LC-MS/MS快速测定不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯的含量

 目的建立银杏叶中银杏内酯和白果内酯的高效液相电喷雾二级质谱(LC-MS/MS)定量分析方法,并对不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯含量进行测定。方法银杏叶样品以甲醇-水(1:9)提取,并用乙酸乙酯萃取,采用Phenomenex ODS柱分离,流动相为甲醇-水(60:40),流速0.7 mL·min^-1。电离方式为电喷雾正离子,采用多反应检测模式(MRM),捡测离子分别为m/z 409.4→345.3(银杏内酯A)、m/z 425.3→361.3(银杏内酯B)、m/z 441.4→325.3(银杏内酯C)和m/z 327.4→309.3(白果内酯)。结果分析过程仅需8.5 min,且无杂质干扰,4种成分回收率为91.79%～101.48%银杏内酯A,B和白果内酯含量分别在7月18日、8月19日和7月5日采摘的样品达到最高。结论方法快速、准确、选择性好,适合银杏内酯和白果内酯的定量分析,七月份叶子中内酯含量最高,为最佳采摘时间。     

银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的LC-MS/MS含量测定研究

该实验建立了同时测定银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸含量的LC-MS/MS方法。采用Agilent Zorbax Eclipse plus C₁₈色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.8 μm);流动相甲醇-0.2%甲酸水(95 : 5),等度洗脱;流速0.5 mL·min^-1;质谱条件:采用ESI^-多反应监测(MRM)模式扫描。结果显示,5种银杏酸在0.2~36.0 μg·L^-1线性关系均良好(r≥0.999 5);银杏酸C13 : 0(白果新酸),C15 : 1,C17 : 2,C15 : 0,C17 : 1的最低定量限(LOQ)分别为0.18,0.18,0.21,0.10,0.20 μg·L^-1;平均回收率在73.28%~87.56%;3批样品中所含总银杏酸的质量分数为0.023~0.028 μg·g^-1,均远低于药品注册标准规定的限度(含总银杏酸以白果新酸计,不得过百万分之二)。该方法简便、快捷,灵敏度高,可用于银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的快速测定。     

葛根素与血浆蛋白非共价结合的电喷雾离子阱质谱研究

 目的研究葛根素与人血清白蛋白和α₁-酸性糖蛋白之间的非共价结合特性。方法应用电喷雾离子阱质谱分别测定葛根素、人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数(K);根据热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型。结果葛根素与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白形成的复合物的结合常数分别为7.59×10⁴和8.01×10⁴mol·L^-1,最大表观化学结合计量比分别为1∶5和1∶8。葛根素与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白间的作用力主要为静电引力。结论电喷雾离子阱质谱是一种研究药物与蛋白间非共价结合的灵敏快速和准确的方法。     

LC-MS法研究血浆中氧化苦参碱及其代谢物在犬体内的药代学

目的 :建立同时测定Beagle犬血浆中氧化苦参碱及其代谢物的LC MS分析法 ,研究氧化苦参碱及其代谢物药代学过程。方法 :采用LichrospherC₁₈柱 (4.6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ,柱温 2 5℃。流动相 10mmol·L^-1醋酸铵水溶液 甲醇 (2 5∶75 ) ,流速 1mL·min^-1;电喷雾离子化 (ESI)方式 ,采用选择性离子检测法 ,检测离子为正离子 ,氧化苦参碱SIM的离子是 [M +H]⁺ ,m/z 2 6 5 .1;苦参碱SIM的离子是 [M +H]⁺ ,m/z2 4 9 2。结果 :氧化苦参碱与苦参碱在 2～ 5 0 0 0ng·mL^-1呈良好的线性关系 (r≥ 0. 9990 ) ,二者最小检出含量分别为 0. 6 ,0. 3ng·mL^-1。日内和日间误差均小于 4.7% ,方法回收率大于 96. 5 % ;氧化苦参碱的T_1/2 ,T_max,C_max,MRT ,AUC_{0→24 h}为 (5. 5± 1 5 8)h ,(1.0± 0 .30 )h ,(2 4 18 3± 970 78)ng·mL^-1,(3.2± 0. 6 4 )h ,(5 797 4± 90 8 16 )ng·mL^-1·h ,苦参碱的T_1/2 ,T_max,C_max,MRT ,AUC_{0→24 h}为 (9.8± 2.77)h ,(1.9± 1.0 9)h ,(15 32. 4± 4 94 86 )ng·mL^-1,(4 4± 1 97)h ,(5.5 30 5± 10 4 2.6 5 )ng·mL^-1·h。结论 :氧化苦参碱和苦参碱LC MS定量法灵敏、快速、简单 ,专属性强 ;氧化苦参碱口服后在Beagle犬体内转化较多。     

