重组葡萄球菌肠毒素A及其突变体蛋白促淋巴细胞增殖作用的研究

 目的 观察重组葡萄球菌肠毒素A（rSEA）及其突变体蛋白对淋巴细胞增殖、活化作用及对淋巴细胞亚群分群的影响。方法 分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）及小鼠脾淋巴细胞悬液,体外经rSEA及其3种突变体（rSEA/H187A、rSEA/H225A和rSEA/D227A）蛋白刺激后,采用噻唑蓝法（MTT）检测人和小鼠脾淋巴细胞增殖水平,采用流式细胞术检测人外周血中T淋巴细胞亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞）及活化CD4⁺、CD8⁺ T细胞和自然杀伤细胞（NK）的含量。结果 5~20 mg·L^-1的rSEA及其3个突变体蛋白对人PBMC和小鼠脾淋巴细胞均有明显促增殖作用（P<0.05）;经rSEA、rSEA/H225A刺激后的人PBMC中,CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞的含量明显高于对照组,rSEA/H187A能上调CD3⁺和CD8⁺T细胞,而rSEA/D227A只上调CD8⁺T细胞（P<0.05）;rSEA及3种突变体蛋白均能上调活化CD4⁺和CD8⁺T细胞,rSEA、rSEA/H187A、rSEA/H225A能上调NK细胞含量（P<0.05）。结论 rSEA及其3种突变体（rSEA/H187A、rSEA/H225A和rSEA/D227A）蛋白对淋巴细胞均有明显促增殖和活化作用,并可不同程度地上调T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ 及NK细胞的含量,为筛选出低毒、高效的升白细胞相关药物候选突变体奠定基础。
     

呼吸道合胞病毒感染患儿的 TBNK 淋巴 细胞亚群及急性时相反应蛋白变化

〔摘 要〕 目的：探究呼吸道合胞病毒感染患儿的 TBNK 淋巴细胞亚群及其急性时相反应蛋白的变化。 方法：选取 2019 年 5 月至 2023 年 5 月期间在福建省福州儿童医院诊治的 80 例呼吸道合胞病毒感染的患儿作为观察组,另选取同时期的 80 例 体检健康儿童作为对照组。比较两组儿童的 TBNK 淋巴细胞亚群［分化抗原（CD）3⁺ /CD45⁺ 、CD3⁺ CD8⁺ /CD45⁺ 、 CD3⁺ CD4⁺ /CD45⁺ 、CD16⁺ CD56⁺ /CD45⁺ 及 CD19⁺ /CD45⁺ ］及急性时相反应蛋白［血浆 C 反应蛋白（CRP）及血浆淀粉 样蛋白 A（SAA）］水平,并比较观察组中不同疾病严重程度指数（SI）评估结果以及不同疾病分期儿童的 TBNK 淋巴 细胞亚群及急性时相反应蛋白水平。 结果：观察组患儿的外周血 CD3⁺ /CD45⁺ 、CD3⁺ CD8⁺ /CD45⁺ 、CD3⁺ CD4⁺ /CD45⁺及 CD16⁺ CD56⁺ /CD45⁺ 显著低于对照组儿童,CD19⁺ /CD45⁺ 及急性时相反应蛋白显著高于对照组儿童,差异均具有统计学 意义（P ＜ 0.05）;观察组 SI 评分较高患儿及急性期的外周血 CD3^{+ /CD45+ 、CD3+ CD8+ /CD45+ 、CD3+ CD4+ /CD45+ 及 CD16+ CD56+ /CD45+ 显著低于 SI 评分较低的患儿及恢复期,CD19+ /CD45+ 及急性时相反应蛋白显著高于 SI 评分较低的患儿 及恢复期,差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论：呼吸道合胞病毒感染患儿的 TBNK 淋巴细胞亚群及急性时相反应 蛋白显著异于同龄的健康儿童,且患儿中不同严重程度及分期的上述指标检测差异较大,因此 TBNK 淋巴细胞亚群及急性 时相反应蛋白在呼吸道合胞病毒感染患儿中的检测价值较高。}     

