基于正交设计析因分析法评价肺瘤平膏的组方配伍

目的：建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,采用正交设计法分组,观察肺瘤平膏及其拆方的抑瘤率,分析复方中两大类药物（扶正类和祛邪类）所起的作用,评价该药主要组分的疗效。方法：观察不同组分中药对Lewis肺癌小鼠体瘤体的影响,采用析因分析法分析评价中药复方肺瘤平膏的组方配伍的合理性。结果：肺瘤平膏可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长,其抑制率为45．09％。益气方、解毒方和益气解毒方的抑制率分别为23．36％,35．51％和39．20％;析因分析的结果表明,解毒类药物的主效应与其他类药物比较,差异有统计学意义（P=0．001）,即该方中的解毒类药物发挥主要抑瘤作用,而益气类药物可协同提高其作用。结论肺瘤平膏中祛邪类药物主要发挥抑瘤作用,扶正类药物在提高机体免疫功能的基础上,在一定程度上可以减轻祛邪类药物的副作用,从而间接提高抑瘤作用。     

扶正解毒方基于凋亡的抗肺癌作用研究

目的:明确扶正解毒方体内外对肺癌的抑制作用并探明其可能的作用机制。方法:体内实验:建立Lewis小鼠肺癌皮下移植瘤模型,不同浓度扶正解毒方灌胃干预,评价其对移植瘤增殖的影响;免疫组化检测Cleaved-caspase3的表达。体外实验:不同浓度扶正解毒方干预A549和H1299细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测凋亡情况。结果:扶正解毒方抑制Lewis小鼠肺癌皮下移植瘤增殖,促进移植瘤组织Cleaved-caspase3表达。CCK8结果显示扶正解毒方体外可明显抑制A549和H1299细胞株增殖活性,流式细胞仪检测提示扶正解毒方可促进肺癌细胞凋亡。结论:扶正解毒方体内、外有明确的抑制增殖和促凋亡作用,可能通过促进细胞凋亡发挥抑制肺癌增殖的作用。     

不同功效中药对裸鼠肺癌皮下移植瘤及转移相关微小RNA的影响

目的观察益气养阴、健脾温肾、软坚散结中药对裸鼠人肺癌NCI-H460细胞皮下移植瘤的影响及其可能作用机制。方法将人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460接种于32只裸鼠皮下,成瘤后随机分为健脾温肾组、益气养阴组、软坚散结组和生理盐水组,每组8只。接种1个月起各组小鼠分别灌胃给予相应药物,健脾温肾方、益气养阴方、软坚散结方药物浓度分别为1.1、1.9、1.8 g/ml,每日1次,每次0.3ml,共15天。检测各组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量,计算抑瘤率,PCR检测肺癌皮下移植瘤中MicroRNA-21、MicroRNA-218的表达。结果给药10天时各组小鼠瘤体积均较给药前明显增大,给药15天时益气养阴组、软坚散结组、生理盐水组小鼠瘤体积较给药前增大(P0.05)。温肾健脾组、益气养阴组、软坚散结组肿瘤抑制率分别为9.9%、16.3%、11.8%,各组抑制率比较差异无统计学意义(P0.05)。益气养阴组瘤重、MicroRNA-21的表达量均明显低于生理盐水组(P0.05)。结论益气养阴方可以抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,下调致癌基因相关微小RNA的表达可能是其作用机制之一。     

六君二陈解毒汤及其拆方抑制Lewis肺癌及对VEGF和nm23-H1表达的影响

目的:研究六君二陈解毒汤及其拆方对小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用及对移植瘤细胞VEGF和nm23-H1表达的影响。方法:建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌模型,给药15 d后观察肺表面转移瘤结节数;用免疫组化法检测Lewis肺癌移植瘤细胞VEGF和nm23-H1的表达。结果:六君二陈解毒汤及其拆方六君二陈汤、清热解毒汤3个治疗组的肺转移形成灶数皆少于生理盐水对照组,其中六君二陈解毒汤肺转移抑制率为80%,明显优于其拆方;六君二陈解毒汤及拆方均可以降低移植瘤细胞VEGF的表达并提高nm23-H1的表达水平。结论:六君二陈解毒汤及其拆方能抑制小鼠Lewis肺癌肿瘤自发性肺转移的发生,其抗肿瘤转移机制可能与影响Lewis肺癌细胞VEGF和nm23-H1的表达有关。     

