银杏叶提取物对STZ诱导糖尿病肾病大鼠氧化应激及TNF-α表达的影响

目的:探讨银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠氧化应激及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)表达的影响。方法:将72只大鼠随机分为对照组、DM组和DM+GBE组,每组各24只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg~(-1))的方法建立DM模型,造模成功后,DM+GBE组给予96mg·kg~(-1)·d~(-1)的GBE灌胃,对照组及DM组均以生理盐水以同等剂量灌胃。检测各组大鼠给药前后尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid,UA)水平及大鼠的肾组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、TNF-α、总氧化状态(total oxidation state,TOS)水平。并对部分肾脏进行HE染色,高倍显微镜下观察肾小管和肾小囊的变化。结果:给药第12周,与对照组比较,DM组大鼠体质量明显降低;与DM组比较,DM+GBE组体质量明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。给药第12周,与对照组比较,DM组及DM+GBE组血糖水平升高;与DM组比较,DM+GBE组血糖水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,DM组UN、UA的水平增高;与DM组大鼠比较,DM+GBE组大鼠UN和UA浓度明显下降,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,DM组大鼠肾组织匀浆中MDA、TOS、NO、TNF-α水平升高;与DM组大鼠比较,DM+GBE组大鼠肾组织匀浆中MDA、TOS、NO、TNF-α水平明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:氧化应激和继发的炎症反应参与了糖尿病肾病的发病发展过程,银杏叶提取物能减轻氧化应激及继发的炎症反应从而对糖尿病肾病肾脏起到保护作用。     

银杏叶提取物对糖尿病肾病大鼠肾功能、心功能、炎性反应、β2-MG及RBP4水平的影响

目的:探究银杏叶提取物(GBE)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能、心功能、炎性反应、β2微球蛋白(β2-MG)及视黄醇结合蛋白4(RBP4)水平的影响.方法:选取36只8周龄的雄性大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病模型组(DN组)及银杏叶提取物干预组(DN+GBE组),每组12只.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/k...     

银杏叶提取物对糖尿病肾病大鼠肾功能及Toll样受体4、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平的影响

目的观察银杏叶提取物对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能及Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将30只成年雄性Wistar大鼠随机分成空白对照组、糖尿病组及银杏叶提取物组,各10只。糖尿病组与银杏叶提取物组采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病模型,造模成功后银杏叶提取物组按96 mg/kg予银杏叶片药液灌胃;空白对照组及糖尿病组均以等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,每日1次,连续灌胃12周。灌胃12周后,观察各组小鼠24 h尿蛋白定量、空腹血糖(FPG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平变化,以及肾组织中TLR4、IL-6及TNF-α水平含量。结果糖尿病组大鼠造模48 h后及灌胃12周后FPG均高于空白对照组同期水平(P0.05),银杏叶提取物组大鼠造模48 h后FPG水平与糖尿病组相当(P 0.05),但灌胃12周后FPG低于糖尿病组同期水平(P0.05);糖尿病组大鼠灌胃12周后24 h尿蛋白定量、BUN及Cr水平均高于空白对照组(P0.05),银杏叶提取物组大鼠灌胃12周后24 h尿蛋白定量、BUN及Cr水平均低于糖尿病组(P0.05);糖尿病组大鼠灌胃12周后肾组织中TLR4、IL-6及TNF-α水平均高于空白对照组(P0.05),银杏叶提取物组大鼠灌胃12周后肾组织中TLR4、IL-6及TNF-α水平均低于糖尿病组(P0.05)。结论银杏叶提取物对糖尿病模型大鼠肾功能具有保护作用,预防DN的发生发展,其作用机制可能与抑制肾组织中TLR4的表达,减少炎症因子IL-6、TNF-α水平的释放有关。     

