牛膝多糖刺激的DC联合CIK细胞对SW480的杀伤作用研究

从中药材牛膝中提取牛膝多糖(ABPS),用ABPS和/或SW480肿瘤抗原刺激的树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)对结肠癌细胞株SW480进行杀伤试验,研究ABPS刺激的DC联合CIK细胞的抗肿瘤效果.分离人外周血单个核细胞培养成DC和CIK细胞.①把DC分成4个组合:单纯DC组作为对照组,ABPS刺激DC实验组(ABPS刺激的质量浓度为50 mg·L-1),SW480肿瘤抗原刺激DC实验组,ABPS(50 mg·L-1)和SW480肿瘤抗原联合刺激DC实验组,流式检测比较各组DC细胞表面分子CD80,CD86,CD11c,CD40,HLA-DR的阳性率的差异(每组均为6例样本).②以上述4个组合的DC与CIK细胞以1∶5比例混合共同作为效应细胞;以SW480肿瘤细胞株为靶细胞,设置效靶比分别为30∶1,20∶1及10∶1,进行细胞杀伤活性试验,用CCK-8试剂盒检测、比较各组细胞杀伤活性的差异.③ELISA检测并比较上述细胞杀伤活性试验中效靶比为30∶1的实验组各反应孔(3个复孔)上清液中细胞因子IL-2,IL-12p70,IL-17及TNF-α的分泌水平的差异.结果显示:①ABPS和SW480肿瘤抗原联合刺激的DC表面CD80,CD11c,HLA-DR的阳性率显著高于其他实验组的DC(P＜0.05);CD86,CD40的阳性率显著高于单纯DC实验组(P＜0.05),与其他实验组无显著差异.②在效靶比分别为30∶1,20∶1及10∶1细胞杀伤活性试验中,ABPS刺激的DC+ CIK细胞组、SW480肿瘤抗原刺激的DC+ CIK细胞组对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性显著高于DC+ CIK细胞组(P＜0.05);ABPS+ SW480肿瘤抗原+DC+ CIK实验组对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性均显著高于其他实验组(P＜0.05).③效靶比为30∶1的细胞杀伤活性试验中,ABPS+ SW480抗原+DC+ CIK细胞组上清液中IL-12p70,TNF-α的分泌水平高于其他实验组,差异具有统计学意义(P＜0.05);IL-2,IL-17的分泌水平各组之间无显著差异.说明ABPS刺激的DC+ CIK细胞对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性显著提高,ABPS和SW480肿瘤抗原共同刺激DC能协同CIK提高对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性.     

白桦脂醇的体内抗肿瘤作用及机制

目的:研究白桦酯醇的体内抗肿瘤作用及机制。方法:采用小鼠肝癌细胞(H22)建立荷瘤小鼠动物模型,白桦脂醇灌胃10 d后,计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数;MTT法测定小鼠T淋巴细胞转化功能及NK细胞杀伤活性。结果:白桦脂醇三个剂量组、阳性对照组瘤重均减轻,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05),中剂量组抑瘤率最高;三个剂量组脾指数与阳性对照组比较差异有统计学意义(P0.05),中、高剂量组与阴性对照组比较差异亦有统计学意义(P0.05);中剂量组胸腺指数与阴性、阳性对照组比较差异有统计学意义(P0.05);中剂量组T淋巴细胞转化率与阴性对照组和阳性对照组比较差异有统计学意义(P0.05);低剂量组在效靶比为25∶1时,NK细胞杀伤活性高于阳性对照组(P0.05),在效靶比为100∶1,杀伤活性高于阴性对照组(P0.05);中剂量组在效靶比为25∶1、50∶1、100∶1时,NK细胞杀伤活性均同时高于阴性对照组和阳性对照组(P0.05);高剂量组在效靶比为25∶1时,NK细胞杀伤活性高于阴性对照组和阳性对照组(P0.05)。结论:白桦脂醇通过刺激激活免疫器官,提高T淋巴细胞转化功能、提高NK细胞杀伤活性来抑制肿瘤细胞增殖。     

