益气解毒活络中药有效成分对高糖刺激人肾小球系膜细胞增殖分化及ColIV、MCP-1 mRNA和蛋白表达影响

目的:观察高糖刺激下人肾小球系膜细增殖分化及Col IV、MCP-1 mRNA和蛋白活性表达变化,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的分子机制,讨论正交配伍中最优药物组合。方法:以体外培养人肾小球系膜细胞株,传代3~5代后接种于96孔培养板,采用4因素3水平分为正常对照组,高糖模型组、中药1、2、3、4、5、6、7、8、9组,以相应药物对HMCs干预24、48、72 h。MTT法检测24、48、72 h各时间点HMCs增殖分化情况;以qRT-PCR法检测48 h Col IV、MCP-1 mRNA表达;以ELISA法检测48 h Col IV、MCP-1蛋白活性表达。结果:(1)高糖环境刺激作用下HMCs及胞外基质均能够显著增殖,且在48 h达到顶峰;(2)益气解毒活络中药有效成分药防治DN作用机制与通过下调高糖作用下HMCs Col IV、MCP-1 mRNA及蛋白活性表达,进而抑制高糖刺激HMCs增殖相关;(3)益气解毒活络中药有效,最佳配伍为黄芪甲苷低剂量、盐酸小檗碱低剂量、水蛭素低剂量、木犀草苷低剂量。     

益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球系膜细胞PPAR-γmRNA及蛋白表达的影响

目的:观察益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球系膜细胞PPAR-γmRNA及蛋白表达影响,探讨益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的可能机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞株(GMC),分为正常对照组,高糖高脂模型组、中药组(第1组、第2组、第3组),qRT-PCR法检测各组24、48 h PPAR-γmRNA的表达,WesternBlot法检测各组24、48 h PPAR-γ蛋白活性的表达。结果:(1)各组24、48 h PPAR-γmRNA表达比较:24 h:与正常组比较模型组及中药配伍组均有显著差异(P0.01),与模型组比较各中药配伍组PPAR-γmRNA表达均明显上升,且有显著差异(P0.01),各中药配伍组组间比较发现第1组PPAR-γmRNA表达最高(P0.01)。48 h:与正常组比较除去第1组未见明显差异(P0.05),模型组及其余各用药组均有显著差异(P0.01);与模型组比较各中药配伍组PPAR-γmRNA表达均明显上升,且有显著差异(P0.01);各中药配伍组组间比较发现第1组PPAR-γmRNA表达最高(P0.01)。正常组24、48 h两时间点PPAR-γmRNA表达未见显著差异(P0.05),模型组及第1、2、3组48h PPAR-γmRNA表达显著高于24 h PPAR-γmRNA表达(P0.01)。(2)各组24、48h PPAR-γ蛋白表达比较:GMC细胞24 h PPAR-γ蛋白表达比较:模型对照组PPAR-γ蛋白低表达,各中药配伍组均能够调高PPAR-γ的表达,各中药配伍组组间比较发现第1组调高PPAR-γ作用最显著。GMC细胞48 h PPAR-γ蛋白表达比较:模型对照组PPAR-γ蛋白低表达,各中药配伍组均能够调高PPAR-γ的表达,各中药配伍组组间比较发现第1组调高PPAR-γ作用最显著。结论:益气解毒活络中药有效成分可能是通过上调PPAR-γ表达水平的作用来保护受损的GMC,从而起到减缓糖尿病肾病病程进展,保护受损肾脏的作用。     

益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球细系膜细胞NF-κB蛋白表达影响

目的:观察益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球细系膜细胞NF-κB蛋白表达影响,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞株,分为正常对照组,高糖高脂模型组、中药组(第1组、第2组、第3组);Western Blot法检测0、15、30、60、90 min高糖高脂模型组NF-κB蛋白表达;Western Blot法检测60、90 min 5组NF-κB蛋白表达;免疫荧光染色检测NF-κB核转运。结果:(1)模型组第90 min NF-κB蛋白表达达到峰值。(2)各中药配伍组中第3组下调60 min NF-κB蛋白表达效果最佳;第1组下调90 min NF-κB蛋白表达效果最佳。(3)各组60、90 min NF-κB核转运比较发现:细胞免疫荧光显示,正常对照组p65主要分布在细胞质部分,模型对照组p65主要分布在细胞核部分,各中药配伍组p65明显分布在细胞质内,提示各中药配伍组60、90 min的NF-κB核转运作用被抑制。结论:益气解毒活络中药组分配伍可能是通过抑制NF-κB信号途径来保护受损的肾小球系膜细胞,从而起到减缓DN病程进展,保护受损肾脏的作用。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响.方法采用 MTT 比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响.结果黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用.结论养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物.     

