缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子在体外缺氧培养神经元中的表达及意义

目的研究体外培养的新生大鼠皮质神经元缺氧不同时间后缺氧诱导因子(HIF)1α及血管内皮生长因子(VEGF)的表达规律及意义。方法体外培养的新生大鼠皮质神经元于厌氧培养箱中缺氧0、2、4、8 h,用Western blot及real time PCR检测缺氧不同时间后神经元HIF-1α及VEGF mRNA及蛋白的表达。结果常氧培养的神经元中几乎不表达HIF-1α,VEGF表达较低;缺氧2 h后,神经元中HIF-1α及VEGF mRNA表达均显著增加;缺氧4 h后两者mRNA及蛋白表达最高;缺氧8 h后表达降低。结论缺氧增加神经元中HIF-1α及VEGF的表达,随着缺氧时间的增加呈先升高后降低的趋势。     

The expression and significance of HIF-1α and VEGF in hypoxic neurons

目的 研究体外培养的新生大鼠皮质神经元缺氧不同时间后缺氧诱导因子(HIF)1α及血管内皮生长因子(VEGF)的表达规律及意义.方法 体外培养的新生大鼠皮质神经元于厌氧培养箱中缺氧0、2、4、8 h,用Western blot及real time PCR检测缺氧不同时间后神经元HIF-1α及VEGF mRNA及蛋白的表达.结果 常氧培养的神经元中几乎不表达HIF-1α,VEGF表达较低;缺氧2 h后,神经元中HIF-1α及VEGF mRNA表达均显著增加;缺氧4 h后两者mRNA及蛋白表达最高;缺氧8 h后表达降低.结论 缺氧增加神经元中HIF-1α及VEGF的表达,随着缺氧时间的增加呈先升高后降低的趋势.     

铁离子螯合剂对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织缺氧诱导因子1α表达的调节及机制

目的 探讨铁离子螯合剂(DFO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的调节作用及机制.方法 以10日龄SD大鼠48只为研究对象,分为假手术组、缺氧缺血(HI)组、DFO干预组和9 g·L-1盐水对照组,每组分为缺氧后 4 h、8 h及24 h 3个亚组,参照Rice模型制作HIBD动物模型,并经腹腔内注射DFO及9 g· L-1盐水干预.应用Western blot法检测分析其HIF-1α、Akt及p-Akt蛋白表达.RT-PCR检测分析HIF-1α mRNA表达.结果 HI组HIF-1α蛋白4 h 即明显增多,8 h达高峰,24 h开始下降,9 g·L-1盐水对照组与HI组有相同变化.而DFO干预组4 h达高峰,8 h及24 h仍在较高水平,与HI组比较各时间点HIF-1α蛋白表达均增多,差异均有统计学意义(Pa<0.05).DFO干预组和HI组各时间点HIF-1α蛋白表达与假手术组比较均增高(Pa<0.05).HI组与DFO干预组各时间点Akt蛋白表达无明显差异(P>0.05),2组p-Akt蛋白表达有相同趋势,缺氧 4 h HI组与DFO干预组p-Akt蛋白表达无显著性差异.然而与HI组比较,DFO组HIF-1α mRNA表达均有增加.结论 在新生鼠HIBD时,DFO可上调HIF-1α蛋白及mRNA表达,使HIF-1α蛋白表达高峰时间提前,且持续时间延长,在此过程中PI3K/Akt信号通路未参与DFO对HIF-1α的调节.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤时铁离子螯合剂对HIF-1α的调节作用

