状体神经元凋亡率增加（P<0.001）,Beclin-1、LC3-II、Bax 和 cleavedcaspase-3的表达增加（P<0.05）,而LC3-I和Bcl-2的表达减少（P<0.05）,HMGB1含量增加（P<0.05）。给予anti-HMGB1单克隆抗体后,大鼠纹状体神经元凋亡率减少（P<0.05）,Beclin-1、LC3-II、Bax和cleaved caspase-3的表达减少（P<0.05）,而LC3-I和Bcl-2的表达增加（P<0.05）,HMGB1含量减少（P<0.05）。结论 anti-HMGB1单克隆抗体下调HMGB1水平改善大鼠脑出血后的神经功能,其机制可能是抑制大鼠脑出血后的神经元细胞自噬和凋亡。     

氯化镉对大鼠胰岛瘤INS-1细胞自噬与凋亡的影响

目的 研究典型持久性有毒污染物氯化镉(CdCl2)对大鼠胰岛瘤INS-1细胞自噬和凋亡的影响及二者的关系,同时探索可能的分子机制和参与因素.方法 ①以免疫印迹法(Western blot)检测细胞自噬和凋亡标志蛋白及自噬调节相关蛋白;②以RNA干扰(RNAi)手段沉默INS-1细胞自噬必需基因即自噬相关基因7(Atg7),以检测CdC12所诱导的细胞自噬对凋亡的影响;③以2′,7′-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)染色法检测胞内活性氧(ROS)水平变化,并用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和CdC12联合处理INS-1细胞,以确定ROS是否参与CdCl2所诱导的INS-1细胞自噬和凋亡.结果 CdCl2通过刺激ROS的产生进而诱导INS-1细胞自噬和凋亡;CdCl2所诱导的INS-1细胞自噬为非哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)依赖途径,且可能起到抑制凋亡的作用.结论 CdCl2可能通过刺激活性氧的增加而诱导INS-1细胞自噬和凋亡,且自噬是凋亡的抑制因素.     

丙泊酚 瑞芬太尼对大鼠缺血再灌注损伤肺泡细胞凋亡的影响

目的：探讨麻醉药丙泊酚（propofol）和瑞芬太尼（remifentanil）对大鼠缺血再灌注损伤（is-chemia reperfusion injury,IR）后肺泡细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠原位热缺血再灌注模型,于结扎前、缺血30min、再灌注1h、2h、4h给予药物干预,采取肺组织及右房血标本,测定血氧分压,肺组织湿/干重比,并作光镜和透射电镜观察组织细胞形态及超微结构,确定凋亡发生,流式细胞仪测定肺组织中凋亡情况。结果：缺血再灌注组与假手术组比较,血氧分压降低,肺组织湿/干重比增高,肺泡细胞凋亡指数增高,丙泊酚组、瑞芬太尼组与缺血再灌注组比较,血氧分压增高,肺组织湿/干重比降低,肺泡细胞凋亡指数下降。结论：丙泊酚和瑞芬太尼对IR后肺泡细胞凋亡有抑制作用。     

肺泡Ⅱ型细胞凋亡在急进高原大鼠早期肺损伤中的作用

目的观察、探讨肺泡Ⅱ型细胞凋亡在急进高原大鼠肺损伤中的作用与意义。方法 60只wistar大鼠急进高原后,随机分高原1、3、7 d组,经处理,观察大鼠肺组织大体形态变化;H-E染色,显微镜观察肺组织学变化,电镜观察肺组织超微结构的变化。结果光镜下,大鼠肺组织出现了明显的炎症反应,肺泡壁毛细血管充血水肿,肺泡腔内有大量炎细胞;电镜下,肺泡上皮细胞凋亡明显。实验组形态学损伤重于对照组,且细胞凋亡率高于对照组,两者存在统计学差异（P〈0.05）。结论急进高原大鼠Ⅱ型细胞凋亡可能是引起高原急性肺损伤的原因之一,推测凋亡可能导致肺水转运障碍、钠水潴留而引发肺损伤。但其肺水转运障碍引发肺损伤的作用机制还有待于进一步研究。     

