大鼠骨髓基质细胞与胶原复合后修复牙槽骨缺损的研究

目的：探寻以大鼠骨髓基质细胞为种子细胞和胶原复合物为支架材料,构建组织工程骨的原理和方法修复齿槽骨缺损。方法：将SD大鼠骨髓基质细胞（Bone Marrows Stromal Cell,BMSc）进行体外培养并利用矿化液诱导为成骨样细胞,加入胶原（collagen）培养1d后,植入大鼠下颌骨缺损处,2周和4周后处死,取其下颌骨切片,观察成骨效应。结果：术后2周实验侧缺损区可见骨小梁形成,而对照侧无明显骨修复,4周后实验侧新骨形成量逐渐增加,而对照侧只有一些纤维组织修复。HE染色和mallory三色法染色结果也表明实验侧有新骨形成且逐渐增多。结论：应用胶原加体外诱导的成骨样细胞复合体移植可修复大鼠自体的牙槽骨缺损,为组织工程化骨在颌面外科及修复科领域的临床应用奠定了基础。     

大鼠骨髓基质细胞促进自体骨形成的实验研究

目的研究自体骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)体外诱导扩增与仿生纳米壳聚糖-胶原复合支架材料(nano chitosan sodium collagen scaffold,NCSCS)复合修复骨缺损的可行性。方法分离纯化Wistar大鼠BMSCs,诱导BM-SCs向成骨细胞(osteoblast,OB)转化,经碱性磷酸酶、茜素红组织化学染色鉴定,将BMSCs复合仿生纳米壳聚糖-胶原复合支架材料(nano chitosan sodium collagen scaffold,NCSCS)进行扫描电镜观察。制作Wistar大鼠胫骨骨缺损模型,缺损处NCSCS-BMSCs复合物移植后观察骨缺损修复成骨情况。结果扫描电镜下BMSCs细胞在仿生纳米壳聚糖-胶原复合支架材料上大面积生长。BMSCs复合仿生纳米壳聚糖-胶原复合支架材料植入2周后,材料周围可见大量纤维组织,并可见成骨细胞和少量新生的骨样基质,新生骨对照组和实验组比较差异显著(P<0.01);植入6周后,可见到材料与新生骨之间相互混杂,中有纤维相间隔,和原有骨界面尚清晰可辨认,材料部分降解,对照组和实验组比较新生骨有统计学差异(P<0.05);植入12周后,材料几乎降解完全,和天然骨组织界面可见新骨形成,对照组和实验组比较新骨形成无统计学差异(P>0.05)。材料降解在各时间段对照组和实验组比较差别不显著(P>0.05)。结论 BMSCs介导NCSCS修复骨缺损优于单纯的NCSCS修复骨缺损,尤以早期效果为好。     

钛网加强的BMSC/松质骨基质修复下颌骨缺损的实验研究

目的：观察钛网加强的骨髓基质细胞(BMSC)／松质骨基质复合物修复下颌骨缺损的能力。方法：体外培养兔BMSC经扩增，诱导分化后复合同种异体松质骨基质，植入自体下颌骨缺损区，修复骨缺损，钛网固位和加强，植入6周、12周后经X线，组织学检查，观察骨形成情况。结果：骨髓基质细胞(BMSC)/松质骨基质复合物有很强的成骨作用，实验组X线观察有骨形成，组织学染色证实有新骨形成，骨磨片显示钛网和新骨获得良好的愈合。结论：钛网加强的BMSC／松质骨基质可诱导修复兔下颌骨缺损，为组织工程方法修复骨缺损提供了新的思路。     

钛网加强的BMSC/珊瑚修复下颌骨缺损的实验研究

目的:观察钛网加强的骨髓基质细胞(BMSC) /珊瑚复合物对下颌骨缺损的修复能力。方法:体外培养兔BMSC,经扩增、诱导分化后复合角孔珊瑚,植入自体下颌骨缺损区,修复骨缺损,并采用钛网固位和加强,植入 6、12周后进行X线观察和组织学检查,观察骨形成情况。结果:骨髓基质细胞 (BMSC) /珊瑚复合物有很强的成骨作用。实验组X线观察有骨形成,组织学染色证实有新骨形成,骨磨片显示钛网和新骨获得良好的骨愈合。结论:钛网 /BMSC/珊瑚复合物可修复兔下颌骨缺损,有良好的临床应用前景。     

