深低温长期保存兔角膜内皮细胞体外培养的实验研究

①目的观察深低温保存后兔角膜内皮细胞的活性。②方法将深低温保存兔角膜与新鲜兔角膜进行内皮细胞体外培养对比观察。③结果在培养７ｄ内,深低温保存的角膜内皮细胞较新鲜角膜内皮细胞滞后１～２ｄ生长,１４ｄ以后二者逐渐趋于一致。④结论经深低温长期保存的兔角膜内皮细胞仍保持良好的生长活性     

器官培养角膜保存法保存兔角膜的观察研究

目的观察器官培养角膜保存法保存角膜活性的效果,探讨该方法临床应用的可行性.方法兔角膜28只,分为两组,实验组16只眼,对照组12只眼.实验组用31℃器官培养液保存,对照组用K-液4℃保存.两组中每4只角膜分别保存3、7、14 d.实验组4只角膜保存14 d后移入运输液中培养3 d.保存前测角膜厚度,做内皮细胞形态学检查和台盼蓝染色.保存后不同时间做相同检查和茜素红染色, 并用透射电镜观察角膜内皮细胞超微结构.在取出角膜前从所有保存瓶抽取保存液样本做细菌和真菌的培养. 临床应用器官培养保存1周的角膜行穿透性角膜移植术1例.结果实验组和对照组角膜内皮细胞形态、活性率1周后差异有显著性.2组角膜厚度差异有显著性.透射电镜检查, 实验组7 d和14 d角膜内皮细胞超微结构完整.对照组7 d后线粒体肿胀,14 d可见细胞结构破坏.穿透性角膜移植术临床病例随访2年,角膜移植片基本透明.结论器官培养液保存角膜的效果确切,活性保存时间明显长于K-液保存.     

深低温保存牛角膜内皮细胞的分裂特性

【目的】探讨科学评价深低温保存角膜内皮细胞活性的方法 ,弥补直接形态学染色法的缺陷。【方法】体外培养新鲜及深低温保存牛角膜内皮细胞 ,观察其贴壁时间 ,融合时间及贴壁率。用MTT法检测细胞吸光度 (A )及用3 H tdR法检测放射性核素计数 ,评价细胞活性。【结果】原代培养时 ,深低温保存角膜内皮细胞的贴壁时间及融合时间分别为 (5 5± 1 8)d及 (15 8±3 2 )d ,均较新鲜角膜内皮细胞长 [分别为 (2 5± 1 3)d及 (8 6± 2 4)d];贴壁率、吸光度及放射计数分别为 71 8%± 6 6 %、0 46± 0 11及 (9 6± 1 1)Bq,也均较新鲜角膜内皮细胞低 [分别为 90 2 %± 4 5 %、1 74± 0 75及 (70 1± 5 4)Bq]。但其余各代培养细胞二组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。【结论】通过体外培养 ,研究深低温冻存的角膜内皮细胞生物学特性 ,能更科学、准确地判定细胞活性。深低温保存对角膜内皮细胞活性有抑制作用 ,但这种抑制是可以恢复的     

中长期保存的角膜内皮细胞超微结构的变化

目的 探讨角膜保存方法及保存角膜内皮细胞的超微结构变化.方法 取新鲜眼球经消毒处理后,抽空房水,前房注入optisol、likorol角膜保存液或C3F8惰性气体,全眼球置于保存液中,4℃冰箱保存.分别取保存3～7d的角膜5例(保存组),通过电子显微镜观察角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核及线粒体结构,应用角膜内皮机检测角膜内皮细胞密度及六边形细胞比率,并与3d内保存的新鲜角膜对照(对照组).结果 保存组与对照组角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核、线粒体之结构变化无明显差异;两组角膜内皮细胞密度及六边形细胞比率差异也无统计学意义(均P>0.05).结论 在optisol、likorol角膜保护液和C3F8气体中长期保存的角膜与新鲜角膜无明显差异.     

