小鼠肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白的鉴定及其功能研究

目的：研究葡萄糖转运蛋白１（ｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｒ，ＧＬＵＴ１）在肾小球系膜细胞上的表达与功能，探讨共在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法：ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ蛋白质表达及其功能的检测分别采用ＲＴ－ＰＣＲ，细胞免疫荧光染色，流式细胞仪分析技术２－Ｄｅｏｘｙ－（＾３Ｈ）－Ｄ－Ｇｌｕｃｏｓｅ摄入法与根皮素竞争性抑制实验。结果：证实小鼠肾小球系膜细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ和蛋白质的表达并表肯定了系     

大黄酸对体外培养小鼠肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表？…

目的 研究大黄酸对系膜细胞葡萄糖转运蛋白１（ＧＬＵＴ１）及葡萄糖摄入的影响,探讨大黄酸拮抗ＴＧＦβ１作用的可能机制。方法 选用体外培养的小鼠肾小球系膜细胞,ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达的检测采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹,葡萄糖摄入的测定采用２－ｄｅｏｘｙ－〔＾３Ｈ〕－Ｄ－ｇｌｕｃｏｅｓ摄入法。结果 ＴＧＦβ１显著增加系膜细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ的表达和葡萄糖摄入,大黄酸对正常培养条件下系膜细胞的葡萄糖摄入没有     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达生长因子—β1的作用

目的 探讨Ａｍａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法 用体外制备的Ａｍａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍａｄｏｒｉ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍｏｌ／Ｌ培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞，观察ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ表达有改变。结果 糖化血清蛋白对肾小     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达转移生长因子-β_1的作用

目的　探讨Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法　用体外制备的Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍ ａｄｏｒｉ－ｍ ｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍ ｏｌ／Ｌ）培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞,观察ＴＧＦ－β１ ｍ ＲＮＡ表达有改变。结果　糖化血清蛋白在正常糖浓度下作用于系膜细胞４天后,ＴＧＦ－β１ 基因表达显著增高,为对照组的１．９９倍。结论　糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞中的ＴＧＦ－β１基因表达有明显的刺激作用,可能是其参与糖尿病肾病发病的机制之一     

氧化型脂蛋白(a)对血管内皮细胞血小板衍生生长因子B链表达的影响

目的 探讨氧化型脂蛋白（ａ）「ｏｘ－Ｌｐ（ａ）」对人脐静脉内皮细胞表达血小板衍生生长因子－Ｂ链（ＰＤＧＦ－Ｂ）的影响,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法 在内皮细胞培养基中分别加入天然脂蛋白（ａ）「ｎ－Ｌｐ（ａ）」与ｏｘ－Ｌｐ（ａ）及天然低密度脂蛋白（ｎ－ＬＤＬ）与氧化型低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）,３７℃温育。用细胞酶联免疫检测ＰＤＧＦ－Ｂ蛋白的表达,同时用荧光免疫方法证实ＰＤＧＦ－Ｂ蛋白     

大黄酸对系膜细胞葡萄糖摄入的影响及其机制

目的 研究大黄酸对系膜细胞葡萄糖摄入的影响,探讨大黄酸拮抗糖尿病肾脏代谢异常的可能机制。方法 选用体外培养的小鼠肾小球系膜细胞,葡萄糖摄入及其动力学的测定采用２－ｄｅｏｘｙ－［＾３Ｈ］－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｅ摄入法,葡萄糖转运蛋白１（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｅｒ,１ＧＬＵＴ１）ｍＲＮＡ表达的检测采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｘ印迹,结果 大黄酸对正常培养条件下系膜细胞的葡萄糖摄入及动力学没有明显影响     

内皮素对豚鼠心室肌细胞触发电活动的影响

应用玻璃微电极技术和膜片钳全细胞记录，研究出皮素（ＥＴ－１）致豚鼠心室肌细胞早期后除极（ＥＡＤｓ）的作用及发生机制。结果显示：５０ｎｍｏｌ／Ｌ ＥＴ－１灌流能明显延长动作电位时程ＡＰＤ５０，诱发ＥＡＤｓ。产生ＥＡＤｓ基础可能在于促进心室肌细胞Ｌ－型钙内流（Ｌ－Ｉｃａ），使稳态激活曲线左移，其作用呈浓度依赖性。     

