病毒转基因番茄疫苗研制现状

番茄(Lycopersicon esculentum)是一种优良的蔬菜品种,应用基因工程技术对番茄进行开发和改造已成为国内外研究的热点。本文综述了肝炎病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、HIV1病毒、狂犬病毒、诺沃克病毒、口蹄疫病毒、肠病毒71和植物花叶病毒等的转基因番茄的研制现状。     

抑菌抗生素对可食用番茄防龋疫苗载体的影响

[目的]探讨可食用番茄防龋疫苗植物转化过程中的有效抑菌抗生素及其浓度.[方法]①用不同浓度梯度的红霉素、氨苄青霉素、头孢拉定、新治菌(头孢噻肟钠 舒巴坦钠)对已转化入编码嵌合体SBR-CTΔA1基因的农杆菌AT-RSB进行抑菌实验,筛选抑菌效果最好的抗生素;②设立浓度梯度的新治菌(头孢噻肟钠 舒巴坦钠)对农杆菌AT-RSB进行抑菌实验,同时观察其对番茄外植体再生的影响,筛选最适浓度.[结果]①新治菌的抑菌效果最好;②300 mg/L的新治菌为最佳浓度,既能有效抑制农杆菌的生长,又不妨碍转化体番茄的再生.[结论]确定了农杆菌介导转化转基因番茄防龋疫苗的有效抗生素及其浓度,为可食用防龋疫苗的构建提供实验基础.     

人用靶向防龋DNA疫苗防龋效果及交叉免疫保护的实验研究

变形链球菌（Streptococcus mutans，S．mtttans）是主要致龋菌，细胞表面蛋白抗原PAc和葡糖基转移酶（glucosyltransferas，GTFs）是其主要毒力因子。郭继华等构建了以细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4为引导，针对变形链球菌PAc和GTF的靶向防龋DNA疫苗pGJA—P，大大提高了防龋效果。在此基础上，以符合美国食品和药品管理局要求的pVAX1为载体，又构建了人用新型靶向防龋DNA疫苗pGJA-P／VAX。     

靶向融合防龋DNA疫苗经肌肉免疫动物的实验研究

目的　观察靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P在大鼠肌肉组织中的原位表达。检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P经股四头肌注射途径免疫大鼠后体内抗体水平和防龋效果 ,并与融合防龋DNA疫苗pGLUA P进行比较。在小鼠体内长期观察抗体动态变化。方法　质粒pGJA P经股四头肌注射途径免疫大鼠 ,免疫组织化学方法检测重组蛋白的原位表达。质粒pGJA P和pGLUA P经股四头肌注射途径免疫定菌鼠 ,ELISA法检测血清IgG和唾液IgA抗体水平 ,Keyes记分法评估定菌鼠磨牙患龋情况。质粒pGJA P和pGLUA P经股四头肌注射途径免疫BALB/c小鼠 ,ELISA法检测血清IgG和唾液IgA动态变化。结果　大鼠股四头肌组织检测到表达的重组蛋白。大鼠pGJA P免疫组血清抗PAcIgG水平 (1∶2 0 0 0 0 0 )和抗GTFIgG水平 (1∶5 80 0 0 )均显著高于pGLUA P免疫组 (1∶2 30 0 0和 1∶110 0 0 )(均P <0 0 1)。大鼠pGJA P免疫组唾液抗PAcIgA水平 (1∶8)和抗GTFIgA水平 (1∶6 )均显著高于pGLUA P免疫组 (1∶2和 1∶2 ) (均P <0 0 1)。pGLUA P免疫组未能引起有效的唾液IgA反应。pGJA P免疫组龋齿记分显著低于pGLUA P免疫组和空白组 (P <0 0 1)。小鼠pGJA P免疫组有效血清IgG、唾液IgA和pGLUA P免疫组有效血清IgG均持续至本实验结束 ,pGJA P免疫组血清IgG和唾液Ig     

