DDR1促进胰腺癌细胞AsPC-1的迁移及侵袭能力

目的 探讨盘状结构域受体1 (DDR1)对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响.方法 利用qRT-PCR检测DDR1在胰腺癌旁组织及癌组织中的表达水平.通过脂质体转染DDR1表达质粒至胰腺癌细胞AsPC-1中,应用Western blot验证其转染效果.通过划痕实验及Transwell法检测转染DDR1表达质粒后细胞迁移及侵袭能力的变化情况.Western blot检测转染后基质金属蛋白酶2 (MMP2)和基质金属蛋白酶9 (MMP9)的表达水平.结果 与癌旁组织比较,胰腺癌组织的DDR1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05).转染质粒后,AsPC-1细胞DDR1蛋白表达量显著升高(P<0.05).应用划痕试验及Transwell试验结果显示,与对照组比较,AsPC-1/DDR1迁移力上调(51.11±11.51)%,侵袭力上调(77.25±10.64)%,差异均具有统计学意义(P<0.05).过表达DDR1后,AsPC-1细胞中MMP2和MMP9表达水平显著升高(P<0.05).结论 DDR1通过改变MMP2和MMP9的表达水平,促进胰腺癌细胞的迁移及侵袭,有望成为靶向治疗的新方向.     

miR-373在人肝细胞癌中的表达及其作用

目的探讨miR-373在肝细胞癌的表达及其作用。方法 qRT-PCR法检测80例肝癌及癌旁灶中miR-373的表达;qRT-PCR法检测人肝细胞癌细胞株BEL7402、HepG2、Hep3b、Huh7、SMMC7721中miR-373的表达情况,选择高表达miR-373的细胞株为后续研究对象;干扰miR-373表达后,Transwell检测细胞株体外迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞内MMP2、MMP9蛋白的表达变化。结果人肝细胞癌细胞株BEL7402、HepG2、Hep3b、Huh7、SMMC7721中,HepG2细胞中miR-373的表达最高。用miR-373 inhibitor转染HepG2细胞后,细胞内miR-373表达水平明显下调(P<0.05)。转染miR-373 inhibitor后,细胞迁移和侵袭细胞数目均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-373inhibitor后,HepG2细胞内MMP2、MMP9表达下调,(P<0.05)。结论 miR-373上调MMP2、MMP9表达促进了肝细胞癌的转移,miR-373可能为... 更多     

Tip30基因表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：分析Tip30表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法：聚乳酸-羟乙酸(polylactic-co-glycolic acid, PLGA)纳米粒介导腺相关病毒质粒pAAV-Tip30真核表达质粒转染HepG2细胞。RT-PCR检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2,MMP-9和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA水平;Western印迹 检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;Transwell法检测肝癌细胞迁移能力;四氮唑盐(MTS)法和细胞集落形成实验检测细 胞增殖能力;细胞-细胞黏附试验、细胞-基质黏附实验检测Tip30表达对肝癌细胞黏附能力的影响。结果：过表达Tip30 基因的HepG2肝癌细胞明显降低了MMP-2,MMP-9的mRNA表达和蛋白的翻译;肝癌细胞的增殖、锚定非依赖性生长及 肝癌细胞迁移能力均明显受到抑制。结论：体外实验研究证明Tip30基因可抑制肝癌细胞侵袭转移的能力。     

KLF6基因在原发性肝癌中的表达

目的 通过研究潜在抑癌基因KLF6在肝细胞癌的表达,探讨KLF6基因作为肝癌抑制基因的可能性.方法 分别用荧光定量PCR、半定量RT-PCR和Western blot方法检测肝细胞癌及癌旁组织中KLF6基因在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 实时荧光定量PCR显示经过看家基因GAPDH标化的KLF6 cDNA 起始浓度,在配对癌旁组织约为肝癌组织的3倍.26例肝癌组织的KLF6 mRNA表达水平与配对癌旁组织相比,差异具有显著性意义(P<0.01).在肝癌细胞株HepG2及Hep3B,KLF6 mRNA的表达亦显著低于正常对照细胞L02(P<0.01).实验还发现,在肝细胞癌中KLF6蛋白表达变化与mRNA表达变化一致,即KLF6蛋白在癌组织及肝癌细胞的表达明显低于癌旁组织及L02(P<0.01).结论 KLF6表达下调可能是肝细胞癌的遗传学改变之一, KLF6基因可能为新的肝癌相关抑癌基因.     

