Effect of neuropeptide Y on calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ in rat cardiomyocytes

Objective To explore the effect of neuropeptide Y (NPY) on calcium/calmodulindependent protein kinase Ⅱ (CaMK Ⅱ ) in rat cardiomyocytes.Methods The cardiomyocytes from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats were primarily cultured and divided into the control and NPY groups (n=6 each).The NPY group was added with 100 nmol/L NPY (final concentration), while the control group was left untreated.After 15 min, the activity of CaMK Ⅱ was detected by isotope 32P incorporation assay, and the expression of phospho - CaMK Ⅱ (p - CaMK Ⅱ ) protein by Western blotting.After 24 h, intranuclear concentration of Ca2+ in resting cardiomyocytes was recorded under laser scanning confocal microscope (LSCM).In addition, real-time PCR was used to detect the expressions of P-myosin heavy chain (β-MHC)mRNA and atrial natriuretic factor (ANF) mRNA in cardiomyocytes.Results After NPY stimulation for 15 min, the NPY group showed significantly elevated activity of CaMK Ⅱ (336 094.80±0 744.61 vs 273 301.50±±16 737..99, P＜0.05) and increased expression of p-CaMK Ⅱ protein in cardiomyocytes, compared with the control group.After 24 h, the NYP group showed a significant increase in intranuclear Ca2+ concentration compared wiith the control group (226.87±17.37 vs 84.04±6.50,P＜0.01).Moreover, real-time PCR also showed signficant increase in expressions of β- MHC and ANF mRNA.Conclusion The CaMK Ⅱ is activated with the increase of intranuclear Ca2+ concentration by NPY, which may play a major role in NYP-induced cardiomyocyte hypertrophy.     

神经肽Y活化大鼠心肌细胞内Ca2+及钙调素依赖的钙调神经磷酸酶途径

目的 观察神经肽 Y (NPY)对心肌细胞内Ca2+及钙调素(CaM)依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)信号传导途径的影响.方法 以NPY刺激心肌细胞.用环胞素A(CsA)特异性抑制CaN活性.应用Western印迹测细胞内CaN-α蛋白表达.采用组织化学法测CaN酶活性.用Fluo3-AM荧光标记法观察心肌细胞胞质及核内钙离子浓度变化.结果 加入100 nmol/L NPY刺激后,心肌细胞CaN酶活力较对照组明显增高(P＜0.05),10 nmol/L NPY组和CsA 组(100 nmol/L NPY + 5 μg/ml CsA) CaN酶活性与对照组相比,差异无统计学意义.100 nmol/L NPY组心肌细胞内CaN-α蛋白表达较对照组显著增高(P＜0.05). 加入100 nmol/L NPY在10 min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量与对照组相比,差异无统计学意义.经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(P均＜0.01).结论 NPY可活化心肌细胞内Ca2+及CaM-CaN途径.NPY刺激下产生的细胞内钙增加,可能是其活化CaN途径的始动环节.     

长期甲状腺素刺激对大鼠心肌Ca /钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的: 通过观察长期甲状腺素刺激对心肌Ca²⁺/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的影响,探讨CaMKII是否参与甲亢性心脏病的发生发展。方法: 将20只SD大鼠随机分为甲状腺素刺激组和对照组,每组各10只。以0.2 mg·kg^-1·d^-1的剂量腹腔注射甲状腺素或等体积生理盐水3个月(每次给药前称体重),造模后3个月处死大鼠。以心重(HW)、心重与体重之比(HW/BW)、左心室重与体重之比(LVW/BW)及心肌细胞直径大小反映心肌肥厚;以心肌血管周围胶原面积(PVCA)/血管腔面积(VA)的比值反映心肌纤维化。用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白表达水平反映CaMKII的变化。结果: 造模3个月后与对照组相比,甲状腺素刺激组的HW/BW、LVW/BW、心肌细胞直径大小和心肌纤维化程度(PVCA/VA)均明显高于对照组,分别是对照组的1.87、1.84、2.15和1.94倍,差异均显著(P<0.05,P<0.01);甲状腺素刺激组心肌细胞中CaMKII mRNA表达水平、蛋白含量与对照组相比均降低,分别是对照组的40%和79%,但CaMKII的活性较对照组增加1.58倍,其差异均显著(P<0.05)。结论: 长期甲状腺素刺激诱导大鼠心肌肥厚模型中,甲状腺素降低心肌CaMKII的表达,但心肌CaMKII的活性增加,CaMKII可能参与甲状腺素诱导的甲亢性心脏病的发生发展。     