抗癌扶正方对小鼠Lewis肺癌移植瘤抑瘤作用的实验研究

目的:研究抗癌扶正方对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用。方法:建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,随机分成荷瘤对照组,顺铂对照组,抗癌扶正方低、中、高剂量组(14.6、29.2、58.4 g/kg),各组连续给药28 d后,剥离肿瘤组织,称重、计算抑瘤率。结果:与荷瘤对照组比较,顺铂对照组和抗癌扶正方低、中、高剂量组小鼠瘤重极显著降低(P<0.01),且抗癌扶正方的抑瘤率随着剂量的增加而升高。结论:抗癌扶正方对Lewis肺癌移植瘤具有显著的抑制作用。     

六君二陈解毒汤及拆方抗Lewis肺癌作用的比较研究

目的:比较研究代表性益气健脾、祛湿化痰、清热解毒三法配伍的六君二陈解毒汤及其拆方对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用。方法:建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,给药15d后取瘤称重,计算抑瘤率;应用流式细胞仪检测分析小鼠肿瘤细胞的周期变化及凋亡百分率。结果:六君二陈解毒汤及其拆方六君二陈汤、半夏陈皮汤和清热解毒汤皆可抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,抑瘤率分别为33.15%,21.54%,19.05%和17.59%;4个中药复方治疗组处于G0/G1期的肿瘤细胞及其平均凋亡率皆显著高于生理盐水对照组。结论:六君二陈解毒汤及其拆方均能抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,但以三法配伍的六君二陈解毒汤疗效最好,其作用机制可能与阻滞细胞于G0/G1期并诱导癌细胞凋亡有关。     

益气消瘤方对C26肠癌小鼠的药理作用

目的:探讨益气消瘤方合用环磷酰胺对C26荷瘤小鼠抑瘤增效减毒作用。方法:将C26肿瘤细胞种植于小鼠右腋窝皮下,建立移植性肿瘤模型,接种后第2天开始给药,腹腔注射环磷酰胺及灌胃益气消瘤方,第10天称重后处死小鼠,眼眶取血做血液学检查,观察小鼠胸腺、脾脏及肿瘤生长情况。结果:与同期荷瘤环磷酰胺组相比,益气消瘤方组能明显提高环磷酰胺引起的白细胞、血小板下降,并加强环磷酰胺的抑瘤作用。结论:益气消瘤方与环磷酰胺联合用药具有增效减毒作用。     

基于温里药抑制肺癌的药物筛选及对肿瘤相关巨噬细胞的影响

目的:根据《中药学》第7版,将温里药附子、肉桂、干姜、高良姜、丁香、小茴香、花椒、吴茱萸、胡椒、荜茇、荜澄茄进行筛选,选出温里药中对Lewis小鼠具有抑瘤作用的温里药,并通过数据库筛选出肿瘤的有效成分,为下一步温里药组方奠定基础。方法:构建Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤模型,将附子、干姜、高良姜、丁香、小茴香、花椒、吴茱萸、胡椒、荜茇、荜澄茄灌胃21 d后,观察其抑瘤效果。结果:附子、吴茱萸、荜茇对肿瘤具有抑制作用,与对照组相比,附子、吴茱萸、荜茇对肿瘤具有抑制效果,可以抑制Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤的生长,差异有统计学意义(P0.05)。结论:温里药中的附子、吴茱萸、荜茇对Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤有抑制作用,荜茇可抑制肿瘤组织中CD206的表达。     

益气除痰方对肺癌移植鼠内质网分子伴侣蛋白GRP94表达的影响

目的观察益气除痰方对脾虚Lewis肺癌移植鼠内质网分子伴侣蛋白GRP94表达的影响,探讨其抗癌的可能作用机制。方法采用苦寒泻下加饥饱失常方式建立脾虚小鼠模型,再将无血清培养基制备的癌细胞悬液接种至脾虚C57BL/6小鼠背侧,制作脾虚Lewis肺癌小鼠模型。将48只成模小鼠随机分为模型组、化疗组、联合用药组及益气除痰方低、中、高剂量组,每组8只。各给药组给予相应药物干预。给药14 d后处死小鼠,检测肿瘤体积和质量;HE染色观察各组移植瘤组织形态,免疫组化、Western blot和RT-PCR检测肿瘤组织GRP94蛋白和基因表达。结果与模型组比较,化疗组、联合用药组及益气除痰方中、高剂量组肿瘤体积、肿瘤质量明显降低(P0.05,P0.01),肿瘤细胞大量坏死,GRP94蛋白表达明显降低(P0.01);与化疗组比较,联合用药组GRP94蛋白表达明显降低(P0.01)。结论益气除痰方联合化疗可有效治疗Lewis肺癌小鼠,其机制可能与其下调内质网分子伴侣蛋白GRP94表达、逆转肿瘤细胞自身保护机制相关。     

