急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞TSP1表达及凋亡的意义

目的：应用颅骶疗法治疗颅脑和脊柱损伤及其后遗症,探讨颅骶疗法对于经络功能的调节作用.方法：颅脑损伤和脊柱损伤患者1例,采用颅骶疗法治疗,分别于治疗前和治疗后用经络检测仪评价经络功能状态.结果：治疗后患者在肝胆脏腑功能和胃经功能均有改善.结论：颅骶疗法通过调节不同经络的功能,对颅脑和脊柱损伤及其后遗症的康复具有明显的促进作用.     

急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞TSP1表达及凋亡的意义

急性肾衰(acute renal failure,ARF)的发病机制尚不清.研究表明,肾小管上皮细胞的凋亡在多种肾脏病中发挥重要作用,TSP1的表达异常参与多种细胞凋亡的调控.但是ARF时肾小管上皮细胞的凋亡、TSP1的表达尚不清楚.为此,我们利用甘油诱导大鼠ARF,观察ARF时肾小管上皮细胞的凋亡及TSP1的表达情况,并利用纯化的TSP1与大鼠肾小管上皮细胞体外共同培养后检测肾小管上皮细胞凋亡.旨在探讨二者在ARF发病中的意义.     

肾茶黄酮对急性肾衰中肾小管上皮细胞保护作用的研究＊

目的 探究肾茶黄酮对急性肾衰中肾小管上皮细胞保护作用。方法 甘油制备大鼠急性肾衰模型，检测成功后提取肾小管上皮细胞，分为模型组、（100、200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组，其中（100、200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组分别添加对应剂量肾茶黄酮，对照组未经处理的正常肾小管上皮细胞，对照组和模型组正常培养。分别在培养（0、3、6、12、24、36） h Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力；各组细胞处理24h流式细胞术检测细胞凋亡能力，超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒、丙二醛（MDA）检测试剂盒分别检测SOD活性、MDA水平，蛋白免疫印迹（WB）检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3、caspase9、B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、Bcl-2相关X蛋白（BAX）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Sma和Mad相关蛋白3（Smad3）蛋白水平。结果 与对照组相比，模型组在细胞培养（3、6、12、24、36）h OD₄₅₀降低（P < 0.05）；与模型组相比，（200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组在细胞培养6h OD₄₅₀升高（P < 0.05）；（300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组在细胞培养（12、24、36）h OD₄₅₀升高（P < 0.05）。各组细胞处理24h，与对照组相比，模型组SOD活性、细胞凋亡率，caspase3、caspase9、BAX、TGF-β1、Smad3蛋白水平升高（P < 0.05），MDA活性、BCL2蛋白水平降低（P < 0.05），随着剂量的升高，各组呈剂量依赖性变化。与模型组相比，（100、200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组细胞凋亡率，SOD活性，BCL2、TGF-β1、Smad3蛋白水平降低（P < 0.05），MDA活性、caspase3、caspase9、BAX蛋白水平升高（P < 0.05），呈剂量依赖效应。结论 肾茶黄酮可促进急性肾衰中肾小管上皮细胞增殖、抑制凋亡，抑制氧化应激，抑制促凋亡蛋白的表达从而减缓急性肾衰肾小管上皮细胞的损伤。     

急性重症肾小管坏死性肾衰治验1则

<正> 1987年本人运用了中药肾衰1号方治疗急性肾小管坏死性肾功衰1例,疗效显著,痊愈出院,现介绍如下。 王某,男,41岁,农民。初因左股骨骨折,左小腿撕裂伤收入骨科住院。经清创、缝合及抗感染治疗,皮肤撕裂伤无感染,Ⅰ期愈合,左股骨经骨牵引及小夹板外固定等治疗,骨折对位良好,对线尚可,已有部分骨痂形成。一般情况良好。患者住院1月后,无明显诱因,急骤起病,突发高热(T40℃),无汗,伴呕吐,乏力,面颈上胸充血,球结膜充血,咳嗽无痰,不伴气紧,喘促,发绀等,经用PNC等抗感染治疗3d无效,上证加重并伴无尿而转入急症科治疗。入我科时患者证见头痛,腰痛,畏寒,发热(T40.6℃)伴乏力,恶心呕吐频繁,呕吐物为淡咖啡色,黑便,口渴明显,面颈,上胸部皮肤潮红,如酒醉样,尿闭,24h无尿。PE:T40.6℃,P113次/min,R18次/min,BP16/10。     

