高致病性禽流感的流行及其预防控制

禽流行性感冒（简称禽流感，Avian influenza，AI）也称禽流感综合征，是由A型流感病毒（Avian influenza vires，AIV）引起的急性、高度致死性、烈性传染病。该病已被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。AIV依据其外膜血凝素（Hemagglutinin，H）和神经氨酸酶（Neuraminidase，N）抗原性的不同，目前至少可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1-N9）。由H5和H7亚型毒株（以H5N1和H7N7为代表）所引起的禽类疾病称为高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HeM），其发病率和病死率都很高，危害极大。     

禽流感与人类健康

禽流感（Avian Influenza，AI）是由禽流感病毒引起的一种从呼吸系统到全身性败血症等多种症状的传染性疾病综合征。禽流感病毒在分类地位上与人的流感病毒一样。属于正粘病毒科，A型流感病毒属，单股负链分节段的RNA病毒。根据表面糖蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性差异可分为不同的亚型。到目前为止，已经鉴定了16种H亚型（H1-H16）和9种N亚型（N1-Ng）。禽流感病毒根据其对鸡致病性的强弱可分为高致病性和低致病性两种。高致病性禽流感病毒可引起鸡群高达100％的死亡率，故被世界动物卫生组织（OIE）列为A类疾病。低致病性禽流感病毒可引起温和的呼吸道疾病，但在混合感染或环境因素的作用下可引起严重的疾病。近年来H5N1和H9N2等亚型的禽流感病毒感染人的事件，表明家禽是禽流感人畜传播潜在的中间宿主。这也使得世界各国对禽流感的关注程度大大提高。因此，开展对禽流感病毒的研究，从分子水平掌握禽流感病毒的流行规律和致病机理，不仅在病毒学、兽医学等学科上有重要的学术意义，而且在公共卫生等方面也具有重大的社会意义。     

禽流感与公共卫生

近年来，H5N1亚型高致病性禽流感在东南亚多个国家爆发，给养禽业带来沉重打击。H5N1亚型禽流感病毒还在越南、泰国、印尼、柬 埔寨和中国引起160多人感染，导致半数以上感染者死亡。禽流感这一重大禽类疫病，目前已成为公共卫生面临的最大威胁。本文对流感及流感病毒、H5N1亚型禽流感病毒跨越禽-哺乳动物种间屏障的分子机制进行了综述，并对今后禽流感的防治提出了建议。     

加强监测是应对流感大流行的基础

高致病性禽流感病毒H5N1自1997年发生18人感染6人死亡疫情以来,一直受到国际社会的高度关注,特别是自2003年以来高致病禽流感病毒H5N1动物疫情在亚洲已成地方性流行,并且已经蔓延到欧洲和非洲.人感染病例以及发生人感染病例的国家和地区不断扩大,2003年底以来,截止2006年3月15日,全球新发人禽流感（H5N1）病例数已上升至176例,其中死亡97例.我国自2005年10月第一例禽流感病毒H5N1感染病例确诊以来一共有15例,其中10例死亡.高致病性禽流感病毒H5N1目前不仅对禽类带来巨大威胁,严重影响国家的经济发展,而且对人类健康也带来巨大的威胁,会不会由H5N1禽流感病毒导致一次流感大流行已引起全球的高度关注.流感大流行的发生一般应包括以下几个条件：（1）一种新的流感病毒亚型感染人或一种已经消失很长时间的旧亚型的重现;（2）人群普遍缺乏免疫力;（3）具有一定的发病率和病死率;（4）能够在人群广泛传播.目前H5N1病毒可以说具备了前3个条件,到目前为止还没有具备人传人的能力,一旦病毒发生变异具备第4条就有可能导致流感大流行,如何应对流感大流行已得到各国政府和各种国际组织的高度重视.流感大流行的应对涉及各个方面,其中包括疫苗、药物、检测技术以及医疗救治和宣传教育等各个方面,而对禽流感病毒的监测是各种应对措施的基础.……     

流感及H5N1亚型禽流感病毒液相检测芯片的制备

目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒（H5N1）的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据保守序列,设计针对各基因的简并引物和寡核苷酸探针,制备探针偶联微球,将样本核酸多重PCR扩增产物与微球进行杂交,以Bio-Plex液相芯片检测系统进行芯片检测。结果 该方法可以对甲型流感病毒的NP基因、乙型流感病毒的HA基因以及高致病性禽流感病毒（H5N1）的H5、N1基因同时进行检测,病毒核酸的最低检出量为1pg,检测特异性高。结论 成功构建了甲、乙型流感病毒和H5N1亚型高致病性禽流感病毒液相芯片检测系统,为流感、禽流感的快速检测、诊断奠定了基础。     