环孢素A，庆大霉素和硒制剂对大鼠外因淋巴细胞分子和基因表达的影响

 目的为比较环孢素A，庆大霉素和硒制剂对细胞免疫功能的不同影响，本实验观察了大鼠短期服用环孢素A，庆大霉素和硒制剂后外周血多种淋巴细胞分子和基因的表达水平变化，并对3组药物进行了对比。方法将24只大鼠分为4组，分别ig给药。于第3天取血并分离淋巴细胞。用荧光单克隆抗体(mAb)标记淋巴细胞分子并提取淋巴细胞总RNA。流式细胞仪检测淋巴细胞分子MHC-Ⅱ，CD4，CD8，ICAM-Ⅰ和IL2-R的表达水平，基因差异显示分析法检测多基因表达水平。免疫组化法检测各组心肌组织中CD4⁺，CD8⁺淋巴细胞数。结果与对照组相比，环孢素A，庆大霉素和硒制剂都抑制淋巴细胞分子ICAM-I，CD4和CD8的表达，同时3组心肌组织中CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞数降低，心肌组织中CD4⁺淋巴细胞数与CD4分子表达水平明显正相关(P＜0.000 1)。3组的细胞分子表达和心肌淋巴细胞数的降低程度依次为环孢素A＞庆大霉素＞硒制剂。不同的是，环孢素A还负调MHC-Ⅱ和IL2-R的表达水平，而庆大霉素却正调MHC-II和IL2-R的表达，硒制剂负调MHC-Ⅱ，正调IL2-R的表达。3组都表现出对凋亡基因gig18和一个450 bp左右的待测基因的正调表达。结论①短期服用环孢素A，庆大霉素和硒制剂，都抑制大鼠外周血淋巴细胞对ICAM-I，CD4和CD8等细胞分子的表达，但抑制程度不同；②三者对淋巴细胞MHC-II和IL2-R的表达调控具有明显差异；③三者都正调淋巴细胞凋亡基因gig18的表达。     

石见穿多糖通过PTEN通路对骨肉瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响

[目的] 探讨石见穿多糖（PSSC）通过第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）通路对骨肉瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响。[方法] 选取60只BALB/C雌性裸鼠,取12只作为对照组,剩余48只采用MG-63人骨肉瘤细胞注射法建立骨肉瘤小鼠模型,成功建模42只,随机分为模型组（11只,腹腔注射生理盐水10 mL/kg）、PSSC低剂量组（11只,腹腔注射PSSC 10 mg/kg）、PSSC高剂量组（10只,腹腔注射PSSC 100 mg/kg）、顺铂组（10只,腹腔注射顺铂2 mg/kg）,干预2周,绘制小鼠肿瘤生长曲线观察移植瘤体积变化,流式细胞仪测定小鼠外周血CD4⁺、CD3⁺T细胞比例,测定小鼠移植瘤质量,苏木精-伊红（HE）染色观察肿瘤病理组织变化,统计肿瘤细胞凋亡率,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测移植瘤组织PTEN、磷酸肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达。[结果] PSSC能降低骨肉瘤小鼠移植瘤体积及质量,提高外周血CD4⁺、CD3⁺T细胞比例,减轻肿瘤病理组织变化,提高肿瘤细胞凋亡率,促进PTEN蛋白表达,抑制PI3K、p-Akt蛋白表达,且具有剂量依赖性,高剂量PSSC抑瘤作用更为明显,肿瘤抑制效用与顺铂化疗效用相当。[结论] 采用PSSC治疗骨肉瘤小鼠,能提高小鼠免疫能力,减轻肿瘤病理变化,促进肿瘤细胞凋亡,抑制移植瘤体积及质量,可能与PSSC可激活抑癌基因PTEN有关。     

四神丸调节结肠炎大鼠PP结T细胞亚群及Treg/Th17间平衡的作用机制

目的:探讨四神丸对结肠炎大鼠派伊尔结(Payer's patch,PP结)中Treg/Th17细胞间平衡的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、四神丸组(2.5 g·kg^-1)及美沙拉嗪组(0.15 g·kg^-1)。除正常组外,其余各组建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法诱导的大鼠结肠炎模型后,ig给药7 d。采用流式细胞仪检测大鼠小肠PP结中T淋巴细胞亚群的表达水平并计算Treg/Th17,Western blot检测结肠组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和信号转导和转录激活因子5a(STAT5a)的表达量。结果:与正常组比较,模型组CD4⁺T淋巴细胞水平明显升高,CD8⁺T细胞水平显著降低,且CD4/CD8间比例明显升高,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞明显降低,Th17细胞明显升高,Treg/Th17降低,而且结肠组织中RORγt蛋白表达量升高,STAT5a蛋白表达量则明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,四神丸组大鼠小肠PP结中CD4⁺T淋巴细胞水平明显降低,CD8⁺T细胞水平显著升高,且CD4/CD8间比例明显降低(P<0.01),同时,四神丸组则CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞显著升高,Th17细胞明显降低,Treg/Th17升高,而且结肠组织中RORγt蛋白表达量降低,STAT5a蛋白表达量则显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:四神丸可以调节T淋巴细胞亚群,并通过抑制RORγt表达、提高STAT5a的蛋白分泌调节Treg/Th17间的平衡。     

