应用二维电泳和质谱技术筛选乳腺癌相关差异表达蛋白质的初步研究

目的:通过分离并鉴定乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法:提取人乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在乳腺癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.结果:获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在乳腺癌组织中明显差异表达的20个蛋白点,共有13个蛋白点被成功鉴定,其中在乳腺癌组织巾高表达的为8个,低表达的为5个.结论:乳腺癌组织相对于癌旁、正常乳腺组织蛋白存在明显的差异,过蛋白质组学方法筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为用于早期诊断和评价预后的乳腺癌标志物.     

双向电泳联合串联质谱技术筛查人胃癌血清蛋白质标记物

目的:通过血清蛋白质组学技术寻找胃癌标记物,是目前肿瘤研究的热点.文中比较胃癌患者与正常人血清蛋白质的差异,以寻找候选血清标记物. 方法:①随机选取20例胃癌患者(胃癌组)血清,pTNM分期(Ⅰ～Ⅳ期)各5例,10例正常人(对照组)血清作对照.②血清样品处理:通过蛋白亲和柱去除血清清蛋白和IgG两种高丰度蛋白.③通过双向电泳进行差异比较,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)鉴定差异蛋白点.④利用免疫印记方法对筛选的标记物蛋白质进行验证. 结果:发现胃癌患者较正常人存在多个蛋白质点差异,差异蛋白质点质谱鉴定结果显示,补体 C4-B 前体在胃癌血清中含量明显增高;补体因子Ⅰ前体和血清结合珠蛋白前体则含量显著降低(P＜0.01). 结论:利用血清蛋白质组学技术可筛选出胃癌血清蛋白标记物,为胃癌的血清学诊断提供依据.     

利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物

目的 利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白.方法 收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质.结果 血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少.大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白( transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1).其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达.大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72) mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01) mg/L,P＜0.01].结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物.     

多囊卵巢综合征差异蛋白质组分析

筛选和鉴定与多囊卵巢综合征相关蛋白.方法:以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向进行血清蛋白质分离;图像分析软件PDQuest 7.3分析电泳图谱寻找有意义的差异蛋白点,运用MALDI-TOF-MS质谱鉴定,分析其意义.结果:选取具有明显差异的3个蛋白点进行质谱鉴定,经数据库查询,2个蛋白点获得了有意义的结果分别为载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,ApoA-I),热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70).结论:多囊卵巢综合征患者与正常妇女的血清蛋白表达存在差异,这些差异蛋白有可能是多囊卵巢综合征特异相关性蛋白,并有可能成为多囊卵巢综合征诊断的分子标志物.     

糖尿病肾病大鼠血浆差异表达蛋白的质谱分析

目的 探讨应用比较蛋白质组学分析糖尿病肾病大鼠血浆的差异表达蛋白,寻找和糖尿病肾病发生相关的蛋白质.方法 建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,将DN模型组和正常组大鼠血浆采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离血浆蛋白,经PD-Quest软件分析结合人工对比确认差异蛋白点,MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达的蛋白. 结果 成功建立2-DE血浆蛋白图谱,经质谱鉴定出8种差异蛋白,这些差异蛋白主要与氧化应激、炎症反应及脂质代谢紊乱等相关. 结论 双向电泳质谱技术可有效筛选糖尿病肾病相关蛋白,为进一步早期诊断提供依据.     

重度子痫前期初产妇血清蛋白质组学研究浅析

目的:利用蛋白质组学技术寻找敏感性高、特异性好的血清标志物作为重度子痫前期的诊断依据.方法:采用双向凝胶电泳与质谱联用的方法筛选鉴定子痫前期重度患者和健康孕妇血清中的差异蛋白质.结果:采用双向凝胶电泳共识别出13个差异蛋白质点,质谱分析鉴定出两组共有的差异蛋白为载脂蛋白、结合珠蛋白及白蛋白.结论:重度子痫前期患者血清中存在诸多差异蛋白质点,可通过进一步检测它们的水平对临床诊断提供参考.     

