中耳细菌感染诱导的急性期HSP-70相关反应的免疫组织化学研究

探讨中耳细菌感染急性期时 ,哺乳动物中、内耳热休克反应的部位 ,以及中耳细菌感染诱生的热休克蛋白是否可能引发内耳自身免疫损伤。运用中耳注射肺炎克雷伯杆菌制成豚鼠中耳急性感染动物模型 ,分别于接种后第 1、3、5、7天处死动物取材。应用免疫组化技术 ,研究了中耳粘膜和耳蜗表达热休克蛋白 70 (HSP- 70 )的部位。结果表明 :正常状态下 ,中耳粘膜表层的上皮细胞和内耳膜迷路血管纹、螺旋韧带、Corti氏器均有弱的阳性反应 ,感染应激后 ,上述同样部位均有强的阳性显色。不同取材时段显示的阳性位置无差异。说明在中耳急性细菌感染期 ,中耳粘膜和内耳组织均表达了同源 HSP- 70蛋白分子 ,这些同源 HSP- 70为引发内耳自身免疫损伤提供了物质基础。     

中耳细菌感染对内耳及机体免疫功能长期影响的？…

目的 探讨中耳细菌感染后内耳热休克反应是否会长期存在,及其对内耳功能的潜在影响。方法 ６０只ＢＡＬＢ－ｃ鼠随机分为肺炎克雷白杆菌、金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和生理盐水对照６个组,每组１０只。中耳注射致病菌１３５ｄ后测试畸变产物耳声发射并取材进行光镜与电镜观察,检测内耳热休克蛋白（ＨＳＰ）７０相关表位分子的表达,行单个核细胞因子κ－Ｂｐ６５和抗肺炎克雷白杆菌抗体、抗膜     

中耳细菌感染对内耳及机体免疫功能长期影响的实验观察

目的　探讨中耳细菌感染后内耳热休克反应是否会长期存在 ,及其对内耳功能的潜在影响。方法　 6 0只BALB/c鼠随机分为肺炎克雷白杆菌、金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和生理盐水对照 6个组 ,每组 10只。中耳注射致病菌 135d后测试畸变产物耳声发射并取材进行光镜与电镜观察 ,检测内耳热休克蛋白 (heatshockprotein ,HSP) 70相关表位分子的表达 ,行单个核细胞核因子κBp6 5和抗肺炎克雷白杆菌抗体、抗膜迷路蛋白抗体的测试。结果　所有标本核因子κBp6 5未发生明显核内转移。金葡菌感染组 3只、肺炎克雷白杆菌组和变形杆菌组 2只、绿脓杆菌组 3只以及对照组 1只动物的抗肺炎克雷白杆菌抗体阳性。经外加电场固定液相分子快速斑点免疫分析筛选 ,金葡菌感染组 2只、肺炎克雷白杆菌组 2只、绿脓杆菌组和生理盐水对照组各 1只抗膜迷路蛋白抗体阳性 ,其中金葡菌组和肺炎克雷白杆菌组抗膜迷路蛋白和抗肺炎克雷白杆菌双阳性。经免疫转印分析 ,其阳性条带除 1例相对分子质量为 6 80 0 0以外 ,其余均为小分子 ,以 2 6 0 0 0～ 30 0 0 0为主 ,380 0 0～ 410 0 0次之 ,46 0 0 0～ 5 0 0 0 0有微弱反应。除变形杆菌组右耳和绿脓杆菌组左耳 16 2 5Hz畸变产物耳声发射检测显著异常外 ,其余     

热休克蛋白70在中耳胆脂瘤中的异常表达

目的研究热休克蛋白(HSP70)在中耳胆脂瘤组织中的异常表达,探讨HSP70与胆脂瘤的关系及其作用.方法采用免疫组化SABC染色法、计算机图像定量分析法,对25例中耳胆脂瘤和10例正常外耳道皮肤中HSP70的表达情况进行观察.结果在25例胆脂瘤上皮组织的全层及上皮下结缔组织中炎性细胞和成纤维细胞的胞浆中均有HSP70强表达,部分核中也有强表达.10例正常外耳道皮肤中HSP70为弱表达.计算机图象分析仪定量分析,结果显示胆脂瘤上皮中HSP70阳性细胞的平均光密度为0.3309±0.0070,正常外耳道上皮为0.1798±0.0020,胆脂瘤上皮中HSP70的含量显著高于外耳道皮肤(P＜0.001).结论HSP70可能参与了胆脂瘤的形成和发展.     