过表达KLF4抑制非小细胞肺癌增殖及上皮间质转化的作用机制

目的探究KLF4 调控非小细胞肺癌（NSCLC）增殖及上皮间质转化（EMT）发生的作用机制，为NSCLC 的临床研究提供理论依据。方法收集临床病理资料进行统计学分析，免疫组织化学检测KLF4 在癌旁及癌组织中的表达，细胞水平检测KLF4 在癌细胞和正常细胞中的表达差异，过表达KLF4 检测对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT 相关标志物的影响。结果KLF4 在癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达，并且与患者的临床分期及远处转移密切相关，细胞水平检测也得到了相同的结果，上调KLF4 的表达抑制了细胞的增殖、侵袭及迁移，同时抑制EMT 相关的间充质标志物的表达，促进上皮标志物的表达。结论过表达KLF4能够抑制NSCLC 增殖及EMT 的发生。     

lncRNA GIHCG通过调节miR-429在原发性肝癌发生发展中的作用

目的 探讨lncRNA GIHCG通过调节miR-429在原发性肝癌发生发展中的作用。 方法 选择宁波市第七医院2017年1—12月60例原发性肝癌手术患者的肝癌组织及相应的癌旁组织。将HepG2细胞根据随机数字法分为空白对照组、阴性对照组和lncRNA GIHCG-siRNA组。采用RT-PCR测定肝癌组织和细胞中lncRNA GIHCG mRNA和miR-429水平，采用WST-1测定细胞增殖，采用Transwell法测定细胞侵袭和迁移能力。 结果 肝癌组织中lncRNA GIHCG mRNA水平高于癌旁组织(P<0.05)，miR-429水平低于癌旁组织(P<0.05)。肝癌细胞中lncRNA GIHCG mRNA水平高于正常肝细胞(P<0.05)，miR-429水平低于正常肝细胞(P<0.05)。肝癌组织及肝癌细胞中lncRNA GIHCG mRNA和miR-429呈负相关(P<0.05)。第3天和第5天，GIHCG-siRNA组细胞OD值低于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较，lncRNA GIHCG-siRNA组HepG2细胞中lncRNA GIHCG mRNA水平、细胞侵袭和迁移能力降低(均P<0.05)，miR-429水平升高(均P<0.05)。 结论 原发性肝癌组织中lncRNA GIHCG水平升高，lncRNA GIHCG可能通过调节miR-429促进肝癌细胞增殖和侵袭迁移。      

肾母细胞瘤过表达基因促进肝癌细胞的侵袭与转移

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV CCN3)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中的CCN3的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中CCN3的mRNA表达水平,Western blot检测肝癌及癌旁组织中CCN3蛋白的表达量;通过肝癌细胞过表达CCN3分析CCN3蛋白对肝癌细胞转移的作用;运用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验研究CCN3过表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响?结果:50对样本中有39对CCN3的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,Western blot提示肝癌组织中CCN3蛋白表达量高于癌旁组织?体外肝癌细胞的功能试验中,过表达CCN3能促进MHCC-97H?SMMC-7721细胞的侵袭与转移?结论:CCN3在肝癌组织中高表达,过表达CCN3能促进肝癌的侵袭与转移,CCN3发挥作用机制的研究能为肝细胞肝癌的治疗提供新的思路?     

