白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠小肠组织中Perforin和Granzyme的影响

目的:通过对脾虚感染白色念珠菌小鼠小肠超微结构及黏膜组织中Perforin、Granzyme表达水平的观察,探讨机体在脾虚状态下感染白色念珠菌的部分免疫机制。方法:健康SPF级昆明种小白鼠60只,按随机数字表法分为空白对照组(N1组15只)、空白感染白念组(N2组15只)、脾虚模型对照组(M1组15只)、脾虚感染白念组(M2组15只)。分别令N2和M2组小鼠感染白色念珠菌,白念菌浓度为2×108CFU/ml,剂量为0.2 ml/10 g体质量,于染菌后第21天进行相关指标检测。采用RT-PCR法检测各组小鼠小肠组织中穿孔素(Perforin)、颗粒酶(Granzyme)m RNA表达水平;采用western-blot法检测各组小鼠小肠组织中Perforin、Granzyme表达水平。结果:各组小鼠小肠组织中Perforin、Granzyme m RNA及蛋白表达水平检测结果显示,与N1组比较,N2组、M1组、M2组小鼠小肠组织中Perforin、Granzyme m RNA及蛋白表达水平显著升高;与N2组比较,M1组Perforin、Granzyme m RNA及蛋白表达水平显著降低,而M2组Perforin、Granzyme m RNA及蛋白表达水平显著升高;与M1组比较,M2组Perforin、Granzyme m RNA及蛋白表达水平显著升高。结论:小肠局部黏膜组织中Perforin和Granzyme高表达水平可能是造成小肠黏膜局部损伤的免疫机制之一。     

白色念珠菌肠道感染对脾虚模型小鼠小肠组织中IL-10和IL-12影响的实验研究

目的:通过观察脾虚小鼠感染白色念珠菌后小肠黏膜病理变化及小肠黏膜组织中IL-10、IL-12 mRNA及蛋白表达水平的变化,探讨脾虚小鼠感染白色念珠菌的部分免疫机制。方法:健康SPF级昆明种小白鼠60只,随机分为两组:空白组(N组,30只);脾虚模型组(M组,30只)。对脾虚模型组小鼠采用饮食不节加劳倦过度的方法复制脾虚小鼠模型。模型复制成功后,再次分别将N组及M组小鼠各随机分为两组:空白对照组(N1组,15只);空白感染白念组(N2组,15只);脾虚模型对照组(M1,15只);脾虚感染白念组(M2,15只)。分别令N2和M2组小鼠感染白色念珠菌,白念菌浓度为2×108CFU/m L,剂量为0.2 m L/10 g体重。于染菌后第21天进行相关指标检测。采用HE染色的方法,观察各组小鼠小肠组织病理变化;采用RT-PCR法检测各组小鼠小肠组织中IL-10、IL-12 mRNA表达水平;采用western-blot法检测各组小鼠小肠组织中IL-10、IL-12表达水平。结果:与空白对照组比较,空白感染白念组、脾虚模型对照组、脾虚感染白念组小鼠小肠组织中IL-12、IL-10 mRNA及蛋白的表达水平均有所上调(P<0.01),脾虚感染白念组IL-12表达水平上调最为明显;空白感染白念组IL-10上调最为明显。结论:脾虚小鼠比正常小鼠对白色念珠菌更加容易发生感染,感染的发生机制可能与机体的总体免疫功能相关,免疫功能正常状态下,可能与IL-10表达水平升高相关,免疫功能低下状态下,可能与IL-12表达水平升高相关。     