清热中药对高糖培养下肾小球系膜细胞增殖的影响

为研究清热中药治疗糖尿病肾病的作用机理,验证中医理论对糖尿病发病机制的认识,并为临床用药提供依据。采用MTF比色法,观察具有清热作用的中药知母、生地、胡黄连和地骨皮水提物对体外高糖条件下培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果显示,知母、生地和胡黄连对系膜细胞增殖有抑制作用,而地骨皮无明显作用。提示清热中药可能通过抑制系膜细胞的增殖从而对糖尿病肾病的发生产生一定的影响。     

活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（RMCs）增殖及纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 以大鼠RMCs为研究对象,用高糖和不同浓度的中药处理RMCs,分别作用24、48 h后,用噻唑蓝（MTT）法检测RMCs的增殖情况,实时定量PCR法检测FN mRNA表达,ELISA法检测FN蛋白表达。结果 处理24 h和48 h,与对照组比较,单纯高糖组细胞增殖明显升高（P<0.01, P<0.01）;FN mRNA表达及蛋白表达也明显升高（P<0.01）;与高糖组比较, 24 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;48 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达较高糖组明显下降（P<0.01, P<0.01）。结论 高糖能够刺激RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达,中药处理24 h对高糖刺激的RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达的作用不明显,中药处理48 h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖及降低FN 蛋白及mRNA 的表达。     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-βRⅠmRNA及其蛋白的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达转化生长因子βI型受体(transforming growth factorβ,TGF-β-RI)mRNA及其蛋白的影响。方法:采用RT-PCR法检测各组含药血清对Ms C表达TGF-βRⅠ mRNA的影响;采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠MsC表达TGF-βRⅠ蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-βRⅠ mRNA(P<0.01),复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异显著(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组(P<0.01)。(2)Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-βRⅠ蛋白,复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异显著(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组(P<0.01)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷的含药血清均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-βRⅠmRNA及其蛋白。复方组作用较强,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。     

虫草益肾颗粒对高糖诱导人肾小球系膜细胞氧化应激及p47phox表达的影响

目的:研究虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMCs)的氧化应激及p47phox表达水平的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DKD)的作用机制.方法:将HMCs随机分为6组:正常组、高糖组、福辛普利组和虫草益肾颗粒低、中、高剂量组,分别给予相应的动物含药血清处理后,收集48 h和72 h细胞上清液,用流式细胞术检测各...     

MTT法检测地龙有效成分对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究地龙有效成分对体外培养的人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响,并探讨其防治糖尿病肾病的可能作用机制。方法:将常规培养的HMC分为正常对照组、地龙有效成分低、中、高剂量组,分别给予相应处理后24h采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。结果:与空白对照组相比,各药物组均不同程度的抑制了正常HMC的增殖,其中,中剂量药物组对HMC细胞的增殖抑制作用最为显著(P0.01),低剂量和高剂量组也能够抑制HMC细胞的增殖(P0.05)。结论:地龙有效成分能够抑制HMC的增殖,中剂量组效果最佳。     

秦皮甲素对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨秦皮甲素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度秦皮甲素(10、30、90μmol·L-1)对正常培养条件(含糖5.6 mmol·L-1)和高糖培养条件(含糖25 mmol·L-1)下的HBZY-1细胞增殖的影响;以PI3K抑制剂Wortmannin(1μmol·L-1)干预为对照,采用Western Blot法检测秦皮甲素对高糖培养条件下HBZY-1细胞FN蛋白表达及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平变化的影响。结果在正常培养条件下,与正常组比较,秦皮甲素给药组(10、30、90μmol·L-1)的HBZY-1细胞增殖均无明显变化(P>0.05)。在高糖培养条件下,与正常组比较,高糖组的细胞活力明显增加(P<0.05),HBZY-1细胞FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05);与高糖组比较,90μmol·L-1秦皮甲素给药组的HBZY-1细胞活力明显降低(P<0.05),FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平亦显著下调(P<0.05)。结论秦皮甲素能够抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,下调FN蛋白表达,可能与其抑制PI3K/Akt信号通路激活密切相关。     

通络保肾复方对高糖环境下LPS刺激肾小球足细胞增殖及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:探讨通络保肾复方对肾小球脏层上皮细胞(POD)增殖反应及转分化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法:将5%含药血清培养基加入体外培养的足细胞,分别于高糖环境下脂多糖(LPS)刺激足细胞12h、24h、36h、48h后,用MTT方法检测各组的增殖情况,RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA的表达。结果:LPS刺激12h后足细胞开始增殖,24h达高峰,48h后开始下降。通络保肾复方能够抑制足细胞增殖,以通络保肾复方大剂量组效果显著,与LPS组比较差异显著(P<0.01)。同时通络保肾复方可以降低足细胞TGF-β1mRNA的表达。本研究结果提示,通络保肾复方可以抑制高糖环境下LPS刺激诱导的足细胞增殖及降低足细胞TGF-β1mRNA的表达,减轻足细胞的损伤,抑制细胞外基质的异常积聚和沉积,从而延缓肾小球硬化的进程。     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌TGF-β1的影响

目的 探讨小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌TGF-β1的影响.方法 分离培养糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞,用MTT法检测系膜细胞的增殖能力,ELISA法测定系膜细胞分泌的TGF-β1,放射免疫法测定系膜细胞产生cAMP水平.结果 间接免疫荧光鉴定结果显示所培养的细胞为系膜细胞.小檗碱(15、30、60、120 μmol/L)能有效的抑制糖尿病肾病大鼠系膜细胞的增殖和TGF-β1的分泌,并显著升高糖尿病肾病大鼠系膜细胞的cAMP水平.结论 升高糖尿病肾病大鼠系膜细胞cAMP水平可能是小檗碱发挥抑制系膜细胞过度增殖和分泌的机制之一.     

清热利湿中药对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨清热利湿中药利肾口服液防治肾小球疾病的机制。方法常规方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞并加入白细胞介素-1(IL-1)及中药利肾口服液,采用3H-TdR掺入法检测系膜细胞增殖情况。结果利肾口服液可显著抑制体外培养的肾小球系膜细胞,并对IL-1刺激肾小球系膜细胞的增殖有显著的抑制作用,并呈一定的量效关系。结论利肾口服液防治肾小球疾病的机制与免疫调节、直接抑制和拮抗IL-1刺激肾小球系膜细胞的增殖等有关。     

解聚复肾宁对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨解聚复肾宁(黄芪、地黄、黄连、丹参、姜黄、葛根等)(JJFSN)治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:高糖诱导系膜细胞(MC)增殖以及细胞外基质(ECM)分泌,制备不同浓度JJFSN含药血清作用于体外培养的MC,用MTT法检测细胞增殖,放射免疫技术(RIA)检测细胞培养上清中Ⅳ型胶原(ColⅣ)及层黏连蛋白(Ln)的含量。结果:JJFSN含药血清可抑制高糖诱导的MC过度增殖(P0.05),并且这种作用具有药物剂量和时间依赖关系。同时,JJFSN可逆转高糖对ColⅣ和Ln分泌的影响,降低MC培养上清中ColⅣ和Ln的含量(P0.05),并且这种作用随着JJFSN剂量的增加而增强。结论:JJFSN抑制高糖诱导的MC过度增殖并减少ECM的过量分泌,可能是其防治DN早期的作用机制。     

益肾蠲湿合剂对TGF-β_1诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的探讨中药复方益肾蠲湿合剂对TGF-β1作用下肾小球系膜细胞（GMC）分泌细胞外基质的影响。方法将含不同剂量益肾蠲湿合剂的药物血清与TGF-β1（终浓度5μg/L）共同培养GMC 24,48,72 h,收集培养上清并用ELISA法检测纤维连结蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。结果益肾蠲湿合剂的药物血清可抑制TGF-β1刺激GMC分泌FN、LN和ColIV,而且随着药物浓度的增加,其对GMC分泌FN、LN和ColIV的抑制率也相应增加。结论益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的GMC分泌FN、LN和ColIV有明显的抑制作用,提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是本复方治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

大黄素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及IL-6的影响

目的:观察大黄素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及系膜细胞分泌IL-6的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖及ELISA法检测系膜细胞中IL-6的含量,观察大黄素对其的影响。结果:大黄素可明显抑制大鼠系膜细胞的增殖及降低系膜细胞对IL-6的分泌,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:提示大黄素可明显抑制肾小球系膜细胞增生,减少细胞外基质的生成,从而减轻与延缓肾小球硬化,其机制可能与减少肾小球系膜细胞分泌IL-6有关。     

川芎嗪对人胎肾小球系膜细胞增殖的影响及其机理探讨

在人胎肾小球系膜细胞培养体系中加入川芎嗪后能抑制ＭＣ生长数量。川芎嗪０．６ｍｍｏｌ，１．２ｍｍｏｌ加入ＭＣ培养系６天后，ＭＣ数量分别为：３７５８０±３４７５，２７３５０±３４１８，明显低于对照组７１８５０±５１０８（Ｐ＜０．０５）；ＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ摄取量对照组为３５７５±３０６，加入川芎嗪０．６ｍｍｏｌ，１．２ｍｍｏｌ后分别为１０１７±２０，５８３±２７１（Ｐ＜０．０１）；加入川芎嗪１ｍｍｏｌ于     

葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨葛根素对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分空白对照组和葛根素组。葛根素组采用MTT法,观察12h、24h、48h和72h后GMcs的增殖水平。结果：随着葛根素浓度的提高及作用时间的延长,GMCs细胞的生长抑制率呈现上升趋势。结论：葛根素能抑制GMCs增殖,并与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。