银杏叶提取物对早期糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制研究

目的观察银杏叶提取物对早期糖尿病肾病(DN)大鼠炎性反应表达的影响,探讨银杏叶提取物保护糖尿病肾病肾脏的部分机制。方法成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组、糖尿病组和银杏叶提取物。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立DN模型,银杏叶组灌胃银杏叶片溶液96 mg/(kg·d),并于实验12周时对动物进行处理,ELISA方法检测白细胞介素-6(IL-6)、晚期糖基化终产物(AGEs)、血浆Nod样受体蛋白-3(NLRP3)水平及免疫组织化学检测肾组织纤连蛋白和胶原Ⅳ蛋白水平的变化,并对部分肾脏标本进行肾脏肥大指数检测。结果 1)与对照组比较,模型组BUN和Cr水平均升高(P 0.05);与模型组比较,银杏叶组BUN和Cr浓度明显下降(P 0.01或P 0.05);2)与对照组相比较,模型组IL-6、AGEs、NLRP3表达水平均增高(P 0.05);与模型组比较,银杏叶组IL-6、AGEs、NLRP3表达水平均明显下降(P 0.01);3)与对照组相比较,模型组FN、CoⅣ蛋白表达水平均增高(P 0.05)。与模型组比较,银杏叶组FN、CoⅣ蛋白表达水平均明显下降(P 0.01)。结论炎性反应参与了DN的发病发展,银杏叶提取物可能通过抑制NLRP3炎症小体激活和AGEs-RAGE相互作用,对DN大鼠起到肾脏保护作用。     

银杏酮酯(GBE50)抑制NLRP3炎症小体活性改善大鼠抑郁样行为

目的:本实验通过观察银杏酮酯(GBE50)对抑郁模型大鼠行为学及NLRP3炎症小体作用,探索GBE50抗抑郁的机制。方法:采用慢性不可预见性应激抑郁模型(CUMS)。将40只雄性SD大鼠随机分为4组(对照组、模型组、氟西汀组、GBE50组)。经3周应激刺激后,运用糖水偏爱实验、强迫游泳实验评价造模,并剔除造模不成功老鼠。然后对照组、模型组给予1%CMC灌胃,氟西汀组给予氟西汀(10mg/kg)灌胃,GBE50组给予GBE50(100mg/kg)灌胃,持续3周,最后对各实验组进行糖水偏爱实验、强迫游泳实验测试,并运用Western检测各组大鼠海马组织NLRP3炎症小体及其相关激活信号通路蛋白的表达含量。结果:糖水偏爱实验结果显示,与模型组相比,GBE50(100mg/kg)可以明显增加抑郁大鼠的糖水消耗量。强迫游泳实验结果显示,与模型组相比,GBE50(100mg/kg)可以明显增加抑郁大鼠强迫游泳的挣扎时间。Western结果显示:CUMS可以明显增加模型组NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、TLR4、P2X7、P-IKKα/β、P-NF-κB的蛋白表达,而GBE50(100mg/kg)治疗后NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、TLR4、P2X7、P-IKKα/β、P-NF-κB蛋白表达明显减少。结论:GBE50(100mg/kg)可以改善CUMS诱导的大鼠的抑郁样行为,而其作用机制与调控TLR4/NF-κB信号通路,抑制NLRP3炎症小体激活有关。     

金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响

目的观察金刚藤颗粒对急性盆腔炎(APID)模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法将雌性SD大鼠105只随机分为假手术组、模型组及金刚藤颗粒低、中、高剂量组,每组均15只,灌胃治疗15 d后,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织的病理形态;实时定量PCR及Western blotting分别检测NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 HE染色显示,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞脱落坏死,腔壁结构紊乱,全层炎性细胞浸润,有充血水肿;与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组症状较模型组有显著改善;与对照组、假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-18水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组IL-1β、IL-18水平显著降低(P 0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著降低(P 0.05);模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平显著高于假手术组(P 0.05),金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Cas-pase-1蛋白表达水平较模型组显著降低(P 0.05)。结论金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠具有显著治疗作用,其可能通过抑制NLRP3炎症小体通路发挥免疫作用。     