保存液中添加bFGF对中期保存角膜细胞活性的影响

目的:研究bPGF对中期保存角膜细胞活性的影响.方法:配制保存液保存新西兰大白兔角膜,对照组为配制保存液保存,实验组为配制保存液加入bFGF(10ng/ml),两组在30～34℃恒温条件下保存16～18h后转入4℃低温保存,在保存3、5、7d分别取保存角膜片行30～34℃ 2h复温,台盼蓝-茜素红联合染色检测角膜内皮细胞活性、电镜检测细胞超微结构和PCNA检测细胞增殖情况.结果:加入bFGF实验组保存角膜,角膜水肿较轻、皱褶较少、透明度较高,角膜内皮细胞形态结构和活性较好(P＜0.05);并且角膜上皮、基质和内皮层有PCNA阳性细胞,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:bFGF在中期角膜保存中有促进细胞增殖、保持角膜细胞活性的作用,可应用于中期角膜保存.     

深低温长期保存免用膜内皮细胞体外培养的实验研究

观察深低温保存后兔角膜内皮细胞的活性。方法将深低温保存兔角膜与新鲜兔用膜进行内皮细胞体外培养对比观察。结果在培养７ｄ内，深低温保存的角膜内皮细胞较新鲜角膜内皮细胞滞后１－２ｄ生长，１４ｄ以后二者逐渐趋于一致。     

中期保存的兔角膜内皮细胞的形态学观察

目的　通过对兔角膜内皮细胞形态结构的观察 ,了解中期保存对内皮细胞的影响。方法　前房内注入M K液 ,全眼球保存兔角膜。在保存 1、3、5、7d后 ,分别进行角膜内皮显微镜检查、角膜内皮细胞活性染色及电镜学检查。结果　随着保存时间的延长 ,角膜内皮细胞的活性不断降低。尤其在保存 7d后 ,角膜内皮细胞存活率及六边形细胞百分率明显下降。超微结构显示细胞膜连续性破坏 ,细胞器丢失 ,细胞死亡。结论　角膜中期保存液保存角膜的最佳时间为 1～ 5d。     

VitE对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的探讨Vitamin E对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法前房内分别注入M-K液,以及含有25、50、100mol／L Vitamin E的M—K液,全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后,分别进行角膜内皮细胞活性染色以及角膜内皮显微镜检查。结果保存后实验组内皮细胞存活率高于对照组。保存后各实验组的六边形细胞百分率、细胞平均密度均较对照组高。结论在角膜中期保存液中加入一定剂量的Vitamin E,能够提高内皮细胞的抗氧化能力,延长角膜的保存时间。     

粘弹剂Viscoat前房注入湿房保存角膜的实验研究

目的研究含透明质酸钠(SH)、硫酸软骨素(CS)的粘弹剂Viscoat在角膜短期保存中的作用,以期开创一种新的角膜短期保存的方法.方法分3组.A组:兔前房内注入Viscoat 约0.25ml ;B组:兔前房内注入过滤空气约 0.25ml;C组:对照.均在湿房内4℃保存.于保存后24、48、72、96 h对角膜行大体形态和超微结构观察,活体内皮显微镜检查,苔盼蓝-茜素红染色检测角膜内皮细胞活性.结果 A组角膜保存效果最好,透明度最高,内皮细胞数最多,活性最高;B组保存效果次于A组;C组保存效果最差,各组比较有显著性差异(P<0.01).结论含SH和CS粘弹剂Viscoat在角膜短期保存中对角膜内皮细胞可起到明显的保护和稳定作用,可显著提高保存角膜的质量,延长保存时间,且方法简单易行.     

应用酶组织细胞化学技术对真空冷冻干燥保存兔角膜内皮细胞的研究

目的:探讨真空冷冻干燥保存法对于兔角膜内皮细胞活性的影响.方法:将冷冻及冻干保存兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜角膜同时行内皮细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的酶组织细胞化学染色,观察3组酶活性的差异.结果:3组样本ATPase及SDH酶组化染色均呈阳性反应.实验组与对照组间ATPase和SDH酶的平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:真空冷冻干燥保存法可使离体角膜组织保持一定的活性.与新鲜及冷冻角膜相比,冻于法有望成为一种新的角膜长期保存方法.     

