基于LKB1/AMPK/PGC-1α的泽泻汤改善非酒精性脂肪肝作用机制研究

以棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的脂质堆积细胞模型和高脂诱导的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)动物模型,探讨泽泻汤(Zexie Decoction)体内外改善NAFLD的药效,以LKB1/AMPK/PGC-1α通路为切入点探讨其可能作用机制。MTT结果显示泽泻汤对HepG2细胞活力无影响,泽泻汤剂量依赖性下调PA诱导的肝细胞培养基谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平,降低高脂饮食(high-fat diet,HFD)小鼠血浆ALT、AST及肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平。尼罗红染色观察PA诱导的细胞内脂质沉积,PA诱导的肝细胞脂质蓄积显著增加,体外细胞脂质堆积模型诱导成功,泽泻汤有效改善PA诱导的肝细胞脂质堆积;小鼠肝脏油红染色结果同样表明,泽泻汤剂量依赖性减少HFD小鼠肝脏脂质堆积。线粒体膜电位染色显示泽泻汤能够逆转PA诱导肝细胞损伤引起的线粒体膜电位的下降;同时泽泻汤激活PGC-1α上调其靶基因ACADS、CPT-1α、CPT-1β、UCP-1、ACSL-1、NRF-1等的表达;Western blot及免疫组化结果显示泽泻汤可体内外上调LKB1、p-AMPK、p-ACC、PGC-1α蛋白表达水平。综上所述,泽泻汤能够有效改善NAFLD,其机制可能与调控LKB1/AMPK/PGC-1α通路相关。     

糖尿病肾病足细胞损伤的病理机制及中药的干预作用

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)进程中,足细胞损伤与蛋白尿密切相关。足细胞损伤的病理特征主要是指足细胞形态和功能的改变,包括足突融合、足细胞数量和密度减少、足细胞凋亡、足细胞上皮-间充质转分化以及足细胞肥大等。这些病理性损伤受控于肾组织内多条信号调控途径,如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)/自噬通路、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1通路以及Notch通路等。以雷公藤制剂为代表的一些中药提取物,如雷公藤多苷(multiglycoside of Tripterygium wilfordii,GTW)、雷公藤甲素(triptolide,TP)、黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)、黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)以及三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在体内外对DN模型鼠足细胞病变或高糖诱导的足细胞损伤都具有一定的保护作用。国内的初步研究表明,GTW很可能通过调控DN模型鼠肾组织m TORC1信号通路活性而改善足细胞损伤。因此,基于DN足细胞损伤的信号调控途径而探讨中药干预作用的研究是今后的发展方向。     

两色金鸡菊黄酮成分对高糖高脂诱导的细胞模型能量代谢紊乱的影响

目的观察两色金鸡菊黄酮成分对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1能量代谢紊乱的影响,探讨其保护作用机制。方法采用高糖高脂诱导HBZY-1细胞建立体外糖尿病肾病代谢紊乱细胞模型,将HBZY-1细胞分为正常组、模型组和两色金鸡菊黄酮成分不同剂量组。采用MTS实验检测模型细胞增殖水平,倒置显微镜观察模型细胞形态变化,细胞划痕实验观察模型细胞细胞外基质分泌,Westernblot检测细胞能量代谢调控因子5’腺苷-磷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)、乙酰辅酶a羧化酶1(ACC1)、甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)及氧化应激因子一氧化氮合酶(e NOS)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的蛋白表达。结果两色金鸡菊黄酮成分能抑制高糖高脂诱导的HBZY-1细胞增殖,细胞间隙增大、密度显著降低;两色金鸡菊黄酮成分促进模型细胞p-AMPKα、p-ACC1、e NOS的蛋白表达,抑制模型细胞SREBP1、NOX4、ACC1的蛋白表达;划痕实验结果显示,两色金鸡菊黄酮成分对模型细胞细胞外基质分泌有显著抑制作用,同时α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达显著降低。结论两色金鸡菊黄酮成分可能通过调控AMPK/SREBP1/ACC1能量代谢通路,抑制模型细胞增殖、氧化应激,进而改善肾脏纤维化病变。     

黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响

目的:体外研究高糖刺激人肾间质成纤维细胞时纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的表达,以及黄芪延缓糖尿病肾病与其相关性。方法:将人肾间质成纤维细胞培养于不同浓度葡萄糖中,24 h 后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测 PAI-1 mRNA 转录水平,免疫组化方法检测 PAI-1蛋白的表达。随即用黄芪药物血清刺激细胞,观察 PAI-1表达情况。结果:高浓度葡萄糖培养的细胞 PAI-1表达升高,并呈现剂量和时间依赖性。说明 PAI-1表达与高糖作用存在相关性。同时等渗甘露醇也可以诱导 PAI-1表达。黄芪含药血清可以显著抑制细胞表达 PAI-1。结论:高糖可诱导 PAI-1表达,抑制细胞外基质成分降解。黄芪通过抑制 PAI-1的产生,起到抗纤维化作用,从而延缓糖尿病肾病的进展。     

中药干预足细胞上皮间质转分化治疗糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病是终末期肾病的首要原因,足细胞上皮间质转分化(epithelial to mesenchymal transition, EMT)与糖尿病肾病肾功能减退、蛋白尿的发生及进展有重要关系。中医药治疗糖尿病肾病在临床中疗效确切,但糖尿病肾病发病机制复杂,其分子机制尚未完全阐明。足细胞EMT和多条信号通路有关,如转化生长因子-β、Wnt/β-catenin、整合素连接激酶、Notch、丝裂原活化蛋白激酶、核因子-κB、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路,其中转化生长因子-β作为必需细胞因子可激活其他信号通路。信号通路将受到刺激后产生的细胞外信号分子传递进细胞核内与靶基因结合,促进足细胞EMT。中药单体、单味中药如黄芪甲苷、当归多糖、雷公藤甲素、黄芩苷、丹参和生地黄等在体内外实验中被证明对EMT具有一定的抑制作用。本文从信号通路角度,通过将中药干预足细胞EMT的文献进行整合,筛选出作用于足细胞EMT信号通路的中药并对其功效进行分析,发现益气养阴类、清热祛湿类、活血化瘀类中药在足细胞EMT中的研究较多,在糖尿病肾病治疗中可能发挥足细胞保护的机制,为糖尿病肾病的中药治疗提供思路。     

糖尿病肾病中足细胞损伤的信号通路及中药的干预研究进展

足细胞(podocyte)位于肾小球基底膜外侧,具有高度的结构、功能特异性,在维持肾小球滤过膜的结构和功能中起重要作用。足细胞损伤在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中起重要因素,以足细胞损伤为靶点的治疗已成为治疗糖尿病肾病的新手段,对信号通路的干预可能为其治疗提供新方向,目前关于足细胞损伤机制研究较多的有自噬与PI3K-Akt/m TOR信号通路、Notch信号通路、TGF-β/Smad、NF-κB信号通路、Rho/ROCK信号通路和Wnt/β-catenin信号通路等。临床上尚无控制糖尿病肾病的特异性药物,最新研究发现,中医药在足细胞损伤具有一定的保护作用,主要通过增加足细胞数量、密度,调节足细胞相关蛋白、因子等途径保护足细胞。因此,本文就糖尿病肾病中足细胞损伤相关的信号通路及中医药的干预作用做一综述,为更好地防治糖尿病肾病提供研究策略。     

基于活性氧簇-自噬通路调控的加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞的保护机制研究

目的观察加味黄芪赤风汤基于活性氧簇(ROS)-自噬通路对AngⅡ诱导肾小球足细胞损伤的保护机制。方法制备低、中、高剂量加味黄芪赤风汤(分别应用生药浓度为0.57、1.15、2.29 g/mL的加味黄芪赤风汤灌胃小鼠)含药血清及替米沙坦(0.83 mg/mL灌胃小鼠)含药血清,采用AngⅡ(1×10~(-7)mol/L)诱导足细胞损伤模型,分为空白组,模型组,加味黄芪赤风汤低、中、高剂量组以及替米沙坦组;为验证自噬与模型的关系,设置3MA与氯喹组。采用Western Blot检测足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62表达,溶酶体荧光探针检测自噬流活性,透射电镜观察足细胞内自噬体的形成,流式细胞仪检测细胞内ROS平均荧光强度(MFI)。结果与空白组比较,模型组足细胞nephrin、podocin、P62表达下调(P0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达上调(P0.01),ROS的MFI增强(P0.01)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示模型组自噬体数量增多,溶酶体表达增强。与模型组比较,加味黄芪赤风汤中、高剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin、P62表达上调(P0.01,P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达下调(P0.01,P0.05);3MA及氯喹组足细胞nephrin、podocin表达下调(P0.01,P0.05);加味黄芪赤风汤低剂量组Beclin-1表达下调(P0.05);各给药组ROS MFI减弱(P0.01,P0.05)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示加味黄芪赤风汤组及替米沙坦组自噬体数量减少,溶酶体表达减弱。结论 AngⅡ通过下调nephrin、podocin表达损伤足细胞;加味黄芪赤风汤可上调AngⅡ诱导的nephrin、podocin表达,缓解足细胞损伤;加味黄芪赤风汤可能基于ROS-自噬通路,下调AngⅡ诱导的自噬流,拮抗肾小球足细胞损伤。     