参芪扶正注射液对脐血CIK细胞体外增殖及杀瘤活性的影响

目的观察参芪扶正注射液对脐血细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外增殖及杀瘤活性的影响。方法用脐血单个核细胞,诱导分化CIK细胞,分为4组。细胞因子组加入γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素2(IL-2)、CD3单抗细胞因子;参芪扶正注射液组:加入参芪扶正注射液;细胞因子+参芪扶正注射液组:加入参芪扶正注射液﹑IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3单抗细胞因子;对照组只加培养液。培养12天后CIK细胞达到增殖高峰期,用流式细胞仪检测细胞表型和增殖能力,MTT法检测CIK细胞对K562细胞的杀伤作用,ELISA法检测CIK细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果对脐血CIK细胞体外增殖的影响,在培养12天时,参芪扶正注射液组与细胞因子组比较差异无统计学意义(P>0.05),细胞因子+参芪扶正注射液组与细胞因子组相比差异有统计学意义(P<0.01);CIK细胞对K562细胞的杀伤作用,各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),参芪扶正注射液组CIK细胞在12、16天时分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α因子水平优于对照组(P<0.01)。结论参芪扶正注射液对脐血CIK细胞既有显著的增殖和杀瘤作用,又可促进脐血CIK细胞分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α。     

激发型CD28单抗参与诱导的CIK对乳腺MDA-MB-231、MCF-7细胞的杀伤作用研究

目的观察激发型CD28单抗参与诱导的杀伤细胞(CIK)的增殖能力、表型特征及对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞株的杀伤作用。方法制备鼠抗人激发型CD28单抗,采用激发型CD28单抗参与CIK的诱导,观察CIK细胞的增殖能力及表型特征;采用CCK-8法检测激发型CD28单抗参与诱导的CIK对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞株的杀伤率,采用流式细胞术检测乳腺癌细胞的凋亡率。结果激发型CD28单抗能明显促进CIK细胞的体外增殖且能明显上调具有肿瘤杀伤活性的T细胞比例;CCK8检测发现,激发型CD28单抗诱导的CIK对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7的杀伤率均高于对照组(P均0.05),且杀伤率随效靶比升高,并确定20∶1为最终效靶比;流式细胞术检测发现,加入激发型CD28单抗诱导的CIK,可提高乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7的凋亡率及坏死率(P均0.05)。结论激发型CD28单抗参与诱导的CIK能明显提高CIK的增殖能力及上调具有肿瘤杀伤活性的T细胞比例,增强对乳腺癌细胞的杀伤能力,可能为乳腺癌的免疫治疗提供新思路。     

益气平悬饮提取物对肺癌胸水中肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的影响

目的:探讨中药复方益气平悬饮治疗肺癌性胸水的局部免疫学机理.方法:采集病人胸水,用不连续密度梯度离心搜集肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和自体肿瘤细胞(ATC),培养液中培养,效靶比为40:1,加含益气平悬饮培养液中混合培养2、7、14、21d,MTT比色法,计算细胞杀伤活性.结果:益气平悬饮组第7d、14d、21dTIL杀伤活性分别达(46.62±0.36)%、(58.87±0.42)%、(59.10±1.09)%,与对照组比较有统计学意义(P＜0.01).结论:益气平悬饮能明显提高TIL杀伤ATC的活性.     

