大鼠中药血清对骨关节炎患者膝关节软骨细胞胶原和金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的:观察祛痰除湿剂对原代培养骨关节炎(OA)患者的膝关节软骨细胞中Ⅱ型胶原、X型胶原和相关代谢酶MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表达的影响,探讨祛痰除湿剂治疗骨关节炎的作用及其机制.方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验.关节软骨细胞经含药血清作用72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col Ⅹ)、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13的mRNA表达.结果:OA患者膝关节软骨细胞经祛痰除湿剂含药血清作用后Col Ⅱ mRNA表达明显高于仅使用胎牛血清培养的空白对照组,经10％祛痰除湿剂含药血清作用后Col Ⅹ及MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表达均明显低于空白对照组.结论:祛痰除湿剂可调节OA患者关节软骨中胶原及相关金属蛋白酶(MMPs)的mRNA表达,从而对退变的软骨细胞有一定的修复作用并可延缓关节软骨细胞的进一步退变.     

多巴胺对骨关节炎的治疗作用及相关分子机制研究

目的:探讨多巴胺(DA)对骨关节炎的治疗作用及相关分子机制。方法:SPF级别雄性SD大鼠60只,随机分为模型组、多巴胺5μg/kg组、多巴胺10μg/kg组、多巴胺15μg/kg组、假手术组、阳性对照组。采用右膝关节前韧带交叉切断术建立骨关节炎(OA)大鼠模型,检测大鼠的机械性痛阈值和膝关节直径;采用ELISA法检测大鼠外周血液中白细胞介素(IL)-1β,IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;采用RT-PCR法检测大鼠关节组织中IL-1β,IL-6,TNF-α,金属基质蛋白酶(MMP)-3,MMP-9和MMP-13 mRNA表达水平;采用HE染色和番红固绿染色检测大鼠关节组织的病理学变化;采用Western Blot法检测大鼠关节组织中MMP-3,MMP-9,MMP-13,Akt,p-Akt,p-Iκ-Bα,Iκ-Bα,p-p65和p65蛋白表达水平。结果:多巴胺显著增加OA大鼠的机械性痛阈值,并减小OA大鼠的膝关节直径,差异有统计学意义(P0.05);同时下调OA大鼠外周血液中IL-1β,IL-6及TNF-α的表达水平,差异有统计学意义(P0.05);多巴胺显著下调OA大鼠关节组织中IL-1β,IL-6,TNF-α,MMP-3,MMP-9及MMP-13 mRNA表达水平,并缓解OA大鼠关节组织中炎性细胞浸润和软骨基质降解,差异有统计学意义(P0.05);除此之外,多巴胺显著下调OA大鼠关节组织中MMP-3,MMP-9,MMP-13,p-Akt/Akt,p-Iκ-Bα/Iκ-Bα及p-p65/p65蛋白表达水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论:多巴胺对骨关节炎治疗具有潜在的价值,且这种作用可能与抑制Akt/NF-κb信号通路活化有关。     

三联疗法对兔膝骨性关节炎软骨MMP-1,MMP-13及TIMP-1 mRNA的影响

目的:观察模型兔膝骨性关节炎软骨中MMP-1、MMP-13及TIMP-1 mRNA表达水平及"三联疗法"对它的影响.方法:将56只大耳白兔随机取8只作正常对照组,48只进行手术方法制作兔膝OA模型.8周后待兔膝骨性关节炎模型建立后,随机将48只追模动物分为模型组、中药薰洗组、功能锻炼组、手法弹拨组、扶他林组、三联疗法组.各治疗组分别进行4周治疗后,取股骨内髁内侧退变软骨用反转录-多聚酶链反应的方法检测各治疗组对软骨中MMP-1、-13及TIMP-1 mRNA表达的影响.结果:正常组软骨中MMP-1、MMP-13及TIMP-1 mRNA表达较低,模型组软骨中MMP-1、MMP-13的mRNA表达明显增高,TIMP-1的mRNA检测为阴性表达.各治疗组软骨中MMP-1、MMP-13的mRNA表达降低,三联疗法组比其它治疗组降低显著(P<0.05),各治疗组软骨中TIMP-1的mRNA表达极低,且各治疗组比较差异无统计学意义.结论:各治疗组均能抑制软骨中MMP-1、-13的mRNA表达,不同程度减轻兔膝骨性关节炎软骨的退变,各治疗组对软骨中TIMP-1的mRNA表达无影响.三联疗法组与其它治疗组在抑制MMP-1、MMP-13在兔膝骨性关节炎软骨中比较差异有统计学意义(P<0.05),说明"三联疗法组"在治疗兔膝骨性关节炎抑制基质胶原溶解破坏减轻软骨退变优于其它治疗组,它对兔膝骨性关节炎的治疗作用机制之一可能与抑制MMP-1、-13表达有关.     