中分化肺腺癌及癌旁组织中差异蛋白质组学分析

目的分析人中分化肺腺癌及癌旁正常组织中的差异蛋白,寻找与肺腺癌发病相关的蛋白质。方法利用双向凝胶电泳法分离肺腺癌及癌旁正常组织中的蛋白质,通过图像扫描寻找差异2倍以上蛋白点,进而应用基质辅助激光电离飞行时间质谱得到肽质量指纹图谱,对比数据库确定差异蛋白。结果肺腺癌组织及癌旁正常组织平均蛋白点数分别为1 810±167、1 704±53。共筛选出18个差异蛋白点,其中13个差异蛋白点在肺腺癌组织中表达上升。结论双向凝胶电泳技术结合基质辅助激光电离飞行时间质谱可鉴定肺腺癌及癌旁正常组织的差异蛋白,为早期诊断肺癌、判断预后提供依据。     

双向电泳结合质谱法分析双相情感障碍患者血浆差异表达蛋白

目的 应用比较蛋白质组学分析静息相双相情感障碍(bipolar disorder,BD)患者和健康对照血浆的差异表达蛋白质,以期找到与情感发作无关但和疾病发生相关的蛋白质.方法 收集BD静息相患者(n=12)和健康对照者(n=20)空腹血浆,MARS柱去除7种高丰度蛋白质,运用2-DE分离血浆蛋白,PD-Quest分析后MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达的蛋白点,MetaCore软件进行生物信息学分析,Western blot验证部分差异蛋白结果.结果 经2-DE分析在静息相BD患者血浆中找到45个差异蛋白点,质谱鉴定出27个非冗余蛋白质,生物信息学分析显示差异蛋白主要与免疫调节相关,Apo A1和A2M经Western blot验证差异与2-DE结果一致且有统计学意义(P＜0.05).结论 与健康对照相比,BD静息相患者存在蛋白质谱的异常表达.差异表达蛋白提示BD静息相患者存在免疫功能异常及脂质代谢紊乱.     

人类巨细胞病毒感染的特异性血清蛋白差异表达

目的应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选在人类巨细胞病毒(HCMV)血清差异表达蛋白。方法收集HCMV感染者与正常人的血清各10例,去除高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记后采用液相色谱-串联质谱技术鉴定特异性蛋白,并比较蛋白的表达差异。结果共鉴定出362种蛋白质。对比发现有49种血清蛋白的表达差异超过两倍,其中蛋白表达显著上调的有19种,显著下调的有30种;这些差异蛋白中有6种与HCMV感染具有较高的相关性,分别是:脂联素、α-1抗胰蛋白酶、载脂蛋白E、C反应蛋白、结合珠蛋白和血清淀粉样蛋白A1。结论定量的血清蛋白质组学分析,可有效地获得HCMV感染者与正常人的血清蛋白质组差异表达图谱,筛选出与HCMV感染相关的特异性蛋白,为HCMV的早期诊断与治疗提供依据。     

早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱的建立及应用

目的构建早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱,初步探讨其在肝癌早期诊断中的临床意义。方法 (1)收集正常人、早期肝癌患者血清各12例,分别等量混匀为两组样本,去掉血清中的白蛋白和IgG。取血清各300μg与水化液充分混合,双向凝胶电泳,实验重复3次,银染,图像分析,筛选差异表达的蛋白点,构建早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱。(2)应用该模式图谱盲法对13例慢性肝脏疾病患者和10名健康人进行验证。结果筛选出两组间差异表达的蛋白点共38个,对表达量差异5倍以上的11个蛋白点进行分析,构建早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱。盲法分析示敏感性为92%,特异性90%。结论早期肝癌患者血清2-DE蛋白质图谱与健康人有一定差异,其差异表达的蛋白质及其特定组合构成有望成为早期肝癌诊断与判定预后的模式图谱。     

血清蛋白质指纹图谱预测模型在胰腺癌诊断中的应用研究

目的 血清蛋白质指纹图谱预测模型在胰腺癌诊断中的建立及应用.方法 应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,分析胰腺癌患者和健康对照者的血清蛋白质指纹图谱,从中筛选出与胰腺癌相关的血清差异蛋白质,通过生物信息学方法建立胰腺癌诊断预测模型,并通过盲法检测验证该模型的可靠性.比较该诊断预测模型与胰腺癌传统血清肿瘤标志物CA19-9对于胰腺癌诊断的灵敏度和特异度,评价其临床应用价值.结果 采用金属亲和捕获芯片(IMAC3),在胰腺癌患者血清中发现了12个差异表达蛋白质,其中有6个蛋白质诊断胰腺癌的价值高于CA19-9;应用决策树原理,建立了由4个节点、5个终结点组成的胰腺癌血清蛋白质指纹图谱诊断预测模型;经盲法检测,该模型在区分胰腺癌与健康对照者时的灵敏度是90.7%(39/43),特异度是89.6%(43/48),均优于传统的肿瘤标志物CA19-9,诊断预测模型与CA19-9的系列试验可以将特异度提高至97.9%(47/48),而平行试验可以将灵敏度提高至95.3%(41/43).结论 血清蛋白质指纹图谱预测模型为胰腺癌的诊断提供了一条快速、简便、准确的新途径,并有助于筛选新的肿瘤标志物.     

