80例头部立体定向间充质细胞移植治疗脑瘫疗效分析

目的 头部立体定向间充质细胞移植治疗脑瘫临床疗效分析.方法 对80例脑瘫患儿行头部立体定向间充质细胞移植治疗,并进行术前、术后半年、术后1年粗大运动功能评定（GMFM）、儿童精细运动功能评估量表（FMMF）、日常生活能力评定（ADL）Barthel指数、Ashworth痉挛分级评估运动功能改善情况评分.结果 患儿感觉功能、运动功能、日常生活能力明显改善,P＜0.01.结论 头部立体定向间充质细胞移植治疗可以显著改善脑瘫换患儿症状,改善运动、言语、智力等症状,促进脑功能恢复.     

自体骨髓间充质干细胞回输对脑性瘫痪儿童运动功能发育的影响

背景：自体骨髓干细胞对神经系统疾病具有一定的治疗作用,但对脑瘫治疗缺乏系统有对照的临床研究。 目的：分析自体骨髓间充质干细胞移植对脑性瘫痪儿童运动功能发育的影响。 方法：将34例脑性瘫痪者按其家长是否同意使用自体骨髓干细胞移植治疗分为治疗组和对照组,治疗组采取自体骨髓间充质干细胞移植结合康复训练,对照组只采用康复训练,分别在治疗前和治疗后3个月做粗大运动功能测试量表(GMFM)评估并进行对比。 结果与结论：与治疗前比较,2组治疗后3个月GMFM评分均增高,而GMFM评分增加量均降低,差异均有显著性意义 (P < 0.05)。治疗组GMFM评分增加量高于对照组(P < 0.05)。 提示自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑性瘫痪是有效的,对促进脑性瘫痪患儿运动功能发育有积极作用。     

脐血间充质干细胞移植治疗儿童型脊肌萎缩症1例

背景：国内外已有实验动物和临床应用脐血间充质干细胞移植治疗神经系统遗传性疾病安全、有效的诸多报道。 目的：探讨脐血间充质干细胞移植治疗儿童进行性脊髓性肌肉萎缩症的可行性及效果。 方法：2010-01收治1例确诊为儿童进行性脊髓性肌肉萎缩症患儿,经药物及康复治疗无效,行脐血间充质干细胞移植治疗。移植途径采取首次静脉输注,后3次蛛网膜下腔注入,1次/周,每次细胞数量达(4~6)×107个,4次为1个疗程。治疗前和治疗后半年均需完善神经系统体检、实验室检查、肌酶、FIM评分、肌电图等。 结果与结论：移植6个月与移植前比较,肌酶下降,FIM评分由68分提高到93分,肌电图检查重收缩每10.0 ms所检肌运动单位增加两三个,双下肢肌力增加,生活自理能力改善。随访10个月,患者未出现明显的不良反应。提示脐血间充质干细胞移植治疗该例儿童进行性脊髓性肌肉萎缩症患儿有效,其神经功能恢复明显。     

脐带间充质干细胞移植治疗初发1型糖尿病

背景：研究证实,新诊断的1型糖尿病患者,接受自体造血干细胞治疗后,绝大多数患者胰岛β细胞功能增强,不依赖胰岛素的时间也延长。 目的：观察人脐带间充质干细胞移植治疗初发1型糖尿病的临床疗效。 方法：选择12例病程<3个月的初发1型糖尿病患者,其中6例行人脐带间充质干细胞和胰岛素治疗,另外6例行单纯胰岛素治疗。移植前及移植9个月后分别监测空腹及餐后血糖、胰岛素用量、C肽、HbA1c的变化和记录不良反应。 结果与结论：随访9个月,干细胞治疗组的空腹血糖,糖化血红蛋白及C肽水平都有明显的改善,而对照组C肽水平明显下降,其他指标变化不明显。提示,人脐带间充质干细胞治疗初发1型糖尿病疗效良好。     