赶黄草3种提取物对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用

目的探讨赶黄草水提取物、70%乙醇提取物、95%乙醇提取物对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用。方法脂多糖刺激RAW264. 7细胞建立体外炎症模型,尾静脉注射脂多糖建立小鼠体内肝损伤模型,3种提取物干预,肝苏颗粒为阳性对照。Giemsa法观察细胞形态学变化,MTS法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,HE染色观察肝组织病理学变化,赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,超氧化物歧化酶法测定肝组织超氧物歧化酶(SOD)水平,TBA法检测肝组织丙二醛(MDA)水平,免疫荧光法检测肝组织凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达。结果与脂多糖组比较,脂多糖+70%乙醇提取物组(25、50 mg/L)明显抑制细胞形态学变化,TNF-α、IL-1β水平显著降低(P0. 05,P0. 01)。与模型组比较,70%乙醇提取物组明显改善肝组织病理损伤,降低ASC、NLRP3表达,显著降低ALT、AST、MDA水平(P0. 05)。结论赶黄草70%乙醇提取物对小鼠内毒素性肝损伤具有明显保护作用,其机制可能与减少TNF-α产生、调控ROS/NLRP3/IL-1β通路有关。     

基于NLRP3炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg·kg-1),每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P0.01)。结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

基于NALP3炎性体信号通路研究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制

目的:探究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎以及对NALP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins-3,NALP3)信号通路的影响。方法:将SD大鼠分为6组,分别为正常组,模型组(踝关节腔注射尿酸钠制备),栀黄止痛颗粒低、中、高剂量(1.0,2.5,5.0 g·kg-1)和阳性药组(秋水仙碱,3.0 g·kg-1),酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)含量,造模后24 h评定大鼠步态以及关节炎症指数,造模前、造模后6,12,24,48 h测定大鼠裸关节肿胀度。苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化法检测关节组织中NLRP3,IL-1β,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与正常组比较,模型组血清中TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α,IL-6,IL-1β含量(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠步态较差、关节肿胀显著(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、药物处理组步态、关节肿胀得到所改善,随着药物剂量浓度的增加,步态、关节肿胀分级逐渐降低(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组踝关节组织中NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组均显著降低NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白的表达(P0.01)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1表达阳性表达量显著升高,而与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒中、高剂量组显著降低阳性表达率(P0.01),具有剂量依赖性。结论:栀黄止痛颗粒能够缓解痛风性关节炎大鼠关节肿胀,其机制可能与抑制NALP3炎性体信号通路有关。     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

艾灸通过调控NLRP3炎性小体缓解5-氟尿嘧啶诱导的大鼠化疗性肠黏膜炎的实验研究

目的:探讨艾灸通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)缓解5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的化疗性肠黏膜炎的作用机制。方法:将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组,每组10只,造模前7 d对艾灸组行艾灸处理,模型组与艾灸组采用单次腹腔注射5-FU造模,造模完成后,艾灸组继续行艾灸处理,正常组与模型组常规饲养,观察各组大鼠一般情况,检测血清中IL-1β、TNF-α、NLRP3含量,观察结肠组织病理改变,检测结肠组织NLRP3 mRNA表达水平,以及NLRP3组成相关蛋白及IL-1β的表达。结果:腹腔注射5-FU后,模型组体质量和摄食量下降明显,肠黏膜形态不规则,损伤严重,肠绒毛变短融合,上皮细胞排列紊乱。与模型组比较,艾灸组体质量增长、血便、摄食量均有不同程度改善,疾病活动指数评分显著低于模型组。艾灸组血清中IL-1β、TNF-α、NLRP3含量均显著低于模型组(P0.05或P0.01);艾灸组结肠组织中NLRP3炎性小体组成部分NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白及IL-1β表达显著低于模型组(P0.05)。结论:艾灸可通过抑制NLRP3炎性小体改善5-FU诱导的大鼠化疗性肠黏膜炎症状。     