中药多糖与过继免疫联合治疗卵巢癌

目的:观察比较中药多糖干预后的多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞在不同条件下特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的效果,探讨中药与过继免疫联合治疗卵巢癌的可行性。方法:实验分4组,CIK组、PBOC-CIK组、SKOV3Ag-PBDC-CIK组及SKOV3Ag-ADC-CIK组。联合猪苓多糖(100 mg.L-1)、茯苓多糖(100 mg.L-1)、黄芪多糖(100 mg.L-1)及多种细胞因子对卵巢癌患者外周血CIK细胞进行体外诱导和扩增,以卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原致敏外周血与腹水来源的DC细胞,比较单纯CIK、未经抗原负载的外周血树突状细胞(DC)活化的CIK、经抗原负载的外周血DC活化的CIK、经抗原负载的腹水DC活化的CIK对SKOV3细胞的杀伤作用,并动态观察CIK细胞的增殖情况。结果:①CIK与DC共培养可显著增加CIK增殖倍数(P<0.01);②中药多糖干预后CIK对SKOV3卵巢癌细胞株有明显杀伤作用,且杀伤率随效靶比增加而提高,细胞杀伤率分别为(9.12±0.21)%,(10.15±0.27)%,(11.20±0.34)%和(12.73±0.43)%(P<0.05);③SKVO3冻融抗原负载的外周血DC可显著增加CIK特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的能力,杀伤率显著高于未负载抗原外周血DC活化的CIK细胞和单纯CIK细胞(P<0.05或P<0.01);④腹水来源DC负载抗原后所活化的CIK细胞对SKOV3细胞杀伤率,与负载抗原的外周血来源DC活化的CIK无明显差异。结论:经SKOV3肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏的DC,可促进中药多糖干预后CIK细胞扩增,增强CIK细胞对SKOV3卵巢癌细胞的杀伤作用,且卵巢癌腹水可作为过继免疫治疗中效应细胞的一个重要来源。     

大量培养诱导乳腺癌患者自体DC和CIK细胞的研究

目的探讨获得大量乳腺癌患者自体树突状细胞(dendritic cells,DCs)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced cells,CIK细胞)的可行性。方法实验组,乳腺癌患者经外周血干细胞动员,取50mL外周血分外周血单个核细胞(PBMC),用AIM-V无血清培养基培养DCs和CIK,并设健康人对照组,用RPMI1640完全营养培养基。结果实验组PBMC产出2×108个并诱导出1.2×107个DCs和2×109个CIK细胞,显著高于对照组(P<0.01)。DCs的CD86、CD11c和HLA-DR分子都有较高表达,CIK细胞CD3 、CD56 双阳性细胞达到14.41%。细胞毒实验提示CIK细胞有强大的杀瘤活性。结论乳腺癌患者经外周血干细胞动员,用AIM-V无血清系统培养,少量外周血可诱导大量优质自体DCs和CIK细胞。     

扶正抗癌方联合自体CIK免疫治疗对中晚期胃癌患者细胞免疫功能和远期生存率的影响

目的观察扶正抗癌方联合自体CIK免疫治疗对中晚期胃癌患者细胞免疫功能和远期生存率的影响。方法将70例中晚期胃癌患者随机分为对照组和联合组各35例,对照组给予自体CIK免疫治疗,联合组在对照组基础上加用扶正抗癌方,比较2组疗效、细胞免疫功能变化及远期生存情况。结果联合组治疗总有效率显著高于对照组(P0.05);治疗3个月、6个月2组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明显升高(P均0.05),且联合组治疗6个月时各指标水平均显著高于对照组(P均0.05);随访3个月、6个月期间2组生存情况比较差异无统计学意义(P均0.05),随访1年、2年联合组生存率显著高于对照组(P均0.05)。结论扶正抗癌方联合自体CIK免疫疗法可显著改善中晚期胃癌患者临床症状,提高机体细胞免疫功能,延长生存时间,提高生存率,具有推广价值。     