晚期糖化终产物对糖尿病大鼠肾小球改变的影响

目的 探讨晚期糖化终产物（ＡＧＥｓ）与糖尿病肾小球改变的关系。方法 用链脲佐菌素制糖尿病大鼠模型，观察肾小球ＡＧＥｓ、血小板源生长因子－Ａ（ＰＤＧＦ－Ａ）和超微结构的变化。结果 肾小球ＡＧＥｓ从４周起、ＰＤＧＦ－Ａ从８周起增多，１２周时，基膜增厚，系膜增宽。氨基胍能降低ＡＧＥｓ含量，减缓肾小球改变。结论 ＡＧＥｓ是肾小球改变的重要原因，其致病过程可能有ＰＤＧＦ－Ａ参与。     

间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液的酶活性研究

目的探讨支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）多项酶活性与间质性肺疾病（ＩＬＤ）的关系。方法检测３０例ＩＬＤｓ：包括特发性肺纤维化（ＩＰＦ）１８例和结节病（Ｓａｒｃ）１２例与９例正常对照者的ＢＡＬＦ中超氧化歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）、血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性，并分类计数ＢＡＬＦ细胞成份。结果（１）ＩＰＦ组ＢＡＬＦ中各项酶活性均与对照组间差异有显著性（ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ降低，ＡＣＥ和ＬＤＨ升高）（Ｐ＜０．０５）；而Ｓａｒｃ组仅见ＡＣＥ明显增高（Ｐ＜０．０５）。（２）ＢＡＬＦ－ＡＣＥ与Ｓａｒｃ组淋巴细胞百分比及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值均有显著线性相关（Ｐ＜０．０５）。结论ＢＡＬＦ中ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＡＣＥ和ＬＤＨ活性测定，有助于进一步探讨ＩＬＤ发病机理和提供辅助诊断依据，ＢＡＬＦ－ＡＣＥ对判断Ｓａｒｃ活动性有重要临床意义。     

乙型肝炎病毒核心区DNA疫苗接种后H-2d小鼠的特异性免疫应答

目的观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心区ＤＮＡ疫苗接种后ＢＡＬＢ／ｃ（－２ｄ）小鼠的特异性免疫应答。方法构建ＨＢＶ核心区ＤＮＡ疫苗（ＰＪＷ４３０３／ＨＢｃ）;用基因枪法和肌肉注射祛将该ＤＮＡ疫苗接种ＢＡＬＢ／ｃ小鼠;ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清抗－ＨＢＣ（ＩｇＧ）及ＩｇＧ亚类（ＩｇＧ１,ＩｇＧ２ａ）;５１铬释放法检测小鼠脾细胞ＨＢｃＡｇ特异性ＣＴＬ活性。结果该ＤＮＡ疫苗在体外转染细胞中可良好表达ＨＢｃＡｇ。血清抗－ＨＢｃ终点滴度在ＤＮＡ疫苗基因枪组和肌肉注射接种组小鼠分别为１：３２８０５０和１：１０９３５０．两组小鼠的抗－ＨＢｃＩｇＧ亚类均以ＩｇＧ２ａ略占优势。两组小鼠的ＨＢＣＡｔｈｅ异性ＣＴＬ杀伤活性分别达到５１．１％和５５．２％。结论ＨＢＶ核心区ＤＮＡ疫苗在小鼠实验中具有良好的细胞免疫和体液免疫原性。     

Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞胸腺基质淋巴细胞生成素表达

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是否可以诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),并探讨核因子-κB(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法:原代培养VSMCs,分别用ox-LDL及ox-LDL联合NF-κB特异性抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预。采用免疫组织化学染色检测胞质中TSLP的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液中TSLP的浓度,用电泳迁移率实验检测NF-κB的结合活性。结果:正常未经ox-LDL刺激的VSMCs几乎不表达TSLP,经ox-LDL刺激后胞质及上清液中的TSLP表达明显增加,并有浓度和时间依赖性。Ox-LDL刺激VSMCs表达TSLP的同时NF-κB信号通路激活,经PDTC预处理后TSLP表达量显著减少。结论:Ox-LDL能够诱导VSMCs表达TSLP,其作用机制可能为上调NF-κB的结合活性。     