达格列净对糖尿病肾病患者肾功能和外周血NLRP3炎性小体表达的影响

目的探讨达格列净对糖尿病肾病患者肾功能和外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体表达的影响。方法以2017年6月—2019年10月在重庆市涪陵中心医院治疗的170例2型糖尿病肾病患者为研究对象,根据随机数字表法将患者分为观察组85例和对照组85例,对照组给予规范常规降糖治疗,观察组在对照组治疗基础上加用达格列净,疗程均为3个月。观察2组患者治疗前后血糖[空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)]、肾功能[血肌酐(Cr)、肾小球滤过率(eGFR)、24 h尿糖、24 h尿微量白蛋白]、血清炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及外周血单核细胞中NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA和蛋白表达水平,统计2组患者不良反应发生情况。结果治疗3个月后,观察组FPG、2hPG、HbA1c、24 h尿微量白蛋白、IL-1β、TNF-α水平及外周血单核细胞中NLRP3、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于治疗前及对照组(P均0.05),24 h尿糖显著高于治疗前及对照组(P均0.05),Cr、eGFR均无显著变化(P均0.05);对照组上述指标均无显著变化(P均0.05);观察组和对照组不良反应发生率分别为3.5%(3/85)和2.4%(2/85),2组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论达格列净可显著减少糖尿病肾病患者尿蛋白,保护肾功能,其可能与降低患者外周血NLRP3炎性小体表达,抑制炎症反应有关。     

加味四妙方对高尿酸血症合并急性痛风性关节炎模型大鼠踝关节组织NLRP3 mRNA及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的探讨加味四妙方治疗高尿酸血症(HUA)合并急性痛风性关节炎(GA)的可能作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,加味四妙方低、中、高剂量组,西药组,每组8只。各组造模与灌胃同时进行。加味四妙方低、中、高剂量组分别给予加味四妙方16.8、33.6、67.2g/(kg·d)灌胃,西药组给予别嘌醇0.09g/kg+秋水仙碱0.05mg/100g灌胃,空白组及模型组给予10ml/kg蒸馏水灌胃。各组连续给药7d。除空白组外,其余各组腹腔注射3%氧嗪酸钾溶液建立HUA模型,再于大鼠右踝关节腔内注射尿酸钠溶液诱导GA模型。观察大鼠踝关节周径变化,检测大鼠血尿酸(SUA)、C反应蛋白(CRP)水平,大鼠踝关节组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果与空白组相比,模型组大鼠踝关节周径明显增加,血清SUA、CRP水平升高,踝关节组织NLRP3 mRNA及IL-1β、TNF-α表达显著升高(P0.01)。与模型组相比,加味四妙方组中、高剂量组和西药组大鼠踝关节周径缩小,血清SUA、CRP水平降低,踝关节组织NLRP3 mRNA、IL-1β、TNF-α表达均降低(P0.05)。与加味四妙方高剂量组比较,西药组血清CRP水平、踝关节组织NLRP3 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论加味四妙方可缓解HUA合并GA关节肿胀,降低血清SUA水平,其作用机制可能与调控NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌有关。     

冠通方通过干预NLRP3炎症小体信号通路对大鼠血管内膜损伤后再狭窄作用机制分析

目的：从NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路,探究冠通方改善大鼠血管内膜损伤后再狭窄的分子机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、冠通方组、NLRP3激活剂组、冠通方+激活剂组,每组12只;用颈动脉球囊损伤术复制血管内膜损伤后再狭窄模型,各组大鼠经药物干预处理4周后,ELISA法检测大鼠血管白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平;HE染色观察颈动脉血管组织病理变化;增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色法检测血管平滑肌细胞增殖状况;RT-PCR法检测血管组织NLRP3mRNA、IL-1βmRNA表达;Western blot法检测血管组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)蛋白表达。结果：与假手术组相比,模型组大鼠颈总动脉血管组织内膜增生及管腔狭窄等病理损伤加重,内膜增生程度、炎症因子水平、血管平滑肌细胞增殖活性及NLRP3炎性小体信号通路活性升高(P<0.05)。冠通方干预治疗后,大鼠血管内膜增生、管腔狭窄等病理损伤减轻,内膜增生程度、炎症...     