LC-ESI-MS/MS快速测定人血浆中艾司西酞普兰的浓度

 目的建立测定人血浆中艾司西酞普兰浓度的高效液相色谱串联质谱电喷雾法(LC-ESI-MS/MS)。方法以Agilent C₁₈反相柱(Agilent C₁₈ column,2.1 mm×30 mm,3.5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-5 mmol·L^-1甲酸铵(75∶25),流速为0.4mL·min^-1,柱温:25℃,以正己烷-异戊醇(95∶5)为提取剂。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对艾司西酞普兰(m/z 325→109)和内标利培酮(m/z 411→191)进行测定。并用此法测定40例患者稳态血药浓度。结果艾司西酞普兰的高、中、低(25,10,0.5μg·L^-1)3个浓度的平均回收率分别为99.16%、99.94%和92.28%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于10%;分析方法的最低定量限为0.2μg·L^-1。线性范围为:0.2～50μg·L^-1,回归方程为Y=0.394 2ρ+0.020 5,r=0.999 4(n=8)。结论该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究。     

HPLC-MS-MS法测定牛黄降压丸中芍药苷的含量

目的：建立HPLC-MS-MS法测定牛黄降压丸中芍药苷的含量。方法：采用HPLC-MS-MS法对牛黄降压丸中芍药苷进行含量测定,选用Agilent 20RBA×SB-C₁₈反相柱（2.1 mm×30 mm,3.5 μm）为色谱柱,流动相为甲醇-5 mmol·L^-1甲酸铵（75：25）,流速0.4 mL·min^-1,柱温25℃。质谱条件：电喷雾离子源（ESI）,检测方式为多离子反应监测（MRM）,负离子模式,用于定量分析的离子为m/z 525~449。结果：芍药苷的线性范围为20~2 000 mg·L^-1（r=1.000 0）;样品平均加样回收率为99.56%,RSD 0.86%。结论：该方法操作简便,快速,准确度好,能有效控制牛黄降压丸的质量。     

LC-ESI-MS/MS 快速测定人血浆中奥氮平的浓度及临床应用

 目的 建立快速测定人血浆中奥氮平浓度的高效液相色谱串联质谱电喷雾检测法 (LC-ESI-MS/MS) 。 方法 以 Dikma diamonsil^TM C₁₈ 反相柱（ 4.6 mm × 150 mm , 5 μm ）为色谱柱,流动相为甲醇 -5 mmol·L^-1 甲酸铵（ 90 ∶ 10 ）,流速为 1 mL·min^-1 ,柱温： 25 ℃ ,以乙酸乙酯 - 二氯甲烷（ 4 ∶ 1 ）为提取剂。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测（ SRM ）对奥氮平（ <> m/z 313 → 256 ）和内标替米沙坦（ <> m/z 515.3 → 497.3 ）进行测定,并用此法测定 36 例患者稳态血药浓度。 结果 奥氮平的高（ 50 μg · L^-1 ）、中（ 25 μg · L^-1 ）、低（ 1 μg·L^-1 ） 3 个浓度的平均回收率分别为 100.14% 、 100.33% 和 100.21% ,日内（ <> n =5 ）、日间（ <> n =3 ） RSD 均小于 15% ;分析方法的最低定量限为 0.5 μg · L^-1 。线性范围为： 0.5~100 μg · L^-1 ,回归方程为 <> F =1.529 5 <> ρ - 0.014 3 , <> r =0.999 （ <> n =8 ）,权重系数为 1/ <> ρ 。 结论 该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究。     

HPLC法测定抱龙丸中木香烃内酯及去氢木香内酯的含量

目的:建立HPLC法测定抱龙丸中木香烃内酯及去氢木香内酯的含量。方法:采用AgilentC₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(65∶35);流速1.0mL·min^-1;检测波长225nm。结果:木香烃内酯的线性范围为0.2～1μg,r=0.9999,平均回收率为99.96%,RSD=0.56%;去氢木香内酯线性范围为0.2～1μg;r=0.9999,平均回收率为99.68%,RSD=0.68%。结论:该方法结果准确,重复性好,可作为抱龙丸质量控制的定量方法。     

