壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

壮督驱寒合剂对强直性脊柱炎模型小鼠miR-29a及Wnt信号通路的影响

目的:研究壮督驱寒合剂对强直性脊柱炎(AS)模型小鼠miR-29a及Wnt通路的影响,以探讨壮督驱寒合剂防治AS的机制。方法:将50只6～8周Balb/c雌性小鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组均采取蛋白聚糖加完全弗式试剂腹腔注射复制AS小鼠模型。造模结束后各组分别进行相应药物灌胃处理,1次/d,连续6周,末次给药后取膝关节滑膜组织。采用实时荧光定量法测定miR-29a、DKK-1及β-catenin的mRNA表达,采用免疫印迹法检测β-catenin、DKK-1蛋白含量。结果:与空白组相比,模型组小鼠滑膜组织中miR-29a表达升高,β-catenin mRNA及蛋白表达升高,DKK-1 mRNA及蛋白表达下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,西药组及中药低、高剂量组miR-29a表达下降,β-catenin mRNA及蛋白表达下降,DKK-1 mRNA及蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:壮督驱寒合剂可能通过调控miR-29a来影响Wnt/β-catenin经典信号通路的表达,从而起到延缓AS新骨形成的作用。     

不同补肾方对卵巢摘除术后骨质疏松大鼠Wnt信号表达的影响

目的：比较3种补肾方对卵巢摘除骨质疏松大鼠Wnt通路β-Catenin mRNA表达的影响。方法：雌性SD大鼠70只,随机分为假手术组、模型组、龟鹿二仙胶组、二仙汤组、补肾活血组、雌二醇组、仙灵骨葆组,每组10只。双侧卵巢摘除术复制骨质疏松模型,术后30天进行相应的给药实验,假手术组和模型组给予灌服等量的生理盐水。12周后测定各组大鼠血清中I型胶原羧基端肽（β-Crosslaps）、I型前胶原氨基端延长肽（P1NP）含量;以双能X线骨密度测定仪测定大鼠股骨的骨密度;用RT-PCR检测右侧股骨髓LRP5、Wnt2、β-Catenin mRNA表达,用Western blot方法检测LRP5、Wnt2、β-Catenin蛋白表达。结果：与sham组比较,模型组股骨骨密度、血液PINP浓度、β-Catenin mRNA、LRP5 mRNA、Wnt2 mRNA表达均显著降低（P<0.01）,β-Crosslaps 浓度显著增高（P<0.01）。与模型组比较,3组中药组骨密度、血液PINP浓度、LRP5 mRNA、β-Catenin mRNA、Wnt2 mRNA及蛋白表达显著增高（P<0.05）,血液β-Crosslaps浓度显著降低（P<0.01）,补肾活血组骨密度及β-Catenin mRNA及蛋白表达高于其他两补肾方剂组。结论：补肾方通过Wnt信号通路促进去卵巢大鼠成骨细胞增殖而改善骨质疏松症,补肾活血组方效果更为明显。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨尪痹片促进去势后胶原诱导性关节炎大鼠骨形成的机制

目的 基于果蝇无翅基因/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路，研究尪痹片（WBT）干预去势后胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的骨形成机制。方法 48只雌性SD大鼠经随机数字表法分为空白对照组、去势组、CIA组、去势CIA组、去势+WBT组、CIA+WBT组、CIA+甲氨蝶呤（MTX）组、去势CIA+WBT组，每组6只。去势法制备肾虚证模型，CIA法制备类风湿关节炎模型，WBT采用每日0.63 g/kg灌胃，MTX采用每周1.05 mg/kg结合生理盐水灌胃，其余组均予生理盐水灌胃，56日后取材。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）水平，蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、Dickkopf相关蛋白-1 (DKK-1)、Runt相关转录核心因子2(Runx2)、碱性磷酸酶（ALP）、核酸内切酶Dicer蛋白表达量，逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DKK-1、微小RNA(miR)-335-5p mRNA表达量。结果 去势后大鼠逐渐...     