人参皂苷Rg1对尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷的单体成分Rg1对尿蛋白(Upro)诱导的肾小管上皮细胞HK2凋亡的作用及机制.方法:体外培养的HK2细胞,用MTT法选择尿蛋白诱导HK2细胞凋亡的适合浓度,将肾小管上皮细胞HK2分为对照组、模型组、Rg1+Upro组、肝细胞生长因子(HGF) +Upro组,检测线粒体膜电位(JC-1)及Rg1的干预作用.结果:一定浓度的尿蛋白能够诱导HK2细胞凋亡,而人参皂苷Rg1能稳定HK2细胞的线粒体膜电位,显著抑制尿蛋白诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论:肾小管上皮细胞凋亡是尿蛋白损伤的一种重要形式,人参皂苷Rg1可以稳定细胞线粒体膜电位,从而抑制尿蛋白诱导细胞凋亡而起到肾小管上皮细胞的保护作用.     

杏丁对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的 观察杏丁对过氧化氢 (H2O2) 诱导肾小管上皮细胞(NRK52E)凋亡的抑制作用及其作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞分成:对照组,H2O2(400μmol/L),杏丁+ H2O2组,杏丁组,各组细胞培养至80%～90%汇合时加入相应药物干预,采用H2O2诱导肾小管上皮细胞凋亡模型,用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并采用 RT-PCR 检测Survivin mRNA表达.结果 杏丁可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,并降低细胞凋亡率,增加Survivin mRNA表达.结论 杏丁显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,其抗细胞凋亡作用可能与其增加Survivin表达活化有关.     

高浓度氨基酸对人肾小管上皮细胞的影响

目的体外观察高浓度氨基酸对肾小管上皮细胞（HKC）的影响。方法高浓度氨基酸对HKC体外干预,监测干预后转化生长因子-β1（TGF-β1）和血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）的变化。结果高浓度氨基酸干预HKC,实验组与对照组相比,TGF-β1含量增多,表达AT1R上调。结论高浓度氨基酸可以诱导HKC分泌TGF-β1增多,增加AT1R表达。     

人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响

目的:研究人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响。方法:人肾小管上皮细胞株(HK-2)常规培养,随机分为两组,实验组加入5μg/ml的Rbl,对照组加入等量的培养基,药物作用20min,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster 2D Platinum v5.0软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,实验组的2-DE图谱共检出蛋白斑点为429个,其中236个为表达增强的蛋白斑点;经质谱鉴定的与Rbl作用相关的4个差异表达的蛋白斑点包括:普通转录因子ⅡH亚基1变体、双链断裂修复蛋白rad-21同源物、富含亮氨酸重复序列蛋白-45、DNA依赖性蛋白激酶,它们均属于磷酸化蛋白质。结论:Rbl作用于人肾小管上皮细胞的表达蛋白质组与对照组相比较存在明显的差异;Rbl对人肾小管上皮细胞的作用极有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来实现的。     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的]研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法]传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200μg/m L),每组设3个复孔。将细胞置于37℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果]24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20μg/m L细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。     

中医药对肾小管上皮细胞转分化影响研究进展

肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）是肾间质纤维化的重要发病机制之一，在此基础上，出现间质区细胞外基质（ECM）大量产生和沉积，导致间质区扩展加宽，肾小管萎缩，形成间质纤维化。研究表明：EMT是一个非常复杂的过程，受许多生长因子、细胞因子、细胞外基质的调节。因此，阻止EMT日益被认为是防治肾间质纤维化的重要环节。     

