载药脂质微气泡的制备及其应用

目的制备载紫杉醇脂质微气泡并测定其包封率、载药量、药物释放及观察其体内超声显像效果。方法制备载紫杉醇脂质微气泡,测定其包封率,载药量,粒径大小、分布和Zeta电位;观察苏丹黑对脂质微气泡的染色,以及超声辐照后苏丹黑的释放情况;观察辐照后载药脂质微气泡各层溶液药物的释放;并观察其在小鼠肝内的显像效果。结果载药脂质微气泡的浓度为2.3×109~3.5×109/ml,粒径范围为90%以上2~6μm,平均粒径为2.95μm。脂质微气泡紫杉醇的包封率大于90%,载药量为(26.5±0.7)%;Zeta电位为-(21.8±1.1)mV;苏丹黑染色后光镜下可见微气泡壁被染成黑色,超声辐照后微气泡稀释液变黑,并且超声辐照载药脂质微泡溶液后,上层和中间层的药物释放明显增加;静脉注射此载药微气泡后,小鼠肝可见良好、持续的增强显像效果。结论采用机械振荡法制备的紫杉醇脂质微气泡,包封率和载药量均较高,粒径分布好,体内显像效果好,超声辐照能促使微泡中的药物释放,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药。     

载竹红菌素脂质微泡的制备及对兔VX2肝肿瘤的显影实验

目的 制备一种载光动力药物的脂质超声微泡,测定物理特性,并观察其对兔VX2肝肿瘤的显影效果及过程.方法 采用机械振荡的方法 制备载竹红菌素脂质微泡,并测定其粒径大小、分布、Zeta电位和包封率、稳定性及超声辐照后药物释放情况.采用不同超声模式观察微泡在兔VX2肝肿瘤的显像效果及过程.结果 载药微泡的粒径为(1052.4±322.7)nm,Zeta电位为 (21.1±7.4)mV,包封率为(88.1±4.6)%,超声辐照能够促使微泡释放药物,对兔VX2肝肿瘤的显影效果好.结论 载竹红菌素脂质微泡包封率高、微泡能够释放药物、显像好,符合理想的药物载体,为实时监控下的体内定位光动力治疗疾病提供了一种新的思路.     

载血卟啉脂质微泡的制备及一般特性的实验研究

目的 制备一种载声动力药物的脂质超声微泡并测定其包封率、粒径大小、观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡的方法制备载血卟啉的脂质超声微泡,用荧光分光光度仪测定其包封率,用倒置显微镜及马尔文激光粒径测量仪测量粒径大小、分布和Zeta电位;观察60Co射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度和平均粒径的改变,并观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(3.24±0.79)×109/ml,粒径范围为1.5～5.3μm,平均粒径为(2.84±0.4)μm;脂质载血卟啉(1mg)微泡的包封率为(30.25±4.45)%;Zeta电位为-(15.4±2.4)mV.经60℃射线灭菌后观察微泡形态、粒径及包封率无明显变化,其平均粒径大小及包封率分别为(2.24±0.3)μm,(27.39±2.91)%.静脉注射此载药微泡后,小鼠肝脏可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法制备的载血卟啉脂质微泡,包封率较高,粒径分布均一,体内显像效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药.     

载10-羟基喜树碱脂质超声微泡的处方制备及一般特性研究

目的 研究载10-羟基喜树碱(HCPT)脂质超声微泡的处方制备工艺,筛选出最佳处方制备载药微泡,研究微泡的一般特性及显影效果,并检测微泡的药物包封率和载药量.方法 以机械振荡法制备载HCPT脂质超声微泡;采用正交试验优选处方;采用紫外分光光度法和反相高效液相色谱法测定微泡的包封率和载药量;在光学显微镜下计数并观察微泡的外观和分布情况;以马尔文激光粒径测量仪测量微泡粒径大小和Zeta电位;观察并比较微泡经60Co射线灭菌前后其外观、形态、平均粒径和包封率的改变;并观察微泡在兔肝脏的增强显影效果.结果 以最佳处方制备的载10-羟基喜树碱(2 mg)微泡的药物包封率为86.70%,载药量为21.70%;浓度为(3.07±0.58)×109/ml,粒径范围为(1.10±0.20)μm,平均粒径为1.10 μm;Zeta电位为-(3.90±0.80)mV;超声定向辐照微泡后,药物吸光度值明显增加;经60Co射线灭菌后观察微泡形态、平均粒径及包封率无明显变化;静脉注射此载药微泡后,兔肝脏超声显影持续增强.结论 采用机械振荡法制备的载HCPT脂质微泡,包封率和载药量较高,粒径分布均匀,体内显影效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药,为进一步研究奠定了基础.     