脱矿牙本质基质材料对大鼠颅骨缺损修复的研究

目的：探讨生物相容性较好的脱矿牙本质基质材料对大鼠颅骨缺损的修复效果。方法：①拔除健康大鼠上下前牙,脱矿,脱脂,粉碎后提取脱矿牙本质基质粉末,后与熟石膏以重量2：1比例混合。②大鼠头盖骨正中建立直径约8mm的圆形骨缺损,实验组：在缺损区植入脱矿牙本质基质粉末与熟石膏复合物,用生理盐水调和。对照组：无修复治疗。术后4周和8周分组处死取标本,进行大体标本, X线和组织学HE染色光镜下观察。结果：脱矿牙本质基质粉末与熟石膏具有良好的组织相容性和骨引导性,并与新骨紧密结合,熟石膏可以较好的抑制脱矿牙本质基质牙粉末颗粒离散。结论：脱矿牙本质基质粉末与熟石膏复合骨材料对大鼠颅骨缺损有良好的修复作用,可促进新骨形成,缩短骨缺损修复时间。     

鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷支架负载骨髓基质细胞异位成骨性能研究

目的：观察鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷复合骨髓基质细胞后植入裸鼠皮下的成骨性能。方法：获取兔髂骨松质骨骨髓基质细胞，体外分离、扩增、诱导后接种于多相钙磷陶瓷支架。支架／细胞复合物植入裸鼠背部皮下，单纯支架材料植入作为对照。植入后4周、8周取材，通过大体、组织学观察评价成骨活性。结果：支架／细胞复合物植入后4周，新骨主要以软骨为主，部分区域见少量成熟骨，可见软骨内成骨方式。植入后8周，材料表面和孔隙内有更多的成熟骨形成，部分区域有血管和多核巨细胞分布。结论：支架／细胞复合物显示良好的成骨活性，鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷可以用于骨组织工程支架材料。     

组织工程材料大鼠颅骨缺损修复过程中的磨片三色染色观察

目的:用自体细胞复合含孔磷酸钙陶瓷修复颅骨极量骨缺损的SD大鼠骨组织工程模型标本,制作不脱钙磨片并通过改良Masson氏三色染色以观察新骨形成及其与支架材料的关系。方法:成年雄性SD大鼠 14只,随机分成实验组和对照组,每组 7只。全麻及无菌条件下取其左侧胫、股骨骨髓,体外诱导培养大鼠自体骨髓基质细胞。实验组将已分化的自体成骨细胞与含孔磷酸钙陶瓷复合用于修复同体大鼠颅骨极量骨缺损;对照组颅骨缺损处仅置入无细胞的单纯陶瓷。分别于术后 4、8、12、16、20、24及 28周每组各处死1只动物并取材,制成不脱钙磨片并进行改良Masson氏三色染色,光学显微镜下观察比较颅骨修复情况及其矿化程度。结果:实验组 4周时不脱钙磨片,即可见骨缺损修复中央区陶瓷孔隙内蓝色的新骨形成;随着时间的推移,形成新骨逐渐矿化成为红色的成熟骨组织, 28周时骨缺损修复区可见大片新骨呈岛状或条索状排列,其间的陶瓷支架部分已降解,同时加以墨汁灌注的磨片显示骨组织中已形成大量新生血管网。结论:以含孔磷酸钙陶瓷为支架的组织工程骨缺损修复明显优于单纯生物陶瓷修复法,磨片三色染色方法既可了解新骨形成及其矿化程度,又可观察新骨形成与陶瓷支架之间的关系。     