大鼠肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的动态观察

目的研究大鼠肺缺血再灌注损伤(IR)中肺泡细胞凋亡的动态过程及其与肺损伤的相关性。方法采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。于缺血再灌注0min、30min、1h、2h,6h及12h采取肺组织及左房血标本,测定血氧分压、肺组织湿／干重比,并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构,确定凋亡发生。TUNEL法测定肺组织中凋亡指数。台盼蓝活体染色评价细胞死亡程度,并结合同组凋亡水平间接推测细胞坏死水平。结果肺IR后,肺组织透射电镜观察可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增多,并且不同程度出现形态学改变,细胞体积缩小变圆,细胞核呈多形性,核被膜外折或内陷,核固缩并边集在核膜下呈月牙状或腰带状,胞浆浓缩,胞浆内嗜锇性板层体减少、排空增多,细胞膜上微绒毛减少或消失,提示细胞凋亡发生,肺泡Ⅰ型上皮细胞则少有上述改变。单独缺血30min,肺泡细胞凋亡指数无增高。肺再灌注后0．5h起,肺泡细胞凋亡指数显著增高,再灌注2h时达到高峰。与细胞凋亡指数相比,坏死指数与肺功能损害的相关性更显著。结论肺IR后发生凋亡的主要是肺泡Ⅱ型上皮细胞。肺泡细胞凋亡指数于再灌注2h达到高峰。肺泡细胞坏死指数与肺功能损害的相关性较凋亡指数更显著。     

Induction of type Ⅱ alveolar epithelial cells apoptosis in mouse by lipopolysaccharide does not require TNF-α

Objective To examine whether lipopolysaccharide (LPS)-induced apoptosis correlates with TNF-α release by type Ⅱ alveolar epithelial cells (AEC Ⅱ), whether TNF-α knockout (TNF KO) abrogates the induction of apoptosis by LPS and whether TNF-α is sufficient to induce apoptosis in this cell type.Methods AEC Ⅱ were isolated from wild type mice and TNF KO mice. Cells were stimulated with LPS or recombinant murine TNF-α for 24 h. TNF-α in culture supernatant was determined by ELISA following LPS stimulation. Apoptosis was determined by the terminal deoxynucleotidyl transferase end-labeling (TUNEL) assay after treatment with either LPS or TNF-α. Results LPS induced apoptosis in wild type AEC Ⅱ in a concentration-dependent manner. LPS-induced AEC Ⅱ apoptosis was accompanied by an 11-fold increase (from 0.073±0.065 ng/ml in control to 0.94±0.14 ng/ml in 50 μg/ml of LPS, P&lt;0.01) in TNF-α release. However, increasing concentrations (5 or 25 ng/ml) of recombinant murine TNF-α failed to induce AEC Ⅱ apoptosis. In addition, apoptosis did occur in AEC Ⅱ isolated from TNF KO mice following LPS stimulation.Conclusions This study confirms that LPS induces TNF-α release and apoptosis in murine AEC Ⅱ in vitro. Exogenous TNF-α failed to induce AEC Ⅱ apoptosis, and apoptosis occurred following LPS stimulation in cells lacking the ability to produce TNF-α. Taken together, these results suggest that LPS-induced AEC Ⅱ apoptosis occurs by a TNF-α-independent mechanism.     

