慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用。方法:用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢（海马CA1区、齿状回、大脑皮层）L-ENK的变化。结果:大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响。结论:逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优。     

慢性束缚应激模型大鼠海马脑啡肽mRNA和前强啡肽mRNA的表达及中药复方的影响

目的:探讨中药复方逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸抗慢性束缚性应激的机理。方法:采用单纯束缚的方法建立慢性束缚性应激的大鼠模型,提取海马总RNA,采用RT-PCR反应扩增脑啡肽和前强啡肽基因,比较二者在海马中的表达情况。结果:显示慢性束缚应激时大鼠海马内脑啡呔mRNA和前强啡肽mRNA的表达明显增强,并且时间越长增强越明显。逍遥散和四君子汤都能降低海马内脑啡肽mRNA的表达,三个复方都能降低前强啡肽mRNA的表达,逍遥散的作用明显优于金匮肾气丸。结论:脑啡肽和前强啡肽都参与了海马对应激的调控,对内源性阿片系统的调节是三个中药复方调节应激的重要途径之一。     

慢性束缚应激大鼠海马BDNF TrkB NT3的变化及逍遥散对其影响

目的：观察慢性束缚应激时大鼠海马BDNF、TrkB、NT，的变化及逍遥散对其影响。方法：用束缚的方法建立了应激模型。用心脏灌流的方法固定海马，切片后用免疫组织化学结合图像分析的方法观察了海马CA1区BDNF、TrkB、NT，变化情况。结果：发现海马中BDNF和NT3的阳性细胞数和积分光密度下降，TrkB阳性细胞数和积分光密度明显上升。逍遥散能不同程度的抑制海马中BDNF和NR阳性细胞数和积分光密度的下降以及TrkB阳性细胞数和积分光密度的上升。结论：BDNF、TrkB、NT3在慢性应激中发挥了重要作用，逍遥散可能正是通过它们的变化，作用于HPA轴引起机体免疫功能变化的。     

慢性束缚应激大鼠海马BDNF TrkB NT3的变化及逍遥散对其影响

目的:观察慢性束缚应激时大鼠海马BDNF、TrkB、NT3的变化及逍遥散对其影响.方法:用束缚的方法建立了应激模型,用心脏灌流的方法固定海马,切片后用免疫组织化学结合图像分析的方法观察了海马CA1区BDNF、TrkB、NT3变化情况.结果:发现海马中BDNF和NT3的阳性细胞数和积分光密度下降,TrkB阳性细胞数和积分光密度明显上升.逍遥散能不同程度的抑制海马中BDNF和NT3阳性细胞数和积分光密度的下降以及TrkB阳性细胞数和积分光密度的上升.结论:BDNF、TrkB、NT3在慢性应激中发挥了重要作用,逍遥散可能正是通过它们的变化,作用于HPA轴引起机体免疫功能变化的.     

慢性束缚应激大鼠下丘脑β-内啡肽变化及中药复方对其的影响

目的 :研究慢性束缚应激时大鼠下丘脑 β 内啡肽 (β endorpin ,β EP)的变化以及逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸 3种中药复方对其的影响。方法 :用特制束缚架连续束缚 7天与 2 1天 ,每天 3h的方法 ,制作大鼠束缚应激模型 ,用免疫组织化学方法结合图像分析检测下丘脑β 内啡肽的变化。结果 :2 1天模型组较正常对照组大鼠下丘脑β EP免疫反应强度、阳性细胞数目及阳性细胞平均总面积均明显增强、增多、增大 (P <0 0 5 )。与 2 1天模型组比较 ,逍遥散组及肾气丸组能显著降低下丘脑 β EP免疫反应阳性强度 (P <0 0 5 ) ,减少下丘脑 β EP免疫反应阳性细胞数目 (P <0 0 5 ) ,减小下丘脑 β EP免疫反应阳性细胞平均总面积 (P <0 0 5 )。     

逍遥散对肝郁脾虚证大鼠边缘系统神经元超微结构的影响

目的:探讨慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠海马CA1区和杏仁核细胞超微结构的变化,明确逍遥散和6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)对慢性应激所致肝郁脾虚证的保护作用及其机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、逍遥散组(D组)、CNQX组(E组)和逍遥散+CNQX组(F组)。C、D、E、F组大鼠通过连续21d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,D、F组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32g/kg,E、F组大鼠在第1、4、7、10、13、16、19、21d右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX0.5μl。第22d处死动物,用透射电镜方法观察海马CA1区和左侧杏仁核神经细胞和突触的形态结构。结果:模型组大鼠海马出现了细胞核变形、线粒体嵴模糊,突触结构不清等,正常组、假手术组和给药各组大鼠CA1区未见明显异常;各组大鼠杏仁核均未见明显异常。结论:逍遥散可改善慢性束缚应激导致的海马CA1区超微结构的损伤,其作用机制可能与CNQX一致。     

逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区GAP-43和Nogo-AmRNA基因表达的调节作用

目的 观察海马及杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散对其表达变化的作用.方法 使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA表达的情况.结果 在慢性束缚应激中,GAP-43 mRNA在海马各区的21天模型中都下调(P<0.01和P<0.05),在CA3和DG区的影响较大(7天和21天模型都下调),而在杏仁核中上调显著(P<0.01和P<0.05).Nogo-AmRNA在海马各区的21天模型中都上调(P<0.01和P<0.05),以CA3的影响明显,而在杏仁核中下调显著(P<0.01).束缚时间越长,对它们的影响愈大.在CA1区,7天模型组中,GAP-43mRNA没有变化(P>0.05),在CA3和BLA区7天模型组中,No go-AmRNA都没有变化(P>0.05).慢性束缚应激明显地影响了大鼠海马和杏仁核中GAP-43和Nogo-AmRNA基因的转录情况,引起突触结构的改变可能影响了突触可塑性.逍遥散对慢性束缚应激引起的GAP-43和Nogo-AmRNA基因转录可能有明显的调节作用,但有选择性,总的来说CA3和D G区的作用明显,而在CA1的7天模型组中没有作用.结论 逍遥散可双向的调节CA3和D G区的GAP-43和Nogo-AmRNA基因转录水平,可能影响突触可塑性.     

逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区GAP-43和Nogo-AmRNA基因表达的调节作用

目的观察海马及杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散对其表达变化的作用。方法使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回（DG）、杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA表达的情况。结果在慢性束缚应激中,GAP-43mRNA在海马各区的21天模型中都下调（P〈0.01和P〈0.05）,在CA3和DG区的影响较大（7天和21天模型都下调）,而在杏仁核中上调显著（P〈0.01和P〈0.05）。Nogo-A mRNA在海马各区的21天模型中都上调（P〈0.01和P〈0.05）,以CA3的影响明显,而在杏仁核中下调显著（P〈0.01）。束缚时间越长,对它们的影响愈大。在CA1区,7天模型组中,GAP-43mRNA没有变化（P〉0.05）,在CA3和BLA区7天模型组中,No go-A mRNA都没有变化（P〉0.05）。慢性束缚应激明显地影响了大鼠海马和杏仁核中GAP-43和Nogo-A mRNA基因的转录情况,引起突触结构的改变可能影响了突触可塑性。逍遥散对慢性束缚应激引起的GAP-43和Nogo-A mRNA基因转录可能有明显的调节作用,但有选择性,总的来说CA3和D G区的作用明显,而在CA1的7天模型组中没有作用。结论逍遥散可双向的调节CA3和D G区的GAP-43和Nogo-A mRNA基因转录水平,可能影响突触可塑性。     

逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区NMDAR2A和NMDAR2BmRNA基因表达的调节作用

目的:观察海马及杏仁核N-甲基D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid(NMDA)受体NMDAR2A(NR2A)和NMDAR2B(NR2B)的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及道遥散的作用。方法:使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CAI区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核NMDA受体NMDAR2A和NMDAR2B的蛋白mRNA表达的情况。结果:NR2AmRNA和NR2BmRNA在海马的CA1,CA3,DG和BLA都有不同程度的基因转录。NR2AmRNA在CA3,DG和BLA区,7天和21天模型组的表达均下调(P0.05和P0.01),在CA1区不明显。NR2BmRNA在CA1,CA3,DG和BLA区,21天模型组的表达均下调(P0.05和P0.01),在CA1和BLA区7天模型组表达不变。逍遥散对CA3和DG区的NR2AmRNA和NR2BmRNA有明显的调节作用,在CA3和DG区7天和21天的表达均上调(P0.05和P0.01)。而在CA1区对NR2AmRNA和NR2BmRNA没有调节作用。其中以CA3区和DG区的调节作用最明显,这里可能是逍遥散的调节靶点。结论:逍遥散在海马和杏仁核区对慢性束缚应激引起的神经传递的改变有明显的双向调节作用,可以影响突触可塑性,以适应机体的功能,主要靶点在CA3和DG区。     