黄芪多糖通过失活Wnt信号通路抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡

目的:研究黄芪多糖对高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:建立高糖诱导下肾小管上皮细胞损伤;运用MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Caspase-3、Axin-1、β-catenin蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中Axin-1、β-catenin mRNA表达。结果:与空白对照组比较,高糖(25、30、40 mmol/L)处理组细胞活力均显著降低(P0.05),且最适浓度为40 mmol/L,在该浓度下细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、β-catenin蛋白表达显著升高、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著降低,β-catenin mRNA显著升高(P0.05)。与模型组比较,黄芪多糖300、400 mg/L组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Caspase-3、β-catenin蛋白表达及β-catenin mRNA表达显著降低、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:黄芪多糖可抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与失活Wnt信号通路有关。     

黄芪甲苷联合大黄素通过Smads通路抑制TGF-β1诱导的足细胞凋亡

目的:探讨黄芪甲苷联合大黄素是否通过Smads通路抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠足细胞株凋亡。方法:①体外培养小鼠足细胞株。②应用不同浓度TGF-β1(10-1¹04ng/L)诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF-β1不同刺激时间(12、24、48 h)诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡,实验分为正常组、TGF-β1组、黄芪甲苷+TGF-β1组(黄芪甲苷组)、大黄素+TGF-β1组(大黄素组)、黄芪甲苷+大黄素+TGF-β1组(黄芪甲苷+大黄素组)。⑤采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3 mRNA及蛋白质表达。结果:①随着TGF-β1浓度增加(10-1104ng/L)诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF-β1不同刺激时间(12、24、48 h)诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡,实验分为正常组、TGF-β1组、黄芪甲苷+TGF-β1组(黄芪甲苷组)、大黄素+TGF-β1组(大黄素组)、黄芪甲苷+大黄素+TGF-β1组(黄芪甲苷+大黄素组)。⑤采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3 mRNA及蛋白质表达。结果:①随着TGF-β1浓度增加(10-1¹04ng/L)、刺激时间增加,足细胞凋亡比率增多(P<0.05),足细胞Smad2、Smad3 mRNA表达增加。TGF-β1103ng/L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24 h为最佳诱导凋亡时间。②TGF-β1组与正常组相比Caspase 3阳性细胞比率增加(P<0.01);Smad2、Smad3蛋白质表达明显增加(P<0.01)。③黄芪甲苷+大黄素组与TGF-β1组、黄芪甲苷组、大黄素组比较:足细胞凋亡比率明显减少(P<0.05);Caspase 3阳性细胞比率减少(P<0.05);Smad2、Smad3蛋白质表达减少(P<0.05)。④黄芪甲苷+大黄素组较TGF-β1组Smad2、Smad3 mRNA表达减少。结论:①TGF-β1能通过Smads通路诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。②黄芪甲苷联合大黄素能通过Smads通路阻断足细胞凋亡,其机制可能与减少TGF-β1的表达,阻止其激活Smads蛋白,从而阻止Caspase家族诱导的足细胞凋亡有关。     