DNA防龋疫苗经TSG途径免疫BALB/c小鼠实验研究

目的观察编码PAc结构基因A-P片段的重组质粒pCIA-P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB/c小鼠后的特异性免疫反应,并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法将25只BALB/c小鼠随机分为4组,分别以重组质粒pCIA-P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA-P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc。结果颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高,并持续数周。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高,但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论重组质粒pCIA-P是一种有效的免疫原,该DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期粘膜免疫的有效途径。     

减毒鼠伤寒沙门菌防龋疫苗的免疫防龋效果

【目的】采用减毒鼠伤寒沙门菌S .typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)防龋疫苗经不同途径免疫定菌大鼠 ,观察其对变形链球菌在大鼠牙面黏附、龋病发生的影响等免疫防龋效果。【方法】将 5 0只大鼠随机分组 ,经口服、皮下、黏膜下途径免疫 ,接种变形链球菌并给予致龋饲料。对各组大鼠口腔中变形链球菌的定居菌落进行计数、黏附率计算 ,收集大鼠颌骨标本 ,根据Keyes评分标准作龋齿计分统计。【结果】口服活菌苗 S typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)组变形链球菌数为(3 4± 1 4)× 10 4 CFU ;磨牙龋齿Keyes计分总和为 30 7± 6 0 ,均明显低于其它组 (P <0 0 5 )。【结论】口服S typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)活菌苗可抑制变形链球菌黏附于牙面 ,并能减少龋病发生 ,具有较好的防龋效果。     

改良品质的转基因番茄研制现状

番茄(Lycopersicon esculentum)是一种优良的蔬菜品种,应用基因工程技术对番茄进行开发和改造已成为国内外研究的热点。本文综述了延迟成熟品种、耐盐品种和耐寒品种的转基因番茄的研制现状。     

DNA防龋疫苗经TSG途径免疫BALB／c小鼠实验研究

目的 观察编码PAc结构基因A—P片段的重组质粒pCIA—P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB／c小鼠后的特异性免疫反应，并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法 将25只BALB／c小鼠随机分为4组，分别以重组质粒pCIA—P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠，ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA—P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc。结果 颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高，并持续数周。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高，但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论 重组质粒pCIA—P是一种有效的免疫原，该DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期粘膜免疫的有效途径。     

纳米基因防龋疫苗的构建及其免疫大鼠的实验研究

目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚糖结合蛋白B的特异SIgA抗体滴度。与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白壳聚糖纳米颗粒组,而与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB组抗体滴度相当。且维持的抗体滴度更稳定和持久。结论:成功构建了以葡聚糖结合蛋白B基因为免疫原的纳米基因防龋疫苗,并获得较好的免疫效果。     

水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT经黏膜途径免疫兔的实验研究

目的观察水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT经黏膜途径免疫兔的免疫效果及其目的蛋白在免疫部位的表达。方法 20只新西兰大白兔随机分为5组,每组4只。A组：pVAX1-gtfB/CAT口服组,B组：pVAX1-gtfB/CAT鼻腔黏膜滴注组,C组：空载体pVAX1质粒口服组,D组：空载体pVAX1＋水凝胶口服组,E组：生理盐水鼻腔黏膜滴注组。每间隔1周免疫1次,共免疫3次。每次免疫剂量为200μg/只。于免疫前和免疫后第1、2、3、4、6、8、10、12、14、16周采集血液及唾液标本,ELISA法检测血清及唾液中特异性抗体水平。第3次免疫后每组处死1只动物,取免疫部位组织,免疫组织化学检测目的蛋白表达。结果 1水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT免疫兔后,诱导了特异性IgG和SIgA抗体产生,在第6和第8周口服免疫诱导的特异性IgG抗体水平高于鼻腔黏膜滴注,其余时间点两种黏膜途径诱导的SIgA和IgG抗体水平差异无统计学意义;2在小肠黏膜和鼻黏膜均检查到了目的蛋白的表达。结论水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT经黏膜途径免疫后,目的蛋白能够在免疫部位表达,均能有效诱导兔的系统免疫和黏膜免疫应答。     