II型肺泡上皮细胞凋亡在COPD患者肺损伤中的作用及机制研究

目的 分析Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）凋亡在慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺损伤中的作用及其机制。方法 筛选2020年1月至2020年12月浙江省嘉兴市第一医院手术治疗的非小细胞肺癌（NSCLC）患者30例入组,分为NSCLC不伴COPD且无吸烟史的患者（A组）、NSCLC不伴COPD但有吸烟史的患者（B组）及NSCLC伴COPD且有吸烟史的患者（C组）,每组10例,常规测定肺功能。分别采用HE染色观察肺组织病理学变化,Real-time PCR和免疫组化检测肺泡表面活性蛋白A（SPA）和肺泡表面活性蛋白C（SPC）mRNA及蛋白表达水平,TUNEL/SPC双重免疫荧光染色检测AECⅡ凋亡情况,Western blot检测p53、p21及叉头框蛋白O3a（FoxO3a）蛋白表达变化。结果 C组患者肺功能符合COPD诊断标准,即FEV1/FVC为（64.90±3.00）%,肺组织呈现明显的肺气肿样病理学改变。分别与A、B组比较,C组MLI[（194.01±7.01） μm比（36.34±4.09） μm、（39.49±4.01） μm];MAA[（21707.72±2306.53） μm2比（3352.49±391.44） μm2、（3493.38±404.29） μm2]明显升高（P均<0.05）;MAN[（52.46±4.68） mm2比（272.50±23.42） mm2、（255.77±32.06） mm2]明显降低（P<0.05）。Real-time PCR和免疫组化结果显示,分别与A、B组比较,C组SPA mRNA[（0.71±0.08）比（1.00±0.02）、（0.94±0.04）],SPC mRNA[（0.72±0.08）比（1.00±0.02）、（0.96±0.03）]明显减少（P<0.05）。TUNEL/SPC双重免疫荧光染色结果表明,C组的AECⅡ凋亡百分比为（12.30±2.21）%,显著高于A组（5.60±1.71）%和B组（6.00±1.83）%,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果表明,分别与A组和B组比较,C组患者肺组织p53和p21蛋白表达量明显增加（P<0.05）、FoxO3a蛋白表达量显著降低（P<0.05）。结论 AECⅡ凋亡在COPD患者肺损伤中起到重要作用,其机制可能与FoxO3a蛋白表达下调及p53、p21蛋白表达上调相关。     

肺泡上皮细胞在ALI、ARDS中的研究进展

急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征是继发于多种疾病的严重威胁病人生命健康的临床综合征。近来研究表明，肺泡上皮细胞，作为肺脏结构和功能的基础，尤其是Ⅱ型肺泡上皮细胞，对肺泡内水份的清除能力，合成、分泌及损伤后的修复能力．以及对其生长、分化的调节在病程的进展和转归中起着重要作用。如何将肺泡上皮细胞的这些特性运用于临床治疗．将是解决急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征的重要方向。     

脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞凋亡的机制研究

目的研究脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞(AT-II)凋亡的机制。方法体外原代培养的AT-II分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测。结果LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P<0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P<0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P<0.05)。结论Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-II细胞凋亡的重要途径。     

晚期氧化蛋白产物对大鼠牙槽骨细胞凋亡的影响

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对大鼠牙槽骨细胞凋亡的诱导作用.方法 选取大鼠牙槽骨细胞作为靶细胞,用不同浓度(0、100、200 μg/mL)的AOPP作用不同时间(12、24 h)刺激牙槽骨细胞,通过流式细胞仪测定细胞凋亡情况,酶标仪测定刺激下牙槽骨细胞活性氧(ROS)的生成量,采用免疫印迹法检测影响细胞凋亡的相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化.结果 原代培养获得的牙槽骨细胞呈贴壁生长,能合成碱性磷酸酶,具有成骨样细胞表现.AOPP可以引起牙槽骨细胞产生大量ROS,引起细胞凋亡,随着作用剂量的增大和作用时间的延长,细胞凋亡率明显升高,其中当AOPP作用浓度为200 μg/mL、作用时间为24 h时,凋亡率最高.牙槽骨细胞可表现为Bcl-2合成减少,Bax合成增加,而且相关凋亡因子表达随着作用时间的延长和作用浓度的增加而显著升高(P<0.05).结论 氧化应激可引起牙槽骨细胞凋亡,这可能是导致部分口腔慢性炎症性疾病后期出现牙槽骨吸收的原因.     