黄芪当归合剂通过抑制c-Jun氨基末端激酶活性影响肾小球系膜细胞表型变化

目的观察中药黄芪当归合剂(A&A)对白细胞介素-1β(IL-1β)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)诱导的肾小球系膜细胞分泌表型及其细胞内 JNK 信号通路的影响。方法在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞中,以IL-lβ和 AⅡ为刺激物,采用蛋白印记和酶联免疫吸附法测定α-平滑肌动蛋白(a-SMA)表达、纤维粘连蛋白(FN)分泌量和 c-Jun 氨基末端激酶(JNK)活性,用共聚焦显微镜观察 IL-lβ刺激前后系膜细胞内α-SMA 的分布变化,并观察 A&A 血清滤液对上述指标的影响。结果外源性 IL-lβ和 AⅡ可刺激肾小球系膜细胞表达α-SMA 和 FN 增加,A&A 血清滤液可明显抑制 IL-lβ刺激系膜细胞导致的上述效应,但对 AⅡ引起的上述变化无明显作用。同时,A&A 血清滤液可显著抑制 IL-lβ刺激诱导的 JNK 活化;AⅡ对 JNK 活化无明显刺激作用,A&A 血清滤液对 AⅡ的作用亦无明显影响。结论 A&A 可抑制 IL-lβ诱导的系膜细胞表型转化,该作用可能与其下调 JNK 信号通路活化有关。     

人参-三七-川芎提取物延缓高糖诱导的小鼠血管衰老的机制探讨

目的:从单磷酸腺苷活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)通路探讨人参-三七-川芎提取物对高糖诱导的小鼠血管衰老的保护作用。方法:130只雄性C57BL/6小鼠先随机分为空白组和高糖组,高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ),并用高脂饮食连续性喂养7个月后再次随机分组,分为模型组、人参-三七-川芎提取物低剂量组(0.819 g·kg~(-1))、人参-三七-川芎提取物高剂量组(1.638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1)),灌胃给药,每天1次,连续9周,期间检测小鼠体质量和血糖变化。给药结束后,苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠胸主动脉形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠胸主动脉周期蛋白依赖激酶抑制因子2A(p16),周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21),AMPK,p-AMPK,mTOR,pmTOR,肝激酶B1(LKB1),p-LKB1,核糖体蛋白s6激酶(p70s6k),p-p70s6k蛋白表达情况。结果:与空白组相比,模型组小鼠体质量显著降低、血糖显著升高(P0.01),在药物干预9周后,各给药组小鼠体质量无明显差异,血糖值较模型组明显下降(P0.05,P0.01)。与空白组相比,模型组内膜损伤严重且有增生,中膜明显增生且排列不整齐,给药各组内膜损伤不明显,中膜少量增生,p16,p21,mTOR,p-mTOR,p70s6k,p-p70s6k蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),AMPK,p-AMPK,LKB1,p-LKB1蛋白表达明显下降(P0.05,P0.01)。药物干预后,各给药组p16,p21,mTOR,p-mTOR,p70s6k,p-p70s6k蛋白表达明显下降(P0.05,P0.01),AMPK,p-AMPK,LKB1,p-LKB1蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:高糖能够诱导小鼠主动脉衰老,人参-三七-川芎提取物可能通过AMPK/mTOR通路改善由高糖诱导的小鼠主动脉衰老。     

山楂叶总黄酮对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1/Smad4信号转导通路的影响

目的探讨山楂叶总黄酮对链脲佐菌素(Streptozotocin)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad4信号转导通路的影响。方法用链脲佐菌素加高脂高糖饲养建立糖尿病肾病模型。60只Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、厄贝沙坦组、山楂叶总黄酮组。结果山楂叶总黄酮显著降低糖尿病肾病大鼠的血糖,减少肾小球细胞外基质的相对面积,改善肾功能;下调肾组织中TGF-β1、Smad4 mRNA的表达。结论山楂叶总黄酮可通过干预TGF-β1/Smad信号转导通路,减少肾小球细胞外基质的沉积,改善糖尿病肾病大鼠肾功能。     

糖肾宁对高糖诱导的足细胞损伤模型Rho/ROCK通路的影响

目的：基于Rho/ROCK信号通路研究中药糖肾宁对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。方法：高糖培养足细胞,以不同药物分组干预足细胞24 h,用罗丹明染色的鬼笔环肽法检测足细胞骨架,细胞免疫荧光检测足细胞标志蛋白Nephrin,Western Blotting检测RhoA、ROCK1、Nephrin蛋白的表达。比较不同药物或药物浓度对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。结果：糖肾宁可改善足细胞骨架结构,下调高糖诱导的足细胞损伤模型中异常升高的RhoA和ROCK1蛋白表达,上调Nephrin表达。结论：中药糖肾宁可抑制高糖诱导的足细胞损伤模型RhoA/ROCK1信号通路,减轻足细胞骨架重构,改善足细胞损伤。     