肠道白念珠菌感染对脾虚小鼠小肠组织中IFN-γ和IL-10 mRNA及蛋白表达水平的实验研究

目的:观察脾虚小鼠感染白念珠菌后小肠组织中IFN-γ和IL-10 mRNA和蛋白表达水平的变化,探讨脾虚小鼠在白念珠菌感染过程中的部分免疫机制,为临床诊治白念珠菌感染及脾虚证提供一定的参考依据。方法:采用饮食失节加劳倦过度的复合因素制备小鼠脾虚证模型,经肠道感染白念珠菌14 d后,检测粪便中的活菌数,应用RT-PCR方法检测肠组织局部γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)mRNA的表达水平,应用Westornblot方法检测肠组织中IFN-γ和IL-10的蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,其他三组小鼠粪便中活菌数、肠组织中IFN-γ和IL-10 mRNA及其蛋白的表达水平均显著增高(P0.01);与正常白念感染组比较,脾虚模型组小鼠小肠组织中IFN-γ、IL-10 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01),而脾虚白念感染组显著升高(P0.05或0.01);与脾虚模型组比较,脾虚白念感染组小鼠粪便中活菌数、小肠组织中IFN-γ和IL-10 mRNA及蛋白表达水平也显著升高(P0.01或P0.05)。结论:小鼠脾虚后可发生肠道菌群紊乱,比正常小鼠对白念珠菌的易感性增强,在肠道局部抗白念珠菌的作用主要以细胞免疫为主,Th1类细胞因子发挥主要作用。     

四君子汤对脾虚小鼠感染念珠菌后血清中IFN-γ含量及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

目的研究小鼠在脾虚时经口感染白念珠菌后经四君子汤灌胃治疗,检测小鼠血清中IFN-γ含量的变化及腹腔巨噬细胞的吞噬功能,探讨脾虚小鼠在感染白色念珠菌经中药治疗后的免疫机制。方法选取SPF级昆明种小白鼠,随机分组,经口感染白念珠菌,中药四君子汤灌胃治疗,检测腹腔巨噬细胞吞噬白色念珠菌的吞噬百分率,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定小鼠血清中γ干扰素(IFN-γ)的含量;结果与正常对照组比较,脾虚模型组、脾虚+白色念珠菌组、脾虚+白色念珠菌+氟康唑组、脾虚+白色念珠菌+四君子汤组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬白色念珠菌的吞噬率在给药的第14天显著降低(P0.01)。与脾虚模型组比较,脾虚+白色念珠菌组、脾虚+白色念珠菌+四君子汤组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬白色念珠菌的吞噬率在给药的第14天均降低P0.05),与脾虚+白色念珠菌组比较,脾虚+白色念珠菌+氟康唑组、脾虚+白色念珠菌+四君子汤组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬白色念珠菌的吞噬率在给药的第14天显著升高(P0.01)。小鼠血清中IFN-γ的含量,与正常对照组比较,脾虚+白色念珠菌+氟康唑组、脾虚+白色念珠菌+四君子汤组小鼠血清中IFN-γ的含量在给药的第14天含量显著升高(P0.01)。与脾虚模型组比较,脾虚+白色念珠菌+氟康唑组、脾虚+白色念珠菌+四君子汤组小鼠血清中IFN-γ的含量在给药的第14天含量明显升高(P0.05或P0.01)。与脾虚+白色念珠菌组比较,脾虚+白色念珠菌+四君子汤组小鼠血清中IFN-γ的含量在灌胃四君子汤的第14天含量明显升高(P0.05)。结论当机体在脾虚状态下,经消化道感染白念珠菌后会导致免疫力下降,而四君子汤通过益气健脾,增强机体免疫力,起到治疗作用。     

白色念珠菌消化道感染对脾虚小鼠腹腔巨噬细胞及血清中白细胞介素-1β表达的影响

目的探讨脾虚证易并发白色念珠菌感染的免疫学机制,为临床防治白色念珠菌感染和脾虚证提供依据。方法将40只昆明小鼠分层随机分成4组,即正常对照组（A组）、脾虚模型组（B组）、正常感染白色念珠菌组（C组）、脾虚感染白色念珠菌组（D组）。采用饮食失节加劳倦过度的复合因素制备小鼠脾虚证模型。模型成功后,经口灌给C、D组小鼠白色念珠菌悬液,A、B组给予生理盐水。3周后,应用动物血液分析仪检测小鼠外周血细胞数量,应用酶联免疫吸附法测定腹腔巨噬细胞及血清中白细胞介素-1β（IL-1β）的表达水平。结果脾虚小鼠感染白色念珠菌后期,单核细胞数明显升高（P〈0.01）,中性粒细胞也明显增加;腹腔巨噬细胞及血清中IL-1β表达水平明显高于其他各组（P〈0.01）。结论脾虚小鼠对消化道感染白色念珠菌的易感性增强,感染后期体内表达炎性细胞因子IL-1β的水平明显增高。     