抗癌扶正方不同提取液对顺铂化疗荷Lewis肺癌小鼠干预作用的实验研究

目的:观察抗癌扶正方水提液与醇提液对顺铂化疗荷Lewis肺癌小鼠的干预作用。方法:将制得的Lewis肺癌细胞接种至C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下复制模型。实验随机分为5组:正常对照组、模型组、顺铂组、水提+顺铂组、醇提+顺铂组,每组10只,连续给药24 d。给药期间观察各组小鼠的一般反应,每4 d称量一次体质量和肿瘤体积。处死小鼠取血及脾脏,计算脾脏指数,检测白细胞计数;测量肿瘤体积和瘤重,观察肺组织病理变化情况。结果:药物干预24 d后,水提+顺铂组小鼠精神萎靡、反应迟钝等现象明显改善;肿瘤体积、瘤重及脾脏指数明显减小(P0.05,P0.01);体质量、白细胞数目明显升高(P0.05,P0.01);给药各组小鼠肺组织病理检查均显示瘤细胞出现灶状坏死区及核碎裂象,并有炎性细胞浸润,瘤组织内及其周围微血管减少。醇提+顺铂组小鼠上述各项指标均无明显变化。结论:抗癌扶正方水提液可明显改善抗癌药顺铂对荷Lewis肺癌小鼠的副作用,同顺铂配合使用具有协同抗癌作用;抗癌扶正方醇提液则无此作用。     

中药祛毒扶正汤对肺癌小鼠血清TK1表达及肺癌细胞周期影响的实验研究

目的研究中药祛毒扶正汤对肺癌小鼠血清TK1表达及对肺癌细胞周期的影响,初步探讨其抑制小鼠Lewis肺癌肿瘤生长的作用及分子机制。方法 C57BL/6纯系小鼠80只,构建小鼠肺癌模型,随机分成4组:生理盐水组(A组),祛毒扶正方低剂量组(B组)、高剂量组(C组),顺铂(DDP)组(D组),每组20只。测定各组小鼠的皮下瘤重,计算抑瘤率;采用增强化学发光法测定各组小鼠血清胸苷激酶(TK1)的含量;应用流式细胞术进行肺癌细胞周期测定。结果①B组、C组、D组小鼠的肿瘤生长均受到不同程度的抑制,其抑瘤率分别为26.87%、34.35%、57.14%;在减轻瘤重方面,与A组比较均具有显著性差异(P<0.05),且C组的瘤重低于B组(P<0.05),D组的瘤重低于B组、C组(P<0.05);②增强化学发光法测定结果显示各治疗组小鼠血清TK1表达均较A组降低(P<0.05);③流式细胞术检测各治疗组均能影响肿瘤的细胞周期,能有效地阻滞细胞于G0、G1期,从而减少S期细胞的分布(P<0.01)。结论祛毒扶正方能有效降低小鼠Lewis肺癌血清TK1的表达和抑制细胞增殖作用,从而抑制Lewis小鼠肺癌肿瘤生长,其抑瘤机制可能与降低血清TK1水平及抑制肺癌细胞增殖周期有关。     

肺抑瘤膏对气滞血瘀质Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及VEGF-C表达的影响

目的通过建立Lewis肺癌病证结合小鼠模型,观察肺抑瘤膏对非小细胞肺癌气滞血瘀质模型的干预作用。方法使用C57BL/6小鼠,建立平和质与气滞血瘀质小鼠模型,并接种Lewis肺癌细胞,造模成功后,随机分两亚组,亚组2予肺抑瘤膏干预,观察瘤体体积、瘤重及血清VEGF-C水平。结果气滞血瘀组亚组1较平和对照组亚组1小鼠在种植瘤瘤体积、瘤重、血清VEGF-C平均光密度方面差异均有统计学意义(P0.05)。各亚组2肿瘤抑制率、VEGF-C平均光密度与对应的亚组1比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论气滞血瘀质组较平和质组皮下种植瘤更易生长。肺抑瘤膏能够不同程度地抑制种植瘤的生长,且可能通过抑制VEGF表达而起到治疗作用。     