脐带源与骨髓源干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效比较

目的 观察人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗大鼠脊髓损伤后的功能恢复和急慢性排斥反应.方法 选取SD大鼠40只按随机数字表随机分成3组:脐带间充质干细胞移植组16只、骨髓间充质干细胞移植组16只和PBS组8只.采用脊髓半切手术制作大鼠脊髓损伤模型,损伤后对脐带间充质干细胞移植组进行HUCMSCs移植,对骨髓间充质干细胞移植组行大鼠BMSCs移植,对PBS组移植同等剂量的PBS.通过BBB评分对各组动物的术后恢复进行评估比较.用ELISA法测定移植后3组动物不同时间点(移植后1周、1个月、2个月及3个月)血中IL-2及IL-10的水平,并通过免疫组化的方法检测移植局部病理切片CD3+细胞浸润的情况.结果 在移植后1周、1个月、2个月及3个月时,检测到干细胞移植组各个时间点大鼠静脉血中IL-2水平较PBS组明显升高,而IL-10水平较PBS组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).大鼠骨髓间充质干细胞移植组在移植后1周、1个月、2个月及3个月时大鼠静脉血中IL-2水平较脐带间充质干细胞移植组明显升高,IL-10水平较对照组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).三组在急性期(细胞移植后l周)移植局部均有大量CD3+细胞浸润.而移植的慢性期(细胞移植后3个月)大鼠骨髓间充质干细胞移植组仍存在大量CD3+细胞浸润,与其他两组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 异体干细胞细胞移植后可发生急、慢性免疫排斥反应.HUCMSCs较大鼠BMSCs有更低的免疫源性,更利于脊髓损伤的功能恢复.     

脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病效果分析

目的 探讨脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病的临床效果.方法 选择我院收治的38例帕金森病为研究对象,采用足月妊娠产妇脐带处理后干细胞,于第2周期进行鞘内注射移植治疗.分析治疗后临床症状及体征改善情况.治疗前及治疗后1个月,采用帕金森病统一评分量表（UPDRS）对患者精神、行为、情绪、日常活动、运动功能、并发症进行评价.结果 所有患者的静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势步态障碍均不同程度缓解,治疗过程中及治疗后患者各项生命体征均较平稳.38例患者移植后UPDRS评分显著低于移植前,差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗过程中患者有低热、头痛、腰痛、兴奋症状出现,给予对症处理后均完全缓解.均未见抗移植物宿主病.结论 脐带间充质干细胞移植可显著改善帕金森病患者的临床症状.     

鼠神经生长因子注射头部运动区治疗痉挛型脑瘫临床观察

目的 对比头部运动区注射鼠神经生长因子治疗痉挛性脑瘫的临床疗效及安全性。方法 纳入2013-06—2017-06就诊于菏泽市立医院儿科6个月~6岁的痉挛性脑瘫患儿150例,随机分为实验组和治疗组,所有患儿接受运动及综合康复治疗。实验组在对照组基础上进行鼠神经生长因子18μg头部运动区注射,1次/d,10次为1个疗程,共进行3个疗程,每个疗程间隔10d。观察2组粗大运动功能量表(GMFM-88)评分情况。结果 所有患者3个疗程后GMFM-88评分较治疗前显著提高,差异有统计学意义(P0.05);实验组3个疗程后GMFM-88评分显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);实验组治疗后6个月~3岁患儿评分与3~6岁患儿比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 鼠神经生长因子可有效改善6个月~6岁痉挛型脑瘫患儿的运动功能,值得临床推广。     

脐带间充质干细胞移植治疗终末期肝硬化的疗效及安全性

背景：骨髓间充质干细胞移植已应用于治疗终末期肝病并取得一定疗效。 目的：观察脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化患者的疗效及安全性。 方法：无菌条件下分离培养脐带间充质干细胞,选择60例肝硬化患者,在内科治疗基础上经肝动脉插管进行脐带间充质干细胞移植。 结果与结论：移植2,4,8,12周后,患者血清白蛋白、前白蛋白水平逐渐升高(P < 0.05),总胆红素、凝血酶原时间明显低于治疗前水平(P < 0.05)。移植后患者乏力、腹胀、纳差明显好转,未发生与移植相关的严重并发症。说明脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化安全有效,能改善患者的肝功能、凝血功能及临床症状。     

甲钴胺在脑性瘫痪患儿嗅鞘细胞移植治疗中的应用效果观察

目的探讨甲钴胺在脑性瘫痪患儿嗅鞘细胞移植治疗中的疗效。方法 32例脑性瘫痪患儿随机分为2组,对照组予常规嗅鞘细胞移植治疗,观察组予甲钴胺+嗅鞘细胞移植治疗,应用小儿脑瘫粗大运动评价量表(GMFM-88)对患儿治疗前及治疗疗程结束4周后运动功能的肌力进行评估,应用改良Ashworth法评估患儿的肌张力,同时应用脑瘫日常生活活动能力量表(ADL)评价患儿日常生活活动能力。结果治疗后2组GMFM-88评分、ADL评分均明显提高,小腿肌张力明显降低,且观察组GMFM-88评分、ADL评分明显高于对照组,小腿肌张力明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论嗅鞘细胞移植治疗小儿脑性瘫痪具有确切的疗效,同时联合应用甲钴胺可进一步改善患儿的运动功能及肌张力,提高日常生活活动能力。     