检测禽流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立

禽流行性感冒（avian influenza,AI）简称禽流感,是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类传染病。高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza,HPAI）被世界动物卫生组织（world organization for animal health,OIE）列为A类传染病。我国也把禽流感列为一类动物疫病。禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）可感染几乎所有野生禽及家禽,     

我国分离人H5N1禽流感病毒血凝素基因特性的研究

目的 分析我国分离的人高致病性禽流感H5N1病毒的抗原性以及基因特性.方法 对所分离的H5N1病毒的血凝素基因和神经氨酸酶基因进行序列测定.结果 对血凝素基因的序列测定结果表明从我国分离的H5N1病毒具有较高的同源性,但是与越南、泰国等国家分离的H5N1病毒明显不同.序列测定的结果同时表明无论是受体特异性还是连接肽都是禽源的.结论 目前我国分离的H5N1病毒属于同一个组,与泰国、越南分离毒株不同,并且发现病毒的特性仍然是禽源的,没有发现从禽到人的重组或者重配。     

人感染高致病性禽流感病毒H5N1核酸检测方法的建立及应用

目的 建立人感染高致病性禽流感病毒H5N1的核酸检测方法,用于人感染高致病性禽流感病毒疑似病例临床标本的检测.方法 针对甲型流感病毒保守基因M设计RT-PCR和real-time PCR引物检测是否为甲型流感病毒,同时针对H5N1禽流感病毒设计针对H5和N1基因的特异性RT-PCR和real-time PCR引物作亚型检测,建立禽流感H5N1病毒RT-PCR和real-time PCR检测方法.结果 本研究建立的RT-PCR和real-time PCR方法可以特异性地检测H5N1病毒,并且与人流感病毒H1、H3没有交叉反应.RT-PCR检测方法灵敏度可到1TCID50,real-time PCR灵敏度可达0.01TCID50.利用上述方法检测人感染高致病性禽流感病毒H5N1疑似病例临床标本,从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例.结论 本研究建立的RT-PCR和real-time PCR方法可以用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1临床标本的实验室检测.     

采用反向遗传学技术构建H5亚型禽流感疫苗株

目的构建重组H5亚型禽流感疫苗株。方法采用RT-PCR技术，分别扩增鹅源高产禽流感病毒A／Goose／Dalian／3／01（H9N2）的6条内部基因片段、高致病性禽流感病毒株A／Goose／HLJ／QFY／04（H5N1）的血凝素（HA）基因和N3亚型参考株A／Duck／Germany／1215／73（H2N3）的神经氨酸酶（NA）基因，并对HA1和HA2连接肽处的5个碱性氨基酸（R-R-R-K-K）的编码序列进行缺失与修饰，然后分别构建这8个基因的转录与表达载体，将其共转染293T／MDCK混合培养细胞单层，对拯救出的重组病毒进行表型分析。结果利用反向遗传学技术拯救出了全部基因都源于禽流感病毒的疫苗株，其基因序列符合设计要求包括删除HA基因的毒力相关序列，疫苗株的表型为H5N3。结论构建成功重组禽流感疫苗株rH5N3，为制备H5亚型禽流感疫苗打下了坚实的基础。     

2016—2018年长沙市人群及活禽市场环境H5N6亚型禽流感病毒监测分析

目的:开展2016—2018年长沙市人群感染和活禽市场(live poultry markets, LPMs)环境污染H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)监测,为防控人感染H5N6亚型AIV提供实验室数据。方法:采集2016—2018年长沙市流感样病例和不明原因肺炎病例咽拭子6...     

2011-2012年肇庆市禽流感职业暴露人群及外环境病毒分布监测分析

目的了解肇庆市禽类职业暴露人群禽流感病毒感染状况以及外环境禽流感病毒的分布情况。方法采集禽类职业暴露人员血清样本,用红细胞血凝抑制试验（HI）检测H5N1流感抗体;采集外环境样本,用荧光定量PCR法检测禽流感病毒FluA、H5、H7和H9核酸。结果2011-2012年共采集职业暴露人员血清样本400份,检测H5N1抗体均为阴性;共采集外环境有效样本202份,检出FluA阳性25份,阳性率为12．38％,其中AH9亚型阳性14份（56．00％）。AH7亚型阳性1份（4．00％）,A未分型10份（40．00％）,未检出AH5亚型。结论肇庆市职业暴露人群尚未发现感染高致病性禽流感H5N1病毒．夕h环境存在禽流感病毒的污染,H9亚型是主要的病原体。     