肺瘤平膏及其拆方对Lewis肺癌小鼠树突状细胞影响的实验研究

目的观察中药复方肺瘤平膏及其拆方对Lewis肺癌荷瘤小鼠血中、脾中及瘤体中的树突状细胞(DC)含量的影响,以期阐明不同治则方药对机体免疫调节功能可能的作用机制。方法观察肺瘤平膏及其各拆方对Lewis肺癌小鼠血中及脾中DC含量的影响,并用免疫组化观察各组瘤组织中S-100蛋白的表达情况。结果 Lewis肺癌荷瘤小鼠的外周血及脾中DC含量(‰)较正常组明显降低(P0.01),分别为:0.43±0.26vs4.68±0.90,0.32±0.16vs3.68±1.58,瘤组织中S-100蛋白的表达较弱;肺瘤平膏可明显提高其外周血及脾中DC含量(P0.01),分别为:2.55±0.29,2.70±0.63,并明显上调S-100蛋白表达水平;拆方研究表明,肺瘤平膏中的益气类方药对Lewis肺癌荷瘤小鼠DC含量及表达的升高作用最为显著。结论在扶正培本为主要治则的肺瘤平膏抗肿瘤作用明确,其作用机制可能是通过提高荷瘤小鼠DC含量及表达,增强机体的抗肿瘤免疫功能,进而发挥抑瘤作用。     

桑黄云芝胶囊对Lewis肺癌自发肺转移模型小鼠的抑瘤作用

目的 :通过应用Lewis肺癌移植性肿瘤小鼠模型,观察桑黄云芝胶囊的抑瘤及抗转移作用。 方法: C₅₇BL/6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌瘤株,连续ig给药21 d后,处死动物,摘取瘤体称重,并计算肿瘤生长抑制率。剥离鼠肺,用Bouin氏液固定,解剖镜下计数肺部正反面及肺叶间的转移瘤集落数。 结果: 桑黄云芝胶囊高、中、低3个剂量对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长均有明显的抑制作用(与模型组比较,P<0.05),抑瘤率分别为21.2%,21.0%,24.6%。桑黄云芝胶囊高剂量组Lewis肺癌荷瘤小鼠肺转移集落明显少于模型组(P<0.05)。 结论 :桑黄云芝胶囊对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长具有明显抑制作用,并可抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠的肺转移,以高剂量最为明显。     

九节龙皂苷I对小鼠Lewis肺癌和裸鼠肝癌SMMC-7721的抑制作用

目的:研究九节龙皂苷I对小鼠Lewis肺癌和裸鼠肝癌SMMC-7721的抑制作用。方法:C57BL/6小鼠足跖接种稀释3倍的Lewis肺癌细胞悬液20μl制备肺转移模型,灌胃给药14d后,截下荷瘤足,计算原位抑癌率,继续给药至25d,计算肺转移集落数和转移抑制率;BALB/c/nu裸鼠背部皮下接种肝癌SMMC-7721细胞5×106个/ml复制人肝癌实体瘤模型,连续给药16d,动态测量肿瘤体积、体重,画肿瘤生长曲线,实验结束后,剥离瘤块,计算抑瘤率。结果:九节龙皂苷I25mg/kg~100mg/kg对小鼠Lewis肺癌原位癌抑制率和肺转移均分别在40.5%~54.0%和45.4%~69.1%之间,对裸鼠肝癌SMMC-7721实体瘤的抑制率在45.6%~56.3%之间。结论:九节龙皂苷I对Lewis肺癌转移瘤和裸鼠肝癌SMMC-7721均有抑制作用。     

阳和汤抑制阳虚证小鼠Lewis肺癌生长的实验研究

目的:研究阳和汤对阳虚证Lewis肺癌小鼠抑瘤率、NK细胞活性、Bax、Bcl-2、VEGF水平的影响。方法:将40只小鼠随机分为阳虚Lewis组、阳和汤临床等效剂量组、阳和汤2倍临床等效剂量组、顺铂组,每组10只。采用氢化可的松注射液肌肉注射制作阳虚证小鼠模型,然后将Lewis肺癌细胞株接种于小鼠右侧腋部皮下,造模1周后开始给药。末次给药24 h后处死小鼠,取瘤称重计算抑瘤率,采用乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾脏NK细胞活性,取瘤组织分别测定Bcl-2、Bax、VEGF的表达。结果:阳和汤对阳虚证Lewis肺癌小鼠肿瘤生长具有抑制作用,能恢复阳虚证Lewis肺癌小鼠脾脏NK细胞活性,有效降低阳虚证Lewis肺癌小鼠Blc-2表达,提高Bax表达,并且能降低VEGF表达。结论:阳和汤对于阳虚证肺癌的生长具有明确抑制作用,其作用强度与剂量有关,其抗肿瘤的可能机制是增加NK杀伤细胞活性、调节Bax、Bcl-2表达水平和抑制肿瘤血管生成。     