经口感染白色念珠菌对脾虚小鼠巨噬细胞吞噬功能和血清中TNF-α的影响

目的：研究脾虚小鼠经口感染白色念珠菌后,血清中TNF-α含量以及腹腔中巨噬细胞吞噬功能的变化情况。方法：将小鼠经口感染白色念珠菌,观察不同状态下的小鼠感染白色念珠菌后机体巨噬细胞功能及血清中TNF-α的变化情况。结果：与正常对照组比较,正常加白色念珠菌和脾虚加白色念珠菌组吞噬百分率均明显降低（P〈0.01）,脾虚组也有降低（P〈0.05）;血清中TNF-α含量的测定结果显示,正常对照组与脾虚模型组、正常加白色念珠菌组和脾虚加白色念珠菌组相比,均高于其他3组（P〈0.01）,与脾虚模型组比较,正常加白色念珠菌组高于该组（P〈0.01）,而脾虚加白色念珠菌组低于该组（P〈0.05）。结论：经口感染白色念珠菌的脾虚小鼠巨噬细胞吞噬功能和血清中TNF—a含量均明显低于正常对照组和脾虚对照组。     

连翘对岭南湿热模型小鼠的作用及其肠道菌群变化的研究

目的探究连翘对岭南湿热模型小鼠的作用及对模型小鼠肠道菌群的影响。方法将21只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、连翘组,每组7只。将模型组和连翘组放入人工气候箱[T:(30±0.15)℃,HR:80%～85%]每天12 h,隔日灌服白酒0.3 mL+跑步30 min,每日以高蛋白饲料喂养的"外湿+内湿+脾虚"的复合因素造模。造模49 d后,连翘组小鼠连续7 d进行连翘水溶液灌胃,模型组小鼠连续7 d超纯水灌胃。实验结束后用酶联免疫吸附法(ELISA)对各组小鼠血清、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)及内毒素(LPS)进行检测,对各组小鼠舌、小肠组织进行病理学检测,对粪便进行16s rRNA检测。结果与正常组比较,模型组小鼠血清TNF-α、IFN-γ、LPS含量增加(P 0.01,P 0.001);舌组织黏膜层角化增加并且有明显的过角质化突起,固有层结缔组织破坏明显;小肠组织黏膜层上皮细胞被破坏,固有层腺体损伤;肠道菌群结构发生紊乱,拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)所占肠道菌群的比例均有所增加(P 0.05),厚壁菌门(Firmicutes)所占比例减少(P 0.01);肠道有益菌普氏菌属(Prevotella)和颤螺菌属(Oscillospira)含量减少(P 0.05,P 0.01),致病菌大肠杆菌属(Escherichia)含量增加(P 0.05)。与模型组比较,连翘组小鼠血清TNF-α的含量有减少趋势,IFN-γ的含量减少明显(P 0.01),但血清LPS含量没有显著变化;舌组织黏膜层过角化突起没有改善,舌乳头排列较均匀,固有层形态规整;小肠组织黏膜层上皮细胞结构清晰,排列规则,固有层腺体结构清晰;肠道菌群结构改善,拟杆菌门所占比例降低(P 0.05),厚壁菌门所占比例升高(P 0.01);肠道有益菌普氏菌属和颤螺菌属含量增加(P 0.05),致病菌螺杆菌属(Helicobacter)含量降低(P 0.05)。结论连翘对中医湿热证有积极的治疗作用,能够治疗炎症,改善舌和小肠组织病变,降低肠道致病菌的含量并且对肠道菌群结构有调节作用。     