H5亚型禽流感灭活疫苗病毒基因的定量检测及其与HI抗体效价之间关系的分析

目的建立H5亚型禽流感病毒灭活疫苗中病毒核酸的特异、敏感、快速的定量检测方法，分析其与HI抗体效价之间的相关性。探索禽流感灭活疫苗效力体外检验的方法。方法选取H5亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）血凝素（hemagglutinin，HA）基因保守序列，使用Prinler Express 2．0软件设计了特异性引物和TaqMan MGB（minor groove binder）探针，利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感灭活疫苗，通过体外转录，制备含有选定检测序列的RNA标准品，绘制标准曲线。对50批H5亚型禽流感灭活疫苗进行了荧光定量PCR检测，测定了疫苗的HA基因拷贝数，同时测定了50批疫苗相应的HI抗体效价。进行了疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价之间相关性的分析。结果该方法的灵敏度为10拷贝，反应，标准曲线的相关系数为0．998003，对H9亚型禽流感灭活疫苗和其他禽病疫苗无交叉反应，特异性好、重复性佳。疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价不相关。结论荧光定量PCR方法为H5亚型禽流感病毒灭活疫苗检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。     

深圳地区人和鸡群中H9N2亚型流感病毒病原学和血清流行病学调查

目的：了解甲型流感病毒N9N2亚型毒株在深圳地区鸡群和人群中的分布。方法：采用常规的鸡胚双腔法来分离病毒。抗体测定，采用红细胞凝集抑制（HI）试验和中和试验测定法。结果：从深圳地区农贸市场鸡群中分离到27株H9N2亚型流感病毒，但未能从人群中分离到H9N2病毒。约有26％人血清中检测到H9亚型毒株的抗体，（HI滴度≥20），同时还发现抗体阳性率和几何均数随人群年龄增长而增高，同时与职业有关。然而，在鸡群中H9毒株的抗体阳性率仅为7％。结论：禽H9N2毒株不仅能感染人，而且在深圳地区人群和禽类中较为广泛的分布。人H9N2很大可能来源于鸡的H9N2毒株。     

广东省2例城市型人感染高致病性禽流感（H5N1）病例的流行病学调查

目的通过对2例城市人禽流感病例的流行病学调查、分析，探讨无直接病死禽暴露情况下的可能感染来源，为进一步防控禽流感提供科学依据。方法采用现场流行病学、血清学调查的方法；荧光定量PCR、ELISA、RT—PCR和应急监测等方法进行调查、诊断。结果2例感染高致病性禽流感病毒（H5NI）确诊病例未发现有明确病死禽接触史，但发病前到过甚至多次到过农贸市场；密切接触者中没有发生不明原因肺炎病例，未发现人一人传播证据。结论2例人感染高致病性禽流感病例均属城市型感染个案，非人传人病例，感染来源可能与农贸市场环境有关。     

广东地区人禽流感H5N1毒株的核蛋白基因变异和进化

目的通过对人禽流感H5N1毒株核蛋白（NP）基因序列的变异分析，揭示毒株NP基因变异与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株NP基因核苷酸序列，同时检索全球人禽流感H5N1毒株NP基因序列，采用DNAStar5．0软件对检索的人禽流感H5N1毒株NP基因核苷酸序列进行比对和分析；并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果1997--2006年45株毒株胛基因核苷酸序列同源性分成3类，1997--1998年毒株为第1类，2004--2005年毒株为第2类，2003年毒株和2006年毒株为第3类；NP基因35个氨基酸位点全部置换，占7．03％（35／498）；2003—2006年H5N1毒株通过氨基酸第430位（1〈430T）位点的置换，增加一个糖基化位点（NGT430-432；GD—01—06毒株第370位发生N3加S变异；增加一个糖基化位点（NES368.370）。同义变异中，NP基因Ks（同义变异速度）值为2．03×10^-5～2．55×10^-5核苷酸／d，Ka（错义变异速度）值为1．58×10^-6～3．10×10^-6核苷酸／d，检验发现进化无明显选择性压力存在。结论1997--1998年毒株、2004--2005年毒株、2003年毒株和2006年毒株NP基因核苷酸有差异；2003--2006年人禽流感H5N1毒株NP基因增加一个糖蛋白位点、GD-01—06毒株再增加一个糖蛋白位点可能改变毒株抗原性。人禽流感H5N1毒株在自然界变异频繁，随着其自然进化，H5N1毒株具有人．人传播能力的概率较大。     