益气除痰方对小鼠lewis肺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨益气除痰方对小鼠Lewis肺癌生长的抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法 复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,将96只接种Lewis肺癌的小鼠随机分为6组:益气除痰方高、低剂量组,顺铂对照组,顺铂联合中药高、低剂量组,模型组,每组16只。给药1周后停药观察1周,其中一半动物处死观察细胞凋亡相关指标,另一半动物用于观察生存期。结果 与模型组比较,益气除痰方高、低剂量组均能明显降低瘤质量指数,差异有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01)。益气除痰方低剂量组肺转移抑制率为 28 %、高剂量组为 52 %,顺铂对照组为 50 %,顺铂联合低剂量组为40 %、高剂量组为50 %,与模型组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)。与模型组比较,益气除痰方组高、低剂量组和顺铂对照组、联合用药组均能明显提高肿瘤细胞凋亡率,差异均有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01,P < 0.001)。与模型组比较,益气除痰方低剂量组及顺铂对照组能有效延长模型小鼠的生存期,差异均有统计学意义(P < 0.01)。结论 益气除痰方有抑制肿瘤生长、延长肿瘤动物生存期及促进Lewis肺癌细胞凋亡的作用。     

莪术油抑制小鼠Lewis肺癌生长机制的探讨

目的建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,探讨莪术油对移植瘤生长、转移及血管内皮生长因子的影响。方法以Lewis肺癌荷瘤小鼠为研究对象,随机均分为生理盐水组与高、中、低剂量莪术油治疗组,分别于接种第7天起予莪术油、0．9％氯化钠溶液腹腔注射,每日1次,连续7次。检测莪术油对移植瘤的抑制率,并用免疫组化和western blot检测莪术油对荷瘤小鼠血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。结果莪术油处理15天后莪术油对Lewis肺癌荷瘤小鼠表现出明显抑瘤作用,其高、中、低剂量抑瘤率分别为85．0％,75．0％,51．0％。免疫组化及westernblot结果显示,莪术油可有效抑制肺癌转移,能够下调VEGF的表达。结论莪术油具有抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长,抑制肿瘤血管生成的作用,其作用机制可能与下调VEGF表达有关。     

硇砂提取物治疗小鼠Lewis肺癌的效果初步评价

目的评价硇砂提取物治疗小鼠Lewis肺癌的效果及对免疫系统的毒性.方法采用MTT法及流式细胞仪分别检测Lewis肺癌细胞的增殖和细胞周期,采用小鼠Lewis肺癌皮下移植肿瘤模型观察硇砂提取物的抗肿瘤作用,通过小鼠碳粒廓清和迟发性变态反应考察硇砂提取物对免疫系统的毒性.结果硇砂提取物可剂量依赖性抑制Lewis肺癌细胞的增殖,使细胞周期停止于S期.硇砂提取物水溶液连续瘤内给药8 d对小鼠Lewis肺癌皮下肿瘤的抑瘤率为46.7%,但同时灌胃给药对肿瘤的抑瘤率仅为15.7%.硇砂提取物水溶液皮下注射或灌胃给药对小鼠碳粒廓清能力及迟发性变态反应均无明显影响.结论硇砂提取物的抗肿瘤作用与给药途径有关,其对机体自身的免疫功能无明显影响.     

扶正解毒方选择性抑制肿瘤血管生成及调控VEGF/VEGFR-2信号通路的实验研究

目的:探讨扶正解毒方选择性抑制肿瘤血管生成及其相关作用机制。方法:以肿瘤血管内皮细胞模型、正常血管内皮细胞及Lewis肺癌荷瘤小鼠为研究对象,随机分为生理盐水组、贝伐单抗组、扶正解毒组及其拆方扶正、解毒药物组,采用MTT法观察扶正解毒方药、贝伐单抗对肿瘤血管内皮细胞与正常血管内皮细胞增殖的影响;采用免疫组化法观察药物对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织VEGF表达的影响;采用Western Blotting法观察药物对血管内皮细胞VEGFR-2(KDR)表达的影响。结果:扶正解毒方能够抑制肿瘤血管内皮细胞增殖(P0.05),而对正常血管内皮细胞增殖没有明显影响(P0.05),贝伐单抗对肿瘤血管内皮细胞及正常血管内皮细胞增殖均有抑制作用(P0.01),扶正解毒组与贝伐单抗组比较有明显差异(P0.05);扶正解毒方能降低瘤组织VEGF表达及肿瘤血管内皮细胞VEGFR-2表达(P0.05),扶正解毒方组VEGFR-2表达水平与正常血管内皮细胞相近。结论:扶正解毒方能够选择性抑制肿瘤血管生成,其作用机制与调控VEGF/VEGFR-2信号传导有关。