脐带间充质干细胞移植治疗遗传性痉挛性截瘫2例

背景：遗传性痉挛性截瘫是一种具有临床及遗传异质性的神经系统遗传病,目前临床治疗无明显效果。 目的：观察脐带间充质干细胞移植治疗遗传性痉挛性截瘫的效果及安全性。 方法：将细胞总数为(2~6)×107个人胎儿脐带间充质干细胞通过静脉输注和腰穿鞘内注射途径移植到自愿接受干细胞移植的2例遗传性痉挛性截瘫患者体内。移植后定期随访观察患者临床症状及各项指标的变化并进行综合分析。 结果与结论：2例患者经脐带间充质干细胞移植治疗后临床症状均明显好转,双下肢肌张力明显降低,不需借助拐杖或他人帮助可独立行走,并且步态平稳,移植后各项生化指标正常,未出现严重的并发症和明显的不良反应。随访1年余2例患者的症状持续缓解无复发。说明脐带间充质干细胞移植治疗遗传性痉挛性截瘫近期疗效明显,可以改善患者的临床症状,延缓病情的进展。     

脐带间充质干细胞与许旺细胞共移植修复大鼠坐骨神经缺损

Previous research has demonstrated that cotransplantation of umbilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs) and Schwann cells (SCs) can repair spinal nerve injury, but few studies have investigated their use in peripheral nerve regeneration. In the present study, we cotransplanted UCMSCs and SCs to repair 5-mm left sciatic nerve defects in rats, and compared the effects of UCMSCs + SCs transplantation with UCMSCs or SCs transplantation alone. After UCMSCs + SCs transplantation, nerve conduction velocity of the left sciatic nerve and gait were both improved. Retrograde tracing analysis demonstrated that the mean count of fluorogold-labeled neurons, as well as the mean axon count and axon density, were significantly greater in the left sciatic nerve after UCMSCs + SCs transplantation, compared with UCMSCs or SCs transplantation alone. Improvements in conduction velocity and increased sheath thickness in the left sciatic nerve were similar after UCMSCs transplantation and UCMSCs + SCs transplantation. These findings suggest that UCMSCs transplantation can promote the repair of sciatic nerve defects to some extent, but that combined UCMSCs + SCs transplantation has a significantly greater regenerative effect.     

人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤

背景：脐带间充质干细胞体内移植治疗脑损伤的效果目前尚较少见报道。 目的：观察人脐带间充质干细胞移植对大鼠液压冲击脑损伤的治疗作用。 方法：从新生儿脐带中分离、培养间充质干细胞。制作中度打击大鼠脑损伤模型。实验分为4组：①脐带间充质干细胞移植组：损伤后原位移植脐带间充质干细胞。②对照组：损伤后原位注射等量DMEN/F12培养基。③单纯损伤组：仅施行损伤。④假损伤组：仅切开头皮及颅骨,不实施机械性损伤。 结果与结论：脐带间充质干细胞移植后1~3周,动物神经功能评分较对照组明显改善;4周后,各组动物神经功能评分均恢复正常。免疫组织化学检测表明少部分移植细胞表达神经元特异性烯醇化酶,胶质纤维酸性蛋白。与对照组相比,移植组损伤区血管内皮生长因子表达明显增加,凋亡细胞减少。提示脐带充间质干细胞脑内移植有助于促进创伤性脑损伤后的早期功能恢复,这种治疗效果是通过刺激宿主细胞分泌血管内皮生长因子,增加损伤区微血管密度,抑制宿主细胞凋亡等实现的。     

血小板裂解液对脐带间充质干细胞增殖与分化的影响

背景：脐带间充质干细胞是近年来干细胞生物学研究中发现的重要细胞之一，在细胞治疗领域有着良好的应用前景。血小板裂解液对于干细胞的增殖及诱导分化都存在不同程度的有利作用，在一定程度上甚至可以代替甚至优于血清在培养基中的作用。 目的：对血小板裂解液结合脐带间充质干细胞的研究作一综述。 方法：于万方等中文数据库和PubMed等英文数据库中，以“脐带，间充质干细胞，血小板裂解液，分化，增殖”为关键词检索文献，总结脐带间充质干细胞及血小板裂解液的生物学特性和相关临床应用，并汇总有关血小板裂解液对脐带间充质干细胞增殖活性和诱导分化能力影响的研究结果。 结果与结论：血小板裂解液对脐带间充质干细胞的增殖活性及诱导分化有正面影响，这使血小板裂解液在干细胞移植治疗中将会起到无可比拟的作用。     