补肾解毒方阻断程序性死亡受体1/程序性死亡配体1信号通路对辅助慢性乙型肝炎树突状细胞疫苗抗乙型肝炎病毒的免疫效果与机制研究

目的研究补肾解毒方阻断程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)信号通路对辅助慢性乙型肝炎(以下简称乙肝)树突状细胞(DC)疫苗抗乙肝病毒(HBV)的免疫效果与机制。方法将40只BALB/c HBV转基因小鼠按照随机数字表法分为补肾解毒方组、PD-L1抗体组、磷酸缓冲液(PBS)组及联合组4组,每组10只。4组分别予补肾解毒方、PD-L1单克隆抗体、PBS溶液及补肾解毒方联合PD-L1单克隆抗体,持续给药2周后处死小鼠,观察小鼠脾脏组织γ干扰素(IFN-γ)水平、CD8~+T淋巴细胞的PD-1表达情况及乙肝表面抗原(HBsAg)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性。结果联合组小鼠脾脏组织IFN-γ水平高于补肾解毒方组、PD-L1抗体组、PBS组(P0.05);补肾解毒方组、PD-L1抗体组小鼠脾脏组织IFN-γ水平高于PBS组(P0.05);补肾解毒方组与PD-L1抗体组小鼠脾脏组织IFN-γ水平比较差异无统计学意义(P0.05)。联合组小鼠脾脏组织CD8~+T淋巴细胞PD-1表达均低于补肾解毒方组、PD-L1抗体组、PBS组(P0.05);补肾解毒方组、PD-L1抗体组CD8~+T淋巴细胞PD-1表达均低于PBS组(P0.05);PD-L1抗体组CD8~+T淋巴细胞PD-1表达低于补肾解毒方组(P0.05)。当效靶比为100∶1、50∶1时,联合组小鼠脾脏组织HBsAg特异性CTL杀伤活性均高于补肾解毒方组、PD-L1抗体组、PBS组(P0.05);PD-L1抗体组HBsAg特异性CTL杀伤活性均高于补肾解毒方组、PBS组(P0.05);补肾解毒方组与PBS组HBsAg特异性CTL杀伤活性比较差异无统计学意义(P0.05)。当效靶比为25∶1时,补肾解毒方组、PD-L1抗体组、联合组小鼠脾脏HBsAg特异性CTL杀伤活性均高于PBS组(P0.05);补肾解毒方组、PD-L1抗体组、联合组小鼠脾脏HBsAg特异性CTL杀伤活性两两比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 HBV感染时阻断PD-1/PD-L1信号通路可起到恢复特异性T淋巴细胞功能的作用,补肾解毒方能有效发挥对HBV感染时的T淋巴细胞免疫功能的调整作用,补肾解毒方联合PD-L1抗体更具明显协同作用。     

扶正抑瘤方对前列腺癌荷瘤裸鼠的抑癌作用及血清IL-2表达的研究

目的:探究扶正抑瘤方对前列腺癌荷瘤裸鼠的抑癌作用及血清IL-2的表达。方法:取100μL细胞悬液于裸鼠右侧腋下皮下注射。每周测量肿瘤长度和宽度,计算肿瘤体积,42 d后处死裸鼠,解剖分离瘤块,称质量、拍照。MTS法检测靶细胞增殖情况,ELISA法检测血清中IL-2的表达。结果:扶正抑瘤方组、多西紫杉醇组、联合用药组裸鼠肿瘤体积和瘤体质量均低于对照组(P0.05或P0.01);扶正抑瘤方组、多西紫杉醇组、联合用药组PC-3细胞活性均低于对照组(P0.05或P0.01);扶正抑瘤方组、多西紫杉醇组、联合用药组裸鼠IL-2含量均低于对照组(P0.01);联合用药组裸鼠IL-2含量低于扶正抑瘤方组(P0.05),多西紫杉醇组与联合用药组裸鼠IL-2含量比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:扶正抑瘤方对前列腺癌荷瘤裸鼠具有抑癌作用,可促进小鼠脾脏细胞对肿瘤细胞PC-3细胞的杀伤作用,扶正抑瘤方和多西紫杉醇联合用药可降低前列腺癌荷瘤裸鼠血清IL-2水平。     

桃仁蛋白对树突细胞抗原递呈功能的影响

目的:探讨桃仁蛋白(psp)对树突细胞抗原递呈功能的影响。方法:制备荷S180小鼠模型,psp组给以腹腔注射桃仁蛋白,并设空白对照组;分离小鼠骨髓细胞,经IL-4、GM-CSF诱导其DC成熟,并以冻融S180抗原预致敏;在含IL-2培养体系中加入小鼠脾细胞,观察负载S180抗原T细胞对S180杀伤作用。结果:psp组对S180杀伤作用明显优于空白对照组(效靶比为40∶1时,0.638±0.044vs0.743±0.060;效靶比为20∶1时,0.561±0.041vs0.668±0.074;效靶比为10∶1时,0.461±0.036vs0.586±0.054)。结论:桃仁蛋白能够增强小鼠DC抗原递呈功能。     

扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌A549细胞的影响及机制

目的观察扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌A549细胞生长、凋亡的影响,探讨其协同抗肿瘤的可能机制。方法应用MTT法检测扶正抗癌方(0.211、0.316、0.474、0.711、1.067、1.6、2.4、3.6 mg/m L)和吉非替尼(3.95、5.92、8.18、13.33、20、30、45、67.5!mol/L)对A549细胞增殖的影响;用流式细胞术观察对照组(完全培养液组)、中药组(扶正抗癌方,1.6 mg/m L)、西药组(吉非替尼,45!mol/L)、联合组(扶正抗癌方1.6 mg/m L+吉非替尼45!mol/L)A549细胞凋亡;用Western blot检测各组EGFR、p-EGFR、EZH2、PPAR-γ及P53蛋白表达。结果扶正抗癌方及吉非替尼均有抑制肿瘤细胞增殖作用。扶正抗癌方联合吉非替尼干预后细胞凋亡率为(12.6±4.5)%,明显高于扶正抗癌方(4.6±0.7)%及吉非替尼(7.8±2.7)%,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,联合组p-EGFR、EZH2下调(P0.05),PPAR-γ及P53蛋白上调(P0.05),西药组及中药组EZH2下调(P0.05),中药组PPAR-γ上调(P0.05);与西药组比较,联合组p-EGFR下调(P0.05),PPAR-γ上调(P0.05);与中药组比较,联合组p-EGFR下调(P0.05)。结论扶正抗癌方联合吉非替尼能显著抑制A549细胞的增殖生长,促使肿瘤细胞凋亡;其协同抗肿瘤活性的机制可能与下调p-EGFR、EZH2及上调PPAR-γ、P53蛋白有关。     

香菇多糖诱导CIK细胞对肺癌A549细胞杀伤作用的研究

目的:明确香菇多糖对CIK细胞(细胞因子诱导的杀伤细胞)体外增殖及抗肿瘤活性的影响,为临床应用香菇多糖提高CIK细胞过继免疫治疗疗效提供理论数据。方法:于CIK细胞培养第11天加入不同浓度香菇多糖,诱导培养72h后比较细胞密度,流式细胞仪检测CIK细胞CD3、CD56双阳率,CCK8法检测比较经不同浓度香菇多糖诱导后的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率。结果 :诱导72h后,加入5、25、50μg/m L香菇多糖的CIK细胞密度虽有上升但与未加入香菇多糖的空白对照组比较无统计学差异(P0.05)。经5μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率与空白对照组相当(P0.05);而经25、50及75μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率较空白对照组明显升高(P0.05),以50μg/m L香菇多糖诱导组的差异最为明显。经5μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率与空白对照组相当(P0.05);而经25、50及75μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌细胞杀伤率明显高于空白对照组(P0.05),以50μg/m L香菇多糖诱导组对肺癌细胞的杀伤率最高。结论:香菇多糖对CIK细胞的体外增殖无促进作用,高浓度香菇多糖反而抑制CIK细胞增殖;适当浓度的香菇多糖处理CIK细胞能使CD3、CD56双阳性率上升,同时可提高CIK细胞对肺癌A549细胞株杀伤率。香菇多糖诱导CIK细胞的最适浓度在50μg/m L。     