实验性急性中耳细菌感染诱发的热休克反应

目的 探讨细菌抗原和内耳抗原之间的联系及热休克反应对其抗原的影响。方法 用抗哺乳类热休克蛋白（ｂｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｓｐ）７０抗体识别绿脓杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷白杆菌抗原，进行免疫转印分析，测试正常豚鼠膜迷路中ｈｓｐ７０的表达水平。用肺炎克雷白杆菌制作急性中耳感染动物模型，观察细菌的内耳与哺乳类ｈｓｐ７０家族，正常豚鼠膜迷路表达ｈｓｐ７０水平极低。肺炎     

Ras 蛋白在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的探讨Ｒａｓ蛋白在中耳继发性胆脂瘤上皮中的表达,分析其与胆脂瘤上皮增生调节中的可能作用。方法应用免疫组化ＳＰ染色法和计算机图像分析法,检测２２例胆脂瘤上皮和１０例正常外耳道皮肤中Ｒａｓ蛋白的表达情况。结果胆脂瘤上皮各层细胞均存在Ｒａｓ蛋白的较强表达,其中１５／２２为胞膜着色,５／２２胞膜胞浆均着色,２例仅胞浆着色,正常外耳道表皮中Ｒａｓ蛋白主要表达于胞膜,以基底层显色为主;两种组织Ｒａｓ蛋白阳性表达的平均积分吸光度分别为０．８７０和０．４６３,差异呈高度显著性。结论中耳继发性胆脂瘤上皮中存在Ｒａｓ蛋白的高表达,说明胆脂瘤上皮具有高度增生性。     

胆脂瘤型中耳炎患者中耳肉芽肿的免疫组织化学观察

应用免疫组织化学研究方法观察分析了８例胆脂瘤型中耳炎患者中耳肉芽肿的细胞种类、分布，探讨它们在发病中的作用，发现在该肉芽肿的基本病理组织学构成体中存在着Ｔ细胞、Ｂ细胞、朗格罕细胞及ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞，其中Ｔ细胞数量明显多于Ｂ细胞。初步说明Ｔ细胞所形成的细胞免疫是本病免疫反应的中心。     

喉癌组织HSP70的检测

目的 检测HSP70在喉癌中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法对53例喉癌(有癌旁组织对照48例)HSP70表达情况进行研究。结果 喉癌组织HSP70多为过度表达,其过度表达率为50.9％,癌旁组织为27.1％,两者差异有统计学意义(P<0.05);喉癌组织HSP70表达与组织分化有关(P<0.05),但与喉癌的临床分期、发生部位、有无淋巴结转移、病人年龄、性别均无关(P>0.05)。结论 HSP70与喉癌的恶性程度密切相关,可用于喉癌的预后评估。     

热休克蛋白—70免疫印迹测定在免疫相关与非相关性内耳疾病的诊断意义

为评价热休克蛋白 - 70的 Western免疫印迹测定在自身免疫性内耳疾病诊断中的意义 ,该作者应用Western免疫印迹法对 5 3例特发性渐进性感音性听力损失、突发性耳聋和梅尼埃病病人血液中的热休克蛋白 - 70进行了测定 ,其中特发性渐进性感音性听力损失2 4例 ,突发性耳聋 19例 ,梅尼埃病 10例 ,治疗前抽取血液标本并进行全身检查、纯音测听及 MRI检查 ,对应用皮质激素无禁忌的 4 7例给予甲基强地松龙治疗 ,用量 1mg/ kg/天 ,逐渐减量至 2 1天。检测结果显示 ,Western免疫印迹测定仅在 5例 (9.4 % )病人检测到热休克蛋白 - 70抗体 ,其阳性和…     