银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及发生机制。方法采用500μmol/L浓度的过氧化氢(H2O2)作用于对数生长期的肾小管上皮细胞(NRK52E),建立细胞氧化损伤模型。银杏提取物EGB761分为高中低3个浓度组进行干预,应用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞术检测肾小管上皮细胞的凋亡率,RT-PCR检测Caspase-3基因的表达差异。结果与过氧化氢组比较,高、中浓度组银杏提取物EGB761的凋亡阳性率均明显降低,而低浓度组虽有减少趋势但无显著性差异;高、中浓度组银杏提取物EGB761的Caspase-3表达阳性率较过氧化氢组明显降低,且随着浓度的增加而表达逐渐减少(P0.05)。结论银杏提取物EGB761可以拮抗过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的效应,其机制估计与下调Caspase-3的表达有关。     

人肾小管上皮细胞HK-2的培养及生长曲线测定

目的 :通过细胞计数法绘制人肾小管上皮细胞株HK-2细胞的生长曲线,了解HK-2细胞的生长特性,为相关实验研究提供参考。 方法 :将HK-2 细胞用含 10 % 胎牛血清的 DMEM / F12(1 ∶1)培养基培养,每隔24 h在倒置显微镜下观察细胞生长范围,并进行计数,连续观察7 d后,以存活细胞数(万／mL)对培养时间(h或d)作图,即得生长曲线。 结果 :细胞呈立方形铺路石样贴壁生长,细胞间连接紧密。细胞数目在培养第2 d开始增加,但在第1~3 d增加缓慢,第3~6 d 细胞数目急剧增加,并进入指数生长期,在第6 d时细胞达到饱和密度(100%),在第7 d时细胞数目显著下降。 结论 :在1~3 d细胞生长处在潜伏期,3~6 d细胞进入大量分裂的指数生长期,第6 d达到饱和后,细胞生长则进入衰退期。     

复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响

目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5ng/mL+复.肾颗粒100 μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500 μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL).培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达.结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01).结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.     

肾衰泻浊汤对慢性肾衰大鼠肾小管间质损伤的作用

目的 :探讨肾衰泻浊汤对慢性肾衰模型大鼠肾小管间质损伤的抑制作用。方法 :将 5 0只由腺嘌呤诱导慢性肾衰的大鼠模型分为 5组 ,4个治疗组予以肾衰泻浊汤防治 ,分析对比各组大鼠血THP浓度、尿NAG排泄量及肾组织PCNA阳性细胞数 ,评定肾小管间质病理损伤情况。结果 :各治疗组大鼠血THP浓度明显提高 ,尿NAG排泄量及肾组织PCNA阳性细胞数目明显降低 (P <0 .0 5 ) ,肾小管间质病理损伤有所改善。且血THP与Scr ,BUN呈显著负相关 ,尿NAG与SCr呈显著正相关。结论 :肾衰泻浊汤防治慢性肾衰的机制可能与抑制肾脏细胞增殖、减轻肾小管间质的病理损伤有关。     

人参皂苷Rg1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2中炎症反应和纤维化的影响及可能的机制。方法 细胞计数法(CCK-8)检测不同浓度人参皂苷Rg1对细胞活性的影响。HK-2细胞随机分为正常对照组、高糖组、低、高人参皂苷Rg1组。ELISA检测TNF-α和IL-1β,Western blot分析α-SMA、E-cadherin、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达情况。结果人参皂苷Rg1对HK-2细胞无明显毒性作用。与正常对照组相比,高糖组TNF-α和IL-1β含量升高(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平上调(P 0.05),E-cadherin的表达水平下调(P 0.05);与高糖组相比,低、高人参皂苷Rg1组TNF-α和IL-1β含量降低(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平下调(P 0.05),E-cadherin的表达水平上调(P 0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制HG诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和EMT来阻碍肾纤维化进展,其机制可能与阻断TGF-β/Smad信号通路有关。     