目的探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时铁离子螯合剂(DFO)对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的调节作用,以期寻找缺氧缺血性脑损伤的治疗策略。方法以生后10日龄SD大鼠为研究对象,制作HIBD动物模型,并经腹腔内注射DFO及生理盐水(NS)干预。应用Western blot分析检测HIF-1α蛋白表达,RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达水平。结果缺氧缺血组HIF-1α蛋白4h即明显增多,8h达高峰,24h开始下降。NS干预组与缺氧缺血组有相同的变化。而DFO干预组则4h达高峰,8h及24h仍在较高水平,与缺氧缺血组比较,各时间点HIF-1α蛋白表达均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。各组各损伤时间点HIF-1α蛋白表达与对照组比较均有增高(P<0.05)。缺氧缺血组与DFO干预组比较,各时间点HIF-1α mRNA表达均有增加。结论在新生鼠缺氧缺血性脑损伤时,DFO可上调HIF-1α的蛋白及mRNA表达,使HIF-1α蛋白表达高峰时间提前且持续时间延长。     

缺氧缺血新生大鼠海马缺氧诱导因子1α和促红细胞生成素的表达

目的探讨新生鼠缺氧缺血后海马缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达。方法对7日龄SD新生大鼠结扎左侧颈总动脉并暴露在低氧环境建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,以及单纯持续暴露在低氧环境建立低氧诱导模型。新生大鼠HIBD后0、1、6、16h和1、3、7天,用免疫组织化学染色观察海马HIF-1α和EPO的表达情况。低氧诱导0.5、1、2、3、5h后免疫组织化学染色法观察海马HIF-1α的表达。结果 HIBD组随复氧时间的延长,海马CA1区EPO阳性细胞计数先增加后降低,16h最高,差异有统计学意义(P<0.001),对照组各时间点差异无统计学意义(P>0.05);HIBD组各时间点EPO阳性细胞数均高于对照组(P<0.001)。HIBD组缺氧缺血后即刻(0h)海马齿状回见少量HIF-1α阳性细胞,复氧后各时间点和对照组均未见HIF-1α阳性细胞;持续暴露在低氧环境0.5h,HIF-1α开始表达,至3h时HIF-1α表达达高峰。常氧对照组未见HIF-1α表达。结论新生大鼠HIBD后内源性EPO分泌增加,低氧可诱导HIF-1α表达,推测HIF-1α/EPO缺氧信号转导系统可能参与缺氧缺血后海马神经元形成。     

缺氧缺血后新生大鼠海马组织CA1区脑源性促红细胞生成素的表达

目的观察缺氧缺血（HI）后新生大鼠海马CA1区脑源性促红细胞生成素（EPO）的表达,探讨HI后新生大鼠内源性因素激发海马神经发生上调的可能机制。方法选用144只7日龄SD大鼠,随机分为4组：正常对照组（C组）、单纯缺氧组（H组）、单纯缺血组（I组）、缺氧缺血组（HI组）,每组又分为1h、6h、16h、1d、3d和7d共6个时间点。分别对其行HE染色和EPO免疫组织化学法CA1区脑源性EPO表达。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果C组各时间点CA1区EPO表达无明显差异（F=1.185P〉0.1）,其余各组各时间点差异显著[F（H组）=33.57,F（I组）=133.6,F（HI组）=69.75Pa〈0.001];HI后16h,海马CA1区脑源性EPO表达达到较高水平,与该组总体比较差异显著（t=13.08P〈0.001）,以后随时间延长逐渐下调;H组、I组、HI组与C组比较差异均有显著意义（q=32.06,23.84,47.12Pa〈0.001）。结论脑源性EPO表达在新生大鼠HI后增加,受低氧影响最明显;EPO表达高峰在缺氧早期,推测低氧、EPO早期高表达可能是参与海马神经发生的内源性因素之一。     

