神经干细胞移植促进脑出血大鼠神经功能恢复的实验研究

目的探讨脑内定向移植神经干细胞(NSCs)治疗脑出血的可行性和机制。方法采用在成年大鼠中立体定向纹状体内注入新鲜自体血液制作实验性脑出血模型,术后1d采用立体定向将在体外扩增、纯化并经BrdU标记的神经干细胞移植入脑出血部位,通过神经功能缺损评分来观察移植后大鼠神经行为学改善情况,并通过双标GFAP、NeuN、BrdU免疫组化来检测移植入脑的NSCs。结果移植的NSCs迁移至血肿周围区,并分化为神经元(≈10%BrdU阳性细胞)和星形胶质细胞(≈75%);与对照组比较,NSCs移植组在移植后1周有更好的神经功能缺损评分,而且此疗效可维持长达8周。结论移植的NSCs可在脑出血的大鼠脑中存活、迁移,并促进功能恢复。立体定向移植神经干细胞可改善实验性脑出血大鼠的神经功能。     

骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血损伤的实验研究

目的观察立体定向移植骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗MCAO大鼠的效果并探讨其可能机制。方法用改良线拴法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。60只模型大鼠随机分为移植组(A组)、磷酸盐缓冲液溶液组(B组)与假手术组(C组)。在模型建立后7 d,通过立体定向方式将1×106个BMSCs移植入A组大鼠损伤侧纹状体,B组大鼠以同样方式在同样部位移植等体积的磷酸盐缓冲液,C组完成立体定向过程,但无液体注入。应用改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS评分)、水迷宫测试观察大鼠神经功能恢复状况,并取大鼠脑组织行免疫组织化学染色。结果 A组m NSS评分优于B组、C组(P0.05);A组逃避潜伏期明显缩短(P0.05);跨越平台次数明显增多(P0.05)。A组大鼠在脑损伤中心及周围区,可见Brdu单染阳性细胞及Brdu+BDNF、Brdu+GFAP、Brdu+v WF、Brdu+VEGF双染阳性细胞。结论立体定向移植BMSCs可以显著改善MCAO大鼠神经功能恢复。     

神经胶质瘤诱导骨髓基质干细胞定向迁移的初步研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对神经胶质瘤的定向迁移能力及其在脑内的分布规律. 方法 从雄性Wistar大鼠股骨和胫骨中分离出BMSCs并进行传代培养,采用免疫荧光检测BMSCs表面抗原并将其向脂肪细胞和成骨细胞方向诱导分化.证明BMSCs性质.立体定向接种C6胶质瘤细胞于Wistar大鼠脑内基底节区以建立鼠腩胶质瘤模型,7 d后将5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的BMSCs接种入鼠脑对侧半球、对侧脑室和鼠尾静脉.BMSCS移植14d后心脏灌注取脑制成石蜡切片.以HE染色确定胶质瘤性质.SABC法免疫荧光染色显示BMSCs对神经胶质瘤组织的定向迁移能力及其在脑内的分布规律. 结果 对侧半球组和对侧脑室组均可见移植的BMSCs多沿针道直线分布并向对侧胶质瘤迁移.在胶质瘤与正常脑组织交界处可见激发出绿色荧光的阳性BMSCs:鼠尾静脉组亦可见少量BMSCs阳性细胞分布在胶质瘤组织周围. 结论 BMSCs通过脑实质、脑室及静脉注射途径均可定向迁移到胶质瘤组织,提示BMSCs可作为一种新的细胞载体用于胶质瘤的基因治疗.     

BMSCs移植对大鼠脑梗死后神经功能恢复及Nogo-A表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）静脉移植对大鼠脑梗死后神经功能恢复及对Nogo-A表达的影响。方法将大鼠随机分成假手术组、模型对照组、溶剂对照组和移植组。全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,线栓法制作大鼠MCAO模型;移植组自尾静脉注射BMSCs悬液,溶剂对照组注射磷酸盐缓冲液;造模成功后第3、7、14和21 d通过神经功能缺损程度评分,观察其恢复状况;RT-PCR法检测Nogo-AmRNA的表达水平,免疫组化方法检测Nogo-A蛋白的表达水平。结果移植组第7、14和21 d神经功能恢复优于对照组;移植组第3、14和21 d脑组织损伤区周边组织中Nogo-AmRNA表达水平和Nogo-A蛋白的表达水平较对照组降低（P〈0.05）。结论 BMSCs移植可促进大鼠脑梗死后的神经功能恢复,其作用机制可能与下调Nogo-A的表达水平有关。     