钙信号早期干预对大鼠心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶信号途径及细胞凋亡的影响

通过建立肥大心肌细胞模型，研究钙通道阻滞剂对心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶II （calcium/calmodulin-dependent protein kinase II，CaMKII）的表达及钙离子浓度的变化对钙泵、ATP凋亡信号调节激酶（apoptosis signal-regulation kinase1 ASK1）、细胞活力及细胞凋亡率的影响，深入了解钙离子拮抗剂在心肌细胞肥大过程中的作用。通过早期应用钙离子拮抗剂，可以明显改善CaMKII信号系统的活性，保持心肌细胞内钙稳态，抑制心肌细胞的凋亡。     

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93对兔心衰模型心室肌细胞晚钠电流的影响

目的:探讨异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导兔心衰(heart failure,HF)时,兔心室肌细胞晚钠电流(late sodium current,I_(Na L))的变化及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)抑制剂KN-93对I_(Na L)的影响。方法:经兔耳缘静脉注射ISO(300μg·kg~(-1)·d~(-1),连续15 d)诱导兔HF模型;1月后行心脏彩超检查和HE染色观察心肌形态改变来评价HF模型;Western blot分析Na_V1.5、Ca MKⅡδ和磷酸化Ca MKⅡδ的蛋白水平;经Langendorff装置灌注消化生理盐水(normal saline,NS)组和HF组的兔心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录I_(Na L)。结果:与NS组相比,HF组兔心率增加(P0.01),心室腔增大(P0.05),心功能明显降低(P0.01);心肌细胞排列紊乱,呈空泡样变性,细胞间质存在水肿,纤维组织增多。HF组的Na_V1.5、Ca MKⅡδ及磷酸化Ca MKⅡδ的蛋白水平与NS组相比均明显增加(P0.01)。HF组的I_(Na L)与NS组相比明显增加(P0.01);加入海葵毒素Ⅱ(sea anemone toxinⅡ,ATXⅡ)后,HF组及NS组I_(Na L)均明显增加,且HF组比NS组增加更明显(P0.01);在ATXⅡ诱导电流增加稳定后,加入KN-93,NS组及HF组中I_(Na L)均明显减少(P0.05)。结论:Ca MKⅡ抑制剂KN-93能抑制心衰增加的I_(Na L),这一作用可能与影响Ca MKⅡδ活性及Ca MKⅡδ参与I_(Na L)的调控有关。     

戊四氮点燃癫痫大鼠学习记忆功能及海马神经元钙调素依赖性蛋白酶Ⅱ表达的变化

目的 观察戊四氮（PTZ）点燃癫痫对大鼠学习记忆功能的影响及海马神经元钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）表达的变化。方法 腹腔内连续注射PTZ制备点燃癫痫大鼠模型,用Morris水迷宫评测大鼠学习和记忆功能,用免疫组织化学技术观察海马神经元α-CaMKⅡ的表达。结果 与对照组大鼠比较,在Morris水迷宫试验中,PTZ组寻找平台的逃避潜伏期显著延长（P<0.05）,游泳距离显著增加（P<0.05）,穿越平台的次数及在平台象限的游泳距离的百分率显著减少（P<0.05）,搜索策略变差,同时伴有海马CA1、CA3区α-CaMKⅡ表达明显减少（P<0.05）。结论 PTZ点燃癫痫大鼠学习和记忆功能受损可能与海马CA1、CA3区α-CaMKⅡ表达减少有关。     

高脂血症对大鼠大脑皮质神经肽Y能神经元的影响

目的观察高脂血症对大鼠大脑皮质神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)能神经元的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为实验组和对照组(n=30)。实验组饲以高脂饲料,于高脂饲料喂养7d、30d、90d后取大脑组织行免疫组化染色,显微图像分析。结果与正常对照组相比,高脂饲料喂养30d和90d后,大鼠血清总胆固醇浓度显著升高,NPY免疫阳性神经元数目和光密度增加(p<0.05),90d显著增加(p<0.01)。结论高脂血症时,NPY在大鼠大脑皮质过表达。     

皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2 ]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式[、Ca2 ]i和CaMKⅡ表达的变化规律。结果:1 0-6和1 0-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2 ]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少。MK-8 0 1和高浓度葡萄糖均能拮抗1 0-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用。结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2 ]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因。     