组织工程化骨修复大鼠下颌骨缺损的实验研究

目的：探讨以陶瓷化骨为支架材料的组织工程化骨修复下颌骨缺损的效果和实用价值。方法：选用30只SD大鼠，手术获取大鼠一侧胫骨和股骨，冲洗骨髓腔得到骨髓，培养骨髓基质细胞并通过含诱导成分的诱导液将其诱导为成骨样细胞。将自体成骨样细胞种植在煅烧骨基质材料上，然后将该复合体移植到SD大鼠下颌骨的一侧全层骨缺损区，另一侧移植单纯基质材料作为对照。将30只SD大鼠分别于术后2、4、8周处死，标本行大体组织学检查，HE染色和mallory三色法染色检查。结果：术后2周实验侧缺损区可见骨小梁形成，标本行大体组织学检查，HE染色和mallory三色法染色检查。结果：术后2周实验侧缺损区可见骨小梁形成，而对照侧无明显骨修复，2、4、8周后实验侧新骨形成量逐渐增加，而对照侧只有一些纤维组织修复。HE染色和mallory三色法染色结果也表明实验侧有新骨形成且逐渐增多。结论：应用陶瓷化骨加体外诱导的成骨样细胞复合体移植可修复大鼠自体的下颌骨缺损，为组织工程化骨在口腔颌面外科和口腔修复科领域的临床应用奠定了基础。     

自体骨髓基质干细胞-珊瑚羟基磷灰石修复下颌骨节段缺损的实验研究

目的应用骨髓基质干细胞（BMSCs）复合珊瑚羟基磷灰石（CHA）构建组织工程化骨，修复犬下颌骨节段性缺损。方法体外分离培养，成骨诱导扩增犬BMSCs，将第2代细胞复合CHA后修复5只犬自体下颌骨右侧3cm的节段缺损；6只犬植入单纯CHA作为对照，术后12、26、32周通过影像学、大体形态、组织学和生物力学的方法检测骨缺损的修复效果。结果BMSCs-CHA复合物生长良好。随时间延长，X线片和CT显示实验组连接处骨痂形成，实验对照组连接处始终愈合较差；32周大体观察实验组骨修复较好，组织学显示有板层骨形成，连接处骨性愈合，实验对照组有编织骨形成，连接处纤维愈合。实验组与正常对照组下颌骨力学强度差异无统计学意义。结论自体成骨诱导BMSCs复合CHA形成的组织工程化骨可修复犬下颌骨节段缺损。     

以Bio-oss胶原为支架材料的组织工程化骨修复种植体周围骨缺损的初步实验研究

目的研究以Bio-oss胶原为支架材料的组织工程化骨修复种植体周围骨缺损的效果。方法取4只小型猪设立自身对照,获取骨髓基质细胞(BMSCs),经成骨诱导培养液体外培养、扩增、诱导后进行I型胶原、骨钙素的免疫细胞化学检测,将培养的第3代细胞同Bio-oss胶原构建BMSCs/Bio-oss胶原复合物,构建小型猪下颌骨种植体周围骨缺损模型,将复合物植入骨缺损处,通过影像学、能谱分析种植体-新骨界面Ca2+含量及组织学检测初步评价其促成骨作用。结果Ⅰ型胶原、骨钙素免疫细胞化学染色呈阳性,Von Kossa染色可见钙结节形成;超微结构观察可见细胞生长附着于材料网孔内表面;8周时成骨组织学观察可见BMSCs/Bio-oss胶原复合物植入组成骨量大于Bio-oss胶原植入组,能谱分析显示,2组Ca2+含量有统计学差异。16周时,组织学观察可见2组成骨量已无明显差别,能谱分析显示,2组Ca2+含量无统计学差异。结论利用BMSCs/Bio-oss胶原复合物修复小型猪种植体周围骨缺损相对于植入Bio-oss胶原能够缩短种植体发生骨结合的时间。     

血管化组织工程骨修复牙槽嵴裂的实验研究

目的：探讨应用经血管内皮细胞生长因子（VEGF）转染的骨髓基质干细胞（BMSC）复合胶原蛋白海绵构建的血管化组织工程骨修复牙槽嵴裂的可行性。方法：①经股骨骨髓穿刺获得犬BMSC,经分离、培养和鉴定后,转染pAdMV-VEGF质粒,流式细胞仪、RT-PCR和免疫组化检测;转染细胞与蛋白胶原海绵混合培养72h形成复合体。②将复合体植入犬牙槽嵴裂模型的骨缺损处,12周后处死动物,通过大体形态及X线、三维CT重建、组织学检查等方法评价修复牙槽嵴裂的效果。结果：实验组骨缺损完全愈合,骨髓腔通畅,工程骨高度及宽度与自体松质骨植入组无明显差别（P〉0．05）。结论：由经VEGF转染的BMSC复合胶原蛋白海绵构建的组织工程骨可以较好地修复牙槽嵴裂,在修复后的形态、结构等方面均与自体松质骨修复相似,有望成为修复牙槽嵴裂的治疗方法。     