白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响随机平行对照研究

[目的]观测白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响。[方法]使用随机平行对照方法,将60只SPF级昆明小鼠(雌雄各半,体质量20±2g)按随机数字表法分为4组,空白组(A组)、脾虚模型组(B组)、白色念珠菌感染组(单纯感染组,C组)、白色念珠菌脾虚感染组(脾虚感染组,D组),15只/组。使用饮食失节+劳倦过度复合因素方法复制脾虚模型,实验第1d起,B、D组小鼠单日游泳至耐力极限,禁食饲料,喂饲甘蓝;双日喂饲猪油脂0.5mL/只;A、C组小鼠正常饲养;连续14d。实验前7d,将白色念珠菌株在沙保斜面培养基上转种2次,37℃恒温箱培养24h,选择3个直径≥1mm菌落,无菌生理盐水制成菌悬液,血球计数板计数,调整菌液至2×108CFU/mL。灌胃干预:实验第15d,C、D组灌胃白色念珠菌悬液0.2mL/10g体质量,浓度为2×108CFU/mL,A、B组等量生理盐水。实验第35d,各组小鼠随机取10只称体质量,脊髓离断,取脾脏并称质量,冲脾法制备脾细胞悬液,光镜下计数脾细胞,调浓度至107,取100μL加1640培养液500μL混匀;二氧化碳培养箱培养48h,取上清液。观测脾指数、脾细胞IFN-γ、IL-10(双抗体夹心法,严格按照ELISA试剂盒说明操作)。[结果]实验第35d(染菌3周),脾脏外观形态单纯感染组和脾虚感染组体积增大,尤其是脾虚感染组增大明显,颜色变深,呈深暗红色。脾指数单纯感染组和脾虚感染组明显高于空白组(P0.05,P0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P0.01)。IFN-γ、IL-10脾虚感染组明显高于空白组(P0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P0.05或P0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P0.01)。[结论]白色念珠菌肠道感染可升高脾虚小鼠脾指数,促进脾细胞IFN-γ和IL-10表达。     

新扶正除疫颗粒对感染流感病毒小鼠抗病毒作用机制的研究

目的:研究新扶正除疫颗粒对感染流感病毒小鼠的抗病毒作用机制。方法:选择雌性BALB/c小鼠40只,并分成正常对照组(未攻毒)、病毒模型组、达菲对照组、新扶正除疫组,各10只,其中正常对照组、病毒模型组采用无菌生理盐水灌胃,达菲对照组采用达菲水溶液灌胃,新扶正除疫组采用新扶正除疫颗粒水溶液灌胃,持续给药7 d;同时病毒模型组、达菲对照组、新扶正除疫组于给药第3天开展FM1-6-E2滴鼻造模;四组于造模后的第3、6、9天制备脾脏细胞悬液,应用流式细胞仪对T细胞亚群进行检测、对比分析。结果:造模第3天病毒模型组小鼠的CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+水平高于正常对照组,CD_8~+水平低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);达菲对照组、新扶正除疫组小鼠的CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+水平低于病毒模型组,CD_8~+水平高于病毒模型组,差异有统计学意义(P0.05);造模第6天病毒模型组小鼠的CD_3~+、CD_8~+水平高于正常对照组,CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+水平低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);达菲对照组、新扶正除疫组小鼠的CD_3~+、CD_8~+水平低于病毒模型组,CD_4~+/CD_8~+水平高于病毒模型组,差异有统计学意义(P0.05);造模第9d病毒模型组小鼠的CD_3~+、CD_8~+水平低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);而达菲对照组、新扶正除疫组小鼠的CD_3~+、CD_8~+水平高于病毒模型组,CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+水平低于病毒模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:新扶正除疫颗粒能对感染流感病毒小鼠的细胞免疫功能进行调节,说明新扶正除疫颗粒调节T细胞亚群是其抗流感病毒主要作用机制之一。     

