无精子症患者与生育男性精浆蛋白质群的比较分析

目的:探讨无精子症患者精浆蛋白质群的改变。方法:11例正常健康自愿者和6例非梗阻性无精子症者精液标本,以99%和45%Percoll分离获取精浆。采用PBS IIC型蛋白质芯片-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS),经CM10芯片捕获蛋白质,并采用TOF-MS对蛋白质进行检测获得各样本的蛋白质指纹图谱,经过归一化处理后进行组间比较。结果:无精子症组与正常组比较有28种蛋白质表达存在差异,差异的蛋白质中有24种含量低于正常组,其中4个M/Z在7 196.058、7 630.573、7 547.610和7 709.833的蛋白质差异极显著(P<0.01)。结论:无精子症患者其精浆蛋白质群较生育男性有显著改变,改变的蛋白质主要是含量减少,这些蛋白质的减少可能与无精子症的发生有重要相关性。     

血清和精浆抑制素B在无精子症诊断中的应用研究

目的:评价血清和精浆抑制素B浓度在诊断梗阻性和非梗阻性无精子症中的应用价值。方法:测定25例正常生育者(正常对照组),37例梗阻性无精子症以及33例非梗阻性无精子症者的血清卵泡刺激素(FSH)、血清和精浆抑制素B浓度,对无精子症者行睾丸病理Johnsen评分。结果:精浆和血清抑制素B浓度比值在正常对照组和非梗阻性无精子组分别为2.17和3.63,差异无显著性(P=0.29);在梗阻性无精子症组两者比值为0.18,与正常对照组和非梗阻性无精子症组比较显著降低(P<0.01)。结论:精浆和血清抑制素B浓度比值可用于临床诊断梗阻性和非梗阻性无精子症。     

非梗阻性无精子症和健康生育男性精浆差异蛋白质的“shotgun”鉴定

目的:利用"shotgun"蛋白质组学策略鉴定正常生育男性和非梗阻性无精子症男性精浆的差异蛋白质。方法:正常生育男性和非梗阻性无精子症男性各3例自愿捐献的精液标本,通过Percoll分离获取精浆,等量混合后在SDS-PAGE上进行分离,切胶取条带进行胶内酶解,抽提肽段后利用"shotgun"蛋白质组学策略鉴定蛋白质。然后,将两组鉴定到的惟一肽段数≥2和惟一肽段数=1,但肽段总数≥4的蛋白质对比分析。结果:正常生育男性和非梗阻性无精子症男性精浆中共得到213个差异蛋白质,其中133个蛋白质存在于非梗阻性无精子症者,80个蛋白质存在于正常生育者。这些差异蛋白质集中在信号转导、细胞骨架和酶催化活性类,其中酶催化活性类中尤以氧化还原酶类为多。通过进一步分析,有18个差异蛋白质尤其值得关注,这18个蛋白质中包括:胞质动力蛋白重链、脂肪酸合成酶、微管蛋白α6等。结论:本研究中鉴定到的二者的差异蛋白质数量多、功能分布广,不仅再次证明"shotgun"蛋白质组学策略是鉴定蛋白质的一个较好的方法,也提醒我们:非梗阻性无精子症的发生原因复杂,类型多样,选择标本必须从组织学和基因水平严格细化,方能得到蛋白质研究的可信结果。本研究选取的无精子症男性精浆标本从蛋白质水平上表明其病因与有丝分裂M期有关,具体机制尚不清楚。     

生育与不育男性精浆总抗氧化能力分析

目的:分析生育与不育男性精浆中总抗氧化能力(TAC)及其在男性生育中意义。方法:225例男性不育患者分为6组,分别为:梗阻性无精子症组(n=10),非梗阻性无精子症组(n=42),少精子症组(n=20),弱精子症组(n=78),少弱精子症组(n=57),以及正常精子症组(n=18)。28例正常生育男性作为对照(生育组)。分别采用计算机辅助精液分析(CASA)系统进行精液参数分析,采用比色法检测精浆TAC水平。结果:生育组男性精浆TAC为(19.82±6.33)U,梗阻性无精子症组(1.71±1.33)U,非梗阻性无精子症组(12.73±9.44)U,少精子症组(10.85±6.64)U,弱精子症组(13.88±8.24)U,少弱精子症组(11.20±7.02)U,正常精子症组(18.07±8.73)U;与生育组精浆TAC[(19.82±6.33)U]相比,在各不育症组中,除正常精子症组精浆TAC与生育组差异无显著性外,其余各组均显著低于生育组(P<0.01)。精浆TAC与精子密度(r=0.182,P<0.05)和a级精子(r=0.150,P<0.05)呈显著正相关。结论:精浆中TAC水平与男性不育密切相关,精浆中过低的TAC水平可能是引起男性不育的病因之一。     