深低温长期保存兔角膜穿通性移植的动物实验

在进行兔角膜深低温保存技术研究的基础上,将优选出的6种深低温保存方法应用于兔眼穿通性角膜移植动物实验。用深低温保存8～78天的兔角膜对47只兔眼做了穿通性角膜移植,术后3周植片透明为31/35,有17眼术后3个月、7眼术后10个月、4眼术后1年以上植片仍保持透明。结果表明,简易法深低温长期保存兔角膜可成功的用于穿通性角膜移植。     

真空冷冻干燥和保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

目的 :观察真空冷冻干燥和保存的兔角膜的内皮细胞活性。方法 :真空冷冻干燥和保存兔角膜后 ,检测内皮细胞密度 ,存活率。结果 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜复水后 ,角膜内皮细胞密度为 (2 339± 2 0 5 .73)个 /mm2 ,存活率 78.5 7%。结论 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持角膜内皮细胞的活性     

硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法 前房内分别注入M-K液，以及含有3μmol／L、5μmol／L、8μmol／L亚硒酸钠的M-K液后。全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后。分别行内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力检测、角膜内皮细胞活性染色、角膜内皮显微镜检查。结果 保存后实验组GSH-Px活力明显高于对照组。保存3d及5d后实验组内皮细胞存活率高于对照组。内皮显微镜显示。保存后的六边形细胞百分率各实验组均较对照组高。保存5d后实验组细胞平均密度高于对照组。结论 在角膜中期保存液中加入一定剂量的硒，能够提高内皮细胞的抗氧化能力，延长角膜的保存时间。     

深低温角膜长期保存的实验研究

角膜移植术是治疗角膜病盲的重要手段，而角膜材料的获得、保存是开展此手术的重要条件。本研究采用液氮对获得的人及兔角膜行深低温冷冻长期保存，对保存后的角膜活性进行鉴定，结果是2只人体角膜在保存3个月后其内皮细胞成活率达gO％以上。4只正常兔角膜保存162天后经光镜和扫描电镜观察，内皮细胞活性在96％以上。此实验研究证明所选用的冷冻保护剂，降温速率，复温等技术是安全可靠的，所保存的角膜同新鲜的角膜相接近，可用于临床。1材料和方法1．1材料。健康暴死人角膜2只，此角膜在人死后lh内在无菌操作下摘除眼球，4C湿房保存备用…     

体外保存兔甲状软骨活性的实验研究

目的:研究如何在体外长期保存兔甲状软骨块的活性.方法:取兔甲状软骨15块,软骨大小约5 mill×2 mill×1mm,将所取软骨块分别置于4℃,-80℃冷冻及RPMI-1640液,于37℃培养保存,于保存24 h,7,14,21,30 d时取样品,分别用HE,AB/PAS及Masson三色染色和台盼蓝排斥试验检测软骨活性.结果:用RPMI-1640培养液保存的兔甲状软骨,在整个保存期中活性保持较好,软骨细胞活性率保持在85%左右;-80℃冷冻保存7d时软骨基本失去活性,4℃保存软骨在保存30d时软骨活性明显降低.结论:与低温保存方法相比,用组织培养法能较好地保存兔甲状软骨块活性.     

U50,488H预处理及低温保存离体兔心不同时限超微结构的变化

目的探讨U50,488H预处理及低温保存对离体兔心的保存效果和不同保存时间对心肌超微结构的影响.方法健康大白兔32只,随机分成4组,每组8只.1组:低温保存4 h;2组:低温保存6 h;3组:低温保存8 h;4组:低温保存10 h.每组动物经50U,488H预处理后,离体供心均用U50,488H心肌保存液进行低温保存.用电镜观察保存后的心室肌超微结构,比较不同保存时间心肌超微结构的变化.结果兔心保存4 h和6 h时心肌细胞出现轻度损伤;在保存8 h和10 h心肌细胞呈现中度损伤.但保存10h的离体心脏再灌注后心功能的恢复与保存8 h组相比较存在明显的差异.结论U50,488H药物处理及心脏低温保存供心8 h和10 h后心肌组织均出现中度损伤,但离体兔心保存10 h再灌注后出现严重的心功能障碍,而兔心保存8 h以内的离体心脏保存效果良好.     