中药天花粉蛋白增强诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量和功能的初探＊

目的 探讨中药天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）数量和功能的作用。方法 研磨6-8周C57BL/6小鼠脾脏，裂解红细胞后得到单个脾脏淋巴细胞悬液，按5×10⁵/mL细胞密度均匀接种在圆底96孔板，设空白组、对照组（增殖体系：1 μg·mL^-1 anti-CD3/28 mAb）、三个不同诱导方案组，培养7天后收集细胞运用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例以此确定最佳诱导方案；将低浓度Tk（0.25、0.5、1 μg·mL^-1）作用于诱导体系，7天后采用流式检测Tk对CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例的影响；Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡情况；Western blotting法测定各组中Treg细胞特异性转录因子Foxp3蛋白表达情况；实时荧光定量 PCR法检测转录因子Foxp3和细胞因子TGF-β、IL-10、IL-6、IFN-γ基因水平的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清中分泌IFN-γ和IL-10的浓度。结果 与对照组相比，添加TGF-β（5ng·mL^-1）诱导小鼠脾脏淋巴细胞生成Treg的数量和比例最高，此诱导方案最佳（P < 0.01）；与诱导组相比，低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量和比例，呈剂量依赖性（P < 0.01），且Tk需在诱导体系下发挥作用，单加不能诱导生成Treg细胞，此浓度Tk无细胞毒性；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组Treg特异性转录因子Foxp3蛋白和基因表达水平均显著上调（P < 0.01），II型辅助性T细胞（Th2）分泌的炎症抑制因子IL-10、TGF-β基因表达不同程度上调，反之，I型辅助性T细胞（Th1）分泌的促炎因子IFN-γ、IL-6基因表达呈相反趋势下调（P < 0.01）；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组细胞上清中分泌的IL-10浓度显著增加，IFN-γ浓度明显降低（P < 0.01）。结论 低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，上调Foxp3和Th2型炎症抑制因子IL-10、TGF-β的表达，下调Th1型促炎因子IFN-γ、IL-6的表达，从而发挥免疫抑制功能。     

肾阳虚型慢性再障患者CD3+CD19-和CD3+CD25+T细胞与血小板的多重线性回归分析

目的 建立多重线性回归模型分析肾阳虚型慢性再生障碍性贫血（CAA）患者的总T细胞（CD3⁺CD19^-）、活化T细胞（CD3⁺CD25⁺）与血小板（PLT）的线性关系并探讨肾阳虚型CAA患者PLT数量在治疗转归中的预测因素。方法 纳入22例肾阳虚型CAA患者，收集外周血中CD3⁺CD19^-T细胞和CD3⁺CD25⁺T细胞占淋巴细胞的比例和PLT共3个参数并进行线性回归分析。结果 因学生化删除残差（SDR_1）超过3倍标准差的离群值以及强杠杆点（LEV_1） > 0.5者各有1条观测值，对这2条观测值予以删除。回归模型具有统计学意义F（2，17） = 19.479（P < 0.001），R² = 0.696，调整R² = 0.660。纳入模型的2个自变量（CD3⁺CD19^-）和（CD3⁺CD25⁺）对PLT的影响均有统计学意义（P < 0.05），并得到回归方程：PLT = 391.585 -5.104 × （CD3⁺CD19^-） + 23.851 × （CD3⁺CD25⁺）。结论 外周血淋巴细胞中CD3⁺CD19^-T细胞的比例和CD3⁺CD25⁺ T细胞的比例可用于有效地估计和预测肾阳虚型CAA患者在未来临床转归中PLT的值及其变化趋势，有助于临床医师及时判断和评估CAA患者在临床结局中的出血风险及出血症状对患者生存质量的影响，具有较好的预测价值和临床实践意义。     