新生鼠脑缺血预处理后缺氧诱导因子-1 mRNA的表达及意义

目的观察脑缺血预处理对新生Wistar大鼠海马CA1区缺氧诱导因子-1(HIF-1)mRNA表达的影响,以及在缺氧缺血脑损伤内源性保护机制中的作用。方法通过阻断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉制备脑缺血模型,设置假手术组、缺血再灌注组和预缺血-缺血再灌注组;应用原位杂交方法和计算机图像分析技术检测新生鼠脑缺血再灌注后不同时点脑组织HIF-1mRNA的表达。结果预缺血-缺血再灌注组和缺血再灌注组于再灌注3h后HIF-1mRNA表达开始增多,以预缺血-缺血再灌注组升高更明显,12h开始下降,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05),24h后降至假手术组水平。预缺血-缺血再灌注组脑神经细胞有轻微水肿和少量神经细胞坏死,缺血再灌注组以神经细胞坏死为主。结论脑缺血再灌注早期可诱导神经细胞HIF-1mRNA表达增多;经脑缺血预处理后HIF-1mRNA表达较单纯脑缺血再灌注组升高更明显;HIF-1表达可能与脑缺血后神经细胞的内源性保护机制有关,脑缺血预处理对再次严重的脑缺血有保护作用。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡影响

目的研究参附注射液对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠海马神经元凋亡的影响。方法实验分成两部分：1.流式细胞术检测缺氧缺血（HI）前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元凋亡率;2.免疫组织化学测HI前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bcl-2、Bax蛋白表达。建立新生大鼠HIBD模型。每组实验随机分为4组：假手术组（S）,9 g/L盐水对照组（C）,参附预处理组（P）,参附治疗组（SF）。结果SF和P组海马神经元凋亡情况明显低于C组（P〈0.01,〈0.05）,且Bcl-2表达显著增多（P〈0.05,〈0.01）,而Bax表达明显下调（P〈0.05,〈0.01）。结论参附注射液可明显上调新生大鼠HIBD后海马神经元Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少HIBD新生大鼠海马神经元凋亡发生。     

核转录因子FOXO3a在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用

目的：探讨核转录因子FOXO3a在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡中的作用及机制。方法：160只10日龄SD大鼠随机分为缺氧缺血（HI）组和假手术组,HI组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎后缺氧2.5?h;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理。两组在HI后0.5?h、2?h、4?h、8?h和24?h各处死16只大鼠取大脑皮层。应用Western blot定量检测FOXO3a总蛋白、胞核FOXO3a蛋白、胞浆FOXO3a蛋白及Bim蛋白表达。应用TUNEL染色法检测凋亡细胞。结果：与假手术组比较,HI组胞核FOXO3a蛋白于HI后0.5 h表达开始增高,随HI时间延长表达逐渐增高,24?h达高峰（P<0.01）;胞浆FOXO3a蛋白水平在HI后各时间点均低于假手术组（P<0.01）;Bim蛋白在HI后0.5 h表达升高,2?h达高峰,4?h开始降低,至8?h开始恢复至基线水平。TUNEL染色结果显示HI后4 h,凋亡细胞开始增多,24?h达高峰,各时间点凋亡指数均高于假手术组（均P<0.01）。结论：新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时FOXO3a自胞浆转位入胞核,诱导靶基因前凋亡蛋白Bim表达,Bim表达上调可能与神经元凋亡有关。     

不同葡萄糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑病理改变的影响

目的电镜下观察葡萄糖水平对缺氧缺血（HI）新生大鼠脑皮质和海马病理改变的影响。方法7日龄SD新生大鼠随机分为单纯HI组、HI前高血糖组、HI前低血糖组以及正常对照组。各组于HI后72h断头处死,脑组织置2%戊二醛溶液中固定,透射电镜下待检。结果单纯HI主要引起海马部位的病理改变,皮质病变相对轻微。HI前低血糖组的脑病理改变呈进一步加剧,海马部位多见神经元坏死,皮质及海马神经元内线粒体空泡变明显,核周细胞器减少或消失。HI前高血糖组的脑病理改变明显轻于单纯HI组和HI前低血糖组,未见神经元坏死,仅表现为线粒体轻度肿胀以及胶质细胞明显增生。结论HI前低血糖可进一步加剧新生大鼠的脑缺氧缺血损害,HI前高血糖则可明显减轻新生大鼠脑缺氧缺血损伤.     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元特异性烯醇化酶的影响