补肾活血方对膝骨关节炎大鼠MMP-3、MMP-13及OPG/RANKL轴的影响

目的:检测不同质量分数的补肾活血方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化受体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)轴相关因子mRNA表达的影响,探讨补肾活血方对KOA大鼠模型骨重建及治疗作用的机制。方法:采用随机数字表法将48只Wistar大鼠分为正常对照组,模型对照组,依托考昔片组,补肾活血方中药小、中、大剂量组6组,每组8只。采用木瓜蛋白酶膝关节腔内注射法制备KOA大鼠模型。确认造模成功后,依托考昔片组给予依托考昔3.125μg/g混悬液灌胃,补肾活血方小、中、大剂量组分别给予补肾活血方0.52,1.04,2.08 g/kg混悬液灌胃,正常对照组和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,1d1次,连续4周。给药结束后,对KOA模型鼠进行关节软骨退行性改变组织学分级评分(Mankin′s评分),采用实时荧光定量核酸扩增检测系统检测关节软骨内MMP-3、MMP-...     

益气化瘀补肾方及拆方影响椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶mRNA表达的研究

目的探讨益气化瘀补肾方及拆方影响退变模型大鼠颈椎间盘细胞外基质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和相关代谢酶MMPs／TIMPmRNA的表达。方法采用RT—PCR法检测胶原和MMPs／TIMPmRNA表达,凝胶成像系统扫描仪对各条带进行扫描,计算机自动计算出光密度。结果与假手术组比较,模型组Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA表达明显升高（P〈0．01）;TIMP-1 mRNA表达无明显统计学差异（P〉0．05）。益气化瘀补肾方及其拆方可明显降低Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA的过度表达（P〈0．01或P〈0．05）。结论退变椎间盘的Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原mRNA表达增高,MMP-13 mRNA的高表达和TIMP-1 mRNA的低表达,MMPs／TIMP的比例失调,反映了退变椎间盘ECM合成和降解的失调。益气化瘀补肾方及拆方可能通过影响颈椎间盘组织胶原及相关代谢酶mRNA表达而延缓椎间盘的退变。     

仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎大鼠关节软骨损伤的修复作用及机制研究

目的观察仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨损伤的修复作用并探讨其机制。方法 SD大鼠100只,根据体质量随机分成5组:对照组、模型组、仙鹿健骨汤各剂量组;模型组、仙鹿健骨汤各剂量组构建KOA大鼠关节软骨损伤模型,并于造模成功第1天开始给予相应药物灌胃,持续给予3个月,对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠注射液。试验结束后,测定大鼠膝骨性骨关节炎软骨Mankin′s评分、p38m RNA、NF-κB mRNA、p38、NF-κB、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白水平。结果与对照组比较,模型组、仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-кB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P 0.05);与模型组比较,仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显降低(P 0.05),且随着仙鹿健骨汤给药剂量的增加,KOA软骨Mankin′s评分、p384、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P 0.05)。结论仙鹿健骨汤能明显减轻软骨细胞损伤程度,对KOA关节软骨损伤具有一定程度的修复作用,其机制与仙鹿健骨汤组能通过抑制炎症信号通路p38、NF-κB m RNA、蛋白表达水平的表达进而抑制细胞因子MMP-9、MMP-13、IL-1β的表达有关。     