基于内质网应激探讨扶正解毒方联合5-Fu对胃癌荷瘤小鼠术后复发及转移的影响

目的 研究扶正解毒方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌荷瘤小鼠术后复发转移的抑制作用，并通过肿瘤微环境中CD4⁺ T细胞，CD8⁺ T细胞，调节性T（Treg）细胞含量的改变，内质网应激途径及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路，探讨其可能的分子机制。方法 40只615小鼠随机分为模型组，扶正解毒方（25 g·kg^-1）组，5-Fu（25 mg·kg^-1）组，联合组（扶正解毒方25 g·kg^-1+5-Fu 25 mg·kg^-1），每组各10只，将小鼠前胃癌细胞（MFC细胞）接种于左后肢内侧爪垫下，通过手术切除移植瘤建立术后复发模型。苏木素-伊红（HE）染色法观察术后复发胃癌荷瘤小鼠肺转移病理形态的改变；流式细胞术检测复发瘤中CD4⁺/CD8⁺ T值及脾脏中Treg细胞［CD4⁺，CD25⁺，叉头框蛋白P3（FOXP3）⁺细胞］的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）及免疫组化法（IHC）检测内质网应激相关蛋白［葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需求酶1α（IRE1α），激活转录因子6（ATF6），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）］含量，以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，联合组复发抑制率明显升高（P<0.05）；各治疗组复发瘤重均明显降低（P<0.05）；各治疗组肺转移数均降低，转移率均有所降低，联合组肺转移总数最少，转移率最低，但差异无统计学意义；扶正解毒方组、联合组CD4⁺/CD8⁺ T值明显升高（P<0.05），Treg细胞含量明显降低（P<0.05）；5-Fu组Treg细胞含量明显升高（P<0.05）。IHC结果显示，与模型组比较，各治疗组ATF6蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），IRE1α表达明显下降（P<0.05），Akt表达显著下降（P<0.01）；5-Fu组及联合组mTOR表达明显下降（P<0.05）。Western blot结果显示，与模型组比较5-Fu组GRP78表达明显下降（P<0.05），5-Fu组及联合组PI3K，磷酸化Akt（p-Akt），mTOR表达明显下降（P<0.05）。结论 扶正解毒方联合5-Fu可以抑制荷瘤小鼠术后复发转移，机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR的信号通路，下调内质网应激，改善肿瘤免疫抑制微环境有关。     

生津润燥方治疗干燥综合征及调控CD4+CD25+Foxp3T细胞/Th17机制研究

  目的：研究生津润燥方对免疫诱导干燥综合征模型小鼠外周血CD4⁺CD25⁺ Foxp3T细胞(Treg细胞)及Th17细胞水平的影响,同时观察腺体受累的改善状况和外周血淋巴细胞亚群的变化。  方法：雄性BABL/C小鼠分为空白组,模型组,硫酸羟氯喹组,生津润燥方高、中、低剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型。各组采取相应干预措施。采用流式细胞术检测模型小鼠外周血中CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺CD25⁺ Foxp3T细胞及Th17细胞水平,并测定模型鼠唾液、泪液分泌量;治疗的末期,观察下颌腺的组织形态学改变。  结果：与空白组比较,模型组第1周到第4周小鼠唾液和泪液流量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,生津润燥方各剂量组第2、3、4周小鼠唾液流量和泪流量升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组Th17淋巴细胞水平升高(P<0.05)。与模型组比较,生津润燥方各剂量组分别可升高CD8⁺T淋巴细胞水平,降低Th17淋巴细胞水平,升高小鼠Treg细胞水平,差异有统计学意义(P<0.05)。组织形态学观察显示,生津润燥方可抑制模型组小鼠颌下腺间质的淋巴细胞浸润。  结论：生津润燥方通过调节干燥综合征小鼠淋巴细胞的应答作用,从而能改善SS小鼠的症状。     

基于淋巴细胞亚群分析25例MG患者卫气功能特点＊

目的 探讨重症肌无力（myasthenia gravis，MG）患者卫气功能的特点，为临床用药提供科学依据。方法 通过流式细胞技术检测25例初诊为重症肌无力患者的淋巴细胞亚群，分析CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞、CD16⁺56 T细胞等指标的变化，观察MG患者卫气功能的特点。结果 MG患者表现为CD4⁺T细胞功能的活跃，CD8⁺ T细胞的功能抑制以及CD16⁺56 T细胞功能的抑制。结论 MG患者存在着以CD16⁺56 T细胞为代表的固有免疫系统的功能抑制和以CD4⁺ T为代表的获得性免疫系统的功能亢进。     

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的：观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（FCM）观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3（As2O3在该溶液中的主要存在形式）作为阳性对照。结果：雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示：G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论：雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸（V）、甲基砷酸盐（V）可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。     