不同防龋涂膜对形成电化学人工龋效果的实验研究

目的　观察几种防龋涂膜抗电化学人工龋形成和发展的能力 ,筛选出实验室里防龋效果较好的涂膜。方法　将实验牙随机分入不同的防龋材料及空白对照组 ,用电化学人工龋模型 ,观察电化学人工龋的形成和发展。结果　FCTMV(加氟的中药防龋涂膜 )是实验中发现的抗电化学人工龋效果最好的防龋涂膜。结论　绝缘作用加上氟的药物作用 ,可以获得更好的防电化学人工龋的效果     

放射性治疗对SD大鼠唾液中变形链球茵数量的影响

目的：通过建立动物模型,探讨放射性治疗对SD大鼠唾液中变形链球菌数量的影响。方法：选自20只雌性sD大鼠,随机分成试验组和对照组,每组各10只。经接种变形链球茵后,试验组予以15Cy／d放射剂量对双侧腮腺进行照射,连续照射30d。于放射始、30、60d以及90d时,观察大鼠唾液中变形链球茵的数量,并于放射90d时,统计患龋率及根据Keyes评分法评定大鼠患龋状况。结果：随着观察时间的延长,两组大鼠唾液中变形链球菌的数量均不断增加,但实验组各时间点变形链球菌增加数量明显高于对照;放射90d时,大鼠唾液变形链球菌的数量可达l（8．60±O．21）＊107]mL,而对照组仅为[（1．914-0．12）×107^]mL,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组的患龋率及Keyes评分法均明显高于对照组,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：放疗可促进SD大鼠唾液中变形链球菌的繁殖而增加其患龋的风险。     

转基因动物在肥厚型心肌病研究中的应用

肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)是一种常染色体显性遗传心肌病,通常表现为室间隔非对称性肥厚,伴或不伴有流出道的明显梗阻.普通人群的患病率为1:500[1].约有50%的肥厚型心肌病患者有家族史,男女比例2:1,平均发病年龄为(38±15)岁.本病常为青年(特别是运动员)猝死的原因,且无特效治疗手段[2].     

不同材料治疗老年人牙根龋的效果对比研究

目的观察不同材料充填治疗老年人根面龋的临床效果,寻找一种有效的治疗方法。方法将245例(323颗)老年人根面龋患者分为三组:A组(n=102颗)用玻璃离子充填治疗;B组(n=115颗)用光固化复合树脂充填治疗;C组(n=106颗)用银汞合金充填治疗。1年后分别观察充填后的有效率。结果A组、B组、C组充填总有效率分别为87.25%、63.48%、80.19%。A、C组疗效明显优于B组(P均<0.01)。结论玻璃离子水门汀、银汞合金充填修复老年人根面龋的效果明显优于光固化复合树脂。对于前牙的根面龋,美观要求高,视野好的,可用玻璃离子水门汀充填,对于后牙的根面龋,美观要求不高,视野较差的,可用银汞合金充填。     

辽宁省口腔健康流行病学抽样调查结果分析

目的:了解辽宁省城乡不同年龄组人群口腔健康现状,探讨口腔疾病患病特点和规律。方法:采用多阶段分层等容量随机抽样的方法,按照WHO《口腔健康调查基本方法》(第四版)的要求,对全省5、12、35～44岁、65～74岁4个年龄组的人群进行抽样调查。结果:5岁组乳牙患龋率为73.86%,龋均为4.38,农村明显高于城市。12岁组:患龋率为30.05%,龋均为0.51。35～44岁组:患龋率为63.13%,龋均为1.93。65～74岁组:患龋率为65.28%,龋均为2.34。城市的中老年人患龋率和龋均远高于农村。牙周健康者仅占12岁组的29.79%,35～44岁组3.03%,65～74岁组2.65%。6.69%的老年人为无牙颌。结论:辽宁省儿童和成人的患龋率与十年前相比,有了明显下降,但患龋情况仍很严重,口腔卫生状况较差。加强口腔健康教育,提高全人群的口腔保健意识,推广适宜的牙防技术十分必要。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞移植对海仁藻酸致SD大鼠小脑变性损害的实验研究