从Wnt/β-catenin信号通路研究地黄饮子汤剂对去卵巢骨质疏松模型大鼠的防治作用

目的:观察地黄饮子汤剂对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨微结构和Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5等蛋白表达的影响,探讨其防治骨质疏松形成的机制。方法:采用双侧手术切除卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组,戊酸雌二醇组,地黄饮子汤剂高、中、低剂量组,另设假手术组,每组10只。戊酸雌二醇组大鼠给予戊酸雌二醇(剂量为0.09μg/g)灌胃,地黄饮子汤剂治疗组大鼠给予地黄饮子汤剂(剂量为32,16,8g/kg)灌胃,模型对照组和假手术组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃。干预4周后,计算各组大鼠的子宫指数,HE染色法观察各组大鼠骨组织病理形态的改变,Western-Blot法检测骨组织Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5蛋白的表达。结果:与假手术组对比,模型对照组大鼠子宫指数明显降低,股骨Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5等蛋白的表达均明显升高(P0.05);模型对照组大鼠骨小梁结构紊乱、出现丢失和断裂。与模型对照组对比,地黄饮子汤剂中、高剂量组大鼠子宫指数明显升高(P0.05),骨小梁结构紊乱较模型对照组有所恢复;地黄饮子汤剂各剂量组大鼠股骨Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5等蛋白的表达均显著降低(P0.05)。结论 :地黄饮子可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路中重要分子Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5的蛋白表达来改善骨质疏松模型鼠的骨组织形态,进而发挥对骨质疏松的防治作用。     

壮骨止痛方对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin 信号通路、血清 Sclerostin 水平的影响

目的:探讨壮骨止痛方对骨质疏松雌鼠Wnt/β-catenin信号通路以及Sclerostin含量的影响。方法:将实验动物分为假手术组、模型组、壮骨止痛方高剂量治疗组、壮骨止痛方低剂量治疗组、雌二醇组5组,用酶联免疫法测定大鼠血清中β-catenin、Sclerostin的水平。结果:模型组大鼠血清β-catenin降低、Sclerostin水平上升,经壮骨止痛方药物干预后,大鼠血清β-catenin水平明显升高、Sclerostin水平明显下降。结论:壮骨止痛方药物可以提升Wnt/β-catenin信号通路的表达,降低血清Sclerostin的水平,达到预防治疗骨质疏松的作用。     

左归丸对去势骨质疏松模型大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察左归丸对去势骨质疏松大鼠模型骨代谢和Wnt/β-链蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探讨左归丸防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:采用双侧卵巢切除法制备绝经后骨质疏松症大鼠模型,60只雌性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,雌二醇组(戊酸雌二醇片0.05 mg·kg^-1·d^-1),左归丸低、中、高剂量组(5.5,11,22 g·kg^-1·d^-1)。从造模成功后(第13周)开始,每日灌胃(ig)1次,共持续12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠股骨组织结构变化;双能X射线仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD)和骨矿质(BMC);MTS Acumen3型生物力学测试系统检测各组大鼠骨生物力学性能;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中骨碱性磷酸酶(BALP),骨钙素(BGP),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP),Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)等骨代谢标志物含量及雌二醇(E2)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠胫骨组织中Wnt2,β-catenin,低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)水平及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠BMD,BMC,最大载荷和刚度显著降低(P<0.01),血清E2和PINP含量显著降低(P<0.01),BALP,BGP,TRAP含量显著升高(P<0.01),骨组织中Wnt2,p-GSK-3βSer9,LRP5和β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),股骨骨小梁稀疏变细,数量减少;与模型组比较,雌二醇组和左归丸各组BMD,BMC,最大载荷和刚度明显升高(P<0.05,P<0.01),血清E2和PINP含量明显升高(P<0.05,P<0.01),BALP,BGP,TRAP含量显著降低(P<0.01),骨组织中Wnt2,p-GSK-3βSer9,LRP5,β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),股骨骨小梁较模型组变粗,数量增加,结构基本清晰。结论:左归丸对去势大鼠骨质疏松症具有一定的防治作用,其机制可能与提高雌激素水平,激活Wnt/β-catenin信号通路,上调Wnt2和LRP5蛋白表达,抑制GSK-3β的活性,减少β-catenin的降解,协调骨形成与骨吸收的动态耦联平衡,纠正骨代谢紊乱,从而改善骨组织形态相关。     

益骨汤含药血清通过经典Wnt信号通路促进成骨细胞增殖分化的研究

目的:在经典wnt信号通路抑制剂大鼠Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的干预下,观察益骨汤含药血清对成骨细胞的经典Wnt信号通路的影响,探究益骨汤治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症提供实验依据。方法:将40只雌性SD大鼠随机分成2组,益骨汤水提液组和空白对照组,连续灌胃10天,获取含药血清。从乳鼠颅盖骨中分离培养成骨细胞,实验分为4组,即A组(益骨汤含药血清组)、B组(DKK1组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清组)、D组(空白血清对照组)。进行细胞增殖MTT检测、碱性磷酸酶活性检测,RT-PCR检测经典Wnt/β-catenin通路中β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、DKK1基因的表达情况。结果:根据MTT法动态观察各组成骨细胞增殖,发现成骨细胞增殖呈规律性:48 h至72 h成骨细胞呈对数增长期,96 h后细胞增殖逐渐受到抑制。同一时间点与B组比较,A、C、D各组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P0.05)。同一时间点与D组比较,A组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与B组比较,A、C、D组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与D组比较,A组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:益骨汤含药血清可能是通过抑制DKK1的高表达,从而上调经典Wnt/β-catenin信号中β-catenin、LRP-5、TCF基因的表达,达到促进成骨细胞增殖,起到抗骨质疏松作用。     