芪黄煎剂对大鼠胃切除后肠黏膜免疫屏障的影响

目的观察芪黄煎剂对大鼠胃切除后小肠黏膜免疫屏障的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄煎剂组(中药组),每组20只。模型组与中药组均行胃切除手术,模型组术后给予小肠内滴注肠内营养制剂能全素;中药组予小肠内滴注能全素和中药芪黄煎剂。假手术组仅行腹部正中切开及关腹处理,术后正常进食水,不予药物及营养干预。干预1周后,分离出大鼠小肠集合淋巴小结(Peyer's patches,PPs)细胞、固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocytes,LPLs)、黏膜上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IELs)和肠腔黏膜表面分泌型免疫球蛋白A(secretory IgA,s IgA),应用流式细胞术、免疫组织化学、双抗体-PEG放射免疫等技术,检测肠黏膜不同解剖部位T细胞抗原受体(αβT cell antigen receptor)-CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞比例、IgA~+B细胞数量、s IgA含量。结果与假手术组比较,模型组肠黏膜s IgA含量、PPs中IgA~+B细胞数量和LPLs中IgA~+B细胞数量均降低(P0.01);模型组IELs中CD3~+、CD8~+T细胞比例,LPLs中CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞比例,PPs中CD3~+、CD4~+T细胞比例降低(P0.01,P0.05)。与模型组比较,中药组肠黏膜s IgA含量、PPs中IgA~+B细胞数量和LPLs中IgA~+B细胞数量升高(P0.01,P0.05),中药组IELs中CD3~+、CD8~+T细胞比例,LPLs中CD3~+、CD4~+T细胞比例,PPs中CD3~+、CD4~+T细胞比例升高(P0.01,P0.05)。结论芪黄煎剂能促进大鼠胃切除术后小肠黏膜免疫屏障中CD3~+、CD4~+、CD8~+T、IgA~+B淋巴细胞的增殖与分化及s IgA含量的增加,能够促进大鼠胃切除术后肠道免疫屏障功能障碍的恢复。     

灰树花多糖对脾虚小鼠T细胞亚群和Th1/Th2亚群的影响

目的观察灰树花多糖对脾虚小鼠T细胞亚群和Th1/Th2亚群的影响,探讨其免疫调节机制。方法健康雄性清洁级昆明小鼠48只随机分为空白组、脾虚组、阳性组(香菇多糖)及灰树花多糖低、中、高剂量组,每组8只,各给药组给予相应药物,滤菌后腹腔注射10 d,第11日处死动物。流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3+、CD4+及CD8+T细胞百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的含量。结果高剂量灰树花多糖能明显升高脾虚小鼠外周血CD4+T淋巴细胞百分率(P＜0.05);中、高剂量灰树花多糖可以明显升高脾虚小鼠的 CD4+/CD8+T 细胞比值(P＜0.01)。中、高剂量灰树花多糖可以明显升高脾虚小鼠 CD3+T 淋巴细胞百分率(P＜0.01)。灰树花多糖中、高剂量组可以明显升高脾虚小鼠血清 IFN-γ含量(P＜0.01),灰树花多糖高剂量组可以明显降低脾虚小鼠血清IL-4含量(P＜0.01)。结论灰树花多糖可改善脾虚时所致CD4+/CD8+T细胞比值降低,使Th2细胞向Th1细胞转化,从而达到治疗脾虚证的目的。     

肾气丸对衰老大鼠小肠CD4+T细胞、CD8+T 细胞的影响

目的 实验研究肾气丸对D-半乳糖致衰大鼠小肠黏膜内CD4+T细胞、CD8+T 细胞的影响,探讨肾气丸延缓衰老作用.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分成4组,实验组(高、低剂量组)和模型组用D-半乳糖颈部皮下注射,实验组同时灌服肾气丸,对照组、模型组给予等量的生理盐水灌胃,持续42 d,分别取十二指肠、空肠、回肠,用免疫组化SP法显示黏膜内CD4+T细胞、CD8+T 细胞,分别对黏膜上皮和固有层内的阳性细胞计数.结果 模型组与对照组比较,上皮和固有层内CD4+T细胞有显著差异(P＜0.05);高剂量组或低剂量组与对照组比较,上皮和固有层内CD4+T细胞也有显著差异(P＜0.05);CD8+T 细胞在模型组和实验组与对照组比较,均无明显差异(P＞0.05).结论 肾气丸能改善衰老大鼠小肠黏膜内免疫细胞功能状态.     