目的通过观察绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠神经干细胞(NSCs)移植对海仁藻酸(KA)致SD大鼠小脑变性损害区的存活、迁移情况,为临床上NSCs移植治疗小脑变性提供理论依据。方法SD大鼠40只随机分为正常对照组(A组),KA损伤未移植组(B组),KA损伤后注射生理盐水组(C组),KA损伤后NSCs移植组(D组)。分离、培养GFP转基因小鼠的NSCs,以立体定向微量注射方法移植至KA致小脑变性损害区,进行行为学、免疫组化研究。结果(1)行为学观察:A组大鼠头部及口鼻呈机敏的探索状,四肢及躯干动作协调,尾巴稍抬高,可左右摆动。B组和C组表现为精神差,厌食,少动,行动摇晃迟缓,身体左右摇晃,头部触地,尾巴拖地,多次侧翻跌倒并自己不能翻正,嘴部寻找食物笨拙,过竿时间较A组明显延长。D组行为学表现及过竿时间较A组差,但优于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化发现NSCs在小脑变性区存活和迁移,未见细胞过度增生。植入细胞存活数随时间延长而减少,7 d、14 d、28 d分别为(102±67)、(58±77)、(24±6)个/HP,差异有统计学意义(P<0.01)。结论NSCs在小脑变性损害区能够存活、迁移,能够改善KA致小脑变性共济失调症状,提示NSCs移植可成为治疗小脑变性损害的治疗手段。     

Carisolv化学-机械去龋法在乳牙龋病治疗中的临床研究

目的：评价Carisolv化学机械去龋系统用于乳牙龋病的治疗效果。方法：收集3-11岁儿童乳牙龋病患者156例,随机分为两组,每组78例,分别采用Carisolv凝胶去腐和常规磨牙去腐,比较两组儿童的感受及治疗效果。结果：Carisolv凝胶治疗组痛苦小,两组术中疼痛发生率有显著差异（P〈0．05）,近期疗效评价两组的差别无统计学意义（P〉0．05）。结论：Carisolv化学机械去龋系统用于乳牙龋病的治疗安全、有效无痛。     

伤寒杆菌菌苗抗肿瘤的实验研究

应用伤寒杆菌菌苗作为疫苗对小鼠进行体内,外抗肿瘤治疗实验。结果表明腹腔注射一定剂量的伤寒杆菌菌苗在体内具有明显的抑制作用,而在体外对却多种瘤细胞无直接杀伤作用,提示伤寒杆菌菌苗的抑瘤作用是由机体介导的。进一步的免疫学指标显示以伤寒杆菌菌苗作为抗肿瘤商苗可增强荷瘤小鼠的ＮＫ细胞和Ｍφ细胞的杀伤活性。因此证明伤寒杆菌菌苗有较强的体内抗肿瘤作用。     

硝酸银和碘伏消毒后牙敏感中龋窝洞的临床疗效

目的 观察硝酸银和碘伏消毒后牙敏感中龋的临床疗效。方法 选择364颗后牙敏感中龋随机分成 治疗组和对照组各182颗,治疗组窝洞用硝酸银和碘伏消毒,对照组用75％酒精消毒。结果 硝酸银和碘伏消毒 治疗组有效率为99.4％,75％酒精消毒对照组有效率为75.8％。两组比较差异有显著性,P<0.05。结论 硝酸银和 碘伏消毒后牙敏感中龋窝洞疗效明显优于75％酒精消毒,是治疗牙敏感中龋的较理想方法。