载诺帝脂质微泡的制备及特性的实验研究

目的 制备载诺帝(去甲二氢愈创木酸)脂质微泡并测定其包封率、载药量及观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡法制备载诺帝脂质微泡,测定其粒径大小、分布和Zeta电位、包封率、载药量;超声造影观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(2.53±0.52)×109个/ml,粒径为(2.61±0.32)μm,Zeta电位为+(17.52±2.04)mV;脂质微泡诺帝的包封率(27.1±2.01)%,载药量为(10.9±0.90)%;微泡经外周静脉注射后,兔肝可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法可以成功制备携带诺帝的脂质微泡,微泡可以通过肺血管床,符合静脉注射要求,在家兔体内获得了良好的显像效果.     

比较两种制备载紫杉醇超声微泡的方法

目的 比较能被超声击破的两种载紫杉醇超声微泡的制备方法,并评价其理化性质以及超声散射强度.方法 用单纯紫杉醇法Ⅰ号和三醋酸甘油酯溶解法Ⅱ号分别制备载紫杉醇脂质超声微气泡,测定其包封率、载药量、粒径大小、分布和Zeta电位、pH值,并行超声击破试验及兔VX2皮下肿瘤显像试验. 结果两种微泡显像无明显差异,可被低能量超声击破,但Ⅱ号(加入三醋酸甘油酯)脂质微泡较Ⅰ号(常规冷冻干燥法制备)载药微泡粒径显著减小[(1.07±0.38)μm vs(2.79±0.41)μm,P<0.01],表面电位增高[(19.10±0.32)mV vs (-5.90±0.21)mV,P<0.01],包封率和载药量显著增高[(95.00±1.22)% vs (36.10±4.74)%,P<0.01;(5.60±0.11)% vs (0.50±0.04)%, P<0.01]. 结论 三醋酸甘油酯溶解法制备的Ⅱ号微泡在局部药物释放中具有更大的应用价值.     

紫杉醇微泡超声空化增强乳腺癌化疗的实验研究

目的 制备性能稳定的亚微米级紫杉醇微泡超声造影剂,观察脉冲式超声激励下其在肿瘤局部的释放。方法 用三醋酸甘油酯溶解紫杉醇,加入脂质冻干粉,制成亚微米级的载紫杉醇超声微泡,对其进行形态学及质量检测。建立兔VX2乳腺癌模型,将24只模型兔随机分成4组,经耳缘静脉注射紫杉醇微泡或紫杉醇后,采用或不用脉冲超声于体表定点辐照,10 min后即刻剖取瘤块,用反相高效液相色谱法检测肿瘤组织中的紫杉醇含量。结果 载紫杉醇脂膜微泡的粒径为299.8~2383.5 nm,平均(1.07±0.38)μm,浓度9×10⁹~10×10⁹/ml,表面电位为(19.10±0.32)mV,包封率为(95.00±1.22)%,载药量(5.60±0.11)%。超声释放实验显示紫杉醇微泡加超声辐照组肿瘤组织内的紫杉醇含量明显高于其他各组的药物含量(P＜0.05)。结论 在低能量超声激励下,亚微米级紫杉醇载药微泡能实现在肿瘤局部高浓度释放紫杉醇,增强疗效并减少全身不良反应。     

自制脂质纳米级超声造影剂体外基本特性和造影增强的实验研究

目的 研究自制脂质纳米级超声造影剂的体外基本特性和体内造影增强效果,为今后的靶向显像和载药治疗研究提供依据.方法 (1)造影剂复溶后观察微泡形态,检测其平均粒径,计数其浓度;(2)微泡造影剂常温放置1周、1个月和3个月后复溶,观察其基本特性改变情况;(3)观察此造影剂增强正常兔肝脏显影的情况.结果 自制脂质微泡镜下观察:形态好,粒径范围400～950 nm,平均粒径650 nm,分布均匀,微泡浓度为(3.81±0.33)×109/ml.造影剂放置1周、1个月和3个月后复溶,基本特性无明显改变;造影剂复溶后24 h内微泡能保持较高浓度.体内造影结果显示能显著增强兔肝脏血管及实质显像.结论 此脂质纳米级超声造影剂性质稳定,显像效果好,有极大的开发应用价值,值得进一步研究.     