人禽流感研究现状

人禽流行性感冒(人禽流感)(avian-human influenza)是由禽甲型流感病毒中某些亚型的毒株引起的急性呼吸道传染病。禽流感(avian influenza，AI)这个名称在我国可能已家喻户晓。然而，过去一段时间曾把它称之为鸡瘟(fowl plague)，因它在禽中所表现出的症状为全身系统中毒症状或急性呼吸窘迫综合征，与人流感症状相差甚远。鸡瘟于1878年首次报道于意大利，1901年证实其病原为滤过性病原体，1955年才证实其病原为甲型流感病毒的一员。     

广东省首例人高致病性禽流感病例病原体的分离与初步鉴定

人禽流感病是由甲型禽流感病毒（AIV）某些亚型的毒株感染人引起的急性呼吸道传染病。人高致病性禽流感病的潜伏期一般为1～3d，起病急，早期表现类似普通流感。主要症状为发热，伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛和全身不适。2006年2月22号，广州市一家医院发现1名患者出现“流感样”症状．表现为发热、咳嗽和白细胞数降低等发热肺炎症状，3月3日因治疗无效死亡。     

广州地区禽H9N2亚型流感病毒的发现及感染人调查

目的 了解广州地区禽流感病毒在家禽中的流行及感染人的情况，防止香港H5N1禽流感在广州地区流行。方法 对广州地区的主要鸡场和农贸市场的家禽和密切接触家禽的职业人群进行病原学和血清学的检测。病毒分离同时采用MDCK细胞和鸡胚双腔接种法；采用微量血凝抑制半致敏法进行血清学检测。结果 从54份鸡咽拭液中分离到1株H9N2亚型流感病毒；鸡及职业人群血对分离的H9N2毒株的血抑抗体阳性率分别为12．8％和15．1％。结论 广州地区鸡群中有H9N2，亚型流感病毒存在，禽H9N2亚型流感病毒能感染人。     

流感病毒A/广州/333/99(H9N2)毒株基因组特性的研究

目的 了解一株再次从流感患儿中分离出禽H9N2流感毒株的基因组特性，并弄清它的来源。方法 病毒在鸡胚中传代，从收获的尿囊液中提取RNA，通过逆转录合成cDNA，cDNA用PCR扩增。PCR产物用纯化试剂盒纯化，接着做核苷酸序列测定，然后用Meg Align(Version 1.03)和Editseg(Version 3.69)软件进行基因进化树分析。结果 A／广州／333／99（H9N2）毒株的基因组属于禽流感病毒，但它明显不同于A／Duck/Hong Kong/Y439/97毒株。同时不含有任何人流感病毒基因节段，其基因组中有4个基因节段（分别编码HA、NA、NP和NS蛋白）来自G9毒株基因系，而其余4个基因节段（分别编码PB2、PB1、PA和M蛋白）来自G1毒株基因系。结论 A／广州／333／99（H9N2）病毒是G9和G1毒株通过基因重配而来的重配株，它最大可能性直接来自禽。进一步证实了禽H9N2毒株能感染人，同时首次证实了H9N2不同基因系毒株间，在自然界中也能发生基因重配。     

2015—2016年济南市活禽市场禽流感病毒监测分析

目的 了解济南市活禽市场外环境样本中甲型禽流感病毒动态分布状况,分析禽流感病毒污染特征.方法 2015年11月至2016年10月,选择济南市所属槐荫区活禽批发市场与历城区活禽零售市场进行外环境样本采集,样本类型包括禽处理台表面擦拭物、笼具表面擦拭物、粪便标本、清洗禽类的污水、禽类饮用水等.应用荧光定量RT-PCR方法对样本进行甲型流感病毒核酸检测,阳性样本进一步进行H5、H7及H9亚型检测.采用x2检验比较不同类型活禽市场、不同类型样本各亚型禽流感病毒核酸阳性率差异.结果 全年共采集2943份禽流感外环境样本,甲型禽流感病毒核酸阳性样本检出率为13.73%(404份),H5、H7与H9亚型检出率分别为4.52%(133份)、0.07%(2份)和8.49%(250份).五种不同类型样本中,甲型禽流感病毒阳性率最高的为禽处理台表面擦拭物(21.88%),最低的为禽类粪便(9.64%)(x2=38.535,P<0.001).但在活禽批发市场中,甲型禽流感病毒阳性率最高的样本为禽类饮用水(46.60%),零售市场中阳性率最高的样本为禽处理台表面擦拭物(18.65%).环境样本中甲型禽流感病毒的波动呈季节性趋势,冬春季节阳性率较高,最高为12月份,5—9月呈低发平缓趋势.结论 济南市活禽市场环境存在禽流感病毒的污染,并以H5和H9亚型为主.活禽市场中禽类饮用水与零售市场中禽类处理台面的病毒检出率最高.