中耳胆脂瘤上皮中Livin、p73的表达与其发生关系研究

目的 观察凋亡抑制蛋白家族成员Livin及p53基因家族成员p73在中耳胆脂瘤上皮的表达情况,探讨它们在胆脂瘤发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学技术SP法(streptavidin-perosidabe,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测30例胆脂瘤标本及16例外耳道正常皮肤组织中的Livin及p73的表达情况,并结合胆脂瘤对听小骨骨质破坏程度,采用SPSS 10.0软件包进行统计学分析.结果 Livin表达于细胞核及部分细胞质,而D73表达于胞浆,上述两指标在中耳胆脂瘤中的阳性表达率分别为76.7%、40%,Livin在胆脂瘤上皮中的表达高于外耳道正常皮肤(P<0.05),而p73在胆脂瘤及外耳道皮肤中的表达差异无显著性(P>0.05),听小骨骨质破坏程度与上述指标的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 Livin在中耳胆脂瘤的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起相应作用,可能参与胆脂瘤上皮的凋亡调控过程,而p73在中耳胆脂瘤的发生和发展中的作用尚难确定.     

鼻粘膜肥大细胞的分化与增殖免疫组织化学研究

鼻变态反应患者 13例 (年龄 14～ 5 9岁 ,平均 2 7.2岁 ) ,非鼻变态反应患者 5例 (年龄 31～ 6 0岁 ,平均4 4.6岁 )。于鼻内窥镜下鼻窦手术等时 ,采取下鼻甲粘膜、固定、切片 ,分别行抗类胰朊酶抗体、抗 C- Kit抗体、抗增殖细胞核抗原 (PCNA)抗体、抗凝乳酶肥大细胞抗体免疫染色。然后于 4 0 0倍镜下 ,随意观察 5处上皮层、粘膜固有浅层、深层各抗体阳性细胞数目 ,两组间对比。结果发现 ,类胰朊酶阳性细胞数目 ,鼻变态反应组上皮层和粘膜固有层均较非鼻变态反应组多 (P<0 .0 5和 P <0 .0 1)。C- Kit和 PCNA阳性细胞数 ,鼻变态反应组上…     

头颈部鳞状细胞癌细胞热疗后HSP70/HSP90的表达规律及其抑制对热疗疗效的影响

目的探讨口腔鳞状细胞癌（简称鳞癌）CA9-22细胞系热疗后HSP70/HSP90的表达规律及抑制HSP70/HSP90表达对头颈部鳞癌热疗的影响。方法①对体外培养的口腔鳞癌CA9-22细胞,恒温水浴42℃热休克2h,荧光定量PCR检测HSP70/HSP90的基因表达规律,采用Western-blot检测蛋白表达量的变化;②流式细胞术检测热休克前、后2、4、6、8、12、24h细胞的凋亡情况,观察在热疗前应用槲皮素、格尔德霉素及联合对HSP70/HSP90的抑制后对热疗的增敏效果。结果①42℃热疗后CA9-22细胞HSP70/HSP90表达在基因及蛋白水平上均有明显升高,4h达到高峰,8h后开始回落,24h接近正常;②热疗前使用槲皮素及格尔德霉素处理,凋亡细胞比例明显增加,联合处理组增加更为明显。结论 HSP70/HSP90在CA9-22细胞内的表达在热疗后迅速升高,在热疗前联合抑制HSP70/HSP90的活性,可以有效增加热疗敏感性。     

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinic receptor，M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibular nucleus)的表达。方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究。结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达；原位杂交组织化学也证实了M3 mRNA在前庭神经核中的表达。结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型，但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究。     