角膜深低温冷冻保存的实验研究

目的 :探讨复方氨基酸在角膜深低温保存中的应用价值。方法 :4 0对兔角膜随机配对分为对照组和实验组 ,对照组的冷冻保护液为 92 .5 % (V/V)人血白蛋白 (HSA)和 7.5 % (V/V)二甲基亚枫 (DMSO) ;实验组的保护液为92 .5 % (V/V)的复方氨基酸 (AA)和 7.5 % (V/V)二甲基亚枫 (DMSO)。按不同保存时间分别进行内皮细胞密度(ED)、内皮细胞存活率 (ESR)的计算及穿透性角膜移植。结果 :AA组角膜与HSA组角膜无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,在保存 1个月、3个月、6个月时 ,AA组角膜的ED和ESR分别是 ( 2 4 97± 2 2 9)个 /mm2 ,( 2 5 96± 2 0 2 )个 /mm2 ,( 2 5 4 3± 197)个 /mm2 及 ( 86.9± 2 .2 ) % ,( 88.4± 1.8) % ,( 85 .3± 2 .5 ) % ;HSA组角膜的ED和ESR分别是( 2 671± 2 0 9)个 /mm2 ,( 2 696± 2 12 )个 /mm2 ,( 2 662± 195 )个 /mm2 及 ( 89.6± 2 .4 ) % ,( 87.3± 1.9) % ,( 86.7±2 .1) % ;各行 10例穿透性移植后两组角膜的植片透明率都是 80 %。结论 :复方氨基酸可代替人血白蛋白应用于角膜的深低温保存     

两种方法保存同种异体髌腱移植重建膝关节交叉韧带的光镜电镜观察

目的从实验角度观察采用程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存同种异体髌腱及移植重建膝关节交叉韧带后的组织学变化,为临床同种异体腱移植提供理论依据。方法分别将兔的1/2骨-髌腱-骨复合体经程序冷冻液氮保存2周和-80℃深低温保存2周后,观察冻存变化差异并行同种异体移植重建前交叉韧带,分别于术后3周和8周在光镜和电镜下观察其组织学变化。结果光镜和电镜下可见,经程序冷冻液氮保存方法处理后,冷冻损伤较-80℃深低温保存方法轻微; -80℃深低温保存组和程序冷冻液氮保存组的移植物在术后愈合过程中的组织学行为均与自体移植组相似,而程序冷冻液氮保存组更接近于自体移植组。结论经程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法冻存的兔异体髌腱重建膝关节交叉韧带后愈合过程和自体韧带移植重建过程相似,但程序冷冻液氮保存法优于传统的-80℃深低温保存法。     

X-J超级化心脏保存液的研制及作用效果

目的研究和探讨含尼可地尔的X-J超级化心脏保存液对离体兔心低温保存的有效时限和保存效果.方法将32只健康成年兔平均分成4组,每组动物摘取心脏后用X-J超级化液进行低温保存离体供心;Ⅰ组,离体供心低温保存4 h;Ⅱ组低温保存6h;Ⅲ组低温保存8h;Ⅳ组低温保存10 h.采用离体工作心模型,观察保存前后离体兔心的心功能、心肌细胞Ca2 、Ca2 -ATPase活性,心肌肌钙蛋白Ⅰ、心脏冠脉流量、心肌含水量及超微结构的变化.结果随着离体心脏低温保存时间的延长心功能遂渐减弱,心肌细胞Ca2 浓度升高,Ca2 -ATPase活性降低,心肌含水量增加.在低温保存4～6h心肌超微结构均呈轻度损伤;在低温保存8h和10 h心肌超微结构变化呈中度损伤.结论 X-J超级化保存液对离体心脏低温4h、6h保存效果与保存前无差异.8h、10h组分别与6h组相比保存效果有明显差异.     

深低温保存角膜缘干细胞活性实验研究

目的：评价深低温冷冻保存兔眼角膜缘干细胞活性。方法：１２只（１２眼）新西兰白兔，制备２ｍｍ周边角膜和２ｍｍ球结膜的环形浅层角膜缘植片及解膜干细胞缺乏眼表疾病模型。角膜缘植片通过程序温仪程序降温后－１９６℃深低温保存，３０天和６０天后行角膜缘自体移植。组化及免疫组化证实深低温保存的角膜缘干细胞活性。结果：角膜干细胞缺乏导致角膜上皮愈合延迟，上皮结膜化，ＰＡＳ染色阳性，ＡＥ５染色弱阳性；基质水肿，角膜