干扰Sestrin2表达对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察干扰Sestrin2表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型。Western blot检测不同浓度ox-LDL处理HUVEC不同时间Sestrin2的蛋白表达水平及转染Sestrin2 siRNA后Sestrin2的蛋白表达水平;流式细胞术检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡率的影响;Western blot检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC中Caspase-3表达的影响及ox-LDL对HUVEC中JNK通路的影响。结果不同浓度(20、50和100 mg/L)的ox-LDL处理HUVEC 24 h均能明显上调Sestrin2表达;50 mg/L ox-LDL处理HUVEC不同时间(24 h和48 h)均能明显上调Sestrin2表达,24 h达高峰;转染Sestrin2 siRNA能明显抑制Sestrin2的表达;ox-LDL能明显诱导HUVEC凋亡,转染Sestrin2 siRNA能明显促进由ox-LDL诱导的HUVEC凋亡;ox-LDL能明显诱导p-JNK和p-c-Jun的表达,且SP600125能明显抑制由ox-LDL诱导的Sestrin2表达。结论 ox-LDL通过JNK/c-Jun信号通路诱导Sestrin2表达,干扰Sestrin2表达能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC凋亡。     

氧化低密度脂蛋白、荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的：了解不同浓度氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响。方法：用佛波酯（PMA）诱导THP-1源性单核细胞分化为巨噬细胞：以不同浓度的ox-LDL孵育其24h;50mg/L的ox-LDL孵育使该细胞成为泡沫细胞,再以不同浓度荷叶生物碱对其进行干预24h。以PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测不同浓度ox-LDL及荷叶生物碱干预下各组细胞ABCA1的表达。以油红O染色观察各组细胞。结果：镜下：ox-LDL处理组细胞内脂滴的大小与多少随着ox-LDL的浓度的增加而增加;随荷叶生物碱浓度的升高而减少。ABCA1mRNA表达量：ox-LDL各组的表达量均较空白对照组明显升高[25mg/L组：（1.4677±0.0907）,50mg/L组：（2.0510±0.1065）,100 mg/L组：（1.5356±0.0903）比0mg/L组：（1.00）,P均〈0.05],荷叶生物碱各组细胞的表达量[荷叶生物碱25mg/L：（1.0460±0.0580）,50mg/L：（0.8391±0.0661）,100mg/L：（1.1003±0.0752）]表达量均较单纯50mg/L ox-LDL干预组（0.5136±0.0632）明显升高（P均〈0.05）。ABCA1蛋白的表达与ABCA1mRNA表达水平改变相一致。结论：ox-LDL可上调PMA诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞内ABCA1的表达,使其细胞内脂质蓄积。荷叶生物碱既使上述细胞内ABCA1表达上调,又使其细胞内脂质蓄积减少。     

Selectins and anti-CD15 (Lewis x/a) antibodies transmit activation signals in Hodgkin's lymphoma-derived cell lines

OBJECTIVE: The CD15 (Lewis x) cell surface oligosaccharide moiety is expressed in a variety of normal and tumor cells and recognized by selectins. The detection of CD15 on malignant Hodgkin-Reed-Sternberg (HRS) cells serves as a diagnostic marker of Hodgkin's lymphoma (HL). Retrospective studies suggest that the expression of nonsialylated CD15 molecules on HRS cells has a positive prognostic value while presence of sialylated CD15 may correlate with a poor outcome. However, the relevance of the CD15 antigen expression to the pathobiology of the disease is not clear. In this work, we studied the contribution of CD15 to cell adhesion and the activation of signaling cascades in two HL-derived cell lines, KMH-2 and L428. METHODS: Immobilized anti-CD15 monoclonal antibodies and recombinant E- and P-selectins were used to activate KMH-2 and L428 cells. Immunoblotting, immunoprecipitation, and the electrophoretic mobility shift assay were performed to detect tyrosine phosphorylation of c-Cbl, c-Jun nuclear translocation, and AP-1 DNA binding. RESULTS: Treatment of cells with antibodies against the sialylated and nonsialylated forms of CD15, or with immobilized selectins, induced changes in cell morphology. Tyrosine phosphorylation of c-Cbl, together with tyrosine phosphorylation of multiple protein substrates, was also induced. In addition, binding of the CD15 molecules induced nuclear translocation of c-Jun and an increase in AP-1 DNA binding activity. CONCLUSIONS: We suggest that CD15 has a dual physiological role, both as an adhesion molecule recognized by selectins and as a regulatory molecule upstream to specific intracellular signaling cascades with implications to the pathogenesis of HL.     

氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖和细胞功能及凋亡的影响

目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖抑制、细胞功能及促凋亡的影响,观察阿托伐他汀是否对其有保护作用。方法密度梯度离心法从猪的骨髓中分离出EPCs,将细胞分为3组,A组(培养液中不加ox-LDL),B组(ox-LDL 10 mg/L),C组(预先给予阿托伐他汀1μmol/L+ox-LDL 10 mg/L)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖能力、流式细胞仪检测细胞凋亡,同时测定细胞培养液中一氧化氮及一氧化氮合酶含量,观察对细胞功能的影响。结果ox-LDL可引起骨髓EPCs增殖能力降低,促进细胞凋亡,使细胞功能受损,阿托伐他汀可以减弱ox-LDL对细胞的不良影响。结论阿托伐他汀可以减弱ox-LDL引起的EPCs增殖能力降低,对ox-LDL引起的EPC凋亡及细胞功能的损害有保护作用。     

泽泻汤对氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察泽泻汤对血管平滑肌细胞(VSMC)周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、增殖细胞核抗原(PCNA)和p27表达的影响,探讨泽泻汤在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖中的作用和机制。方法通过体外50 mg/L ox-LDL诱导VSMC,建立VSMC增殖的动脉粥样硬化细胞模型;应用空白血清及20%泽泻汤含药血清干预。MTS法检测泽泻汤含药血清对VSMC增殖的影响;Western blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、PCNA和p27表达水平。结果 50 mg/L ox-LDL可明显诱导VSMC增殖。与ox-LDL组比较,泽泻汤含药血清可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,下调细胞Cyclin D1、Cyclin E和PCNA的表达,同时促进p27蛋白表达。结论泽泻汤具有抗VSMC增殖的作用,机制可能与上调p27蛋白和抑制Cyclin D1、Cyclin E、PCNA表达有关。     

血脂康对氧化型低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞凋亡的拮抗作用

目的研究血脂康对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养HUVEC,实验分为空白对照组、ox-LDL组、ox-LDL+不同浓度(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)血脂康组。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染细胞检测细胞凋亡,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS),蛋白免疫印迹分析细胞色素C(CytC)、Caspase-3和PARP-1蛋白的表达情况。结果血脂康(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)可拮抗ox-LDL诱导的HUVEC凋亡、ROS水平增加,100 mg/L血脂康可下调细胞CytC、Caspase-3和PARP-1蛋白的表达。结论血脂康可通过减少ROS形成而抑制CytC释放、减少Caspase-3和PARP-1活化抑制线粒体凋亡途径启动,拮抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡。     

白细胞介素10对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中SR-A表达的影响

目的:本研究旨在观察白细胞介素-10(IL-10)对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中清道夫受体A(SR-A)表达的影响,探讨在动脉粥样硬化形成中IL-10对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化的干预作用。方法:体外建立泡沫细胞培养体系,将细胞分为5组即THP-1单核细胞组,巨噬细胞组,IL-10刺激巨噬细胞组,ox-LDL刺激巨噬细胞组(泡沫细胞组),ox-LDL和IL-10联合刺激巨噬细胞组。采用RT-PCR和Westernbloting分别检测SR-A的mRNA和蛋白表达变化,脂质油红O化学染色方法检测各组细胞脂质摄取量的情况。结果:当THP-1分化为巨噬细胞时,SR-A开始大量表达;IL-10刺激可显著抑制巨噬细胞组SR-A的表达,其mRNA和蛋白分别下降为未刺激前的0.6倍和0.7倍,泡沫细胞形成率也下降为未刺激前的0.6倍。巨噬细胞经ox-LDL刺激形成泡沫细胞时,SR-A的表达进一步升高,其mRNA和蛋白分别增加为巨噬细胞组的1.5倍和1.4倍,泡沫细胞形成率提高为巨噬细胞组的1.7倍。在此过程中加入IL-10联合刺激,观察到SR-A的表达量有显著降低,其mRNA和蛋白均下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.4倍,ox-LDL的摄取量也下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.3倍。结论:IL-10抑制巨噬细胞SR-A表达,IL-10对ox-LDL诱导巨噬细胞SR-A的表达具明显干预作用。IL-10通过抑制SR-A表达可能在抗动脉粥样硬化的发生中发挥重要作用。