骨髓间充质干细胞移植治疗对大鼠脑梗死后神经再生抑制因素的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉移植对大鼠脑梗死后Nogo-A、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)蛋白的影响。方法实验动物分成假手术组、损伤对照组、溶剂对照组和移植组,各组再分为3d、7d、14d和21d组。全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,线栓法制作大鼠脑梗死模型。移植组自大鼠尾静脉注射BMSCs悬液1ml,溶剂对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS)。对各组动物进行神经功能缺损程度评分,免疫组化方法检测Nogo-A、OMgp和MAG的表达水平。结果移植组7、14和21d神经功能恢复优于对照组;移植组术后3、14和21d Nogo-A蛋白表达较对照组降低(P<0.05);移植组7、14和21d OMgp蛋白表达较对照组降低(P<0.05);移植组术后3、7、14和21d MAG蛋白表达较对照组降低(P<0.05)。结论 BMSCs移植可促进大鼠脑梗死后的神经功能恢复,其作用机制与下调Nogo-A、OMgp和MAG的表达有关。     

骨髓基质细胞源神经干细胞移植对脑出血大鼠行为及神经细胞凋亡的动态影响

目的 探讨骨髓基质细胞源神经干细胞对实验性脑出血大鼠行为及神经细胞凋亡的影响.方法 采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型.32只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠分为假手术组、出血对照组、出血骨髓基质细胞移植组和出血骨髓基质细胞源神经干细胞移植组.分别于移植后1d、7d、14d对大鼠进行神经功能缺损评分和空间学习能力检测,并在移植后7d和14d,分别应用TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果 移植后7d各组神经功能均有不同程度的恢复(P<0.05),BMSCs源神经干细胞移植组大鼠的神经功能评分显著优于BMSCs移植组(P<0.01).移植7d后可提高大鼠空间学习能力,且各时间点BMSCs源神经干细胞移植组的空间学习能力改善优于BMSCs组(P<0.05).BMSCs源神经干细胞移植组出血边缘区凋亡细胞数明显少于BMSCs移植(P<0.05).结论 骨髓基质细胞源神经干细胞移植可改善脑出血大鼠神经行为,减少神经细胞凋亡,显著优于BMSCs移植.

Abstract：

Objective To study the effects of bone marrow stromal cells ( BMSCs) derived neural stem cells on behavior and celluar apoptosis in experimental intracerebral hemorrhage (ICH) . Methods The model was established by ster-otactic infusing autologous caudate artery blood into right nucleus caudatus of SD rats. 32 Sprague-Dawley rats were divided into sham-operated group,ICH control group,BMSCs transplanted group and BMSCs derived neural stem cells transplanted group. The neurogenic behavior of the rats were evaluated on 1,7,14 days after transplantation. The rats were killed separat-edly on 7,14days after transplantation. The brain sections were used for TUNEL staining. Result The neurological function of rats were recovery on 7 days later after transplantation( P < 0. 05 ) . The recovery of neurological function in BMSCs derived neural stem cells transplantation group was much evidentl than BMSCs transplantation group( P < 0. 01). The abilities of spatial learning and memory of rats on 7 days later after transplantation got improved (P < 0. 05). More satisfactory outcome got in BMSCs derived neural stem cells transplanted group than in BMSCs transplanted group ( P < 0. 05 ) . The number of apoptotic cells in the group of BMSCs derived neural stem cells transplanted group decreased evidently compared with that of the BMSCs transplantation group (P <0.05). Conclusion BMSCs derived neural stem cells may make the neurogenic behavior recovery, and decrease the infarct volumes and the number of apoptotic cells in ICH.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,并探讨其可能的机制。方法经体外培养并纯化BMSCs,移植前以10 mg/L的BrdU进行标记。线栓法制作大鼠MCAO模型,随机分为移植A组、B组及对照C组。在模型建立后7 d,通过尾静脉分别将3×10~6个BMSCs、1×10~6个BMSCs移植入A、B组大鼠体内,C组不作处理。于移植前、后分别进行改良神经损伤严重程度评分(mNSS)及Morris水迷宫测试,并取大鼠脑组织行免疫组织化学染色。结果移植A组与移植B组、C组比较,行为学恢复更为明显,(P0.01);B、C两组相比无显著性差异(P0.05);移植A组大鼠学习和记忆能力较C组明显改善(P0.05)。A、B组大鼠在脑损伤中心及周围区,可见Brdu单染阳性细胞及Brdu+MAP-2、Brdu+GFAP、Brdu+vWF、Brdu+VEGF双染阳性细胞。结论 BMSCs经尾静脉移植至MCAO大鼠体内后,可在大鼠体内存活、分化,并促进大鼠伸进功能恢复。疗效与移植细胞数量相关。     

骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血大鼠的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞移植对脑出血大鼠的行为和血肿周围神经细胞凋亡的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,使用立体定向纹状体注入胶原酶法制作大鼠脑出血模型。SD大鼠30只,随机分为对照组和移植组(各15只),对照组制作脑出血模型,不移植;移植组制作脑出血模型并于造模后48 h经立体定向脑内注射1×105个干细胞,并于移植后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d进行神经功能缺损评分,对照组在相应时间点同样评分,各组再根据时间的不同随机分成五个亚组(每组3只),在相应时间点处死大鼠行免疫组织化学法检测细胞凋亡。结果在移植后1 d、3 d,两组大鼠评分及血肿周围脑组织内凋亡细胞的数量均较高,两组之间无显著性差异。在移植后第5 d、7 d,两组大鼠评分及血肿周围脑组织内凋亡细胞的数量开始下降,移植组下降幅度大于对照组,两组之间差异显著。移植后14 d,两组之间无显著性差异。结论骨髓间充质干细胞移植可明显促进大鼠脑出血后神经功能的恢复,其机制可能与下调血肿周围神经细胞凋亡有关。     

NGF基因转染骨髓间充质干细胞治疗脑出血的分析

目的 研究NGF基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脑出血大鼠运动功能的改善效果.方法 制作Wistar大鼠尾状核脑出血模型,随机分为A组:脑出血模型组;B组:细胞培养液移植组;C组:BMSCs移植组;D组:NGF基因修饰的BMSCs移植组,4组于移植后1、7、14、28 d进行神经功能缺损评分,并经免疫组织化学鉴定了解移植细胞在大鼠脑内的生存及分化情况.结果 C、D 2组的大鼠运动功能改善好于A、B组,并且D组改善又好于C组,免疫组化显示移植细胞生长良好,并且在血肿灶周围聚集融合,免疫荧光双标证实被移植细胞在脑内分化为神经元、星型胶质细胞.结论 NGF基因修饰的BMSCs移植治疗能显著改善脑出血动物的运动功能,是一种很有发展前途的方法,值得进行更深入的研究.     

骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆大鼠海马胆碱能系统的影响

目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马胆碱能系统的影响.方法 体外分离、扩增大鼠BMSCs,并用BrdU标记.采用双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制备VaD模型.将大鼠随机分为3组:A组(BMSCs移植组):于双侧颈总动脉结扎后4周经尾静脉注射BMSCs;B组(对照组):注射同等剂量PBS;C组(假手术组):暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行尾静脉注射.BMSCs注射后4周,采用免疫荧光染色观察大鼠海马BrdU标记细胞;测定海马结构内乙酰胆碱酯酶(ACHE)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性.结果 BMSCs移植后4周A组大鼠海马结构可见荧光标记的BMSCs;A、B组AChE和ChAT活性均较C组降低(P＜0.05),且A组较B组显著增强(P＜0.05).结论 静脉移植BMSCs可增强VaD大鼠海马胆碱能系统活性.     

The high integration and differentiation potential of autologous neural stem cell transplantation compared with allogeneic transplantation in adult rat hippocampus

Cell therapy is thought to have a central role in restorative therapy, which aims to restore function to the damaged nervous system. The purpose of this study was to establish an autologous neural stem cell (NSC) transplantation model using adult rats and to compare survival, migration, and differentiation between this system and allogeneic NSC transplantation. Furthermore, we compared the immunologic response of the host tissue between autologous and allogeneic transplantation. NSCs were removed from the subventricular zone of adult Fischer 344 rats using stereotactic methods. NSCs were expanded and microinjected into normal hippocampus in the autologous brain. Allogeneic NSC (derived from adult Wistar rats) transplantation was performed using the same procedure, and hippocampal sections were analyzed immunohistologically 3 weeks post-transplantation. The cell survival and migration rate were higher for autologous transplantation than for allogeneic transplantation, and the neuronal differentiation rate in the autologous transplanted cells far exceeded that of allogeneic transplantation. Furthermore, there was less astrocyte and microglia reactivity in the host tissue of the autologous transplantation compared with allogeneic transplantation. These findings demonstrate that immunoreactivity of the host tissue strongly influences cell transplantation in the CNS as the autologous transplantation did not induce host tissue immunoreactivity; the microenvironment was essentially maintained in an optimal condition for the transplanted cells.     