脂多糖对衰老大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对衰老大鼠模型肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡的影响方法用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)复制衰老大鼠模型,实验动物分为老年组和青年组,青老年大鼠分别通过支气管肺泡灌洗和细胞贴壁的方法获取AM,将其分为LPS刺激组和对照组,每组6只,LPS刺激组用10mg/l LPS直接攻击细胞,24h后用AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒进行检测。结果衰老大鼠LPS刺激组细胞凋亡百分率(50.57%±2.29%)高于对照组(17.25%±1.68%,P<0.05);青年大鼠LPS刺激组(28.22%±1.75%)较对照组(14.25%±3.09%,P<0.05)高,青老年对照组之间差异无统计学意义。结论LPS刺激组的AM凋亡衰老大鼠明显高于青年组,老年大鼠对LPS刺激的反应程度大于青年组。     

饥饿对Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究饥饿对Ana-1细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：体外培养Ana-1细胞,将细胞分为对照组（饥饿0h）和饥饿3、6、9、12、24h组（饥饿组）,观察饥饿对细胞自噬与凋亡的影响;将Ana-1细胞分为空白对照组、饥饿组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合饥饿组,孵育24 h,采用Western blotting法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1蛋白表达水平和凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白水平,采用倒置显微镜观察饥饿6、12和24 h组细胞形态表现。结果：与对照组比较,饥饿6、12和24h组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Beclin-1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Caspase-3水平明显降低（P<0.01）,呈时间依赖性;倒置显微镜下观察,与对照组比较,不同时间饥饿组细胞形态发生改变,细胞皱缩、出现碎片,随着时间的延长,细胞变化更加明显。与饥饿组比较,3-MA联合饥饿组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平及Caspase-3蛋白水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：饥饿可诱导Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬并引起细胞凋亡。     

棕榈酸诱导大鼠主动脉内皮细胞凋亡

目的研究棕榈酸对大鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响。方法 0.5%BSA或0.5%BSA及不同浓度的棕榈酸(0.1、0.2和0.3 m m)作用于大鼠主动脉内皮细胞24 h,M TT法检测细胞活性,流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡,分光光度计检测C aspase-3活性。结果 M TT检测结果提示棕榈酸组较对照组细胞活性下降;AnnexinⅤ/PI法检测结果提示棕榈酸组较对照组细胞凋亡增加(P<0.05或P<0.01)。棕榈酸组较对照组C aspase-3活性增加(P<0.05或P<0.01)。结论棕榈酸能够诱导内皮细胞凋亡,说明高水平的游离脂肪酸对内皮细胞有直接的伤害作用。     

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的 探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的分子机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10⁷ TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏...     

硫化氢调节急性肺损伤大鼠肺泡上皮细胞凋亡

Background Acute lung injury (ALI) is a common syndrome associated with high morbidity and mortality in emergency. Cell apoptosis plays a key role in the pathogenesis of ALI. Hydrogen sulfide (H2S) plays a protective role during acute lung injury. We designed this study to examine the role of H2S in the lung alveolar epithelial cell apoptosis in rats with acute lung injury. Methods Sixty-nine male Sprague Dawley rats were used. ALI was induced by intra-tail vein injection of oleic acid (OA). NaHS solution was injected intraperitonally 30 min before OA injection as NaHS pretreatment group. Single sodium hydrosulfide pretreatment group and control group were designed. Index of quantitative assessment (IQA) and the percentage of polymorphonuclear leucocyte (PMN) cells in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were calculated. H2S level in lung tissue was measured by sensitive sulphur electrode. Apoptosis was evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) staining and Fas protein was measured by immunohistochemical staining. Results The level of endogenous H2S in lung tissue decreased in the development of ALI induced by OA injection. Apoptosis and Fas protein in alveolar epithelial cells increased in ALI of rats but NaHS lessened apoptosis and Fas protein expression in alveolar epithelial cells of rats with ALI. Conclusion Endogenous H2S protects rats from oleic acid-induced acute lung injury probably by inhibiting cell apoptosis.