同源异型盒基因HOXA5抑制肝癌的侵袭和迁移通过调控UBC9的表达

目的:检测人肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达情况,观察稳定高表达HOXA5基因的肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的变化,探讨HOXA5调控肝癌侵袭迁移的机制,为肝癌的分子靶向治疗提供新的靶点。方法:通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术检测肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达。构建稳定高表达HOXA5的肝癌细胞MHCC97H,利用划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化。应用CHIP-Seq筛选出HOXA5潜在的靶基因,在稳定高表达HOXA5基因细胞中应用qRT-PCR、Western blot验证HOXA5与靶基因的关系。结果:新鲜的肝癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,肝癌组织中HOXA5的表达低于癌旁;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,肝癌组织中HOXA5的表达水平显著下调。过表达了HOXA5基因的MHCC97H细胞的侵袭能力下降。CHIP-Seq的结果发现,HOXA5结合在UBC9的上游启动子区域。在稳定高表达HOXA5的MHCC97H细胞中,UBC9的mRNA和蛋白表达均下调。当在稳定高表达HOXA5的同时过表达UBC9时,肝癌细胞的侵袭和迁移能力部分回复。结论:在肝癌组织中HOXA5的表达下调;UBC9介导了HOXA5抑制肝癌细胞侵袭迁移的作用,这为进一步阐明肝癌发生侵袭转移过程中的分子机制提供一个新的思路,为精准治疗肝癌提供一个可能的靶点。     

KLF4通过Wnt信号通路抑制甲状腺癌细胞EMT及侵袭迁移的实验研究

目的 探讨Kruppel样因子4(KLF4)对甲状腺癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移的影响及机制.方法 免疫组织化学(IHC)检测45份甲状腺癌标本中KLF4的表达情况.常规体外人甲状腺乳头状癌细胞株KTC1培养,将其分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染LipofectammeTM2000)、KLF4过表达组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4)、siRNA-NC组(转染LipofectamineTM 2000+ NC-siRNA)和KLF4-siRNA组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4-siRNA).免疫荧光检测细胞中KLF4与β-catenin的分布和共表达;Transwell检测癌细胞侵袭和迁移的能力,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测EMT和Wnt信号通路相关的基因和蛋白质表达水平.蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)检测KLF4和β-catenin间的互作情况.结果 免疫荧光标记显示,KLF4和β-catenin在KTC1细胞质中共定位.qRT-PCR结果显示,KLF4过表达组上皮型钙黏蛋白(E-cad)mRNA表达明显高于其他组(P＜0.05),神经型钙黏蛋白(N-cad)和基质金属蛋白酶7(MMP7) mRNA表达水平明显低于其他组(P＜0.05);沉默干扰KLF4后,与其他组相比,KLF4-siRNA组中的E-cad mRNA明显降低(P＜0.05),N-cad和MMP7 mRNA明显升高(P＜0.05).Western blot结果显示,KLF4过表达组中E-cad表达较其他组明显升高(P＜0.05),而N-cad、MMP7表达则明显低于其他组(P＜0.05);当沉默干扰KLF4时,上皮标志物减少(P＜0.05),间质标志物增加(P＜0.05).Transwell结果显示,过表达KLF4可以抑制KTC1细胞的迁移和侵袭,干扰沉默KLF4可增强KTC1细胞的迁移和侵袭.Co-IP结果显示,KLF4与β-catenin之间存在相互作用.KLF4在甲状腺癌及癌旁组织中的阳性表达率分别为24.44％ (11/45)和71.11％ (32/45),二者比较差异有统计学意义(x2=19.639,P＜0.001).45份甲状腺癌标本中,伴淋巴结转移18份标本中KLF4表达4份阳性,而不伴淋巴结转移27份标本中,KLF4表达15份阳性,二者比较差异有统计学意义(22.22％ vs.55.56％,x2=4.919,P=0.027).结论 KLF4通过Wnt信号通路调节相关下游靶基因的表达,从而影响了甲状腺癌的侵袭和迁移能力.     

Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移侵袭的影响

  目的  探讨核受体Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。  方法  首先采用对靶向基因进行特定DNA修饰的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建Rev-erbβ基因敲除的HepG2细胞系。用Rev-erbβ打靶载体共转染到HepG2细胞,通过筛选、克隆化构建Rev-erbβ基因敲除HepG2细胞系,并采用PCR、测序和Western blot鉴定。以正常HepG2细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Rev-erbβ基因敲除对肿瘤迁移、侵袭相关基因表达的影响,采用MTT、细胞划痕、Transwell等实验检测Rev-erbβ基因敲除对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。  结果  成功构建一株Rev-erbβ基因完全敲除单克隆细胞系(经PCR、测序和Western blot鉴定),命名为HepG2 C5(Rev-erbβ-/-)。qRT-PCR结果显示,Rev-erbβ基因敲除可以导致基质金属蛋白酶-2,-9基因(MMP2,MMP9)、细胞外基质蛋白1基因(ECM1)表达上调(P均＜0.05),细胞黏附相关基因E-钙黏蛋白基因(CDH1)下降(P=0.05);MTT、细胞划痕、Transwell实验显示,并且HepG2 C5比对照细胞有更强的增殖、迁移与侵袭能力(P＜0.05)。  结论  Rev-erbβ基因敲除可以改变HepG2细胞与迁移、黏附相关基因的表达,进而影响HepG2细胞增殖、迁移与侵袭能力。     

白细胞介素增强因子3 对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的 探讨白细胞介素增强因子3（ILF 3）对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及相关机制。方法 免疫组织化学技术检测ILF3 在胃癌组织、转移淋巴结组织、正常胃黏膜组织中表达情况;收集患者临床资料,分析ILF3 与胃癌患者临床病理特征的关系。Western blot 检测不同胃癌细胞株中ILF3 表达。合成针对ILF3的小干扰RNA 转染人胃癌细胞株MGC803 ;MTT 法检测MGC803 细胞活性;细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞的迁移侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot 检测MMP -7、MMP -9、TIMP -1 基因的mRNA 和蛋白表达情况。结果 胃癌组织中ILF3 蛋白阳性率高于癌旁组织;转移淋巴结中ILF3 蛋白阳性率高于胃癌组织（P <0.05）。胃癌组织中ILF3 蛋白阳性表达与患者的肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移、临床分期有关（P <0.05）。各胃癌细胞株中MGC803 的ILF3 蛋白表达最强,抑制MGC803 细胞内源性ILF3 表达后细胞的活性减弱;迁移和侵袭能力也降低（P <0.05）。ILF3-siRNA转染MGC803 后细胞的MMP-2、MMP-7 表达减弱,而TIMP-1 的表达增高（P <0.05）。结论 ILF3 对胃癌的侵袭转移有促进作用,ILF3 可能是通过调节MMP -7、MMP -9、TIMP -1 基因而参与了胃癌的侵袭转移。     

miR-145在肝癌中的表达和功能研究

目的 探讨miR-145在肝癌组织、HepG2细胞株和肝脏正常组织中的表达情况及其对肝癌细胞株HepG2 增殖和侵袭能力的影响.方法 运用荧光定量PCR技术检测肝癌、HepG2细胞株及肝组织中miR-145的表达量.应用MTT法检测miR-145对HepG2细胞增殖的影响,通过侵袭实验观察miR-145对细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中miR-145表达明显低于正常组织(P＜0.05).浓度为100 nmol/L的miR-145作用时间72 h时,对HepG2细胞的增殖抑制最强,侵袭实验显示100 nmol/L的miR-145 mimics处理组穿膜细胞数目明显减少,并与对照组有显著差异.结论 miR-145在癌组织中的表达明显低于正常组织;miR-145抑制肝癌细胞株HepG2的增殖和侵袭能力,其在肿瘤发生发展过程中可能担任抑癌基因的角色.     