神经肽Y活化大鼠心肌细胞内Ca^2＋及钙调素依赖的钙调神经磷酸酶途径

目的 观察神经肽 Y （NPY）对心肌细胞内Ca^2＋及钙调素（CaM）依赖的钙调神经磷酸酶（CaN）信号传导途径的影响.方法 以NPY刺激心肌细胞.用环胞素A（CsA）特异性抑制CaN活性.应用Western印迹测细胞内CaN-α蛋白表达.采用组织化学法测CaN酶活性.用Fluo3-AM荧光标记法观察心肌细胞胞质及核内钙离子浓度变化.结果 加入100 nmol/L NPY刺激后,心肌细胞CaN酶活力较对照组明显增高（P＜0.05）,10 nmol/L NPY组和CsA 组（100 nmol/L NPY ＋ 5 μg/ml CsA） CaN酶活性与对照组相比,差异无统计学意义.100 nmol/L NPY组心肌细胞内CaN-α蛋白表达较对照组显著增高（P＜0.05）. 加入100 nmol/L NPY在10 min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量与对照组相比,差异无统计学意义.经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组（P均＜0.01）.结论 NPY可活化心肌细胞内Ca^2＋及CaM-CaN途径.NPY刺激下产生的细胞内钙增加,可能是其活化CaN途径的始动环节.     

不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层Ng、PKC、CaMKⅡ mRNA表达的影响

目的：探讨不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层神经颗粒素（Ng)、蛋白激酶C (PKC)、 Ca2+ -CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）mRNA表达的影响。方法： 雄性Wistar大鼠随机分为3组,即24 h实验组、48 h实验组和72 h实验组,每组再分为睡眠剥夺组（SD组）和对照组（C组）。利用睡眠剥夺箱建立大鼠SD模型,Trizol一步法提取海马和前额皮层总RNA,用SYBRA　green Ⅰ荧光定量RT-PCR测定Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA水平。结果： (1)大鼠海马Ng mRNA水平在睡眠剥夺24 h、48 h和72 h后,较对照组均显著降低（P＜0.05）,PKC和CaMKⅡ mRNA水平在睡眠剥夺48 h和72 h后显著降低（P＜0.05）; (2)在睡眠剥夺24 h和48 h后,大鼠前额皮层Ng、PKC和 CaMKⅡ mRNA水平较对照组有降低趋势,在睡眠剥夺72 h后均显著降低（P＜0.05）。结论： 睡眠剥夺可以使大鼠海马和前额皮层Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA表达水平降低,且随着睡眠剥夺时间的延长,降低更为明显,这可能是睡眠剥夺损害认知功能的原因之一。     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓厚片Ca2+荧光强度的影响

目的　探讨中药脊髓Ⅰ号对脊髓厚片Ca2 + 荧光强度的影响。方法　将 33只Wistar大鼠随机分为 3组 :下胸段脊髓半横断组 (损伤组 )、对照组和中药脊髓Ⅰ号治疗组。快速处死大鼠 ,取下胸段脊髓 ,切脊髓厚片 ,用Fluo 3荧光染料孵育 ,激光共聚焦显微镜观察。结果　损伤组、对照组和中药治疗组左侧Ca2 + 荧光强度分别为 12 6 3± 3 2 7、13 34± 3 5 1和 12 89±3 31,右侧分别为 2 1 6 8± 3 6 9、14 72± 2 12和 12 97± 3 6 0 ,损伤组脊髓厚片损伤侧Ca2 + 荧光强度显著升高 ,治疗组两侧灰质Ca2 + 荧光强度无显著差异。结论　 (1)损伤侧Ca2 + 荧光强度显著升高 ;(2 )中药脊髓Ⅰ号对Ca2 + 荧光强度的升高有一定抑制作用。     

人CaMKKβ蛋白的原核表达、纯化及活性测定

目的对原核体系表达的CaMKKβ蛋白体外活性进行探索,为针对CaMKKβ、AMPK药物研发提供科研基础。方法克隆人CaMKKβ基因,建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ,将其转化入E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内,在16℃、0.02 mmol/L IPTG条件下诱导重组表达CaMKKβ蛋白,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白,并利用Glo?Max Assay方法检测其活性。结果通过基因测序表明pET28a-CaMKKβ质粒构建成功;重组人CaMKKβ蛋白可溶性表达量较高,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白纯度可达80%以上,活性检测结果表明,大肠杆菌体系内表达的人CaMKKβ蛋白在CaM/Ca2+存在与否情况下,酶活基本一致。结论成功构建原核表达载体pET28a-CaMKKβ,实现重组人CaMKKβ在原核体系内可溶性表达,活性测定表明原核体系内表达的CaMKKβ自主酶活性较强,受CaM/Ca2+影响较小。     