Human umbilical cord mesenchymal stem cells promote peripheral nerve repair via paracrine mechanisms

Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells(h UCMSCs) represent a promising young-state stem cell source for cell-based therapy. h UCMSC transplantation into the transected sciatic nerve promotes axonal regeneration and functional recovery. To further clarify the paracrine effects of h UCMSCs on nerve regeneration, we performed human cytokine antibody array analysis, which revealed that h UCMSCs express 14 important neurotrophic factors. Enzyme-linked immunosorbent assay and immunohistochemistry showed that brain-derived neurotrophic factor, glial-derived neurotrophic factor, hepatocyte growth factor, neurotrophin-3, basic fibroblast growth factor, type I collagen, fibronectin and laminin were highly expressed. Treatment with h UCMSC-conditioned medium enhanced Schwann cell viability and proliferation, increased nerve growth factor and brain-derived neurotrophic factor expression in Schwann cells, and enhanced neurite growth from dorsal root ganglion explants. These findings suggest that paracrine action may be a key mechanism underlying the effects of h UCMSCs in peripheral nerve repair.     

hTERT介导脐带间充质干细胞实现永生化的研究

目的 通过转染人端粒酶逆转录酶催化亚单位(hTERT)建立永生化脐带间充质干细胞(UCMSCs),用以获得足够多的UCMSCs满足体外研究与临床需要. 方法 原代分离培养人UCMSCs,取第4代UCMSCs行流式细胞术检测UCMSCs表面特异标志物表达:利用脂质体介导pLXSN-hTERT正义表达质粒转染UCMSCs,建立永生化UCMSCs:RT-PCR检测转染前后hTERTmRNA表达水平,细胞免疫荧光方法检测hTERT蛋白表达,流式细胞术观察hTERT转染后细胞周期改变. 结果 流式细胞术结果显示UCMSCs强表达CD29、CD44、CDl05,极低表达CD31、CD34、CD45,检测结果符合人UCMSCs特征;RT-PCR检测单纯UCMSCs低表达hTERT mRNA,pLXSN-hTERT正义表达质粒转染后hTERT mRNA表达明显增高;细胞免疫荧光显示hTERT全部表达于细胞核,转染后胞核荧光强度明显增强;细胞周期检测结果显示转染后处于S期UCMSCs数目明显增多,细胞可获得长期稳定传代(＞35代). 结论 以hTERT转染UCMSCs在体外可获得长期稳定传代培养细胞,可基本满足体外研究与临床需要.     

人脐带间质干细胞大鼠脑内移植的实验研究

目的探讨人脐带间质干细胞(UCMSC)在大鼠脑组织移植后的存活、迁移及分化。方法体外培养、扩增人脐带MSC,取第6代以内标记后的脐带MSC移植到成年大鼠海马CA1段。分别用荧光显微镜及免疫组织化学方法观察不同时间段移植细胞在体内的存活、迁移情况,并检测移植细胞NSE、NF、GFA P的表达。结果人脐带可大量扩增间质干细胞;大鼠海马CA1段移植UCMSCs后,移植细胞至少可存活6周以上,向注射点临近脑组织移行超过1mm,并向远隔部位如室管膜下区迁移;免疫组织化学检测表明部分细胞表达NSE、NF。结论人UCMSC大鼠脑组织内移植后可长期存活,向室管膜下区迁移并有部分细胞转化为神经元。     

ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

目的 研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法 用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞(UCMSCs),PCR方法 检测外源基因的整合效率,将其分别置于亚低温(33℃)和正常体温(37℃)下培养,细胞免疫荧光方法 检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测细胞周期调控蛋白--周期素D1(Cyclin D1)、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶-2(CDK2)、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法 检测巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 PCR结果 显示ts-SV40LT抗原的基因片段被成功整合入干细胞,该细胞株在33℃条件下增殖生长旺盛,端粒酶活性高,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6均高表达,P16和P21低表达,同时高表达nestin,不表达NSE和GFAP;在37℃条件下细胞增殖缓慢甚至停滞,端粒酶活性低,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6的表达强度明显低于33℃条件,P16和P21则相反,与此同时nestin表达强度明显下降,NSE和GFAP表达水平上升.结论 通过ts-SV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控,为在亚低温条件下实现干细胞移植救治颅脑创伤患者提供了实验支持.     