microRNA-616在肝细胞癌侵袭转移中的作用机制研究

目的探讨microRNA-616（miR-616）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC侵袭转移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-616在60例HCC及癌旁组织中的表达,同时检测miR-616在不同肝癌细胞系中的表达情况;免疫组织化学染色检测miR-616在HCC及癌旁组织中波形蛋白（vimentin）、上皮型钙黏素（E-cadherin）及同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）的表达情况;qRT-PCR检测miR-616在人正常永生化肝细胞（LO2）及5种不同肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Hu7）中的表达水平;使用miR-616抑制物作用Hep3B细胞,TranswellTM实验检测miR-616抑制后Hep3B细胞侵袭能力变化;应用miR-616抑制物及PTENsiRNA转染Hep3B细胞,qRT-PCR检测Hep3B中miR-616、vimentin、PTEN、E-cadherin的mRNA水平,Westernblot法检测癌细胞中vimentin、PTEN、E-cadherin的蛋白水平。结果miR-616在HCC组织中表达水平高于对应癌旁组织;miR-616在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-616高表达与低表达在血管侵犯、Edmonson-Steiner分级、TNM分期比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);miR-616高表达肝癌组PTEN及E-cadherin水平低于miR-616低表达肝癌组,而vimentin水平高于miR-616低表达肝癌组,相关性分析结果显示HCC组织中miR-616与E-cadherin、PTEN水平呈负相关,与vimentin水平呈正相关;在肝癌细胞中抑制miR-616后PTEN及E-cadherin表达水平上调,而vimentin表达降低,Hep3B细胞的侵袭能力明显降低。结论miR-616在HCC组织中表达上调,其表达与HCC恶性临床病理特征有关,miR-616促进肝癌细胞侵袭转移的作用可能与其抑制PTEN表达及诱导上皮间质转化有关。     

Nrf2促进肝癌细胞的迁移与侵袭能力

目的:探讨核转录因子Nrf2对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:将Nrf2过表达质粒通过慢病毒包装后分别转染至肝癌细胞系HCC-LM3及Bel-7402中,通过划痕实验、Transwell侵袭实验观 察Nrf2对肝癌细胞迁移运动及侵袭能力的影响,使用Western印迹法检测转染后的HCC-LM3及Bel-7402肝癌细胞中基质金属蛋白酶2（MMP2）与基质金属蛋白酶9（MMP9）表达情况,通过收集网络数据库 GEPIA中相关临床资料信息分析Nrf2对肝癌患者生存时间的影响。结果:在肝癌细胞系HCC-LM3与Bel-7402中过表达Nrf2,其迁移侵袭能力均明显增强。此外发现过表达Nrf2的HCC-LM3肝癌细胞中MMP2及 MMP9表达均增加（t=2.879、5.582, 均P <0.05）;Bel-7402肝癌细胞转染Nrf2过表达质粒后,其MMP2及MMP9表达也相对增加（t=3.756、2.968, 均P <0.05）。高表达Nrf2的肝癌患者生存时间短于低表 达Nrf2的肝癌患者（Logrank P=0.042）。结论:肝癌细胞Nrf2高表达可能通过增加MMP2及MMP9的表达,进而促进肝癌细胞迁移及侵袭能力,并且Nrf2高表达与肝癌患者的不良预后有关。     

沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系HepG2生
物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及
相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段（IFITM3 si-RNA）,采用脂质体介导转染肝癌细胞（HepG2细胞系）,同时设置无义序列组
和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 mRNA的表达;CCK8（cell counting kit 8）检测转染后细胞增殖能力;
Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相
比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增
值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验也表明迁移能力降低。结论IFITM3在原发性肝
癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。
     

长链非编码RNA TPT1-AS1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用研究

目的 研究肿瘤蛋白翻译调节因子1反义-RNA1(TPT1-AS1)在肝细胞和肝癌细胞中表达的差异,及其对肝细胞癌增殖、迁移、侵袭、上皮细胞间质化(EMT)的影响.方法 2018年9月—2020年6月于西安交通大学实验室进行细胞实验,使用qRT-PCR分别检测92例经手术切除的肝癌组织与对应癌旁肝组织,肝癌细胞HepG2...