补肾活血中药“杜仲-当归”治疗骨性关节炎的作用及机制研究

目的:骨性关节炎(OA)是临床常见病、多发病,目前缺乏切实有效的治疗方法。研究明确补肾活血中药的作用,探寻补肾活血中药对OA的调控机制。方法:通过建立OA模型,以补肾活血中药为代表,进行对MMP13表达的调控研究,OA模型分别灌胃给予补肾药、活血药和补肾活血药,观察各组中药干预后MMP13的回调及回调程度,并结合组织病理学实验结果,明确补肾活血中药的作用:采用HE染色和SO染色观察OA大鼠膝关节软骨的层次、软骨细胞及软骨下骨的变化;ELISA检测大鼠血清和关节滑膜组织IL-1β﹑TNF-α和MMP13的表达情况;免疫组化观察补肾活血中药对OA大鼠膝关节MMP13表达的影响。结果:HE和SO染色初步可判断病变程度从高到低依次为OA模型组、活血组、补肾组、活血补肾组、阳性药物组;ELISA检测显示:OA模型组与正常对照组比较,血清中炎症因子IL-1β﹑TNF-α、MMP13含量明显上升(P0.01),与OA模型组比较,各给药组显著降低IL-1β﹑TNF-α含量,且补肾活血组血清中的IL-1β﹑TNF-α、MMP13含量要低于单独用药组;免疫组化结果显示:正常组大鼠膝关节未见MMP13阳性表达。OA鼠具有明显的MMP13阳性染色且阳性染色面积和累积光密度值显著升高(P0.01)。相对于OA模型组,补肾组、活血组、补肾活血组和阳性药物组大鼠MMP13阳性表达、阳性染色面积和累积光密度值均明显降低,降低程度从高到低依次为阳性药物组、补肾活血组、补肾组、活血组。结论:补肾活血中药(杜仲+当归)对OA具有明确治疗作用,且补肾活血组优于补肾组、活血组,揭示补肾活血治则意义,其治疗主要机制可能是通过降低关节软骨中MMP13含量以及血清中的IL-1β和TNF-α含量。     

补肾益气活血方对人骨关节炎软骨细胞增殖及相关细胞因子的干预作用

目的:探讨补肾益气活血方对人骨关节炎软骨细胞增殖及相关细胞因子干预作用,为骨关节炎的治疗提供依据。方法:选取本院90例人关节炎患者进行研究,行软骨细胞分离培养传代,设立空白对照组,IL-1组,补肾益气活血方组各30例,空白对照组细胞不添加任何药物,IL-1组添加含IL-1血清,益气活血方组添加IL-1血清和补肾益气活血方血清,观察各组软骨细胞增殖情况,并且运用逆转录聚合酶链技术检测软骨细胞基质蛋白酶13(MMP-13)和II型胶原的表达情况。结果:补肾益气活血组软骨细胞增殖情况与正常对照组及IL-1组相比,差异有统计学意义(P0.05);补肾益气活血组MMP-13及Ⅱ型胶原表达情况与其他两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:体外条件下,补肾益气活血药方能够抑制炎性因子IL-1诱导的MMP-13表达,且能对抗MMP-13抑制软骨细胞II型胶原合成,促进软骨细胞的增殖,具有保护软骨细胞的作用。     

丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的:观察丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达情况的影响。方法:取12只6月龄新西兰大白兔关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组、丹参组4组。采用Western blot法测定软骨细胞内MMP-9、TIMP-1蛋白表达,RT-PCR检测软骨细胞内MMP-9 mRNA、TIMP-1mRNA相对表达量。结果:Western Blot检测结果:相对正常组,OA模型组的软骨细胞组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达明显上调(P0.01);玻璃酸钠组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.05),丹参组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.01);丹参组MMP-9蛋白表达低于玻璃酸钠组,TIMP-1蛋白表达高于玻璃酸钠组。荧光定量PCR检测结果:与空白组相比,OA模型组家兔关节软骨组织MMP-9 mRNA相对表达量显著升高(P0.01),MMP-9/TIMP-1失衡;治疗后,与OA模型组相比,玻璃酸钠组、丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与玻璃酸钠组相比丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01)。结论:丹参注射液能够有效纠正MMP-9和TIMP-1在骨性关节炎软骨组织中异常表达,减轻软骨损伤,有效治疗骨性关节炎。     