通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠Wnt信号通路DKK1、β-catenin表达的影响

目的:观察通痹颗粒对胶原性关节炎(CIA)大鼠Wnt信号通路Dickkopf1(DKK1)和β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:将40只健康SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组和通痹颗粒组。除空白组外,其余各组用牛Ⅱ型胶原诱导CIA大鼠模型。造模成功后,通痹颗粒组每日予通痹颗粒20g/kg灌胃,阳性药物组每日予雷公藤多苷片2.4mg/kg灌胃,其余组灌胃等量生理盐水,各组均每日灌胃1次,连续用药14d。比较各组大鼠治疗前后关节炎指数、关节肿胀度变化,治疗后滑膜病理学改变和血清DKK1、β-catenin表达情况。结果:治疗前和治疗第7、14天,与空白组大鼠比较,其余各组大鼠关节炎指数和关节肿胀度均显著增加(P0.01,P0.05)。治疗第7、14天,各治疗组关节炎指数和关节肿胀度均显著低于本组治疗前和模型组治疗同时期(P0.05),且治疗第14天时数值低于第7天(P0.05,P0.05)。空白组滑膜组织未增厚,滑膜细胞整齐排列,未观察到血管增生和炎症细胞浸润;模型组滑膜组织明显增厚,细胞排列紊乱,血管明显增生,大量炎症细胞浸润;各治疗组滑膜组织略微增厚,细胞排列较整齐,少量炎症细胞浸润,其中阳性药物组观察到血管轻度增生。与空白组比较,其余各组大鼠血清DKK1和β-catenin均显著升高(P0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠血清DKK1和β-catenin水平明显降低(P0.05)。结论:通痹颗粒可以显著改善CIA大鼠关节滑膜的炎症反应,提示通过Wnt/β-catenin信号通路下调DKK1和β-catenin表达,从而防止异常血管增生及滑膜的炎症细胞浸润,可能是通痹颗粒治疗CIA的机制之一。     

清热活血方对CIA大鼠自噬相关蛋白p62表达的影响

目的 研究清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠滑膜组织、外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)自噬相关蛋白p62的影响,进一步探讨清热活血方防治类风湿关节炎的相关机制。方法 40只SD大鼠随机分成正常组、模型组、清热活血方组、依那西普组,用免疫源性牛Ⅱ型胶原造模,造模成功后各组大鼠分别给予相应药物灌胃,连续治疗28 d后观察大鼠关节肿胀程度,检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)水平、滑膜及PBMC中p62蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现关节红肿,血清TNF-α、IL-1β水平上升(P<0.01),关节滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平上升(P<0.01),p62蛋白相对含量降低(P<0.01)。与模型组比较,清热活血方组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量降低(P<0.01),滑膜组织及PB...     

参慈胶囊联合顺铂对A549/DDP肺癌组织Wnt/β-catenin信号通路DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA表达的影响

目的:探讨参慈胶囊通过Wnt/β-catenin信号通路对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的影响。方法:将50只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549/DDP细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为模型组、参慈胶囊组、顺铂组、参慈胶囊+顺铂组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,脱颈椎处死取肿瘤组织,采用FQ-PCR技术检测肿瘤组织DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结果:参慈胶囊能升高A549/DDP荷瘤裸鼠肿瘤组织DKK-3 mRNA的表达,降低肿瘤组织β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结论:通过影响Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达,可能是参慈胶囊逆转人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的作用机制之一。     

参慈胶囊联合顺铂对A549/DDP肺癌组织Wnt/β-catenin信号通路DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨参慈胶囊通过Wnt/β-catenin信号通路对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的影响。方法:将50只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549/DDP细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为模型组、参慈胶囊组、顺铂组、参慈胶囊+顺铂组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,脱颈椎处死取肿瘤组织,采用FQ-PCR技术检测肿瘤组织DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结果:参慈胶囊能升高A549/DDP荷瘤裸鼠肿瘤组织DKK-3 mRNA的表达,降低肿瘤组织β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结论:通过影响Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达,可能是参慈胶囊逆转人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的作用机制之一。     

刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

该文研究了不同浓度刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达的影响。经SPF级健康雌性SD大鼠(80只)给予蒸馏水、刺老苞根皮水煎剂高、中、低3种剂量,连续灌胃7d,制备刺老苞根皮含药血清。体外培养原代成骨细胞(OB)并鉴定,取第3代成骨细胞,培养48 h后用各组含药血清干预培养10 d,采用茜素红染色钙化结节并计数;干预培养48 h后收集细胞,分别采用Real-time PCR(RT-PCR)和Western blot法测定β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin的表达情况。结果显示,经鉴定体外培养细胞为原代成骨细胞;在干预培养后,与模型组相比,各剂量组可促进原代成骨细胞的矿化能力,且上调β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF mRNA和蛋白的表达,下调Axin mRNA和蛋白的表达。结果发现刺老苞根皮含药血清可通过调节原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达,增强成骨细胞的分化和增殖。     

续断醇提物对骨关节炎的治疗作用及相关分子机制的研究

目的:探讨续断醇提物(RD)对骨关节炎(OA)的治疗作用及相关信号通路的影响。方法:将SD雄性大鼠(220～250 g)48只随机分为假手术组、模型组、RD-L,RD-M,RD-H及阳性对照组,采用右膝关节前交叉韧带切断术复制大鼠骨关节炎模型,评估OA大鼠的关节炎指数和机械性痛阈值;采用苏木精-伊红和TUNEL染色检测OA大鼠滑膜组织的病理变化;采用ELISA和RT-PCR法分别检测OA大鼠血清和滑膜组织中IL-6,IL-1β,TNF-α的含量和表达水平;采用Western Blot法检测OA大鼠滑膜组织中Wnt/β-catenin信号分子蛋白的表达水平。结果:续断醇提物能够减小关节炎指数和增加机械性痛阈值,差异有统计学意义(P0.05),同时缓解滑膜炎性细胞浸润和滑膜细胞凋亡,除此之外,还能够降低OA大鼠血清中IL-6,IL-1β,TNF-α的含量和下调滑膜组织中IL-6,IL-1β,TNF-α的表达水平,也能够下调滑膜组织中Wnt和β-catenin的蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论:续断醇提物对骨关节炎具有潜在的保护作用,同时抑制滑膜组织Wnt/β-catenin信号通路活化。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子水平及软骨中 Wnt3a.β-catenin 蛋白表达影响的研究

目的:探讨温针灸对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组12只。治疗2周后,比较大鼠滑膜组织TNF-α水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达情况。结果:模型制备前各组大鼠LequesneMG评分差异无统计学意义。模型制备后与正常组比较,模型组、药物组、温针灸组LequesneMG评分均升高(P0.05)。治疗2周后,与正常组比较,模型组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与模型组比较,温针灸组和药物组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与药物组比较,温针灸组LequesneMG评分、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05);滑膜组织TNF-α水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可以降低KOA大鼠滑膜组织TNF-α水平,其机制为抑制软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达,从而达到优于西药的治疗效果,值得在临床上推广应用。     

刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs促成骨分化的影响

目的探究刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs中Wnt信号通路及成骨相关因子的影响。方法分别用刘氏正骨方2号含药血清、BMP-2干预BMSCs,并分为对照组、中药组、BMP-2组,采用CCK-8法检测细胞活性,ALP染色、茜素红染色检测成骨诱导28 d后各组细胞ALP活性和矿化情况,荧光定量PCR、Western Blot法检测各组细胞中Col1A2、OCN、OPN、Sclerostin表达。采用腺病毒转染技术过表达BMSCs中Sclerostin基因,分为空白对照组、过表达Sclerostin组,再分别用空白血清、中药血清体外干预3 d后,检测Wnt信号通路相关分子(LRP5、β-catenin)和成骨相关因子Runx2的表达情况。结果与空白对照组比较,中药组BMSCs细胞活性及成骨分化程度增强,BMP-2组成骨分化程度高于中药组,但BMP-2组细胞活性最低(P0.05);在Sclerostin基因表达方面,中药组出现表达抑制,而BMP-2组呈上调趋势(P0.05)。腺病毒转染BMSCs可抑制BMSCs细胞活性,上调Sclerostin mRNA和蛋白表达。与NT比较,Ad-SOST组细胞活性降低,LRP5、β-catenin、Runx2表达下调(P0.05);与空白血清比较,中药血清干预后NT组、Ad-SOST组细胞活性不同程度增强,而LRP5、β-catenin、Runx2表达上调(P0.05)。结论刘氏正骨方2号具有增强BMSCs细胞活性、促进成骨分化作用,可影响过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs的LRP5、β-catenin、Runx2表达。     