梁金菇多糖诱导K562细胞凋亡的研究

目的 :探讨梁金菇多糖对K562细胞凋亡的影响及其机制。方法 :应用集落形成实验观察梁金菇多糖对K562细胞增殖的影响 ,细胞形态学、DNA凝胶电泳等检测细胞凋亡 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)检测凋亡相关基因FasmRNA的表达。结果 ;梁金菇多糖能明显抑制K562细胞的增殖 ,促进细胞凋亡 ,细胞凋亡率的增加呈剂量依赖性。Fas基因的表达与K562细胞凋亡呈正相关。结论 :梁金菇多糖具有抑制K562细胞增殖、诱导其凋亡的作用 ,Fas基因表达的上调可能是梁金菇多糖诱导细胞凋亡的机制之一。     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的:探讨芒果甙对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,以进一步研究芒果甙抗白血病作用的分子机制。方法:用光学显微镜及透射电镜观察经芒果甙作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变;采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应-酶联免疫测定法(PCR-ELISA)检测白血病细胞端粒酶活性。结果:芒果甙能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强;并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调。结论:芒果甙能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关。在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节。     

复方维甲酸注射液诱导K562分化及凋亡作用

目的:比较复方维甲酸注射液及其拆方制剂青蒿油注射液、维甲酸注射液在体外对人红白血病细胞株K562的增殖、分化和凋亡的影响。方法:用MTT法了解三种注射液对人红白血病细胞株K562增值的抑制作用,用形态学观察、NBT还原实验以及流式细胞术检测表面抗原CD14、CD33观察三种注射液对K562细胞的诱导分化作用;通过流式细胞术观察药物对细胞凋亡和周期的影响。结果:MTT结果显示复方维甲酸注射液对K562细胞增殖有抑制作用,且效果优于其拆方制剂,IC50为11.98±0.06μg/m l;形态学观察、NBT还原实验以及流式检测CD14、CD33均提示复方维甲酸注射液有较好的诱导细胞分化成熟能力;流式检测提示复方维甲酸注射液可将细胞周期阻滞在G2/M期,对K562细胞有诱导早期凋亡的作用,且效果最优。结论:复方维甲酸注射液对人红白血病细胞K562有抑制增殖、诱导分化和凋亡的作用,且效果优于其拆方制剂。     

当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究

目的从细胞凋亡的角度探讨当归多糖(APS)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25 mg/L、250 mg/L、2 500 mg/L当归多糖,分别于第2,4,6天,取细胞用台盘蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组织化学检测bcl-2抗凋亡基因的表达。结果细胞生长曲线显示25~2 500 mg/L的当归多糖对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250 mg/L作用后S,G2+M期K562细胞数减少,G0/G1期细胞增多。APS诱导细胞后bcl-2明显降低(P<0.05)。结论APS对白血病细胞株K562细胞的增殖具有显著抑制作用,APS通过阻止K562细胞进入S期而抑制其DNA合成,bcl-2表达降低可能是APS诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。     

补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎患者外周血CD4~+T淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 观察补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4~+T细胞的调节作用.方法 将30例AS患者随机分为补肾强脊颗粒组和柳氮磺吡啶(SASP)组各15例,在治疗前和治疗后12周后分别采集两组患者外周血,分离CD4~+T细胞,采用RT-PCR测定细胞凋亡相关基因Fas、FasL及Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 补肾强脊颗粒可促进AS患者外周血CD4~+T淋巴细胞Fas、FasL的表达(P＜0.05或P＜0.01),而对Bcl-2、Bax的表达无明显影响.结论 补肾强脊颗粒可能是通过Fas-FasL途径影响CD4~+T细胞的激活诱导的细胞凋亡作用.     

新福菌素对人白血病细胞株K562的凋亡诱导作用

 目的 研究新福菌素对人白血病细胞株K562的体外抑瘤效应及其作用机制。方法应用MTT比色法观察新福菌素对细胞的生长抑制作用;显微镜观察细胞的生长变化和结构改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡和Bel-2蛋白表达情况。结果 新福菌素对人白血病细胞株K562有较强的体外增殖抑制作用。新福菌素能诱导K562细胞凋亡,同时伴随有Bel-2蛋白表达下调。结论 新福菌素对白血病细胞株K562有较强的抗瘤效应,其可能与Bel-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。     

康莱特注射液对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响及机制

目的观察薏苡仁注射液(康莱特注射液)对人肺腺癌细胞A594凋亡的影响,并探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549,分别加入5,10,15,20,25 mL/L康莱特注射液,对照组加等量生理盐水,孵育48 h后,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化;20 mL/L康莱特注射液孵育48 h后,收集细胞,FCM测定细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫印迹(Western blot)法分别测定Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白的表达情况。结果康莱特注射液处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20 mL/L康莱特注射液处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,Bcl-2/Bax比值显著降低。结论康莱特注射液可通过上调A549细胞Caspase-3、Fas和FasL的表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导其凋亡,产生抗肿瘤作用。