加味温胆汤对雌性营养性肥胖大鼠LEP,ACC和MCA的影响

目的:通过检测大鼠组织中瘦素(LEP),乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和丙二酸单酰辅酶A(MCA)相关蛋白及其基因的表达水平,探讨加味温胆汤有效改善雌性营养性肥胖大鼠脂质代谢紊乱的作用机制和量效关系。方法:将50只SD雌性大鼠按体质量随机分为5组,分别为正常组,模型组,加味温胆汤高、中、低剂量组(18.2,9.1,4.55 g·kg^-1)。除正常组外,其余均采用"普通饲料+高脂乳剂+碳酸饮料"混合饲养法建立营养性肥胖大鼠模型,连续灌胃给药5周,各组动物经末次给药后,麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)分别检测各组大鼠血清LEP,肝和腓肠肌组织ACC的含量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠下丘脑组织LEP,MCA mRNA和肝组织ACC2 mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、脂肪指数显著增加(P<0.05);与模型组比较,加味温胆汤中剂量组可显著下调下丘脑组织LEP,MCA mRNA的表达水平(P<0.01),加味温胆汤低剂量组显著下调大鼠血清LEP,下丘脑组织LEP,MCA mRNA和肝组织ACC2 mRNA的表达水平(P<0.05,P<0.01);与加味温胆汤高剂量组比较,中剂量组在下调下丘脑LEP,MCA mRNA的表达水平效果最佳,低剂量组次之(P<0.05,P<0.01)。结论:加味温胆汤抗雌性大鼠营养性肥胖的作用机制与干预大鼠LEP抵抗,降低肝组织ACC2 mRNA和下丘脑MCA mRNA的表达水平有关,其中以中、低剂量组效果更佳。     

补肾中药对肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达影响研究

目的:通过研究摘除卵巢致肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白的表述,揭示摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制.方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,并与补脾中药作疗效的比较.用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达.结果:RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肾组织中存在Smurf2的mRNA和蛋白表达;与正常组、假手术组比较,模空组Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平在肾组织中明显降低.用药12周后,与模空组比较,补肾高、低剂量组、盖天力组可明显上调Smurf2 mRNA和蛋白在肾组织中的表达水平.其中补肾高剂量组上调幅度大于补肾低剂量组.结论:①正常大鼠肾组织中Smurf2可以在基因、蛋白水平表达;②骨质疏松症的发生,可能与肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达的异常变化有关;③补肾中药通过调控肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用.     

川芎嗪对骨关节炎模型大鼠软骨内MMP-13及TIMP-1的调节作用

目的：研究川芎嗪对膝骨关节炎模型大鼠关节软骨内MMP-13及TIMP-1的调节作用。方法：1月龄SD大鼠18只,随机分为正常对照组、模型组和川芎嗪组,每组6只。模型组、川芎嗪组大鼠通过直立位诱导法建立大鼠膝关节炎模型。川芎嗪组大鼠于9月龄时开始用药,连续用药1个月。10月龄时处死3组大鼠取膝关节,行实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组关节软骨内基质金属蛋白酶-13（MMP-13）以及金属蛋白酶类组织抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达的情况。结果：模型组TIMP-1 mRNA的表达量明显低于正常对照组,而川芎嗪组TIMP-1 mRNA的表达量明显高于模型组,差异有统计学意义;模型组MMP-13 mRNA表达量明显高于正常对照组,川芎嗪组MMP-13 mRNA的表达量低于模型组,差异有统计学意义。结论：川芎嗪可刺激TIMP-1的合成,抑制软骨基质中MMP-13作用,延缓软骨细胞退变和基质降解。     

加味温胆汤及其拆方“配伍药组”对雌性营养性肥胖大鼠LEP、MCA、CPT1表达的影响

目的探讨加味温胆汤及其拆方抗雌性营养性肥胖大鼠的作用机制。方法 120只SD雌性大鼠按体重随机分为6组,即空白对照组,模型对照组,加味温胆汤组,祛痰药组,理气活血药组,益气健脾药组,每组20只。除正常对照组外,其余各组均采用"高脂乳剂+碳酸饮料+普通饲料"混合喂养建立营养性肥胖大鼠模型,ig给药,连续5周;各组动物末次给药50min后,取相同部位的肝脏及下丘脑组织,采用RT-PCR法检测下丘脑瘦素(LEP)mRNA、丙二酸单酰辅酶A(MCA)mRNA和肝组织丙二酸辅酶A(MCA)mRNA、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT1)mRNA的表达水平。结果与模型组比较,加味温胆汤组可明显降低大鼠下丘脑LEPmRNA、MCAmRNA和肝脏MCAmRNA、CPT1mRNA的表达水平(P0.01);益气健脾药组可降低大鼠下丘脑LEPmRNA的表达水平(P0.05);理气活血药组可降低肝脏CPT1mRNA的表达水平(P0.05)。结论加味温胆汤抗雌性大鼠营养性肥胖的作用机制与干预大鼠LEP抵抗、降低下丘脑MCAmRNA表达及肝脏MCA、CPT1mRNA表达有关,且其作用是通过祛痰、理气活血、益气健脾等"药组"的配伍综合实现的。     