男性不育患者精浆尿酸的检测及临床意义初探

目的 :检测男性不育患者精浆尿酸的含量 ,并探讨其与不育的关系。　方法 :2 0 0 3年 2～ 8月就诊的男性不育患者 1 6 3例 ,分为 4组 :梗阻性无精子症组 ,1 5例 ;非梗阻性无精子症组 ,36例 ;少精子症组 ,4 3例 ;弱精子症组 ,6 9例。 2 0例正常生育男性为正常对照组。上述各组均作精液参数分析及精浆尿酸含量的测定。　结果 :正常对照组精浆尿酸含量为 (396 .9± 5 3.1 ) μmol/L ,显著高于梗阻性无精子症组 [(79.5± 1 8.1 ) μmol/L]、非梗阻性无精子症组[(2 4 5 .8± 76 .5 ) μmol/L]、少精子症组 [(2 6 2 .2± 79.2 ) μmol/L]和弱精子症组 [(2 5 1 .4± 75 .4 ) μmol/L](P均 <0 .0 1 )。其中 ,梗阻性无精子症组精浆尿酸含量又显著低于其他各不育症组 (P均 <0 .0 1 ) ,其余各不育症组间精浆尿酸含量差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :精浆中尿酸作为生殖系统中的一种重要抗氧化物 ,可能在男性生殖中具有一定意义。     

非梗阻性无精子症相关病因分析

目的 :探讨非梗阻性无精子症患者血清和精浆中的性激素水平、精浆表皮生长因子、α 葡萄糖苷酶、果糖水平及其变化 ,以及染色体分析的意义。　方法 :采用放射免疫法、比色法、染色体G、C显带等方法 ,对 36例已婚非梗阻性无精子症患者和 2 6例正常已婚有精子男性进行生殖内分泌、遗传学等结果比较 ,探讨导致不育的病因。　结果 :非梗阻性无精子症患者血清中FSH、LH、PRL、E2均高于正常对照男性 ,T水平两者间差异无显著性。而精浆中除FSH外 ,其余差异均无显著性。非梗阻性无精子症组性染色体异常 2例 ,大Y 2例 ,小Y 7例 ,精浆表皮生长因子、果糖两者间无相关性。　结论 :非梗阻性无精子症与血清性激素水平、α 葡萄糖苷酶、染色体异常有密切关系     

精浆蛋白电泳带谱分析对梗阻性无精子症的定位诊断价值

目的：评估精浆蛋白电泳带谱对梗阻性无精子症的定位诊断价值。方法：对28例正常生育男子和21例梗阻性无精子症患者(包括14例双侧输精管结扎和7例双侧附睾尾梗阻)，采用不连续SDS-PAGE分析精浆蛋白带谱变化，并分别测定精浆总蛋白质含量。结果：正常生育男子与梗阻性无精子症者比较，虽然总蛋白质含量有差异(P＜0．05)，但精浆蛋白带谱分析基本相同。结论：精浆蛋白电泳带谱分析对梗阻性无精症的诊断及定位无临床意义。     