HPLC同时测定丹参水溶性及脂溶性5种成分的含量

目的: 建立同时测定丹参中2种水溶性和3种脂溶性成分的HPLC方法。 方法: 采用C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱:0~27 min,20%~25%A;27~55 min,25%~80%A;55~65 min,80%~80%A;检测波长为270 nm和286 nm,柱温30 ℃。 结果: 迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A分别在1.92×10^-2~0.96 μg,7.29×10^-2~3.64 μg,3.05×10^-3~0.15 μg,1.71×10^-3~8.55×10^-2 μg,5.80×10^-3~0.29 μg呈良好的线性关系。加样回收率分别为99.88%,104.75%,101.08%,101.41%,102.41%。 结论: 该含量测定方法准确、稳定、简便,分离效果好,能同时测定丹参中迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A 5种有效成分的含量。     

HPLC-ELSD在肝微粒体中银杏萜内酯的测定及其代谢研究中的应用

 目的为研究银杏萜内酯的代谢作用机制和进一步开发利用,建立其体外代谢的HPLC-ELSD测定法。方法以Dia-monsil^TMODS-C₁₈为色谱柱;甲醇-水(37:63)为流动相,流速1.0mL·min^-1;蒸发光散射检测器(ELSD)检测:漂移管温度60℃,雾化气(N₂)压力0.25MPa。鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯用乙醚提取,空气流下挥干乙醚,残渣用适量流动相溶解,取40μL进样,测定剩余银杏内酯A,B,C和白果内酯的含量。对鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯的HPLC-ELSD进行方法学研究,并应用于银杏萜内酯的体外代谢研究。结果白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C分别在3.30～133.60,6.8～136.0,5.40～109.0和3.6～72.0mg·L^-1内呈现良好的线性关系,相关系数r分别为0.9936,0.9964,0.9959和0.9930(n=5)。测得定量限分别为3.30,6.80,5.40和3.60mg·L^-1(RSD<15%,n=3);检测限分别为12,32,20和16ng(S/N=3);方法回收率分别为85.9%～102.9%,85.9%～98.3%,88.6%～98.9%和85.4%～101.8%(n=5),日内、日间精密度小于10.5%。孵育液中其他成分不干扰银杏萜内酯的测定。结论本法简便、准确,可用于银杏萜内酯的体外代谢研究。     

HPLC-ESI-MS测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量

目的 :建立测定冬虫夏草及蚕蛹虫草中腺苷和虫草素的方法。方法 :HPLC-ESI-MS法 ,用甲醇为提取溶剂 ,采用选择性离子检测 (SIM)和电喷雾离子化 (ESI) ;色谱条件 :ShimadzuVP-ODS色谱柱 ;流动相水 甲醇 甲酸(94∶5∶1) ,以 2 氯腺苷为内标。结果 :腺苷回归方程Y=0 .1346X +0.0129,r=0.9984 ,线性范围 0.5～124.5mg·L^-1;虫草素回归方程Y=0.2164X +0.0215 ,r=0.9991,线性范围 0.5～ 136 .5mg·L^-1;腺苷和虫草素加样回收率分别为 95 .8%及 98.1%。结论 :方法灵敏、快速和选择性好 ,可用于冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的分析及质量控制。     

测定天王补心丸和归脾丸中细叶远志皂苷的含量

目的：建立含远志中成药中细叶远志皂苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法,Alltima C18色谱柱 (4.6 mm × 250 mm,5 μm),流动相甲醇- 0.05%磷酸溶液(65∶35),检测波长202 nm,流速1.0 mL·min^-1。结果：细叶远志皂苷的理论塔板数为2 500。回归方程Y = 5.239 ×10⁶ X-6.247×10⁵（ r² = 0.999 4）,线性范围10～500 μg·mL^-1,平均回收率为97.5% (RSD均小于3.0%),最低检出浓度为5.50 μg·mL^-1。结论：检测含远志中成药中细叶远志皂 苷含量方法简便,结果准确,重现性好,可作为含远志的复方制剂质量控制标准。     