HSP72在视网膜的表达及其对抗细胞凋亡作用的研究

目的：检测锌离子诱导的HSP72在大鼠视网膜的表达及HSP72对视网膜缺血再灌注损伤所致细胞病理性凋亡的抑制作用。方法：生理盐水前房加压灌注制作视网膜缺血再灌注（RIR）损伤模型．以腹腔注射硫酸锌诱导HSP72表达作为实验组,以腹腔注射HSP表达抑制荆——槲皮素作为实验对照组．以不作任何处理的大鼠为正常对照组。于不同时间段对视网膜HSP72免疫组化染色．Tunel染色、计数凋亡细胞,比较各组差异。结果：实验组在注射硫酸锌后10h即见视网膜节细胞层有HSP72阳性表达．16h达高峰,注射后7d仍呈弱阳性表达,HSP72主要在神经节细胞（RGC）胞浆表达;正常对照组及实验对照组均呈阴性表达。Tunel染色显示,RIR后12h即有病理性细胞凋亡现象,24h明显增多,实验组凋亡细胞计数少于对照组且有统计学意义（P〈0．05）。结论：（1）腹腔注射锌离子可诱导大鼠视网膜HSP72表达．注射槲皮素可抑制此作用,HSP72主要在RGC胞浆表达;（2）RIR能导致视网膜病理性细胞凋亡．HSP72具有对抗凋亡的作用。     

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinic receptor ,M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibular nucleus )的表达.方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究.结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达;原位杂交组织化学也证实了M3 mRNA在前庭神经核中的表达.结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型,但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究.     

HPV16E7-HSP70融合基因原核表达质粒的构建和鉴定

目的构建HPV16E7-HSP70融合基因原核表达质粒,为进一步研究HPV16E7-HSP70融合蛋白抗喉癌免疫活性奠定基础。方法PCR扩增HPV16E7、HSP70并分别导入相应酶切位点;HPV16E7采用NheI和SacI接入原核表达载体pET28a得到pET28a-HPV16E7中间质粒;HSP70的PCR产物采用TA连接亚克隆到pGEM-Teasy载体;SalI和NotI双酶切后的HSP70片段和pET28a-HPV16E7线性质粒,经连接酶连接,采用PCR、DNA测序鉴定重组质粒;同时,重组质粒转入BL21(DE3)表达,采用IPTG诱导和WesternBlot进一步鉴定重组质粒的表达情况。结果重组质粒经PCR、DNA测序证实插入了HPV16E7-HSP70融合基因,且蛋白开放读码框与pET28a的6×His标签一致。通过IPTG诱导表达和WesternBlot证实融合蛋白可以在原核细菌中正确表达。结论成功构建pET28a-HPV16E7-HSP70重组原核表达质粒。     

RNA干扰技术沉默热休克蛋白70对喉癌Hep-2细胞增殖的影响

<正>喉癌是上呼吸道常见的恶性肿瘤,严重影响着人类的健康。研究表明热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)在正常组织中多不表达,但在包括头颈鳞状细胞癌在内的多种肿瘤组织却有异常表达。肿瘤细胞中高表达的HSP70,对细胞的增殖、侵袭及转移、机体对肿瘤治疗耐受性的发生及肿瘤预后等方面均有很重要的作用[1]。RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是近年来发展起来的一项新的基因技术,可抑制与肿瘤有关的不同基因而控制     

实验性自身免疫性内耳病耳蜗热休克蛋白70的表达

目的　探讨自身免疫性内耳病模型动物耳蜗热休克蛋白的表达。方法　利用同种异体内耳抗原免疫豚鼠 ,以建立自身免疫性内耳病 (autoimmuneinnereardisease ,AIED)动物模型 ,并应用免疫组织化学及原位杂位技术 ,研究热休克蛋白 (heatshockprotein ,hsp) 70在正常对照组及AIED模型动物实验组耳蜗中的表达情况。结果　对照组豚鼠螺旋神经节细胞中存在hsp70样蛋白基础表达 ;实验组 2 8耳中 10耳 (35 7% )听阈提高≥ 10dB ;此组动物螺旋神经节细胞和血管纹、螺旋韧带hsp70及其mRNA表达明显增强。结论　以粗制膜迷路抗原免疫豚鼠 ,听阈提高动物hsp70在螺旋神经节细胞和血管纹、螺旋韧带合成增加。