逍遥散调节肝郁脾虚大鼠中枢AMPA受体及相关蛋白的机制研究

目的:观察逍遥散和6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)对慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠中枢AMPA受体及其相关蛋白表达的影响,探讨逍遥散的作用机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、逍遥散组(D组)、CNQX组(E组)和逍遥散+CNQX组(F组)。C、D、E、F组大鼠通过连续21d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,D、F组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32g/kg,E、F组大鼠隔天右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX 0.5μL。各组动物第22d处死,免疫组化方法检测海马CA1区、CA3区、基底外侧杏仁核(BLA)谷氨酸受体2/3(GluR2/3)、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)水平。结果:模型大鼠GluR2/3在海马CA1、CA3区明显减少,BLA区明显增加;NSF在海马CA1、CA3区有减少趋势;PICK1在海马CA3区明显增加。CNQX和逍遥散对模型大鼠GluR2/3 PICK1在海马的变化均有调节作用。逍遥散联合CNQX作用于慢性束缚应激大鼠与单独使用逍遥散或CNQX后呈现一致性。结论:调节AMPA受体及其相关蛋白在海马各区和杏仁核的兴奋性至少是逍遥散调节突触可塑性、进一步治疗应激和抑郁的作用途径之一。     

加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA，区nNOS表达的影响

目的：探讨加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA,区nNOS表达的影响。方法：腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型,造模后以免疫组化法观察加味金匮肾气丸对大鼠脑海马CA。区神经元nNOS表达的影响。结果：加味金匮肾气九治疗组比糖尿病大鼠nNOS表达增加（P〈0．05）。结论：加味金匮肾气丸可以有效防治糖尿病大鼠海马CA。区神经元退行性变化。     

束缚应激大鼠中枢AMPA受体和相关蛋白mRNA表达的变化及逍遥散对其调节作用

目的观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体各亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散的作用。方法使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回（DG）、杏仁核AMPA受体亚基GluR1-4、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性融合蛋白（NSF）、PKC作用蛋白1（PICKl）mRNA表达的情况。结果7天束缚应激状态下,GIuRlmRNA在海马CA1区表达显著下降（P〈0．05）,在CA3区和杏仁核表达显著上升（均P〈0．05）,GluR2、GluR3mRNA在杏仁核（均P〈0．05）,GluR4mRNA在CA1区（P〈0．01）表达显著增高,NSF、PICK1mRNA表达在杏仁核有明显增高趋势;逍遥散对CA1区GluR4及杏仁核GluRl、GluR2、GluR3mRNA表达变化有显著调节作用（P〈0．05,P〈0．01）。21天束缚应激状态下,CA1区GluR4、DG的GluR2mRNA表达显著下降（均P〈0．05）,杏仁核GluRlmRNA表达显著增强（P〈0．01）;逍遥散对CA1区GIuRl、GluR4mRNA表达变化有显著调节作用（均P〈0．05）。结论短期重复应激对于AMPA受体各亚基mRNA表达的影响较强,逍遥散对AMPA受体各亚基mRNA表达的调节在海马CA1区和杏仁核较明显。     

加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA_1区神经营养因子-3表达的影响

目的探讨加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA1区神经营养因子3（NT-3）表达的影响。方法腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型,造模后以免疫组化法观察加味金匮肾气丸对大鼠脑海马CA1区NT-3表达的影响。结果加味金匮肾气丸治疗组比糖尿病组大鼠脑海马CA1区NT-3表达增加。结论加味金匮肾气丸可以有效防治糖尿病大鼠脑海马CA1区神经元退行性变化。     

加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA1区神经营养因子-3表达的影响

目的探讨加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA1区神经营养因子3(NT-3)表达的影响。方法腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,造模后以免疫组化法观察加味金匮肾气丸对大鼠脑海马CA1区NT-3表达的影响。结果加味金匮肾气丸治疗组比糖尿病组大鼠脑海马CA1区NT-3表达增加。结论加味金匮肾气丸可以有效防治糖尿病大鼠脑海马CA1区神经元退行性变化。     

Xiaoyaosan improves depressive-like behaviors by regulating the NLRP3 signaling pathway in the rat cerebral cortex

ObjectiveTo observe changes in the molecular expression of the NLR Family Pyrin Domain Containing Protein 3 (NLRP3) pathway in depressed rats after treatment with Xiaoyaosan, and identify the regulatory mechanism of this compound.MethodsMale Sprague–Dawley rats were randomly divided into five groups with 12 rats in each group, including the control group, model group, Fluoxetine group, Xiaoyaosan group, and MCC950 group. A depression model was generated by chronic immobilization stress (induced by 3 h of restraint immobilization every day), and the drugs were administered at the same time in each group for 21 days. The effects of Xiaoyaosan on behavioral changes of depressed rats were observed through macroscopic characterization, body mass, open field experiments, and a sucrose preference test. The mRNA and protein expression of the NLRP3 signaling pathway was examined by fluorescence real-time quantitative PCR and Western blot assays.ResultsThe Xiaoyaosan group, Fluoxetine group, and MCC950 group rats showed improved depressive behavior and an increased weight of sucrose water consumption. The protein and mRNA expression levels of NLRP3, Caspase-1, and IL-1β were also decreased in the Fluoxetine, Xiaoyaosan, and MCC950 groups.ConclusionNLRP3, Caspase-1, and IL-1β protein and mRNA expression levels were increased in the cortex of depressed rats, while Xiaoyaosan protected cortical tissue in these rats by decreasing NLRP3, Caspase-1, and IL-1β protein and mRNA expression.     