目的 研究神经生长因子（NGF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用。方法 应用新生7日龄SD大鼠制备HIBD模型,于缺氧缺血（HI）后即刻腹腔注射NGF 100U／只或等量生理盐水,用放射免疫法测定缺氧缺血后24、48h血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平,用免疫组化法检测脑组织NSE蛋白表达变化。结果 NGF可降低血清NSE,增加左侧（缺血侧）脑组织中NSE蛋白水平表达。结论 腹腔注射NGF对HIBD具有保护作用。     

钙蛋白酶抑制剂3对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨钙蛋白酶抑制剂3（MDL 28170）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用及机制。方法将新生7dSD大鼠随机分为对照组、HIBD组及钙蛋白酶抑制剂．3治疗组（MDL组）,分别于HI后6、24、72h取材,采用实时荧光定量PCR技术检测μ-calpain mRNA变化,免疫印迹法检测μ-calpain及caspase-3活性蛋白表达,TUNEL法观察大脑皮质凋亡细胞数;并计数HI后24h海马CA1区神经元死亡数。结果脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA在6h即增高,24h达到高峰（P〈0．05）;μ-calpain蛋白质的活化片段76000与总片段80000比值6h即高于对照组（P〈0．05）,24h达到高峰（P〈0．01）,72h仍处于较高水平（P〈0．05）;caspase-3活性蛋白质在HI后24h达到高峰（P〈0．01）,72h降至对照组水平（P〉0．05）;损伤侧大脑皮质凋亡细胞随着时间延长逐渐增多,24h达到高峰,72h与对照组差异仍有统计学意义（P〈0．01）;24h时HIBD组CA1区神经元死亡数显著高于对照组（P〈0．01）。予MDL 28170干预后,MDL6h及24h组μ-calpain及caspase-3活性蛋白质表达、凋亡细胞数均较同时间点HIBD组减少（P〈0．05）,同时24h CA1区神经元死亡数明显减少（P〈0．05）;MDL28170虽然能降低μ-calpain mRNA的表达量,但与HIBD组相比差异不明显（P〉0．05）。结论HI后μ-calpain基因及蛋白质表达增加,参与了HIBD的发生;钙蛋白酶抑制剂-3可通过抑制μ-calpain及caspase-3蛋白质表达,对抗细胞坏死和凋亡,发挥脑保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠核因子κB表达与脑细胞凋亡的关系

目的观察核因子κB（NF—κB）在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑细胞凋亡中的表达，探讨其HIBD后NF—κB与细胞凋亡的关系。方法新生7日龄SD大鼠48只，随机分为2组：假手术组和缺氧缺血（HI）模型组，各24只。HI组大鼠采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型，分别于手术后6、24、48、72h取脑组织切片，用免疫组织化学方法检测NF—κB在海马区的表达、TUNEL方法检测神经细胞凋亡。假手术组不作缺氧缺血处理，采用同样方法检测NF—κB。结果假手术组海马区有少量NF—κB表达，且有少量凋亡细胞，各时间点无明显变化（Pa〉0．05）；HI组NF—κB的表达在6h后开始增加，48h达高峰，并持续至72h（P〈0．05），与假手术组相比较差异有统计学意义（Pa〈0．05）；细胞凋亡在6h即开始增加，在24、48、72h逐渐增加，随时间变化差异有统计学意义（Pa〈0．05），与假手术组相比差异有统计学意义（Pa〈0．05）；直线相关回归分析HI组NF—κB表达与细胞凋亡呈显著正相关（各时点的r=0.478，0.552，0.641，0.627 Pa〈005．缩诊HTBn后NF—κB在海马区的持续活化对促进神经细胞凋亡起重要作用。     