蛇床子中5种成分的HPLC测定法

目的：建立对蛇床子药材中花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素进行同时测定的RP-HPLC法。方法：采用Alltech C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.1%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速：1 mL·min^-1,检测波长245,325 nm；柱温为40 ℃。结果：花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素的线性范围分别为1～20 μg·mL^-1(r=0.999 9),1～20 μg·mL^-1(r=0.999 9),1～20 μg·mL^-1(r=0.999 8),100～1 200 μg·mL^-1(r=0.999 7),100～2 000 μg·mL^-1(r=0.999 9),回收率均大于95%。结论：本法简便、准确、重现性好,适用于蛇床子中5种成分的同时测定。     

高效液相色谱法荧光检测红车轴草提取物中的苯并(α)芘

目的：建立高效液相色谱法荧光检测红车轴草提取物中苯并(α)芘的测定方法。方法：以乙腈-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,Hypersil C₁₈色谱柱,荧光检测器检测,激发波长(Ex)为368 nm,发射波长(Em)为405 nm。结果：在0.93～37.2 ng·mL^-1内峰面积和浓度呈良好线性关系,样品平均回收率为85.2%(n=9)。结论：本法可以快速、准确地测定红车轴草提取物中的苯并(α)芘。     

RP-HPLC测定白鲜皮中梣酮含量

目的:建立RP-HPLC测定白鲜皮中梣酮含量的方法。方法:采用RP-HPLC,色谱条件:分离柱AT-LICHROM C₁₈(4.6 mm×250 mm),流动相甲醇-水(70∶30),检测波长240 nm,柱温25℃,流速0.5 mL.min^-1。结果:0.018～0.18 mg.mL^-1线性关系良好,平均回收率98.9%,RSD 1.2%(n=4)。结论:该方法简便、快速、重复性好,适用于白鲜皮中梣酮的定量分析。     

RP-HPLC测定白土茯苓中甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的含量

目的：建立白土茯苓中甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的RP-HPLC定量分析方法。方法：采用Century C18 AQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-水(4∶96)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为215 nm,柱温35 ℃。结果：甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷在19.12～382.4 μg·mL^-1线性关系良好(r=0.999 8),方法回收率为99.5%,RSD为2.1%(n＝9)。结论：该方法可用于白土茯苓的质量控制。     

HPLC测定地黄中麦角甾苷的含量

目的:建立用高效液相色谱法测定生地黄和熟地黄中麦角甾苷含量的方法。方法:采用C₁₈柱,以乙腈-0.1%醋酸为流动相,梯度洗脱,检测波长334 nm,流速1.0 mL.min^-1。结果:麦角甾苷在10~500μg.mL^-1时,呈良好的线性关系(r=0.999 0),平均回收率为100.1%,RSD 3.7%。结论:本法可作为地黄质量控制方法。     

RP-HPLC测定当药中环烯醚萜和三萜类成分含量

目的：建立应用RP-HPLC测定当药及不同部位中獐牙菜苦苷、当药苷、龙胆苦苷和齐墩果酸的含量测定方法。方法：采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相分别为乙腈-水(10∶90)和甲醇-水(86∶14),流速1.0 mL·min^-1,检测波长分别为獐牙菜苦苷238 nm、当药苷246 nm、龙胆苦苷274 nm和齐墩果酸207 nm,柱温25 ℃。结果：獐牙菜苦苷、当药苷、龙胆苦苷和齐墩果酸分别在0.034 2～0.427 5,0.001 1～0.014 0,0.000 7～0.008 8,0.001 1～0.008 8 mg·mL^-1线性关系良好,R2分别为0.999 2,0.999 8,0.999 9,0.999 6。结论：本法方便、准确,可用于当药药材的质量控制。     

HPLC测定洋金花中东莨菪碱和阿托品的含量

目的：建立测定洋金花中东莨菪碱和阿托品含量的反相高效液相色谱方法。方法：采用Hypersil BDS C₁₈柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),流动相甲醇-水（40∶60,水中含0.02 mol·L^-1醋酸钠、0.02％三乙胺、用冰醋酸调pH至6.0）,流速1.0 mL·min^-1,检测波长215 nm,柱温室温。结果：东莨菪碱和阿托品的平均回收率分别为99.6%和100.4%；RSD为1.8%和1.5%。结论：该方法简便、准确,灵敏度高,重复性好。