不同途径移植人脐血单核细胞对脑出血大鼠神经功能的影响

目的 观察经不同途径移植人脐血单核细胞14天后脑出血大鼠神经功能评分的变化,探讨干细胞移植的最佳途径。方法 采用自体血二次注血/退针法制作脑出血模型,经计算机断层扫描（computed tomography,CT）检查证实脑出血模型构建成功后,将从人脐血中分离出的新鲜人脐血单核细胞（human umbilical cord blood mononuclear cells,HUCBMC）分别经Wistar大鼠尾静脉、左心室及脑出血局部移植入实验动物体内,对照组造模成功后,不予治疗,自然转归。各组模型均于移植1、3、7、14天采用Longa评分法评价大鼠神经功能。结果 经尾静脉、左心室及脑出血局部移植HUCBMC的大鼠神经功能评分,经统计学处理后提示不同时间点大鼠的神经功能评分差异有显著性（F =131.87,P＜0.001）;移植时间（time）与移植方法（group）的交互效应显示不同的治疗方法时间趋势相同（F =35.54,P＞0.05）。大鼠神经功能评分组间比较显示,不同移植方法对大鼠神经功能评分变化的差异有显著性（F =6.434,P =0.001）;HUCBMC移植术后1天脑局部移植组大鼠神经功能评分（2.35±0.67）高于其他组,移植术后3、7、14天脑局部移植组大鼠神经功能评分（分别为0.40±0.60,0.25±0.37,0.03±0.22）低于其他组;HUCBMC移植后1天4组大鼠神经功能评分差异无显著性（F =2.14,P =0.10）;移植3、7、14天4组大鼠神经功能评分差异有显著性（F值分别为5.59,22.94,11.07,其对应P值均＜0.01）;相同移植途径不同时间点多个样本均数之间比较各组差异有显著性（F值分别为27.71,29.07,92.11,13.47,其对应P＜0.001）;尾静脉与左心室移植组各时间点神经功能评分差别无显著性（P分别为0.85,0.08,0.70,0.68）。结论 经尾静脉、左心室及脑出血局部途径移植人脐血单核细胞治疗脑出血大鼠神经功能均有改善;脑局部移植是脐血单核细胞移植的最佳途径。     

骨髓间充质干细胞自体移植治疗大鼠脑冷冻伤的实验研究

目的探索骨髓间充质干细胞（MSCs）对脑损伤的治疗作用。方法将Wistar大鼠自体骨髓MSCs在体外扩增并经Brdu标记后，通过颈内动脉注射将其植入冷冻伤脑水肿动物体内，从组织化学和神经功能评分两个方面观察骨髓MSCs自体移植的治疗作用。实验动物分为4组；A组给予常规治疗；B组给予干细胞自体移植；C组在进行干细胞自体移植的同时给予神经节苷脂和丹参注射液治疗；D组在干细胞自体移植前给予罂粟碱开放血脑屏障。结果经颈内动脉注射的Brdu标记的大鼠自体骨髓MSCs细胞可向脑损伤区域迁移。B、C、D组Brdu阳性细胞的数量和神经功能恢复的程度均高于A组（P〈0．05）。与B组相比，C组未增加Brdu阳性细胞的数量，但是神经功能恢复的程度明显升高（P〈0．05）。D组Brdu阳性细胞的数量、神经功能恢复的程度均高于B组（P〈0．05），但神经恢复的程度与C组相比无明显差异（P〉0．05）。结论骨髓间充质干细胞可以通过循环系统向脑损伤区迁移而发挥其治疗作用。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血32例：是否安全、可行及有效？