脉络宁抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤作用及其机制探讨

目的 研究新生SD鼠缺氧缺血后大脑皮质谷氨酸和天冬氨酸的变化，观察脑神经元型一氧化氮合酶（nNOS）和c-fos蛋白的表达，探讨脉络宁对缺氧缺血性脑损伤（HIBO）的保护作用。方法 结扎新生7日龄SD大鼠右侧颈总动脉1h（缺血1h），吸入8％氧和92％氮2h（缺氧2h），建立HIBD模型。用色谱分析仪测定大脑皮质内谷氨酸和天冬氨酸含量，用免疫组化方法动态评价缺氧缺血和脉络宁治疗不同时相c-fos蛋白和nNOS的表达。结果 缺氧缺血后大脑皮质兴奋性氨基酸（ZAA）水平升高，经脉络宁处理后则明显降低。c-fos蛋白表达的高峰期呈现在缺氧缺血6h后，与缺氧缺血组相比，脉络宁处理后c-fos蛋白表达的脑神经元数目增多；与假手术组相比，缺氧缺血可上调nNOS的表达水平，脉络宁处理后则减少了nNOS的表达。结论 脉络宁通过改善神经元功能减少EAA的释放，调节nNOS的免疫活性，对神经元起保护作用。脉络宁可增强和延长神经元内c-fos蛋白的表达，减轻HIBD，推测c-fos参与了缺氧缺血后大脑皮质和海马神经元损伤后的修复、存活与再生。     

新生大鼠缺氧缺血脑组织缺氧诱导因子1α的表达及其与神经元凋亡关系的研究

缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是缺氧诱导细胞所产生的一种转录因子,其α亚单位(HIF—1α)对缺氧具有特异性感受,且在缺氧诱导的细胞凋亡中起关键作用。近年来,国外在成年鼠脑缺氧缺血时,对HIF—1α mRNA的表达做过一些研究,但尚未发现新生鼠脑缺氧缺血后HIF—1α mRNA表达变化规律及其与神经元凋亡的关系。     

HIF-1α在青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应机制中的作用

目的 探讨慢性缺氧对先天性心脏病患儿心脏缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响.方法 收集非青紫型先天性心脏病患儿16例、青紫型先天性心脏病患儿12例,体外循环前留取右心耳组织,采用半定量RT-PCR方法 检测右心耳组织中HIF-1α mRNA水平,用免疫组织化学方法 检测右心耳组织中HIF-1α蛋白的表达.结果 青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α mRNA相对表达量与非青紫组比较差异无统计学意义(P>0.05),青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达量与非青紫组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 慢性缺氧上调先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达,该作用可能参与介导青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应的分子机制.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内质网应激相关因子的表达

目的 观察内质网应激相关因子氧调节蛋白150(ORP150)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑皮质内的表达,探讨内质网应激在新生大鼠HIBD中的作用.方法 新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组和缺氧缺血(HI)组.每组按照观测的时间点不同分为3h、6h、12h、24h、3d、7d6个亚组,每个亚组8只.在每个时间点将大鼠断头后取皮质脑组织匀浆,用Western blot方法检测不同时间点其脑皮质ORP150及CHOP的动态变化.用原位末端标记法检测相应时间点光镜下其脑皮质组织的凋亡细胞数.结果 1.HI组CHOP表达水平在HIBD后各时间点均高于假手术组(P＜0.05),且在24h达到高峰;ORP150表达水平在完成HIBD后3h开始增加,6h达到高峰,后逐渐下降,7d时与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).2.HI后3h,HI组即发现结扎侧脑皮质有少量的凋亡细胞,随着HI时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24h达到高峰后下降.3.CHOP的表达变化与神经细胞凋亡时间趋势呈正相关(r=0.911,P＜0.05).结论 HIBD诱发了内质网应激,可能通过上调ORP150表达参与启动末折叠蛋白反应过程,而通过上调CHOP表达诱导神经细胞凋亡的发生.     