应用蛋白质芯片飞行时间质谱仪研究弱精子症患者精浆差异蛋白表达

目的应用蛋白质组学方法研究弱精子症患者及正常生育男性精浆中的差异蛋白,发掘与弱精子症发生发展密切相关的蛋白质标志物。方法收集36例弱精子症患者和28例正常生育男性的精液样本,离心分离获取精浆,用H50蛋白质芯片结合蛋白质芯片-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)对各组精浆样本进行检测,获取各样本的蛋白质指纹图谱,比较各组间蛋白质图谱表达差异。结果在相对分子质量在1 000~50 000Da范围内,共检测到239种有差异的蛋白峰,其中11种有统计学意义(P0.05)。弱精子症组与正常生育男性精浆蛋白质谱相比,弱精子症组有8种差异蛋白质表达降低(P0.05),其中M/Z为7867.33的蛋白质有显著差异性(P0.01)。3种差异蛋白质M/Z为1247.54、1673.51、11158.2,较正常组表达增高,其中M/Z为1673.51的蛋白质有显著差异性(P0.01)。结论弱精子症患者其精浆蛋白质群较正常生育男性精浆有显著改变,这些蛋白质的降低可能与精子活力受损有重要相关性,本研究对探究弱精子症的病因及其临床诊疗具有重要意义。     

利用H4和SAX-2蛋白质芯片技术筛查少精子症患者精浆标志物

目的:通过蛋白质组学技术筛查少精子症患者精浆中特异性生物标志物。方法:用H4和SAX-2蛋白质芯片结合SELD I-TOF-MS对20例少精子症患者及20例生育男性精浆样本进行检测,比较两者间蛋白质图谱表达差异。结果:在H4蛋白质芯片上,少精子症患者精浆与生育男性精浆蛋白质图谱相比,有1处蛋白质峰明显增高,差异有显著性(P<0.05),其相对分子质量(Mr)为11 507.4,有1处蛋白质峰明显降低,差异有显著性(P<0.05),其Mr为11 022.9;在SAX-2蛋白质芯片上,少精子症患者精浆与生育男性精浆蛋白质图谱相比有1处蛋白质峰明显增高,差异有显著性(P<0.05),其Mr为16 751.6。结论:少精子症患者精浆中特异性蛋白质的发现,对探究由少精子症引起的男性不育机制及其临床筛查皆具重要意义。     

精浆和血清生殖激素与精液质量的关系

目的为了评估精液质量不同的男性精浆和血清生殖激素的浓度与精子浓度及活动力的关系,探索精浆与血清生殖激素的关系。方法对301名男性进行精液检查,按照精液的质量参数将受试对象分成4组:精液正常组(n=176),弱精子症组(n=66),少精子症组(n=40)和非梗阻性无精子症组(n=19)。采用电化学发光免疫法测定各组受试对象血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)和雌二醇(E2)六项生殖激素和精浆PRL、T、P和E2四项生殖激素的浓度,比较组间差异并进行相关性分析。结果精液正常组和弱精子症组血清FSH和E2的浓度显著低于少精子症组和非梗阻性无精子症组(P0.05),精液正常组血清LH和P的浓度显著低于弱精子症、少精子症和非梗阻性无精子症的人群(P0.05);而精液正常、弱精子症和少精子症三组精浆PRL的浓度则高于非梗阻性无精子症组(P0.05)。除了非梗阻性无精子症组,受试者血清FSH的浓度与其精子浓度呈负相关(r分别为-0.350、-0.273和-0.448,P0.05)。精液正常组精浆PRL的浓度和精子的浓度之间呈正相关(r=0.269,P0.05);在少精子症组中,亦有相同趋势的相关性(r=0.432,P0.05)。结论精浆PRL及血清FSH的浓度能够反映精子浓度或活动力,在男性不育的病因分析中具有一定的指导价值。     

Analysis of lipid peroxidative levels in seminal plasma of infertile men by high-performance liquid chromatography

For the purpose to evaluate the significance of lipid peroxidative products on male infertility, the levels of malondialdehyde (MDA), which is one of the final products of lipid peroxidation in seminal plasma, were determined. Ninety-three male infertile patients were divided into obstructive azoospermic group (12 cases), non-obstructive azoospermic group (15 cases), oligozoospermic group (21 cases), asthenozoospermic group (19 cases), oligoasthenozoospermic group (16 cases) and oligoasthenoteratozoospermic group (10 cases). Eighteen fertile males were included in the control group. MDA concentrations of seminal plasma in the fertile and infertile men were detected by high-performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that the concentration of MDA in seminal plasma differed significantly between the control group and all the infertile groups (P < 0.01) except the obstructive azoospermic group, between the oligoasthenozoospermic group and the oligozoospermic and asthenozoospermic groups (P < 0.01), and between the oligoasthenoteratozoospermic group and the oligozoospermic and asthenozoospermic groups (P < 0.01). MDA concentration of seminal plasma in the oligoasthenoteratozoospermic group differed significantly from that in the oligoasthenozoospermic group (P <0.05). The results suggested that detection of MDA concentrations in seminal plasma by HPLC has an indicative value on the diagnosis of male infertility induced by overproduction of reactive oxygen species in male reproductive system.     