背景：大量动物实验证实骨髓间充质干细胞在适宜条件下能够定向分化为神经细胞,但目前其应用于临床治疗神经系统损伤性疾病的报道较少。 目的：观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血的近期疗效。 方法：以2007-11/2009-01聊城市脑科医院神经外科收治的32例脑出血患者作为治疗组,根据患者一般状况及血肿量大小,分别行钻孔引流或开颅血肿清除,均留置血肿腔引流管,退至血肿腔边缘,通过引流管注射自体骨髓间充质干细胞悬液3.5 mL。选择同期入院但未行干细胞移植的40例患者作为对照组。分别于移植前和移植后6个月进行神经功能缺损程度评定(NIHSS评分)和日常生活活动能力评定(Barthel指数),行颅脑MRI、血生化指标、肿瘤标记物检查,监测干细胞移植的安全性。 结果与结论：移植前两组患者NIHSS评分及Barthel指数基本相似。与对照组比较,移植后6个月治疗组NIHSS评分显著降低(P < 0.01),Barthel指数显著升高(P < 0.01)。与移植前比较,治疗组在移植后6个月NIHSS评分显著降低(P < 0.01),Barthel指数显著升高(P < 0.01)。治疗组2例患者在移植后出现一过性发热,予对症处理后症状缓解。移植后6个月随访,除1例患者因肺癌导致肿瘤标记物CA-153升高外,颅脑MRI及血生化指标均未出现明显异常,说明自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血是安全可行的,且在近期内疗效确定,远期疗效尚待进一步观察。     

内质网蛋白29在大鼠脑出血继发性脑损伤中的作用研究

目的观察大鼠脑出血后脑组织中内质网蛋白29(ERp29)的表达变化,进而探讨其在脑出血继发性脑损伤中的作用。 方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为2组：对照组(10只,不做处理)和实验组(50只,在脑立体定位仪下采用自体血注入尾状核法制备脑出血模型)。实验组再分为术后6h、12h、18h、24 h、48 h5个时相点,对各个时相点的模型鼠分别采用RT-PCR和Western blotting方法检测脑组织中ERp29和内质网伴侣蛋白Bip/GRp78 mRNA及蛋白的表达。结果在脑出血大鼠模型中,BiP/GRp78 mRNA及蛋白表达在术后12h开始升高,并随着时间的推移在术后18h、24h、48 h继续逐渐升高,于术后48 h达顶峰,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。ERp29 mRNA及蛋白表达在术后6h、12h无明显变化,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);而在术后18h、24h、48h ERp29 mRNA及蛋白表达明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论大鼠脑出血后18h时血肿周围脑组织细胞中发生了内质网应激反应,而ERp29在此过程中表达升高,推测其有可能作为一种保护因子并以与BiP/GRp78相互作用形成复合物的形式来抵抗细胞内质网应激反应,进而减轻血肿对周围脑组织造成的损害。     

血红素氧合酶-1在大鼠实验性脑出血中的作用机制

目的探讨血红素氧合酶-1（HO-1）在大鼠实验性脑出血（ICH）脑损伤中的作用。方法采用立体定向法将自体浓缩红细胞注入大鼠基底节制作实验动物模型，通过免疫组化、干湿重法观察术后各个时间点血肿周围脑组织HO-1的表达及脑组织含水量的变化并进行神经功能缺损评分。结果血肿周围脑组织HO-1在6h即开始表达，24h明显增多，48-72h达高峰；脑组织含水量在24h无明显变化，48h有所增加，72h显著增加并达到高峰，随后逐步下降；二者呈正相关（r=0．760，P％0．05）。ICH后各时间点神经功能缺损评分与相应时间点血肿周围脑组织HO-1表达的水平呈正相关（r=0．669，P〈0．05）。结论HO-1的表达在红细胞致ICH后迟发性脑损伤和脑水肿的形成过程中起着重要作用。     

微囊化人视网膜色素上皮细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的 观察微囊化人视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗帕金森病(PD)大鼠的疗效. 方法 采用机械分离法和酶消化法原代培养人RPE细胞,传代后用高压静电微胶囊成型装置制作海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化细胞,将其立体定向移植人6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致的PD模型大鼠的右侧纹状体.实验分为模型组、裸细胞(RPE)组、空囊对照(APA)组以及微囊化细胞(APA-RPE)组.检测各组大鼠移植前后阿朴吗啡诱导的旋转行为变化和移植后8周纹状体中多巴胺(DA)的含量. 结果 APA-RPE组大鼠在移植后4周阿朴吗啡诱发的旋转次数[(6.25±1.04)r/min]开始减少,与移植前[(12.88±7.34)r/min]相比减少幅度为51.48%,至第8周[(5.87±2.03)r/min]减少更加明显,减少幅度为54.43%,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组[(108.14±1.89)mol/L]比较,APA-RPE组移植后8周[(342.63±28.32)mol/L]大鼠纹状体DA含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),而RPE组和APA组未见明显变化. 结论 微囊化人RPE细胞对PD大鼠模型有治疗作用,可作为一种前景良好的治疗PD的方法 进一步研究.     