补肾复方冲剂及其拆方对免疫介导再障小鼠骨髓造血和T淋巴细胞亚群的影响

目的:研究补肾复方冲剂及其拆方(温阳益气方、滋阴方)对免疫介导再障小鼠骨髓造血的作用机制。方法:建立免疫介导再障小鼠模型,随机分为模型、补肾复方冲剂、温阳益气、滋阴、环孢素(CSA)组,每组12只。并设正常对照组。模型、正常对照组注射生理盐水,其他组注射相应药物,14d后,检测血常规、骨髓有核细胞(BMNC)数、T淋巴细胞亚群,观察股骨骨髓病理学改变。结果:与正常对照组比较,模型组的外周血细胞、BMNC数显著降低(P0.01);T淋巴细胞亚群失衡。补肾复方冲剂组的外周血细胞、BMNC计数高于模型组(P0.05);WBC,RBC,HGB,BMNC数高于温阳益气、滋阴组(P0.05或P0.01)。与模型组比较,补肾复方冲剂、CSA组的CD_3~+CD_(19)~-,CD_3~+CD_4~-CD_8~+细胞比例降低(P0.05),CD_3~+CD_4~+CD_8~-细胞比例升高(P0.05)。补肾复方冲剂组的CD_3~+CD_(19)~-,CD_3~+CD_4~-CD_8~+细胞比例低于温阳益气组(P0.05)。滋阴组的T淋巴细胞比例和模型组比较,差别无统计学意义(P0.05)。病理学观察发现补肾复方冲剂、温阳益气、CSA组骨髓增生仍低下,但可见散在造血灶。结论:补肾复方冲剂可改善再障小鼠骨髓造血,疗效优于单用温阳益气或滋阴法,其机制与调节T淋巴细胞亚群失衡有关。     

四君子汤总多糖对免疫抑制小鼠肠道sIgA的影响及其机制研究

目的初步探讨四君子汤总多糖对小鼠肠道黏膜体液免疫功能的影响。方法取NIH小鼠随机分为正常对照组、模型组、四君子汤总多糖(SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(SJZFP)组,采用ELISA法检测小鼠小肠sIgA浓度,流式细胞(FCM)技术检测Peyer's结细胞表型,免疫组化法检测小鼠肠道TLR4的表达。结果模型组sIgA浓度小于正常对照组、SJZPS和SJZFP组,差异具有显著性(P0.01);模型组CD19+细胞比例下降,与正常对照组比较,具有非常显著性差异(P0.01),SJZPS和SJZFP组CD19+细胞比例上升,与模型组比较,具有非常显著性差异(P0.01);模型组肠黏膜TLR4蛋白表达明显低于正常对照组,SJZPS和SJZFP组,具有非常显著性差异(P0.01)。结论SJZPS和SJZFP可提高环磷酰胺抑制的体液免疫功能,具有肠道黏膜免疫调节作用。     

乌鳖口服液对自身免疫性卵巢早衰小鼠CD_4~+、CD_8~+和卵巢Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:探讨乌鳖口服液对自身免疫性卵巢早衰小鼠的影响。方法:通过皮下多点注射小鼠透明带建立自身免疫性卵巢早衰小鼠模型。然后连续4周给予乌鳖口服液进行治疗,每天剂量为(16.5 g/kg)。通过酶联免疫法检测小鼠抗透明带抗体,用免疫组化法测定脾脏T细胞CD_4~+、CD_8~+的含量。同时用免疫组化法测定卵巢Fas、Fas L蛋白的表达。卵巢和脾脏做病理组织学的分析。结果:模型组小鼠抗透明带抗体的浓度(8.74±0.99)U/m L和CD_4~+/CD_8~+比值(1.74±0.31)增加,同时,模型组小鼠卵巢组织的Fas蛋白表达(0.54±0.29)减少,Fas-L蛋白表达(2.25±0.0)增加。与模型组比较,乌鳖口服液组小鼠抗透明带抗体的浓度(7.34±1.21)U/m L明显低于模型组(P0.05)。脾脏CD_4~+/CD_8~+比值(1.07±0.14)明显低于模型组(P0.01)。乌鳖口服液组FasL蛋白表达(1.29±0.86)明显低于模型组(P0.05)。结论:乌鳖口服液具有降低免疫性卵巢早衰小鼠外周血抗透明带抗体浓度的升高,调节CD_4~+/CD_8~+比值和Fas/FasL系统的作用。     