复合氰基丙烯酸酯一骨形态发生蛋白生物胶预防大鼠牙槽嵴萎缩的实验研究

目的制备复合氰基丙烯酸酯一骨形态发生蛋白(BMP)生物胶,并植入大鼠拔牙窝观察其预防牙槽嵴萎缩的效果。方法选用Wistar大鼠54只,随机分为3组：实验组(复合氰基丙烯酸酯一BMP生物胶组)、对照组(壳聚糖温敏性胶体组)、空白对照组。拔除大鼠下颌切牙后,实验组和对照组在牙槽窝内即刻植入复合氰基丙烯酸酯一BMP生物胶、单纯壳聚糖温敏性胶体,空白对照组则不植入任何材料。39t动物在植入后3、6、9周处死,分离切取下颌骨,用高频钼靶扫描仪获得图像信息,使用Image-Pro Plus软件处理图像,得到剩余牙槽嵴相对高度和牙槽窝相对光密度,组织学观察牙槽窝内的成骨情况。结果术后3、6、9周,实验组的剩余牙槽嵴相对高度和牙槽窝相对光密度均高于对照组和空白对照组(P<0．05);组织学观察显示实验组牙槽窝成骨多于对照组和空白对照组。结论复合氰基丙烯酸酯一BMP生物胶可以用于预防拔牙术后剩余牙槽嵴萎缩,其临床应用前景广阔。     

新型骨支架复合材料修复牙槽骨缺损研究

目的:探讨多孔聚丙烯晴基碳纤维/壳聚糖/双相磷酸钙/聚乳酸-羟基乙酸(PAN/CS/BCP/PLGA)复合支架对大白兔牙槽骨缺损的修复能力。方法:采用真空冷冻干燥技术制备多孔PAN/CS/BCP/PLGA复合支架。选取32只成年雄性新西兰大白兔,随机分为实验组和对照组,手术制备大小为10mm×10mm×10mm牙槽骨缺损区。实验组骨缺损区植入PAN/CS/BCP/PLGA复合支架,对照组植入CS/PLGA复合材料,术后2、4、8、12周分期取材,进行X线检查、组织学观察、扫描电镜(SEM)检测和成骨细胞计数分析。结果:术后12周实验组检测结果,X线观察:骨缺损区阻射影与自体骨相同。组织学观察:骨缺损区完全被新骨充填,且为较成熟的板层骨,与自体骨完全融合。SEM检测:骨-材料界面形成骨性结合,移植材料大部分降解,被成熟骨组织替代。成骨细胞计数分析:成骨细胞生长活跃,统计学有显著性差异。结论:多孔PAN/CS/BCP/PLGA复合支架具备良好的生物活性和生物可降解性,对骨缺损的修复能力要优于CS/PLGA复合材料,为其成为骨组织工程支架替代材料提供理论依据。     

基因修饰的组织工程化骨修复骨质疏松症骨缺损的实验研究

目的 探讨人类骨形成蛋白2（hBMP-2）基因修饰的组织工程化骨修复骨质疏松症者骨缺损的可行性及方法。方法24只6个月龄雌性SD大鼠建立去势模型，按体重编号，随机分组。3个月后实验组骨髓问质干细胞（BMSC）转染hBMP-2质粒，对照组未作干预，在体外构建自体细胞组织工程化骨，植入下颌骨缺损区。结果术后4周时实验组有新生骨质形成，8周时成熟骨基质形成；对照组新生骨质数量明显少于实验组，且材料边缘及中央处有脂肪样结构形成。结论hBMP-2基因修饰的组织工程化骨可用于骨质疏松症者骨缺损的治疗。     