益气养阴方及其拆方影响急性髓细胞白血病细胞Flt3和N-ras表达研究

目的研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对Flt3和N-ras在人急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的作用机制。方法收集60例AML患者骨髓单个核细胞,将所提取每例患者的细胞混悬液分成4组:对照组不加药物,实验组分别加入益气养阴方、扶正方、祛邪方中药制剂。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫印迹法(Western bloting)观察益气养阴组、扶正组、祛邪组及对照组对Flt3、N-ras基因及FLT3蛋白表达的影响。结果 RT-PCR法检测:对照组、益气养阴组、扶正组、祛邪组Flt3基因表达率分别为(90.78±6.92)%、(38.18±4.50)%、(65.57±5.55)%、(61.35±6.39)%,N-ras基因表达率分别为(93.28±5.54)%、(34.38±6.69)%、(59.42±7.35)%、(65.28±7.64)%,益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Westernbloting检测:对照组、益气养阴组、扶正组、祛邪组FLT3蛋白灰度值分别为0.8127±0.0284、0.4265±0.0353、0.5396±0.0274、0.5473±0.0282,对照组与益气养阴组、扶正组、祛邪组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论中药益气养阴方可抑制AML细胞的克隆性增殖,可降低Flt3和N-ras在AML细胞的表达水平,对AML治疗具有作用。     

黄芪解毒方对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及C-myc基因表达的影响

目的:探讨黄芪解毒方对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及C-myc基因表达的影响。方法:胃癌细胞SGC7901分别用黄芪解毒汤浓缩液(实验组)及阿霉素溶液(阳性对照组)干预,无任何药物处理的胃癌细胞SGC7901细胞为对照组。应用MTT法及流式细胞法分别检测胃癌细胞SGC7901的增殖及凋亡情况,RT-PCR法检测细胞中C-myc基因表达。结果:实验组和阳性对照组随培养时间的延长细胞增殖抑制率均升高(P0.01),且实验组细胞培养48 h、72 h细胞增殖抑制率高于阳性对照组(P0.05)。实验组和阳性对照组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),实验组和阳性对照组2组间细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05)。对照组、实验组和阳性对照组C-myc mRNA相对表达量分别为(1.69±0.63)、(0.68±0.37)、(0.86±0.28),实验组和阳性对照组C-myc mRNA相对表达量低于对照组(P0.01),且实验组低于阳性对照组(P0.05)。结论:黄芪解毒方可有效抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并促其凋亡,其作用机制可能与下调C-myc基因表达相关。     

扶正消癥方加减联合化疗治疗宫颈癌的效果观察

目的:对扶正消癥方加减结合化疗在宫颈癌疾病治疗中的临床应用效果进行探讨。方法:按随机单盲法将我院所收治的44例宫颈癌患者均分成对照组与实验组,前者予以单纯化疗治疗,在此基础之上,对后者予以扶正消癥方治疗,且比较两组患者的治疗效果。结果:实验组患者的有效率(77.3%)高于对照组(45.5%),差异有统计学意义(P0.05);实验组患者的x2评分(80.5±10.6)高于对照组(55.1±12.7),差异有统计学意义(P0.05)。结论:对宫颈癌患者予以扶正消癥方加减加化疗治疗,效果确切,且可改善患者的生存质量,值得大力推行与应用。     

六味地黄汤对细胞诱导的杀伤细胞体外扩增及抗骨肉瘤细胞的影响

目的:探讨六味地黄汤对不同人群来源的多种细胞诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)细胞增殖及其对骨肉瘤细胞毒活性的作用。方法:实验分为6组,通过向10名健康男性的外周血单个核细胞(PBMC)中分别加入在白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1(IL-1)、抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)及不同浓度中药血清,诱导CIK细胞,检测其形态及表型,测定CIK细胞对骨肉瘤细胞的细胞毒性作用。结果:单纯中药含药血清对CIK无诱导作用,细胞因子联合含药血清培养的CIK增殖倍数明显高于无药血清和无血清培养(P<0.05),而在联合培养中中剂量中药的CIK增殖速度高于低和高剂量血清培养(P<0.05),且对CIK细胞CD3+CD5 6+表达最为稳定;各组对骨肉瘤细胞均有一定杀伤作用,其中联合培养含药血清中剂量培养CIK细胞对骨肉瘤细胞杀伤效果最好。结论:单纯六味地黄汤含药血清对CIK细胞基本无诱导作用,联合细胞因子有促进CIK细胞的体外扩增作用,对骨肉瘤细胞有较强的杀伤活性,但与浓度相关。     