逍遥散对CUMS大鼠海马CA1区PI3K/AKT信号通路的调节作用研究

目的：本研究旨在探讨逍遥散通过调节PI3K/AKT信号通路进而改善由谷氨酸引起的兴奋性损伤的机制。 方法：100只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组和氟西汀组,利用CUMS方法造模成为抑郁模型大鼠,上述组别分别予以双蒸水、双蒸水、逍遥散药液、氟西汀溶液连续灌胃3周,后进行行为学观察及相关指标检测。采用旷场试验(OFT)和蔗糖偏好试验(SPT)评价逍遥散的抗抑郁作用;ELISA法测定海马组织中5-HT、NE水平;比色法检测各组大鼠海马CA1区谷氨酸水平; RT-qPCR检测海马CA1区NR2B、PI3K的mRNA水平;western blot检测海马CA1区NR2B、PI3K、P-AKT、Akt的蛋白表达。 结果：逍遥散的体内干预可显著提高抑郁大鼠海马组织中的5-HT、NE水平、降低海马CA1区谷氨酸水平、增加了海马CA1区NR2B、PI3K及P-AKT/AKT比值,显著改善了大鼠的抑郁症状。 结论:逍遥散可显著改善经慢性应激刺激后大鼠的抑郁样行为,其机制可能与降低谷氨酸兴奋性毒性,从而提高PI3K/Akt信号通路活性有关。     

原发性甲状腺功能减退症的以方测证研究

目的:观察不同方药对甲减鼠甲状腺功能、形态的影响,探求原发甲减的病机。方法:Wistar大鼠70只,20只为正常组,正常饲养;50只为实验组,参照Kolaja法造模,成模后随机分成4组:模型组、补中益气汤组、逍遥散组和金匮肾气丸组,给予相应处理因素,90天后观察甲状腺功能和形态。结果:①血清TT3:补中益气汤组低于正常组,高于模型组,高于其他两组,与逍遥散组比,P<0.05,与金匮肾气丸组比,P>0.05。逍遥散组和金匮肾气丸组均明显低于正常组。②血清TT4:其余4组与正常组比,P均<0.05,但各组间比较无显著性差异。③血清TSH:补中益气汤组高于正常组,低于模型组,与其他两组比,P均<0.05。④甲状腺相对重量:补中益气汤组高于正常组、低于模型组,P均<0.05,低于其他两组,但P>0.05。逍遥散组和金匮肾气丸组均高于正常组,P均<0.05。⑤甲状腺形态:三治疗组均可使甲状腺滤泡增生及血流方面有不同程度的改善,以补中益气汤组明显,但仍未恢复正常。结论:在低碘致甲减机体中,补中益气汤可以较好地改善甲状腺功能及形态,从而推测脾气虚弱在甲减发病中起重要作用。     

逍遥散对慢性应激损伤大鼠NR受体亚型表达的影响

目的:本研究用逍遥散和糖皮质激素受体(GR)阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其海马区NR受体亚型表达情况。方法:以逍遥散(5.265g/kg)和GR受体阻滞剂RU-38486(12.5g/kg)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给予实验药物,3周后停止刺激,于第22天处死大鼠取材。采用荧光免疫组织化学法,测定各组大鼠海马区NR表达。结果:GR受体阻滞剂RU-38486与中药复方逍遥散可显著下调慢性应激损伤大鼠海马区NR阳性表达。结论:逍遥散可以通过促进慢性应激损伤大鼠海马区NR表达下调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺(HPA)轴负反馈功能的作用,起到缓解诸应激症状的疗效。     

舒郁宁心汤对抑郁模型大鼠海马区脑源性神经营养因子和酪氨酸激酶B表达的影响

目的 观察舒郁宁心汤对慢性应激抑郁模型大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶B(TrkB)表达的影响,探讨其抗抑郁机理.方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组及中药(舒郁宁心汤)高、中、低剂量组.复制孤养加慢性轻度不可预见性的应激抑郁模型,造模成功后分组进行药物干预.21 d后采用免疫组化方法观察大鼠海马区BDNF和TrkB表达的变化.结果 与空白组比较,模型组大鼠BDNF和TrkB阳性表达降低(P＜0.01);与模型组相比,中药高、中剂量组及氟西汀组大鼠海马区BDNF和TrkB阳性表达提高(P＜0.05).结论 舒郁宁心汤可能通过提高海马组织BDNF和TrkB的表达起到治疗抑郁症的作用.