缺氧预处理后骨髓源神经干细胞联合脑源性神经生长因子移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究

目的 研究缺氧预处理后骨髓源性神经干细胞（source n eural s tem c ells o f b one m arrow,BMSCs- NSCs）联合脑源性神经生长因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）立体定向移植治疗大鼠脑缺 血再灌注损伤的疗效,为高原地区脑梗死的细胞移植治疗提供动物实验基础。 方法 72只SD大鼠随机分为缺氧预处理组和常氧组,每组各36只,缺氧预处理组造模前3 d进行低 氧预处理（hypoxic preconditioning,HPC）。两组均制作大脑中动脉阻塞再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R）模型。每组分为3个亚组（BMSCs-NSCs+BDNF组、BMSCs-NSCs组和对 照组,每组各12只）,分别梗死灶同侧尾状核内立体定向移植BMSCs-NSCs+BDNF、BMSCs-NSCs和 DMEM/F12培养基。移植后3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d进行神经功能缺损评分,每个时间点每组 取2只大鼠,断头取脑后行免疫组织化学染色,观察5-溴脱氧尿嘧啶（5-Bromo-deoxyuridine,Brdu）阳 性细胞的迁移路径,行CD133、Nestin、微管相关蛋白2（microtubule-associated protein 2,MAP-2）、兔 抗微管蛋白（β-tubulin）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、半乳糖神经酰胺 （Galactosylceramidase,Galc）免疫荧光染色,了解骨髓源性神经球分化情况。 结果 常氧BMSCs-NSCs+BDNF组、常氧BMSCs-NSCs组、缺氧预处理BMSCs-NSCs+BDNF组、缺氧预处 理BMSCs-NSCs组7 d、14 d、21 d、28 d和35 d的神经功能评分均显著低于同组3 d时的神经功能评分。移 植3 d时缺氧预处理对照组神经功能学评分显著低于常氧对照组（P =0.040）;移植7 d时缺氧预处理 BMSCs-NSCs+BDNF组神经功能评分显著低于常氧BMSCs-NSCs+BDNF组（P =0.031）。无论缺氧预处 理组还是常氧组,BMSCs-NSCs+BDNF组CD133、Nestin、MAP-2、β-tubulli n、GFAP、Gal c免疫荧光染色光 密度值（integral optical density,IOD）均显著高于BMSCs-NSCs组（均P＜0.001）;BMSCs-NSCs+BDNF组、 BMSCs-NSCs移植组各检测指标IOD均高于对照组（均P＜0.001）。 结论 大鼠缺氧预处理后BMSCs-NSCs联合BDNF立体定向移植可显著提高BMSCs-NSCs的效果。缺氧 预处理并不能促进外源性BMSCs-NSCs分化,但却能明显改善大鼠神经功能。     

睾酮对脑出血大鼠脑、肺TNF-α、IL-1β含量的影响及可能机制

目的探讨睾酮在脑出血大鼠急性脑、肺损伤发生、发展中的作用及可能机制。方法 (1)雄性Wistar大鼠55只,分为对照组、脑出血组和氟他胺预处理组。(2)立体定向技术自体血尾状核注入法制作脑出血大鼠模型;氟他胺预处理组大鼠行氟他胺溶液灌胃(50mg/kg.d)10d后,行脑出血造模;对照组大鼠尾状核注入等量生理盐水。(3)ELISA法测定睾酮及TNF-α、IL-1β含量。(4)HE染色光镜观察大鼠脑、肺病理变化。结果 (1)脑出血组大鼠血清睾酮含量显著升高(P<0.05);而氟他胺预处理组各时相点大鼠血清睾酮含量均显著低于脑出血组(P<0.05);(2)脑出血组大鼠各时相点TNF-α、IL-1β含量较对照组显著增高(P<0.05),而氟他胺预处理组各时相点较脑出血组显著降低(P<0.05)。(3)脑出血组大鼠肺匀浆TNF-α、IL-1β含量亦显著增高(P<0.05),氟他胺预处理组显著降低(P<0.05);(4)脑出血组大鼠脑、肺组织出现明显水肿及炎性改变,氟他胺预处理组大鼠脑、肺组织以上变化明显减轻。结论脑出血大鼠脑损伤同时,出现急性炎性肺损伤,氟他胺预处理后炎性反应明显减轻。提示睾酮含量变化可能与炎性肺损伤密切相关。