三七总皂苷通过调控Wnt/β-catenin通路减轻家兔股骨头坏死

目的:探究三七总皂苷通过调控Wnt/β-catenin通路对家兔股骨头坏死的保护作用。方法:采用大剂量激素构建激素性股骨头坏死(SANFH)家兔模型成功后,随机分为模型组、洛伐他汀10 mg/kg组及三七总皂苷10、30、50 mg/kg组,6只/组,另取6只正常家兔作为正常对照组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续12周。检测家兔血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、钙(Ca)、磷(P)含量;血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、白细胞介素-33(IL-33)、白细胞介素-6(IL-6)含量。处死家兔,取出股骨头组织,采用HE染色观察家兔股骨头组织病理学改变及空骨陷窝率,采用Western blot法检测cl-CASP3、Bax、Bcl-2、Wnt3a、LRP5、β-catenin、RUNX2蛋白表达。结果:相比于空白对照组,模型组血清TC、TG、LDL、MDA含量及空骨陷窝率明显升高,而HDL、SOD、Ca及GSH-PX含量明显降低;相比于模型组,三七总皂苷30、50 mg/kg组及洛伐他汀血清TC、TG、LDL、MDA含量及空骨陷窝率明显降低,而HDL、SOD、Ca及GSH-PX含量明显升高。各组家兔血清P水平无明显差异。相比于空白对照组,模型组股骨头组织cl-CASP3、Bax蛋白表达上调,而Bcl-2、Wnt3a、LRP5、β-catenin、RUNX2蛋白表达明显下调;相比于模型组,三七总皂苷10、30、50 mg/kg组及洛伐他汀组股骨头组织cl-CASP3、Bax蛋白表达明显下调,而Bcl-2、Wnt3a、LRP5、β-catenin、RUNX2蛋白表达明显上调。结论:三七总皂苷可通过降低血脂、抑制炎症起到预防和缓解股骨头坏死进展的作用,而其作用机制可能与其能激活Wnt/β-catenin通路有关。     

益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心室重构的干预作用及其机制

目的:观察益气活血方对慢性心力衰竭模型大鼠心脏结构变化的影响,并从线粒体动力学和分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)通路探讨其作用机制。方法:40只雄性SD大鼠随机选取10只为假手术组,其余行左冠状动脉前降支结扎术构建慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,造模完成后随机分为模型组、卡托普利组和益气活血组,每组10只。给药组分别予以卡托普利片13.5 mg·kg^-1·d^-1,益气活血颗粒20 g·kg^-1·d^-1灌胃给药,干预8周后取心脏组织,称取体质量与心脏质量结合超声心动图检测心脏结构变化情况,行马松(Masson)染色测定心肌间质胶原容积分数,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌线粒体融合蛋白视神经萎缩相关蛋白1(Opa1),分裂蛋白线粒体动力相关蛋白1(Drp1)的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Wnt/β-catenin通路相关因子低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),β-catenin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组左心室壁明显增厚(P<0.05),心腔明显扩大、心肌间质胶原含量升高(P<0.01);Opal表达水平降低,Drp1表达水平升高(P<0.01),LRP6,GSK-3β,β-catenin的mRNA表达量升高(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组可减轻室壁增厚和心腔扩大(P<0.05,P<0.01),降低心肌间质胶原含量(P<0.05);上调Opa1的低表达、下调Drpl的高表达、下调LRP6,GSK-3β,β-catenin的高表达(P<0.01),作用效果优于或不劣于卡托普利组。结论:益气活血方可有效减轻慢性心力衰竭大鼠心室重构、改善线粒体能量代谢,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin的相关因子的表达相关。     

清热活血方对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠相关指标的影响研究

目的:观察清热活血方对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠血管内皮生长因子(vegf)、白细胞介素-6(IL-6)的影响,探讨清热活血方对类风湿关节炎滑膜血管新生的抑制机理。方法:应用免疫组化技术检测CD31在CIA大鼠膝关节滑膜组织中的表达,ELISA法检测CIA大鼠血清中血管内皮生长因子和白细胞介素的表达,并观察清热活血方对其的影响。结果:用免疫组化法检测微血管数量发现,清热活血方中、小剂量组与模型组比较微血管数量明显减少,清热活血方大剂量组与模型组比较微血管数量减少,差异有统计学意义。CIA大鼠血清vegf、IL-6检测中,与模型组比较清热活血方中、小剂量组vegf表达降低,清热活血方中剂量组IL-6表达降低明显。结论:中小剂量的清热活血方通过下调VEGF和IL-6的表达,可减少炎症细胞对滑膜的浸润,抑制血管新生,进而达到控制活动性RA病情的目的。