TGF-β/Smad信号通路在糖尿病肾病中的作用及中药干预的研究进展北大核心CSCD

糖尿病肾病(diabetic kidney disease)既是糖尿病重要的微血管并发症之一,也是诱发终末期肾病(end stage renal disease)的主要病因,其病理特性主要包括肾小球上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、足细胞凋亡与自噬、肾小球滤过屏障受损。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad途径受多种机制特异性调控,是参与生物体细胞凋亡、增殖、分化等生理活动的经典信号通路。目前,诸多研究发现TGF-β/Smad信号通路在糖尿病肾病发病机制中占据重要地位。中药多组分、多靶点、多途径的特性在治疗糖尿病肾病进程中优势显著,部分中药提取物、中药及中药复方能够通过调控TGF-β/Smad信号通路,改善糖尿病肾病肾损伤。该文通过阐述TGF-β/Smad信号通路关键靶点与糖尿病肾病的联系,明确TGF-β/Smad信号通路在糖尿病肾病中发挥的作用机制,归纳并总结近年来中药通过干预TGF-β/Smad信号通路治疗糖尿病肾病的研究现状,以期为今后糖尿病肾病的药物研发和临床治疗提供一定参考。     

糖肾汤对氧化低密度脂蛋白诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达及细胞外基质分泌的影响

目的:观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达及转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞外基质分泌的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:培养大鼠系膜细胞,分为空白组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,RT-PCR检测系膜细胞mRNA表达,ELISA技术检测细胞上清液中TGF-β1、四型胶原(ColⅣ)和纤黏连蛋白(FN)含量。结果:糖肾汤、罗格列酮含药血清均能抑制ox-LDL诱导的TGF-β1、LOX-1 mRNA表达上调,及TGF-β1、FN、ColⅣ的分泌,其中糖肾汤含药血清呈剂量依赖性作用,中浓度作用最强。结论:糖肾汤可能通过降低ox-LDL受体LOX-1的表达以减少ox-LDL摄入及由此引起的细胞因子分泌和细胞外基质产生,从而起到防治糖尿病肾病的作用。     

黄芪-当归治疗糖尿病肾病作用机制的网络药理学研究

目的基于网络药理学方法探讨黄芪-当归治疗糖尿病肾病的物质基础和作用机制。方法利用中药系统药理学分析平台(TCMSP),以口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.05为筛选条件,结合文献调研得到黄芪-当归候选化合物,并通过该数据库检索与候选化合物相关的作用靶点。通过TCMSP与比较毒物基因组学数据库(CTD)获得糖尿病肾病相关基因。通过在线韦恩图分析得到候选化合物与糖尿病肾病的交集基因。通过STRING 10.0数据库构建出交集蛋白相互作用网络。通过DAVID数据库对交集蛋白进行基因本体(GO)分析和基于京都基因与基因百科全书(KEGG)对信号通路富集分析。利用Cytoscape 3.6.1软件构建黄芪-当归治疗糖尿病肾病的成分-靶点-信号通路网络。结果所构建的黄芪-当归治疗糖尿病肾病的成分-靶点-信号通路网络涉及槲皮素、山奈酚、芒柄花黄素、毛蕊异黄酮、异鼠李素、咖啡酸酯等10个活性成分;涉及CCL2、IL-1β、IL-1α、VEGFA等12个潜在靶点;涉及糖尿病信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路及Nod样受体信号通路等31条信号通路。结论黄芪-当归药对可能通过槲皮素、异鼠李素等多种成分作用于CCL2、IL-1β等靶点,调控糖尿病、Nod样受体等多条信号通路,进而发挥治疗糖尿病肾病的作用。     