苗药痛风停汤对人肾小管上皮细胞hUAT、hURAT1基因表达的影响

目的:观察不同浓度苗药痛风停汤兔含药血清对人肾小管上皮细胞尿酸盐转运体(h UAT)mRNA和尿酸盐阴离子转运体1(h URAT1)mRNA表达的影响。方法:建立肾小管上皮细胞模型,分为苗药痛风停汤高、中、低剂量组和苯溴马隆组、空白组;采用清洁级新西兰制备含药血清家兔,以高、中、低剂量苗药痛风停汤兔含药血清、苯溴马隆兔含药血清、0.9%氯化钠注射液兔含药血清干预,采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞中h UAT、h URAT1 mRNA的相对表达量(双标准曲线法)。结果:与空白组比较,苗药痛风停汤高、中、低剂量组h UATmRNA表达水平均增高,h URAT1mRNA表达水平均下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:苗药痛风停汤对体外培养的HK-2细胞h UAT、h URAT1mRNA的表达有调控作用,在mRNA水平上上调h UAT、下调h UART1的表达可能是苗药痛风停降尿酸的作用机制之一。     

益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用

目的:研究益肾软坚散含药血清能否拮抗马兜铃酸(aristolochicacid,AA)诱发的人近端肾小管上皮细胞株(HKC)促纤维化效应。方法:用马兜铃酸钠盐(AA Na,40mg·L^-1)加或不加10%大鼠含药血清与HKC细胞孵育,而后检测信使RNA(mRNA)和蛋白质表达。结果:大鼠含药血清能显著下调AA Na刺激后HKC细胞对转化生长因子β1(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)mRNA及蛋白质的高表达(P<0.05),但对纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)mRNA及蛋白质高表达无显著作用(P>0.05)。结论:益肾软坚散含药血清可下调AA刺激的HKC细胞促细胞外基质(ECM)合成因子及抗ECM降解因子的表达。     

醋酸铅致大鼠肾小管上皮细胞凋亡及中药干预作用

目的:探讨核因子ΚB p65(NF-ΚB p65)、p53在铅中毒导致的大鼠肾小管凋亡细胞的高表达及中药的干预作用。方法:40只大鼠随机分为5组:对照组、病理组、中药高、低剂量组、依地酸钠钙(EDTA)组。除对照组外,其他4组饮水中均添加0.02%醋酸铅,中药高剂量组(3.5g.kg-1.d-1)、低剂量组(0.7g.kg-1.d-1)灌服驱铅丸,EDTA组以每日EDTA加普鲁卡因按50.0mg/kg肌肉注射。连续60天后观察肾组织的细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织NF-ΚB p65、p53 mRNA表达;免疫组化方法检测肾组织NF-ΚB p65蛋白表达,WesternBlot方法检测肾组织p53表达。结果:经统计,与对照组比较,病理组细胞凋亡、NF-ΚB p65及p53 mRNA和蛋白表达均显著增高(P<0.01),与病理组比较,各干预组尿铅、血铅含量显著降低(P<0.05),中药高、低剂量干预组肾小管上皮细胞凋亡显著降低(P<0.01),NF-ΚB p65及p53 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:铅通过诱导的大鼠肾小管上皮细胞NF-ΚB p65、p53高表达而促进细胞凋亡,中药驱铅丸能抑制NF-ΚB p65、p53的表达增高而减轻肾小管凋亡程度。     

镰形棘豆总黄酮含药血清对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞VEGF mRNA表达的影响

目的:通过观察镰形棘豆总黄酮含药血清干预转化生长因子β1(TGF-β_1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化细胞因子——血管内皮生长因子(VEGF)m RNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为4组:空白对照组、TGF-β_1诱导组(TGF-β_110 ng/m L)、空白血清对照组(TGF-β_110 ng/m L+10%空白血清)、镰形棘豆总黄酮组(TGF-β_110 ng/m L+10%镰形棘豆总黄酮含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测VEGF m RNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β_1诱导后,VEGF m RNA的表达显著上升,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),经镰形棘豆总黄酮药物血清干预后,VEGF m RNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β_1诱导组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子VEGF的m RNA表达有关。