羟基积雪草苷对胶原关节炎大鼠肠道黏膜免疫的影响

目的:考察胶原关节炎大鼠肠道黏膜免疫的改变及羟基积雪草苷的调节作用。方法:在Wistar大鼠复制胶原关节炎模型,其后将大鼠分为正常对照组、模型组和羟基积雪草苷组,灌胃给药,连续21 d。ELISA法测定大鼠肠内容物中s Ig A含量及小肠组织中IFN-γ含量。流式细胞术检测小肠上皮内及固有层细胞中CD4+和CD8+T细胞的比例,计算CD4+/CD8+比值。实时定量PCR法检测小肠组织中CD80、CD86、IL-6、IL-12及Foxp3 mRNA的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肠内容物中s Ig A含量及小肠组织中IFN-γ含量显著升高,小肠上皮内及固有层T细胞中CD4+/CD8+比值上升,小肠组织中CD80、CD86、IL-6和IL-12 mRNA表达显著上调,而Foxp3 mRNA的表达变化无统计学意义。羟基积雪草苷灌胃给药可降低模型大鼠肠内容物s Ig A和小肠组织IFN-γ含量、CD4+/CD8+比值及CD80、CD86、IL-6和IL-12 mRNA的表达,显著上调Foxp3 mRNA的表达。结论:关节炎状态下大鼠肠道黏膜免疫应答上调,抗原呈递细胞异常活化且免疫耐受状态遭到破坏,羟基积雪草苷可下调关节炎大鼠肠道黏膜免疫应答,促进肠道黏膜免疫耐受的形成和维持。     

黄芪百合颗粒对亚硝酸钠中毒致缺氧性损伤小鼠的保护作用

目的观察黄芪百合颗粒对亚硝酸钠致缺氧性损伤小鼠的保护作用。方法 72只小鼠随机分为空白组,阳性对照组,模型组,黄芪百合颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 mg/kg),各实验组小鼠灌胃给予相应药物30 d。末次给药1 h后,各组(除空白组外)小鼠腹腔注射亚硝酸钠(100 mg/kg),1 h后采血,比色法测定高铁血红蛋白(Met Hb)含有量,ELISA法测定硫代巴比妥酸反应物(TBARS)含有量,HE染色观察小肠病理学变化,免疫组织化学法检查脑组织中脑红蛋白(Ngb)表达。结果与空白组比较,模型组Met Hb、TBARS含有量显著提高(P0.01),小肠黏膜上皮大量脱落,炎细胞浸润数量、Ngb表达显著增加(P0.01);与模型组比较,黄芪百合颗粒各剂量组和阳性对照组Met Hb、TBARS含有量显著降低(P0.05,P0.01),小肠黏膜上皮少量脱落,炎细胞浸润数量显著减少(P0.05,P0.01),Ngb表达显著增加(P0.01),胞浆、胞核均可见棕黄色颗粒状免疫反应阳性产物。结论黄芪百合颗粒可通过降低Met Hb含有量、抑制膜脂过氧化水平、改善小肠病理程度、提高Ngb表达来显示对亚硝酸钠致缺氧性损伤小鼠的保护作用。     

白念珠菌消化道感染对脾虚小鼠肠组织中IFN-γ mRNA及IL-10 mRNA表达的影响

目的:探讨小鼠在脾虚状态下对消化道感染白念珠菌的易感性及其免疫学机制,为防治白念珠菌感染和脾虚证提供一定的实验依据。方法:采用饮食失节加劳倦过度的复合因素制备小鼠脾虚证模型,经消化道感染白念珠菌,检测粪便中的活白念珠菌数,应用RT-PCR方法检测肠组织局部V-干扰素(IFN-γ)mRNA和白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达水平。结果:与正常感染组比较,自第6天起脾虚感染组小鼠粪便活菌数持续显著增高(P<0.05,P<0.01)。与脾虚模型组比较,正常感染组与脾虚感染组小鼠在感染后期肠组织表达IFN-γ mRNA和IL-10 mRNA的水平均显著升高(P<0.01);与正常感染组比较,脾虚感染组小鼠在感染后期IFN-γ mRNA的表达水平显著升高(P<0.01),但IL-10 mRNA表达显著减少(P<0.05)。结论:消化道的白念珠菌感染是否致病与小鼠的免疫力密切相关,尤其是在免疫功能低下时危害更大,同时又进一步加重脾虚状态或感染的病情。     