大鼠心冠状动脉系统神经肽Y年龄变化的免疫组织化学研究

运用免疫组化ＡＢＣ法对不同月龄ＳＤ大鼠心脏冠状动脉及其分支含神经肽Ｙ神经纤维的分布及其衰老变化作了详细观察．结果表明：左、右冠状动脉及其各级分支具有丰富的神经肽Ｙ能神经分布．在冠状动脉主干及其较大分支上，神经纤维较稠密，主要呈环状或网状分布，在血管围周形成较多束、丛、网，并伸入血管壁内形成壁内的神经网络分布．部分神经纤维的游离末梢有穿过血管内膜伸向腔面的迹象．在细小的冠状动脉分支上，神经纤维密度减低，主要沿血管长袖是纵向分布．两侧冠状动脉系统神经肽Ｙ能纤维分布形式及密度没有差别．老龄组动物，左、右冠状动脉及其分支的神经肽Ｙ能纤维密度趋于下降，纤维变细，呈断续状，膨体数量减少，免疫染色变浅、此外，在心内发现了神经肽Ｙ能神经节．     

葛根总黄酮对离体神经肽Y诱导的心肌细胞肥大的影响

目的:观察葛根总黄酮对离体神经肽Y(NPY)诱导的心肌细胞肥大效应的影响。方法:建立体外培养的大鼠心肌细胞培养体系,实验分(1)对照组、(2)NPY组:加入终浓度为100 nmol/L的NPY、(3)NPY+葛根总黄酮4个浓度组:分别加入100 nmol/L NPY和0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L的葛根总黄酮。应用氚-亮氨酸([³H-Leu])掺入法测定心肌细胞蛋白合成率;RT-PCR法测心肌细胞C-jun mRNA表达;组织化学法测心肌钙调磷酸酶(CaN)活性。结果: NPY组心肌细胞[³H-Leu]掺入量为896±34;C-jun mRNA表达为23 132.62±1 787.28;CaN活性为35.62±4.60,与对照组(分别为[³H-Leu]752±46、C-jun mRNA 17 819.49±1 452.06、Can22.94±6.20)相比有显著差异(P＜0.01、P＜0.05)。而葛根总黄酮1-3 mg/L可使在NPY作用下的心肌细胞[³H-Leu]掺入量下降(3个剂量组分别为797±78、772±58、786±43);C-jun mRNA表达减少(分别为18 035.32±1 592.23、18 043.90±1 726.19、18 072.29±1 692.34);CaN活性降低(分别为28.34±6.40、25.69±5.90、26.37±3.50)与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。结论:NPY可诱导心肌细胞肥大;葛根总黄酮在1-3 mg/L浓度可阻断其效应,其作用可能与抑制CaN活性、阻断Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径有关。     

钙／钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ对心肌细胞钙循环的影响

在心衰、心肌肥厚和心肌缺血等情况下,心肌细胞钙离子循环常出现障碍,导致心脏电-机械活动异常,临床发现心律失常和心源性猝死常和钙循环异常有关.钙调素和钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)通过调节钙循环的各个环节来影响心肌细胞信号传导和兴奋-收缩偶联,在心衰或心肌肥厚等病理条件下细胞内表达升高.对其深入研究有利于了解这些病理情况下心律失常发生的机制.     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠生后海马发育中的表达

目的 探讨Wistar大鼠生后海马发育过程中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的表达。 方法 应用免疫荧光方法检测CaMKⅡ在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回（DG）中的表达情况（n =48）。结果 CaMKⅡ于生后各期海马CA1区和DG的表达逐渐增强，生后第10天（P10）达高峰期，此后逐渐减弱；于CA3区的表达在P4和P10时均较高。其中，CaMKⅡ在CA3区的表达高于在CA1区和DG的表达，在多形层和分子层的表达高于在锥体细胞层或颗粒细胞层的表达。结论 CaMKⅡ在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异性的时空分布模式，这可能与其在生后发育过程中的突触发生，树突、轴突形成，海马的成熟以及学习记忆功能相关。     