Significance of malondialdehyde concentration in seminal plasma of infertile men

Objective: To determine the concentration of malondialdehyde (MDA), product of lipid peroxidation, in seminal plasma and evalu ate its significance. Methods: Ninety-three cases of infertile pa tients were divided into the obstructive azoospermic (12 cases), the non-obstructive azoospermic (15 cases), the oligozoospermic (21 cases), the asthenozoospermic (19 cases), the oligoastheno zoospermic (16 cases) and the oligoasthenoteratozoospermic (10) groups. Eighteen fertile males served as the controls. MDA con centration was assessed by high-performance liquid chromatogra phy (HPLC). Results: With the exception of the obstructive azoospermic group, the MDA concentration in the seminal plasma was significantly different between the control group and the infer tile groups (P<0.01) as well as between the different infertile groups. Conclusion: Determination of MDA concentration in the seminal plasma is helpful to the diagnosis of male infertility induced by overproduction of reactive oxygen species.     

Assessment of seminal plasma laminin in fertile and infertile men

Aim： To assess laminin levels in the seminal plasma of infertile and fertile men, and to analyze the correlation of laminin levels with sperm count, age, sperm motility and semen volume. Methods： One hundred and twenty-five recruited men were equally divided into five groups according to their sperm concentration and clinical examination： fertile normozoospermia, oligoasthenozoospermia, non-obstructive azoospermia （NOA）, obstructive azoospermia （OA） and congenital bilateral absent vas deferens （CBAVD）. The patients＇ medical history was investigated and patients underwent clinical examination, conventional semen analysis and estimation of seminal plasma laminin by radioimmunoassay. Results： Seminal plasma laminin levels of successive groups were： 2.82 ± 0.62, 2.49 ± 0.44, 1.77 ± 0.56, 1.72 ± 0.76, 1.35 ± 0.63 U/mL, respectively. The fertile normozoospermic group showed the highest concentration compared to all infertile groups with significant differences compared to azoospermic groups （P 〈 0.05）. Testicular contribution was estimated to be approximately one-third of the seminal laminin. Seminal plasma laminin demonstrated significant correlation with sperm concentration （r = 0.460, P 〈 0.001） and nonsignificant correlation with age （r = 0.021, P = 0.940）, sperm motility percentage （r = 0.142, P = 0.615） and semen volume （r = 0.035, P = 0.087）. Conelusion： Seminal plasma laminin is derived mostly from prostatic and testicular portions and minimally from the seminal vesicle and vas deferens. Estimating seminal laminin alone is not conclusive in diagnosing different cases of male infertility.     

精浆内脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶与α-葡萄糖苷酶的相关性研究

目的分析脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)与精浆其他参数之间的关系,探讨L-PGDS在男性生殖系统中的作用。方法分析92份精液中的精子密度、精子活力、L-PGDS浓度、酸性磷酸酶活力以及α-葡萄糖苷酶活力。依据精子密度,将标本分为3组:正常组(精子密度>20×106/ml)、寡精子组(精子密度<20×106/ml)及无精子组(精子密度为0)。彩色精子质量分析系统测定精子密度及活力,双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测精浆内的L-PGDS浓度,分光光度计测定α-葡萄糖苷酶活力。结果正常组、寡精子组以及无精子组患者精浆L-PGDS浓度依次降低,差异显著(P<0.001)。L-PGDS的浓度与α-葡萄糖苷酶、精子密度及精子活力呈正相关,相关系数(r)分别为0.426、0.813和0.380。结论精浆L-PGDS浓度可作为少精子症的辅助诊断指标。