白芍总苷对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

该实验研究白芍总苷对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响,探讨白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及可能机制。实验采用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠,动物分为正常对照组,糖尿病对照组,白芍总苷低、中、高剂量治疗组(50,100,200 mg·kg-1)及阳性对照组(雷公藤多苷8 mg·kg-1),灌胃给药,每日1次,14周末检测大鼠空腹血糖,血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白;光镜观察肾组织形态学的改变;病理图像系统分析平均肾小球面积及平均肾小球体积;免疫组织化学及Western blot检测肾组织Wnt-1,β-catenin蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织Wnt-1,β-catenin mRNA表达。研究发现高糖高脂诱导的2型糖尿病大鼠肾组织Wnt-1,β-catenin表达增高。与糖尿病对照组比较,各治疗组大鼠血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白,平均肾小球面积,平均肾小球体积显著降低,肾组织病理形态学明显改善;Wnt-1,β-catenin mRNA及蛋白表达显著减少。综上所述,2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路异常活化,白芍总苷可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化,改善糖尿病大鼠肾脏损害,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化

探讨雷公藤甲素（triptolide,TP）改善高剂量D-葡萄糖（高糖）诱导的足细胞上皮-间充质转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用和分子机制。将体外培养的小鼠永生化足细胞分为正常组（normal group,N）、高剂量D-葡萄糖组（high dose of D-glucose group,H-TP）、低剂量TP组（low dose of TP group,L-TP）、高剂量TP组（high dose of TP group,H-TP）以及甘露醇组（mannitol group,MNT）,分别进行不同的干预：N组加入D-葡萄糖（D-glucose,DG,5 mmol·L^-1）;HG组加入HG（25mmol·L^-1）;L-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（3μg·L^-1）;H-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（10μg·L^-1）;MNT组加入DG（5 mmol·L^-1）＋MNT（24.5 mmol·L^-1）。在干预后的各时间点（24,48,72 h）,首先,观察TP对足细胞增殖活性的影响;其次,检测足细胞上皮细胞标志性分子（nephrin和podocin）、间充质细胞标志性分子（desmin和Ⅰ型胶原）以及EMT相关介质snail的蛋白表达水平;最后,检测足细胞Wnt3α/β-catenin信号通路关键信号分子Wnt3α和β-catenin蛋白表达水平。结果表明,HG不仅能引起足细胞nephrin和podocin蛋白低表达,desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白高表达,诱导足细胞EMT,而且,能促使足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,激活Wnt3α/β-catenin信号通路。此外,L-TP对足细胞增殖能力没有影响,与HG联合干预不仅能明显恢复足细胞nephrin和podocin蛋白表达水平,抑制其desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白表达水平,改善足细胞EMT,而且,能明显降低HG诱导的足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性。总之,HG在体外能激活Wnt3α/β-catenin信号通路而诱导足细胞发生EMT;L-TP在体外能明显抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性而改善足细胞EMT,这可能是其干预足细胞EMT的作用和分子机制之一。     

黄芪多糖干预糖尿病肾病炎症发病机制的研究思路探讨

检索近十年关于糖尿病肾病的研究文献,从该病的炎症发病机制出发,重点阐述了炎症因子,包括C-反应蛋白(CRP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞黏附分子(ICAM-1)、白介素(IL)系列、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、血管紧张素II(Ang II)、核因子-κB(NF-κB)等与糖尿病肾病的发病关系,以及JAK/STAT炎症信号通路在糖尿病肾病中的关键作用。论述了糖尿病肾病的中医发病机制,并结合补气中药黄芪多糖在糖尿病方面的研究,探讨其对糖尿病肾病炎症损伤的研究思路。     

黄芪甲苷抑制高糖诱导的足细胞凋亡作用及机制

目的：探讨黄芪甲苷（AS-IV）对高糖诱导的足细胞凋亡的作用及其机制。方法：条件性永生的小鼠足细胞分为正常糖组（NG）、高糖组（HG）、甘露醇高渗对照组（MA）及HG＋不同剂量（10、50、100 μg/mL）黄芪甲苷干预组（AS-IV）。流式细胞仪及Hoechst染色检测细胞凋亡;荧光探针CM-H2-DCF-DA标记细胞检测活性氧（ROS）水平;Western印迹检测足细胞p38-MAPK活性。结果：高糖促进足细胞ROS的产生并引起足细胞凋亡,AS-IV明显抑制高糖诱导的ROS的产生及足细胞凋亡,且呈剂量依赖关系。此外,高糖激活p38-MAPK信号通路,AS-IV呈剂量依赖性抑制p38-MAPK活性。结论： AS-IV能减少高糖所致的足细胞凋亡,其机制可能与AS-IV抗氧化及抑制p38-MAPK活化密切相关。