TNF-α和钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠心肌缺血后适应中的作用

目的: 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肌浆网钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在大鼠心肌缺血后适应发生机制中的作用。方法: SD大鼠随机分为5组(各组n=16),包括假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IP组)、重组人肿瘤坏死因子受体:Fc融合蛋白(rhTNFR:Fc)+缺血再灌注组(F+IR组)和rhTNFR:Fc+缺血后适应组(F+IP组)。结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注损伤和缺血后适应模型,测量各组心肌梗死面积;RT-PCR及Western blotting测定心肌TNF-α mRNA和蛋白及CaMKⅡ含量和活性。结果: (1)与sham组比较,IR组梗死面积/缺血区面积及缺血区面积/总面积的比值均显著增加(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组这2个比值均显著减少(P<0.01),其中F+IP组减少更为明显。(2) 与sham组比较,其余各组心肌组织TNF-α mRNA和蛋白均显著升高(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组TNF-α表达均显著降低(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组CaMK Ⅱ活性均明显升高(P<0.01),其中以F+IP组升高最为显著。(4)与sham组比较,IR组和IP组肌浆网CaMKⅡ活性显著降低(P<0.01),而F+IR组和F+IP组均明显升高;与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组CaMKⅡ活性均明显升高(P<0.01),其中以F+IP组升高最为显著。结论: 缺血后适应可通过降低缺血再灌注时心肌组织TNF-α mRNA和蛋白表达、增加CaMKⅡ含量和活性发挥心肌保护作用。     

神经肽Y、瘦素在Ⅱ型糖尿病大鼠垂体中的表达及丝胶的保护作用

目的:观察丝胶对Ⅱ型糖尿病大鼠垂体神经肽Y(NPY)和瘦素(leptin)表达的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丝胶组和二甲双胍组.模型组、丝胶组和二甲双胍组均建立链脲佐菌素致Ⅱ型糖尿病模型,以血糖≥16.7 mmol/L为成模标准;丝胶组和二甲双胍组分别于成模后给予丝胶和二甲双胍灌胃35 d.采用酶法检测各组大鼠血糖、免疫组织化学显色和RT PCR观察各组大鼠垂体NPY和瘦素及mRNA的表达.结果:与模型大鼠相比,丝胶组和二甲双胍组大鼠血糖、NPY和瘦素及mRNA表达明显降低,且两组比较无明显差别.结论:丝胶可下调垂体NPY和瘦素的高表达,对Ⅱ型糖尿病垂体损伤具有保护作用;且作用与二甲双胍相当.     

过氧化氢对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2表达的影响及CaMKⅡ的作用

目的： 探讨过氧化氢（H₂O₂）对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2（COX-2）表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在其中的作用。方法: 采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H₂O₂处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性，采用RT-PCR检测 COX-2 mRNA的表达水平，采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果: H₂O₂增强COX-2表达，呈浓度和时间依赖性。100 μmol/L H₂O₂处理肺动脉内皮细胞4 h，COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组，COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%（P<0.05），蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%（P<0.05）。 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H₂O₂的这一效应。结论: H₂O₂可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达，CaMKⅡ是H₂O₂增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。     

左卡尼汀通过抑制钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号通路抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡

 目的： 观察左卡尼汀对过氧化氢（H2O2）诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法：利用200 μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N, N, N′, N′-四乙酸(BAPTA)、钙调素依赖蛋白激酶II (CaMKII)特异性抑制剂KN93及左卡尼汀分别于加入H2O2前30 min或1 h加入,以检测这3种药物对H2O2刺激下心肌细胞活力、细胞凋亡、细胞内静息钙浓度（［Ca2+］i）及磷酸化CaMKII (p-CaMKII)表达的影响。利用MTT比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;利用激光共聚焦扫描检测［Ca2+］i;蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达。结果：模型组经200 μmol/L H2O2作用12 h后,细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加。BAPTA、KN93及左卡尼汀预处理显著抑制上述细胞损伤。进一步研究发现,H2O2 诱导的 ［Ca2+］i水平升高、cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达增加均可被上述3种药物不同程度地抑制。结论：左卡尼汀可抑制H2O2所致的心肌细胞凋亡,该心肌保护作用可能与其抑制Ca2+/CaMKⅡ信号通路有关。