加味龟鹿二仙胶汤对Lewis肺癌小鼠C-myc表达及免疫系统影响

目的:研究加味龟鹿二仙胶汤对Lewis肺癌小鼠C-myc表达及免疫系统的影响。方法:选取无特定病原体级SD雄性小鼠60只为研究对象,对所有的小鼠Lewis肺癌造模成功后,将小鼠随机分为模型组、胸腺肽组、加味龟鹿二仙胶汤低、中、高剂量组,每组12只小鼠。对模型组小鼠灌胃生理盐水,胸腺肽组小鼠注射胸腺肽,同时灌胃等量生理盐水,加味龟鹿二仙胶汤低、中、高剂量组小鼠分别灌胃等量但含生药量不同的加味龟鹿二仙胶汤,观察记录各组小鼠抑瘤率、肺转移灶数目和T细胞表达水平等指标。结果:加味龟鹿二仙胶汤低剂量组、中剂量组和高剂量组对小鼠肺癌均有抑瘤作用,其中中剂量组抑瘤率最高,为54.93%,肿瘤重量较小,与模型组小鼠相比差异有统计学意义(P0.05);加味龟鹿二仙胶汤低剂量组、中剂量组和高剂量组对小鼠肺癌肺转移病灶均有抑制作用,其中中剂量组抑瘤率最高,为53.21%,与模型组小鼠相比差异有统计学意义(P0.05);模型组C-myc呈高阳性表达,加味龟鹿二仙胶汤低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠肺癌组织C-myc呈低阴性表达,与胸腺肽组小鼠比较,差异无统计学意义(P0.05),与模型组小鼠比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗前,各组小鼠CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+、CD_8~+表达水平无明显差异,随着治疗的进行胸腺肽组和加味龟鹿二仙胶汤低、中、高剂量组小鼠,其CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+表达水平逐步升高,CD_8~+表达水平降低,且治疗后加味龟鹿二仙胶汤中剂量组小鼠CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+表达水平升高程度高于其他组小鼠,CD_8~+表达水平降低程度高于其他组小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。结论:加味龟鹿二仙胶汤尤其是中剂量对肺癌有明显的抑瘤作用,能够有效的降低C-myc表达,同时提高CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+表达水平,降低CD_8~+表达水平。     

健脾解毒方对脾虚证荷瘤小鼠肠道菌群的调节作用

目的探讨健脾解毒方对脾虚荷瘤鼠移植瘤的抑制作用、对脾虚小鼠肠道菌群的调节作用及两者之间的相关性。方法 48只小鼠随机取36只,利用番泻叶水煎剂成功制备脾虚模型,剩余12只为N.S.组,再使用CT26细胞构建移植瘤模型。36只脾虚模型小鼠则随机分为脾虚组、健脾解毒方低剂量组、健脾解毒方高剂量组,每组12只。连续灌胃给药4周后脱颈椎处死各组小鼠,称取瘤重,计算抑瘤率;计算胸腺指数和脾指数;流式细胞仪检测CD4~+、CD8~+T细胞比例,ELISA法检测血清中IL-17水平;16S rRNA基因测序法检测肠道菌群多样性。结果脾虚组平均瘤重、血清IL-17水平高于N.S.组和健脾解毒方低、高剂量组,同时脾虚组胸腺指数、脾指数、外周血CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值低于N.S.组和健脾解毒方低、高剂量组,差异均有统计学意义(P0.01);且脾虚组小鼠肠道菌群中拟杆菌门显著增多、厚壁菌门显著减少,存在明显的菌群失调现象。与N.S.组及健脾解毒方低、高剂量组比较,脾虚组小鼠肠道中双歧杆菌及乳杆菌减少,而肠杆菌及肠球菌增多。结论健脾解毒方具有抑制脾虚荷瘤鼠皮下瘤生长、提高CD4~+/CD8~+比例、减少炎症因子IL-17分泌的作用,这些作用可能与其改善脾虚小鼠的肠道菌群失调相关。