载10-羟基喜树碱靶向脂质微泡的制备及体外寻靶能力实验研究

目的 制备携人肝癌单抗Hab18载10-羟基喜树碱的脂质微泡,并观察其体外寻靶能力.方法 制备生物素化抗人肝癌Hab18单克隆抗体,检测其生物素化程度;用机械振荡法制备载药脂质微泡,以生物素-亲和素桥连方式构建携人肝癌单抗Hab18载10-羟基喜树碱的脂质超声微泡,检测其一般特性、包封率和载药量,以免疫荧光法检测微泡与抗体的连接情况,在光镜下观察靶向载药微泡的寻靶能力,并与载药非靶向微泡进行比较.结果 每个单抗分子平均可与13个生物素分子结合.载药靶向脂质超声微泡分布均匀,平均粒径为1.52 μm,包封率为76.32%,载药量为21.81%.免疫荧光法显示微泡表面可见明亮的红色环状荧光,体外寻靶实验显示该载药靶向微泡可与人肝癌7721细胞牢固结合.结论 携人肝癌单抗Hab18载10-羟基喜树碱的脂质超声载药靶向微泡可成功制备,其包封率和载药量较高,具有较强的体外寻靶能力.     

载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂对兔VX2肝癌增殖和凋亡的作用

目的 研究载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂对兔VX2肝癌的作用.方法 建立兔VX2肝癌动物模型,将实验兔30只随机分为6组,比较各组的肿瘤生长率、TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡、免疫组化法检测PCNA的表达情况.结果 治疗后载药微泡+超声组肿瘤生长速度明显减慢,其肿瘤生长率与其他各组相比差异有显著性(P<0.01);载药微泡+超声组的凋亡指数显著高于其他各组(P<0.01);载药微泡+超声组的肿瘤增殖受到明显抑制,其增殖指数明显低于其他各组(P<0.01).结论 载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂在超声作用下能延缓兔VX2肝癌的增殖、促进其凋亡,对VX2肝癌具有显著的生长抑制作用.     

载基因及穿膜肽脂质超声造影剂制备的实验研究

目的 研究自制的脂质超声造影剂载基因及穿膜肽的能力,评价其物理性质及显影效果.方法 采用机械振荡法制备载基因及穿膜肽的脂质超声造影剂,检测微泡形态、分布、浓度、粒径、表面电位及载基因和穿膜肽的能力,并观察其对兔心脏的显影效果.结果 自制载基因及穿膜肽脂质超声微泡造影剂的粒径为(2.27±0.38)μm,浓度为(3.07±0.42)×109个/ml,表面电位为(1.95±0.13)mV.该造影剂中基因的包封率为32%,穿膜肽的包封率为35%.体内造影显示该造影剂能有效增强心肌显影.结论 自制载基因及穿膜肽脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,载基因及穿膜肽的效率高,可作为携带基因等生物活性物质的载体材料.     

微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的初步研究

目的研究微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的可行性。方法 26只皮下VX_2肿瘤荷瘤兔随机分为超声微泡组、单纯超声组及假照组。超声微泡组经耳缘静脉推注微泡联合超声辐照肿瘤,单纯超声组以生理盐水代替微泡,假照组超声假照。各组治疗前、治疗后0、30和60min时间点对肿瘤进行超声造影,分析各时间点造影灌注峰值灰阶变化。结果超声微泡组肿瘤造影灰阶值(级)从治疗前的(67.8±13.3)级降至(29.7±20.1)级(P0.01),维持超过60min仍无明显再通;而单纯超声组、假照组肿瘤造影灰阶值无明显变化(P0.05)。结论微泡增强的超声空化能够有效阻断兔VX_2皮下肿瘤的微循环,其发生机制尚不清楚。     

Design and Evaluation of Doxorubicin-containing Microbubbles for Ultrasound-triggered Doxorubicin Delivery: Cytotoxicity and Mechanisms Involved

Drug delivery with microbubbles and ultrasound is gaining more and more attention in the drug delivery field due to its noninvasiveness, local applicability, and proven safety in ultrasonic imaging techniques. In this article, we tried to improve the cytotoxicity of doxorubicin (DOX)-containing liposomes by preparing DOX-liposome-containing microbubbles for drug delivery with therapeutic ultrasound. In this way, the DOX release and uptake can be restricted to ultrasound-treated areas. Compared to DOX-liposomes, DOX-loaded microbubbles killed at least two times more melanoma cells after exposure to ultrasound. After treatment of the melanoma cells with DOX-liposome-loaded microbubbles and ultrasound, DOX was mainly present in the nuclei of the cancer cells, whereas it was mainly detected in the cytoplasm of cells treated with DOX-liposomes. Exposure of cells to DOX-liposome-loaded microbubbles and ultrasound caused an almost instantaneous cellular entry of the DOX. At least two mechanisms were identified that explain the fast uptake of DOX and the superior cell killing of DOX-liposome-loaded microbubbles and ultrasound. First, exposure of DOX-liposome-loaded microbubbles to ultrasound results in the release of free DOX that is more cytotoxic than DOX-liposomes. Second, the cellular entry of the released DOX is facilitated due to sonoporation of the cell membranes. The in vitro results shown in this article indicate that DOX-liposome-loaded microbubbles could be a very interesting tool to obtain an efficient ultrasound-controlled DOX delivery in vivo.     