糖尿病对大鼠牙槽骨缺损修复中骨形态发生蛋白-2表达影响的研究

目的 观察糖尿病(diabetes mellitus,DM)对实验性大鼠牙槽骨缺损修复过程中不同时期骨形态发生蛋白-2(bonemorphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响。方法 将48只雄性SD大鼠随机分为DM组和对照组,每组24只,DM组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素造成DM大鼠模型,建模成功后行大鼠牙槽骨骨缺损制备,2组均分别于骨缺损制备后1、2、4、8周各取6只大鼠处死,取术区组织。苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)镜下观察缺损区内新生骨样组织形成情况;用免疫组化法检测术后1、2、4、8周缺损区内BMP-2的表达情况,比较各组的平均光密度。结果 HE染色观察显示DM组成骨较对照组减少。术后1周、2周免疫组化观察对照组新骨BMP-2的表达强于DM组,二者之间差异有统计学意义(P<0.05),术后4周、8周对照组BMP-2表达较之前弱,但与DM组二者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DM影响了大鼠牙槽骨缺损的修复,可能是DM使BMP-2形成减少,从而抑制了未分化间充质向成骨细胞的转化,从而影响种植体骨结合,降低种植初期稳定性。?     

BMSC/β-TCP修复犬下颌骨缺损的实验研究

目的:通过动物实验探索β-磷酸三钙(β-TCP)复合组织工程骨应用于颌骨缺损修复的可行性。方法:3只杂交犬的双侧下颌骨人工制备3 cm×1 cm×1 cm缺损后,采用自体对照实验方法。实验侧植入骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物(BMSC/β-TCP),对照侧仅植入β-TCP,在植入后均使用四环素荧光标记。分别于术后1、3、6个月进行CT扫描,之后处死实验犬,制备组织标本,进行HE染色、苦味酸品红染色、四环素荧光检测,并加以评价。对分析数据结果使用SAS 6.0进行统计学分析,P<0.05为有统计学意义。结果:BMSC/β-TCP修复犬颌骨缺损,有大量的编织骨生成;对照组虽然在6个月后也有一定量的骨质形成,但未见到编织骨。四环素标记结果显示,实验组术后6个月,骨质形成速率较对照组高;对照组在最初的3个月,骨质形成明显比实验组低。在第3～6个月期间,实验组和对照组骨质形成均明显加快。结论:BMSC/β-TCP修复犬的颌骨缺损可以形成质量较高的板层骨,而单纯β-磷酸三钙所形成的骨质纤维较紊乱,哈弗氏骨管的数量也较少。     

The osteoinductive effect of chitosan-collagen composites around pure titanium implant surfaces in rats

Kung S, Devlin H, Fu E, Ho K‐Y, Liang S‐Y, Hsieh Y‐D. The osteoinductive effect of chitosan–collagen composites around pure titanium implant surfaces in rats. J Periodont Res 2011; 46: 126–133. © 2010 John Wiley & Sons A/S Background and Objective: The enhancing effects of chitosan on activation of platelets and differentiation of osteoprogenitor cells have been demonstrated in vitro. The purpose of this study was to evaluate the in vivo osteoinductive effect of chitosan–collagen composites around pure titanium implant surfaces. Material and Methods: Chitosan–collagen composites containing chitosan of different molecular weights (450 and 750 kDa) were wrapped onto titanium implants and embedded into the subcutaneous area on the back of 15 Sprague–Dawley rats. The control consisted of implants wrapped with plain collagen type I membranes. Implants and surrounding tissues were retrieved 6 wks after surgery and identified by Alizarin red and Alcian blue whole mount staining. The newly formed structures in the test groups were further analyzed by Toluidine blue and Masson–Goldner trichrome staining, and immunohistochemical staining with osteopontin and alkaline phosphotase. The bone formation parameters of the new bone in the two test groups were measured and compared. Results: New bone formed ectopically in both chitosan–collagen groups, whereas no bone induction occurred in the negative control group. These newly formed bone‐like structures were further confirmed by immunohistochemical staining. Comparison of bone parameters of the newly induced bone revealed no statistically significant differences between the 450 and 750 kDa chitosan–collagen groups. Conclusion: Our results demonstrated that chitosan–collagen composites might induce in vivo new bone formation around pure titanium implant surfaces. Different molecular weights of chitosan did not show significantly different effects on the osteoinductive potential of the test materials.     