补肾法与活血法对SD大鼠膝骨性关节炎滑膜IL-1β、TNF-α及软骨MMP-13、ADAMTS-5的影响

目的：探讨补肾活血法、活血法、补肾法、祛风法对SD大鼠膝骨性关节炎IL-1β、TNF-α及MMP-13、ADAMTS-5的作用及其机制。方法：取SD大鼠180只,随机分为活血组、祛风组、补肾组、补肾活血组、预防组及模型组,每组各30只,以4%木瓜蛋白酶行膝关节注射制作大鼠膝骨性关节炎模型。模型制作成功后连续给药,预防组在模型制作同时予以活血药。治疗以1个月为1疗程,6组大鼠分别于模型制作成功给药后30、60、90d分批处死。处死后取大鼠膝关节滑膜及软骨,分别运用免疫组化及反转录-多聚酶链反应（RT-PCR）测定SD大鼠膝关节滑膜IL-1β、TNF-α及膝关节软骨组织中MMP-13、ADAMTS-5mRNA含量的表达。结果：模型组与祛风组IL-1β、TNF-α及MMP-13、ADAMTS-5mRNA含量表达显著高于其他各组,且随着治疗进行降低不显著。早期,预防组比其他组降低显著（P〈0.05）;活血组与补肾活血组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但两者比祛风组、补肾组及模型组降低显著（P〈0.05）;晚期补肾活血组、补肾组与其他组比较降低显著（P〈0.05）,且补肾活血组与补肾组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：补肾法与活血法对SD大鼠膝骨性关节炎IL-1β、TNF-α及MMP-13、ADAMTS-5mRNA的影响在不同时期具有不同的作用,早期时活血法作用较补肾法显著,且预防性给予活血药治疗效果更佳;晚期补肾法较活血法显著,同时补肾活血法治疗效果最为明显。     

补肾活血方对大鼠软骨细胞凋亡增殖及MMP-13水平的影响

目的:探讨补肾活血方对大鼠体外培养软骨细胞凋亡增殖及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平的影响。方法:采用SD大鼠切取关节软骨进行软骨细胞的体外培养,应用甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色进行鉴定。同步细胞后分为中药组、西药组和空白对照组分别处理。采用流式细胞仪进行细胞凋亡与增殖检测,采用放免法进行MMP-13水平检测。结果:成功进行了软骨细胞的培养及鉴定。流式细胞仪检测显示补肾活血方可减低软骨细胞的凋亡率,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05),补肾活血方可促进细胞周期中G2与S期细胞比例,与空白组比较有非常显著性差异(P0.01)。补肾活血方还可以降低MMP-13水平,与空白组比较有显著性差异(P0.05)。结论:补肾活血方具有减少软骨细胞凋亡的作用,同时可以降低MMP-13水平。     

槲皮素对关节软骨中MMP-13、TIMP-1表达的影响

目的探讨槲皮素对关节软骨中MMP-13及TIMP-1表达的影响。方法通过制备大鼠OA模型,研究槲皮素在体内对关节滑液中MMP-13及TIMP-1表达的影响。通过体外培养软骨细胞,以IL-1β为诱导刺激,研究槲皮素对MMP-13及TIMP-1在mRNA及蛋白水平表达的影响。结果槲皮素可显著降低关节滑液中MMP-13的含量,提高TIMP-1的表达水平;同时在体外细胞培养中,槲皮素也显著抑制了MMP-13的基因及蛋白表达水平,提高了TIMP-1在基因及蛋白水平上的表达。结论槲皮素可显著降低MMP-13/TIMP-1的比例,促进抑制软骨细胞外基质的降解,促进对关节软骨的保护。     