扶正消瘤汤辅助细胞因子诱导杀伤细胞对晚期恶性肿瘤患者临床改善情况的影响

目的:探讨扶正消瘤汤联合细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞治疗对晚期恶性肿瘤患者的临床改善情况。方法:选取2016年1月至2017年6月广州中医药大学附属海南中医院收治的恶性肿瘤患者82例作为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组41例。对照组给予CIK细胞过继免疫治疗,观察组在对照组的基础上联合扶正消瘤汤治疗。治疗1个月后,统计2组近期临床疗效,评估2组中医证候积分变化,比较2组免疫指标水平变化,观察治疗期间2组不良反应发生情况。结果:治疗后观察组总缓解率为60. 98%,显著高于对照组的34. 15%,差异有统计学意义(P 0. 05);与治疗前比较,治疗后观察组中医证候积分均显著下降,且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05);与治疗前比较,治疗后2组自然杀伤(NK)细胞、CD3~+、CD4~+T淋巴细胞比例和CD4~+/CD8~+比值均显著升高,观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05),2组CD8~+T淋巴细胞比例明显降低,且观察组明显低于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05);治疗期间观察组总不良反应发生率为17. 07%,对照组总不良反应发生率为19. 51%,2组总不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:扶正消瘤汤联合CIK细胞治疗可明显提高晚期恶性肿瘤患者免疫功能,减轻其临床不适症状,疗效显著,安全可靠。     

益肺逐积方诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制

目的:通过体外实验观察益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性、细胞凋亡以及表皮生长因子受体(EGFR),G蛋白偶联受体30(GPR30)蛋白表达的影响,探讨中药复方益肺逐积方抑制肺癌细胞活性,诱导肺癌细胞凋亡的作用机制。方法:将人肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,益肺逐积方高、低质量浓度组分别加入2,1.5 g·L~(-1)益肺逐积方培养液,5-氟尿密啶(5-FU)组加入2.5 g·L~(-1)5-FU培养液,溶剂组加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液,分别作用24,48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性的影响;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色观察益肺逐积方作用不同时间后人肺腺癌A549细胞的凋亡形态学变化;流式细胞术(FCM)测定益肺逐积方作用下人肺腺癌A549细胞的凋亡率;利用倒置显微镜观察益肺逐积方作用24,48 h后A549细胞的形态学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定人肺腺癌A549凋亡细胞EGFR,GPR30蛋白的表达。结果:与溶剂组比较,1.5,2 g·L~(-1)益肺逐积方均能抑制人肺腺癌A549细胞活性(P0.05),诱导A549细胞发生不同程度的凋亡形态学改变;流式细胞术检测显示,益肺逐积方作用24,48 h后,可使人肺腺癌A549细胞其发生晚期凋亡(P0.05);Western blot结果显示,益肺逐积方可以不同程度地下调人肺腺癌A549细胞GPR30,EGFR蛋白的表达(P0.05)。结论:益肺逐积方可抑制人肺腺癌A549细胞活性、诱导其发生晚期凋亡,并使其发生凋亡形态学改变,这可能与下调EGFR,GPR30蛋白表达有关。     

金黄扶正茶对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响

目的:探讨金黄扶正茶对免疫抑制小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞免疫功能的影响.方法:金黄扶正茶高、中、低剂量组分别连续给昆明种小鼠ig 10 d,同时隔日sc注射环磷酰胺(30 mg·kg-1)造成免疫抑制模型.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定刀豆蛋白A(Con A)诱导脾脏T淋巴细胞增殖和脂多糖(IPS)诱导B淋巴细胞增殖的影响及自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)活性,酶法检测腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮合酶(NOS)的活性,用全自动酶标仪检测巨噬细胞吞噬中性红能力.结果:金黄扶正茶低、中、高剂量组均能显著提高免疫抑制小鼠的T,B淋巴细胞的吸光度(A,P＜0.01);而中、高剂量组能显著提高免疫抑制小鼠NK细胞、LAK细胞活性、腹腔巨噬细胞吞噬活性及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活力(P＜0.01或P＜0.05).结论:金黄扶正茶能促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖,增强NK细胞、LAK细胞活性,提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性,从而增强免疫抑制小鼠的细胞免疫功能.