新型双层骨引导再生壳聚糖膜修复大鼠颅骨缺损的实验研究

目的: 通过比较新型双层壳聚糖膜和Bio-Gide膜对大鼠颅骨缺损的修复效果,评估其作为引导骨再生膜的可行性。方法: 双层壳聚糖膜与MC3T3-E1细胞共培养,应用扫描电子显微镜（scanning electron microscope,SEM）观察细胞对膜的黏附效果;采用cell counting kit-8（CCK-8）法在3、7和10 d检测膜的细胞毒性;选择18只Sprague-Dawley（SD）大鼠,随机分为A、B、C组,在其颅骨中线两侧制作5 mm的极量骨缺损,左侧为实验侧,覆盖双层壳聚糖膜,右侧为对照侧覆盖Bio-Gide膜,分别于术后第2、4及8周时处死各组大鼠,通过大体观察、微计算机体层扫描技术（micro-computed tomography,micro-CT）及组织学方法,评价2种膜修复骨缺损的效果。采用SPSS20.0软件包对结果进行统计学分析。结果: 通过MC3T3-E1细胞在双层壳聚糖膜上培养2 d后的扫描电镜照片,观察到细胞较好地粘附于多孔层上。第3、7及10天时,实验组细胞相对增殖率分别为114.49%、107.17%和98.73%,细胞毒性级别为0或1级,表明膜的细胞毒性轻微。2周时,Bio-Gide膜组的骨形成量（BV）和骨体积分数（BVF、BV/TV）与实验组差异显著（P<0.05）;但在第4和8周时,2组的BV和BVF无显著差异（P>0.05）。结论: 新型双层壳聚糖的体外和体内生物学性能符合GBR技术的要求,具有作为GBR膜的潜力。     

PAN/CS/BCP/�����ϸ���֧�ܲ����޸����۹�ȱ��ʵ���о�

目的研究多孔聚丙烯晴基碳纤维／壳聚糖／双相磷酸钙／川续断（PAN／CS／BCP／川续断）复合支架材料对牙槽骨缺损区的骨愈合及修复作用。方法本研究于2011年10月至2012年4月在佳木斯大学动物实验中心及佳木斯大学基础医学院完成。选用24只新西兰大白兔制成下颌双侧10mm直径的圆型人工牙槽骨缺损模型。随机等分为实验组（植入PAN／CS／BCP／川续断复合支架材料）和对照组（植入壳聚糖／纳米羟基磷灰石）。分别于4、8、12周各处死动物2只,进行骨密度值分析及组织学观察。结果（1）12周时,实验组骨缺损处边缘为高密度阻射影,边缘连续且密度与正常骨组织一致。（2）各个时期内实验组新骨生成均较对照组快,且新生骨骨密度均高于对照组。（3）组织形态观察：HE染色显示,12周时实验组牙槽骨的缺损区可见骨化线及较规则骨组织形成。结论PAN／CS／BCP／川续断复合支架材料有加快骨再生的能力,对骨的愈合有促进作用。     

犬自体骨髓间充质干细胞介导HA-TCP修复牙槽骨缺损的实验研究

目的:研究成年犬骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)介导羟基磷灰石磷酸三钙(hydroxyapatite-tricalcium phosphate,HA-TCP)修复犬牙槽骨缺损。方法:用密度梯度离心贴壁培养法分离纯化成年犬的MSCs,将MSCs矿化诱导为成骨样细胞后与HA-TCP支架复合。选取3只成年犬,在876︱678根分歧处分别制备长宽高均为3mm的骨缺损。左侧作为实验组,牙槽骨缺损处植入MSCs-HA-TCP复合物;右侧作为对照组,将HA-TCP植入牙槽骨缺损部位。移植后8周处死实验动物,进行组织学观察,并进行图像分析。结果:实验组新生骨组织占缺损的百分比明显高于对照组,剩余材料占缺损的百分比低于对照组,具有统计学意义(P<0.01)。结论:MSCs介导HA-TCP修复成年犬牙槽骨缺损效果优于单纯的HA-TCP修复犬牙槽骨缺损。