祛寒逐风颗粒对骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的:观察祛寒逐风颗粒对膝骨性关节炎(KOA)大鼠炎症反应和NF-κB介导NLRP3炎性小体活化的影响。方法:建立骨性关节炎大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、祛寒逐风颗粒组(3,6,9 g/kg)和阳性药组,测量大鼠机械性痛阈值和膝关节直径,采用酶联免疫吸附实验测量大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6的含量变化,采用RT-PCR法测量大鼠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA含量,采用苏木精-伊红染色和阿尔新蓝染色观察组织的病理学变化,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17的蛋白水平。结果:与模型组比较,祛寒逐风颗粒组和阳性药组大鼠的机械性痛阈值增大,膝关节直径变小,血清中IL-1β、TNF-α和IL-6含量减少,组织中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平下调,软骨损伤和纤维化缓解,软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17蛋白表达下调。结论:祛寒逐风颗粒可能通过抑制NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化显着改善KOA大鼠的炎症反应并缓解疼痛,对骨关节炎发挥治疗作用。     

淫羊藿苷通过抑制NLRP3炎性小体和Caspase-1通路减轻骨关节炎

目的:考察淫羊藿苷在治疗骨关节炎中的潜在价值,以及淫羊藿苷对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体和半胱天冬酶-1(Caspase-1)的调控作用。方法:本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠膝关节软骨细胞建立体外骨关节炎模型,通过碘乙酸单钠处理SD大鼠建立体内骨关节炎模型。通过乳酸脱氢酶漏出实验检测细胞毒性,通过MTT实验检测细胞活力。通过qRT-PCR检测NLRP3 mRNA的表达,通过Western Blotting检测NLRP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Collagen Ⅱ、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达。用免疫荧光法和免疫组化法检测软骨细胞和大鼠软骨中的NLRP3表达;番红O/固绿染色评价大鼠软骨病变。结果:与LPS组比较,LPS+ICA组LDH的漏出率、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、NLRP3、Caspase-1、ASC和GSDMD的表达水平明显降低,而Collagen Ⅱ明显升高(P<0.05)。与LPS+ICA+pcDNA3.1-NC组比较,LPS+ICA+pcDNA3.1-NLRP3组的乳酸脱氢酶漏出率及NLRP3炎性小体相关蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OA组大鼠软骨组织中NLRP3阳性细胞数量显著增加,而OA+ICA组的NLRP3阳性细胞数量明显降低(P<0.05)。与OA组比较,OA+ICA组的NRLP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达水平明显降低,而Collagen的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:淫羊藿苷通过抑制NLRP3和Caspase-1信号转导来抑制脂多糖诱导的软骨细胞损伤和细胞焦亡,从而减轻大鼠骨关节炎。     