温度敏感干细胞株的建立及其对脑外伤亚低温治疗的实验研究

目的 建立一种温度敏感型干细胞株,为脑外伤患者接受亚低温治疗期间实施干细胞原位移植打下基础.方法 用含温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(tsSV40LT)的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞(UCMSCs),PCR检测外源基因的整合,绘制细胞生长曲线,检测其致瘤潜能;脑组织行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化及原位细胞凋亡检测,实验动物予以神经功能缺陷评分.结果 基因片段被成功整合,该细胞株在33℃时增殖旺盛,可耐受极低的营养条件,并可在软琼脂中形成小的细胞克隆;37℃时停止生长,低营养耐受力下降,无细胞克隆形成;亚低温治疗期间脑组织高表达PCNA,凋亡少见.结论 温度敏感型干细胞株的建立使脑外伤患者在接受亚低温治疗期间实施干细胞原位移植提供了条件.     

脐带间充质干细胞向成骨细胞分化的潜能

背景：人脐带间充质干细胞含量丰富,较为原始,分化能力强,免疫原性低,是细胞治疗的理想靶细胞。 目的：体外分离培养脐带间充质干细胞并将其定向诱导为成骨细胞。 方法：无菌条件下培养脐带间充质干细胞,分为诱导组和对照组,诱导组用成骨诱导液处理、对照组为干细胞培养液处理。倒置光显微镜观察细胞形态,MTT法测细胞增殖,荧光双染法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期与细胞表面标记。诱导后：检测碱性磷酸酶,Von Kossa染色分析钙盐沉积,RT-PCR检测骨桥蛋白基因、碱性磷酸酶、骨唾液蛋白mRNA的表达。 结果与结论：传代细胞形态稳定、活力好,高标达CD44。诱导后von Kossa染色表现为阳性。碱性磷酸酶活性诱导组比对照组高(P < 0.05),不同时间点比较21 d最高(P < 0.05)。RT-PCR显示：诱导组21,28d 碱性磷酸酶mRNA表达均较与对照组增强(P < 0.05)。诱导组有骨唾液蛋白和骨桥蛋白基因mRNA表达。提示,人脐带间充质干细胞能够定向分化为成骨细胞。     

Human adipose tissue- and umbilical cord-derived stem cells: which is a better alternative to treat spinal cord injury?

Multiple types of stem cells have been proposed for the treatment of spinal cord injury, but their comparative information remains elusive. In this study, a rat model of T10 contusion spinal cord injury was established by the impactor method. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells(UCMSCs) or human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells(ADMSCs)(2.5 μL/injection site, 1 × 10~5 cells/μL) was injected on rostral and caudal of the injury segment on the ninth day after injury. Rats injected with mesenchymal stem cell culture medium were used as controls. Our results show that although transplanted UCMSCs and ADMSCs failed to differentiate into neurons or glial cells in vivo, both significantly improved motor and sensory function. After spinal cord injury, UCMSCs and ADMSCs similarly promoted spinal neuron survival and axonal regeneration, decreased glial scar and lesion cavity formation, and reduced numbers of active macrophages. BioPlex analysis of spinal samples showed a specific increase of interleukin-10 and decrease of tumor necrosis factor α in the ADMSC group, as well as a downregulation of macrophage inflammatory protein 3α in both UCMSC and ADMSC groups at 3 days after cell transplantation. Upregulation of interleukin-10 and interleukin-13 was observed in both UCMSC and ADMSC groups at 7 days after cell transplantation. Isobaric tagging for relative and absolute quantitation proteomics analyses showed that UCMSCs and ADMSCs induced changes of multiple genes related to axonal regeneration, neurotrophy, and cell apoptosis in common and specific manners. In conclusion, UCMSC and ADMSC transplants yielded quite similar contributions to motor and sensory recovery after spinal cord injury via anti-inflammation and improved axonal growth. However, there were some differences in cytokine and gene expression induced by these two types of transplanted cells. Animal experiments were approved by the Laboratory Animal Ethics Committee at Jinan University(approval No. 20180228026) on February 28, 2018, and the application of human stem cells was approved by the Medical Ethics Committee of Medical College of Jinan University of China(approval No. 2016041303) on April 13, 2016.