刺五加皂甙诱导PCI2细胞对缺血的耐受与缺氧诱导因子-1α的表达

目的研究刺五加皂甙（ASS）预处理诱导PCl2细胞对缺血的耐受及缺氧诱导因子．1α（HIF-α）的表达。方法采用氧葡萄糖剥夺（OGD）方法在PCl2细胞上建立缺血模型。用MTT、比色分析法观察ASS预处理是否对缺血的PCl2细胞有保护作用及JC保护作用能否被P13K抑制剂LY294002所阻断。用Westem-blot法检测PCl2细胞予ASS预处理后磷酸化糖原合成激酶．3β（p-GSK-3β）和HIF-1α的表达及其表达诱导作用是否被LY294002所抑制。结果MTT结果显示，缺血9h处理后，PCl2细胞活力明显降低（P〈0．05）；ASS预处理对细胞具有保护作用，细胞活力有明显增加（F=552．6 P〈0．01）；ASS保护作用可被LY294002处理部分阻断，细胞活力有部分降低（P〈0．01）与正常对照组比，ASS预处理后p-GSK-3β和HIF-1α蛋白的表达均明显增加。ASS表达诱导作用可被LY294002处理所抑制，p-GSK-3β表达明显减少，HIF-1α表达部分减少。结论ASS预处理可诱导PCl2细胞对缺血的耐受；ASS预处理诱导PCl2细胞表达的HIF-1α蛋白可能与P13K／Ak／GSK-3信号通路的激活有关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血管内皮生长因子表达与新生血管形成关系的研究

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后不同时间脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达以及血管新生情况，探讨HIBD时脑组织VEGF蛋白表达与血管新生之间的相互关系。方法7日龄Wistar大鼠176只随机分成实验组（n=88）和对照组（n=88），两组分别在缺氧缺血（HI）后0、4、8、12、24、48、72h及7、14、21、28d（每个时间点8只）应用免疫组织化学染色方法检测VEGF蛋白的表达及血管新生情况。结果正常7日龄Wistar大鼠于脑组织多种细胞的胞浆中可见VEGF表达，9日龄时达高峰；HIBD后VEGF蛋白于HI后4h表达逐渐增加，于48h达高峰后逐渐下降，并且于HI后4h～14dVEGF表达明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。正常新生大鼠脑皮质中新生毛细血管数各时间点平均为3～8条／HP；而实验组于HI后3～28d的新生血管数为10～12条／HP，显著多于对照组（P〈0．01），并于HI后4～72hVEGF表达程度与新血管形成之间呈显著正相关（r=0．928，P〈0．05）。结论正常7～35日龄新生大鼠脑组织内有不同程度的VEGF蛋白表达。HI可诱导VEGF表达增加：VEGF参与了HIRD后腩组织新生血管的形成。     

缺氧缺血新生大鼠神经元自噬基因表达节律及调控机制

目的通过新生大鼠缺氧缺血脑损伤后神经元自噬基因和节律基因的表达,探讨缺氧缺血引起神经损伤的新机制。方法将12只Sprague-Dawley大鼠随机分为缺氧缺血组和假手术组,每组6只。采用结扎并切断大鼠右侧颈总动脉并给予低氧处理的方法建立体内缺氧缺血脑损伤模型。Western blot检测两组大鼠大脑皮层和海马组织节律蛋白Clock表达情况。体外培养大鼠神经元细胞,随机分为氧糖剥夺(OGD)组和对照组,OGD组加入无糖无血清DMEM培养基模拟细胞缺血状态,并给予低氧处理建立体外缺氧缺血脑损伤模型。采用Western blot检测两组不同时间点自噬相关蛋白Beclin1和LC3,以及节律基因Clock蛋白表达情况。应用si RNA技术抑制神经元Clock蛋白表达后,检测Beclin1和LC3的表达变化。结果体外培养神经元Beclin1和LC3Ⅱ的表达呈现节律性波动;OGD处理后,体外培养神经元Beclin1和LC3Ⅱ的表达随着时间的延长逐渐升高,不再呈现节律性波动;与假手术组相比,缺氧缺血引起大鼠皮层和海马组织Clock表达降低(P0.05);体外培养神经元经OGD处理后,Clock表达也较对照组显著降低(P0.05);与阴性对照组相比,抑制神经元节律基因Clock表达后,自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达均显著下降(P0.05)。结论缺氧缺血引起神经元Beclin1和LC3Ⅱ表达节律紊乱,其机制可能与Clock参与调控Beclin1和LC3Ⅱ的表达有关。