低能量脉冲式超声联合微泡对兔VX2肿瘤微循环的阻断作用

目的探讨低能量脉冲式超声联合微泡对兔VX2肿瘤微循环的阻断作用及其病理机制。方法将36只皮下VX2荷瘤兔随机平均分成3组:超声微泡组注入0.2ml/kg体质量微泡5ml,并辅以超声辐照10min;单纯超声组注入生理盐水5ml,辐照10min;单纯微泡组仅注入0.2ml/kg体质量微泡5ml,不进行超声辐照。CEUS观察各组治疗前、治疗后0、30min、60min时血流灌注情况,比较各时间点的灌注面积。治疗后即刻随机选取各组6只荷瘤兔处死,完整切取肿瘤,行病理学检查。结果超声微泡组治疗后即刻肿瘤血流灌注完全消失,灌注面积为0,但30min及60min后灌注有所恢复,各时间点治疗后灌注面积显著大于治疗前(均P<0.05);大体病理检查见肿瘤微血管扩张、管壁结构崩解,弥漫性充血、出血和肿瘤组织水肿,局部血肿,形成血栓等。单纯超声组及单纯微泡组治疗前、后造影剂灌注面积无差异,肿瘤内部未见出血、水肿等。结论低能量超声联合微泡能够阻断肿瘤微循环,可能是由于空化效应导致血管壁损伤,组织水肿对局部肿瘤血液循环产生阻力,从而阻断肿瘤血液循环。     

诊断超声联合微泡对兔VX2肿瘤的血流增强效应

目的探讨不同机械指数(MI)的诊断超声联合微泡对兔VX_2肿瘤的血流增强效应。方法选取健康雄性新西兰白兔40只,采用单侧大腿内侧瘤组织块接种法接种VX_2肿瘤,造模成功后将其随机分为实验1组(MI=0.3)、实验2组(MI=0.7)、实验3组(MI=1.4)及对照组,每组各10只。抽取0.2 ml"脂氟显"用5.0 ml生理盐水稀释后经耳缘静脉通道匀速推入,同时分别经不同机械指数辐照肿瘤,对照组予以超声假照,时间均为5 min。储存治疗前后动态造影图像,并用造影分析软件分析,记录峰值强度(PI)和曲线下面积(AUC)。结果实验1组、实验3组治疗前后PI比较差异均有统计学意义(P=0.028、0.018),实验2组、对照组治疗前后PI比较差异无统计学意义(P=0.994、0.978);实验3组治疗前后AUC值比较差异有统计学意义(P=0.009),实验1、2组及对照组治疗前后AUC值比较差异均无统计学意义(P=0.099、0.497、0.898)。结论低能量诊断超声(MI=0.3)联合微泡可丰富兔VX_2肿瘤血供,高能量诊断超声(MI=1.4)可减少血流灌注。     

载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声造影剂的制备及其特性检测

目的 制备一种载重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂,对其物理特性、载病毒的能力及在兔肝脏的显影效果进行研究.方法 采用机械振荡法及分层吸附法制备一种载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的脂质超声微泡造影剂,用DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径和浓度;检测其结合腺病毒的能力及观察对正常兔肝脏的显影效果.结果 载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声微泡分布均匀,平均粒径为(1.17±0.82)μm,浓度为(2.50±0.12)×10~9/mL;该造影剂的最大腺病毒结合的效率为30%;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肝脏实质回声.结论 自制载重组腺病毒的微泡造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载腺病毒效率高,为超声靶向微泡破裂基因释放技术的发展开辟新思路.     

微泡超声造影剂:一种新型的药物靶向载体

药物携载是目前重要的研究领域,如何使得药物安全、有效、靶向性地导入体内特定器官、组织并使其释放在靶细胞内是研究的重点.微泡超声造影剂作为一种新型的体内药物载体,受到国内外学者的广泛关注.本文对有关微泡超声造影剂作为药物载体的作用原理、制备要求、制备方法、特点和应用等方面的研究作了介绍.