甘草甜素调节骨关节炎大鼠软骨代谢标记物表达及外周血Th17/Treg细胞失衡

【目的】探讨甘草甜素对骨关节炎大鼠软骨损伤的治疗作用及机制。【方法】将30只SD大鼠随机分为假手术组（6只）和造模组（24只）。造模组通过切断右侧前交叉韧带构建骨关节炎模型,假手术组大鼠只剪开皮肤和关节腔。将造模成功的22只大鼠随机分为模型组（6只）、甘草甜素低剂量组（5只）、甘草甜素高剂量组（5只）、来氟米特组（6只）。甘草甜素低、高剂量组分别给予腹腔注射甘草甜素25、50mg/kg,来氟米特组给予灌胃来氟米特混悬液1.87mg/kg,模型组与假手术组大鼠腹腔注射同等体积的生理盐水,每天1次,连续给药3周。给药结束后,番红O-快绿染色观察大鼠软骨组织病理损伤情况;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测软骨组织中Caspase-3、Caspase-9mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法检测软骨组织中的Caspase-3、Caspase-9、基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-13、CollagenⅡ、Aggrecan、转化生长因子（TGF）-β、p-Smad1、Smad1蛋白表达情况;流式细胞仪术检测外周血中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织番红O染色重度或完全失染,软骨组织中Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达及蛋白活化水平均显著升高,MMP-1、MMP-13、TGF-β蛋白表达及Smad1磷酸化水平均显著升高,CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达水平均显著降低,外周血中Th17细胞水平均显著升高,Treg细胞水平显著降低（均P<0.05）。与模型组比较,甘草甜素低、高剂量组番红O失染情况得到一定的缓解,来氟米特组大鼠基本恢复至假手术组情况（均P<0.05）;与模型组比较,甘草甜素低、高剂量组及来氟米特组大鼠Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达与蛋白活化水平显著降低,MMP-1、MMP-13、TGF-β蛋白表达及Smad1磷酸化水平均显著降低,CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达水平均显著升高,外周血中Th17细胞水平均显著降低,Treg细胞水平显著升高（均P<0.05）。【结论】甘草甜素可能通过抑制TGF-β/Smad1信号途径,抑制软骨降解与细胞凋亡,纠正Th17/Treg细胞失衡,降低免疫炎症反应来修复OA大鼠软骨损伤。     

中药补肾宁对肾阳虚模型大鼠卵巢MMP-9mRNA的影响

目的:探讨"补肾宁"对氢化可的松法复制肾阳虚模型大鼠卵巢MMP-9mRNA的影响。方法:成年雌性SD大鼠60只,随机分为6组。分别为空白对照组、模型对照组、克罗米芬组、补肾宁低、中、高剂量组。空白对照组每日肌注等容积生理盐水,其余5组,每日下肢肌注氢化可的松注射液,连续11天,制备肾阳虚模型大鼠。11天后按组别分别用药治疗,治疗期为15天。采用原位杂交技术观察各组卵巢局部MMP-9mRNA表达的变化。结果:模型组卵巢MMP-9mRNA的阳性表达明显低于其它各组,其中与补肾宁中、高剂量组比较差异显著(P<0.01);补肾宁中、高剂量组与空白对照组比较MMP-9mRNA表达强度无显著性差异(P>0.05);补肾宁高剂量组与克罗米芬组、补肾宁低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:肾阳虚模型大鼠卵巢MMP-9mRNA表达减弱,可能与卵泡发育异常及排卵障碍有关。补肾宁能够增强肾阳虚模型大鼠卵巢MMP-9mRNA的表达,起到促卵泡发育和促排卵的作用。     

淫羊藿苷通过抑制NLRP3炎性小体和Caspase-1通路减轻骨关节炎

目的:考察淫羊藿苷在治疗骨关节炎中的潜在价值,以及淫羊藿苷对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体和半胱天冬酶-1(Caspase-1)的调控作用。方法:本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠膝关节软骨细胞建立体外骨关节炎模型,通过碘乙酸单钠处理SD大鼠建立体内骨关节炎模型。通过乳酸脱氢酶漏出实验检测细胞毒性,通过MTT实验检测细胞活力。通过qRT-PCR检测NLRP3 mRNA的表达,通过Western Blotting检测NLRP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Collagen Ⅱ、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达。用免疫荧光法和免疫组化法检测软骨细胞和大鼠软骨中的NLRP3表达;番红O/固绿染色评价大鼠软骨病变。结果:与LPS组比较,LPS+ICA组LDH的漏出率、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、NLRP3、Caspase-1、ASC和GSDMD的表达水平明显降低,而Collagen Ⅱ明显升高(P<0.05)。与LPS+ICA+pcDNA3.1-NC组比较,LPS+ICA+pcDNA3.1-NLRP3组的乳酸脱氢酶漏出率及NLRP3炎性小体相关蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OA组大鼠软骨组织中NLRP3阳性细胞数量显著增加,而OA+ICA组的NLRP3阳性细胞数量明显降低(P<0.05)。与OA组比较,OA+ICA组的NRLP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达水平明显降低,而Collagen的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:淫羊藿苷通过抑制NLRP3和Caspase-1信号转导来抑制脂多糖诱导的软骨细胞损伤和细胞焦亡,从而减轻大鼠骨关节炎。