黄葵素对糖尿病肾病大鼠氧化应激、炎症反应和TGF-β1/Smad2信号通路的影响

目的探讨黄葵素对糖尿病肾病大鼠氧化应激、炎症反应和TGF-β₁/Smad2信号通路的影响。方法将60只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、黄葵素低剂量组、黄葵素高剂量组,每组15只。造模成功后第2天,黄葵素低剂量组和黄葵素高剂量组分别给予黄葵素75 mg/kg和150 mg/kg灌胃,对照组和糖尿病肾病组给予生理盐水灌胃,均1次/d,连续8周。血糖仪测定各组大鼠空腹血糖(FPG)水平;双缩脲法测定各组大鼠24 h尿蛋白量;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平;ELISA检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化;Masson染色观察各组大鼠肾组织纤维化情况;免疫组织化学染色检测各组大鼠肾组织中TGF-β₁表达情况;ELISA检测各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平;Western blot检测各组大鼠肾组织中TGF-β₁和p-Smad2蛋白表达水平。结果与对照组比较,糖尿病肾病组大鼠FPG、SCr、BUN、24 h尿蛋白量及血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平均明显升高(P均<0.05),肾组织坏死明显,可见大量炎性细胞,肾小球和肾小管中有大量蓝色的胶原纤维,肾组织中TGF-β₁阳性表达率和肾组织中MDA水平、TGF-β₁蛋白表达水平、Smad2蛋白的磷酸化水平均明显升高(P均<0.05),肾组织中SOD和GSH水平均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,黄葵素各组大鼠FPG、SCr、BUN、24 h尿蛋白量、IL-1β、TNF-α、IL-6水平及肾组织中MDA水平、TGF-β₁蛋白表达水平、Smad2蛋白的磷酸化水平均明显降低(P均<0.05),肾组织中SOD和GSH水平均明显升高(P均<0.05)。结论黄葵素可减轻糖尿病肾病大鼠的炎症反应、氧化应激和肾损伤,抑制TGF-β₁/Smad2信号通路的激活,对糖尿病肾病具有潜在的治疗作用。     

银杏叶提取物对NF-κB活性抑制人视网膜色素上皮细胞炎症反应的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19炎症的影响及核转录因子-kappaB(NF-κB)通路的变化,探讨其作用机制。方法:体外培养ARPE-19细胞株,分为正常组(5.5 mmol·L-1葡萄糖),高糖组(30 mmol·L-1葡萄糖),银杏叶提取物不同剂量组组(30 mmol·L-1葡萄糖+12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物)。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞术测定细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定炎症因子(NIK/p-NIK,IKKα/p-IKKα,IκB/p-IκB)表达;Western blot检测NF-κB磷酸化及核NF-κB表达。结果:与正常组比较,高糖组吸光度A明显降低(P0.05),细胞TNF-α,IL-1β含量明显升高(P0.05),p-NIK,p-IKKα,p-IκB表达水平明显升高(P0.05),p-NF-κB,核NF-κB表达水平明显升高(P0.05);与高糖组比较,12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物组吸光度A明显升高(P0.05);细胞TNF-α,IL-1β含量明显降低(P0.05),p-NIK,p-IKKα,p-IκB水平明显降低(P0.05),p-NF-κB,核NF-κB表达水平明显降低(P0.05)。结论:银杏叶提取物能通过抑制NF-κB活性抑制炎症反应,保护视网膜色素上皮细胞,用于糖尿病视网膜病变的防治。     

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗痛风性关节炎的作用机制

目的:探讨桂枝芍药知母汤(GT)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中炎性信号表达的影响。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组化实验,酶联免疫吸附测定(ELISA)实验,蛋白质免疫印迹(Western blot)实验。各实验取大鼠60只,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型组,正常组,GT高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg~(-1)),秋水仙碱阳性药组(3×10-4g·kg~(-1))。实验组均ig给药,正常组、模型组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。第5天ig前,大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导GA。取大鼠关节滑膜组织,免疫组化检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体的表达,Image-Pro Plus6.0图像分析系统测定平均积分吸光度(IA),Western blot检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸酶~(-1)(Caspase~(-1))信号衔接蛋白表达,ELISA测定炎性因子白细胞介素~(-1)β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),核因子-κB(NF-κB)表达水平。结果:造模72 h后,与正常组比较,模型组大鼠关节滑膜组织中NLRP3,ASC,Caspase~(-1),L~(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达明显升高(P0.05),Caspase~(-1)2表达明显降低(P0.05);与模型组比较,GT高、中剂量组NLRP3,ASC,GT各剂量组Caspase~(-1)表达水平均显著降低(P0.05),Caspase~(-1)2表达明显升高(P0.05),GT各组IL~(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达均明显降低(P0.05)。结论:GT治疗GA的作用机制可能与降低NLRP3,ASC,Caspase~(-1)表达,抑制IL~(-1)β分化成熟及NF-κB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。