血清蛋白质质谱与支持向量机模型在胰腺癌检测上的应用

目的:为提高胰腺癌的早期检测率筛选新的标志物,应用蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术建立胰腺癌的血清蛋白质质谱模型。方法:用弱阳离子交换芯片(CM10)结合SELDI-TOF-MS技术检测了73例血清样本,其中31例胰腺癌,22例胰腺炎,20例健康人。用支持向量机方法建立胰腺癌和健康人以及胰腺癌和胰腺炎的辨别模型。结果:胰腺癌和健康人辨别模型用了3个蛋白质峰,辨别的敏感性和特异性均为100%,而胰腺癌和胰腺炎辨别模型用了5个蛋白质峰,辨别的特异性和敏感性分别为95.5%和93.5%。结论:SELDI-TOF-MS技术结合生物信息学方法检测胰腺癌具有较高的敏感性和特异性。     

血清Galectin-3对胰腺癌诊断价值的初探

目的：探讨联合检测血清半乳糖血凝素-3（galectin-3）水平、癌胚抗原（Carcinoembryonic Antigen,CEA）和糖链抗原199（Carbohydrate Antigen199,CA199）对胰腺癌的互补诊断价值。方法：ELISA法检测胰腺癌30例、胃肠道肿瘤18例、胰腺炎13例、正常人16例血清galectin-3浓度,同步测定血清CA199及CEA,比较galectin-3与CA199、CEA诊断胰腺癌的灵敏性及特异性,galectin-3与CA199和CEA对胰腺癌的互补诊断价值。结果：（1）血清galectin-3在胰腺癌患者的检出率为30.0%,而胃肠道肿瘤、胰腺炎、正常人检出率为0%;（2）ROC曲线分别确定galectin-3、CEA及CA199对良、恶性胰腺疾病的鉴别界值分别为0ng/ml、5.2ng/ml及35U/ml。Galectin-3、CEA及CA199在胰腺癌中诊断阳性率分别为33.3%、50.0%及63.3%;（3）血清galectin-3与CEA及CA199间均无相关性（P均〉0.05）,联合检测galectin-3、CEA及CA199对胰腺癌诊断具有互补价值。结论：胰腺癌患者血清Galectin-3升高,联合检测Galectin-3与CA199和CEA可提高对胰腺癌的诊断敏感性。     

胰腺癌不同进展期血清外泌体蛋白质组学分析

目的 筛选健康对照与不同进展期胰腺癌患者的血清外泌体差异蛋白质,绘制差异蛋白质表达图谱,并分析差异蛋白质参与的生物学过程。方法 采用非标记定量蛋白质组学进行外泌体蛋白质检测,筛选差异蛋白质并进行生物信息学分析;利用蛋白免疫印迹对与胰腺癌进展相关的蛋白质进行血清学验证。结果 在对照组、胰腺癌未转移组和转移组样品中共检测到2 242个蛋白质。通过不同分组差异蛋白质分析,共鉴定出664个差异具有统计学意义的蛋白质,主要参与囊泡介导转运、局灶黏附、细胞外基质(ECM)受体相互作用等信号通路。此外,鉴定到在3组间差异均有统计学意义的蛋白质5个,验证发现富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)在胰腺癌转移组外泌体中表达量较高。结论 对照组、胰腺癌未转移组和转移组间蛋白质表达存在差异,差异蛋白质主要富集于局灶黏附、细胞外基质受体相互作用等信号通路,且在3组间表达均有差异的外泌体蛋白质LRG1可能成为监测胰腺癌进展的血清学标志物。     

胰腺癌患者血清骨桥蛋白的检测及其临床意义

目的 探讨血清骨桥蛋白检测在胰腺癌诊断、转移评价和临床分期中的应用价值.方法 应用酶联免疫吸附法检测胰腺癌患者57例、胰腺良性疾病患者53例和正常人50例的血清骨桥蛋白（OPN）水平,比较各组之间OPN水平的差异.通过ROC曲线确定血清OPN临界值,计算OPN指标用于胰腺癌临床诊断和远处转移评价的敏感性和特异性.结果 胰腺癌患者血清OPN水平显著高于胰腺良性疾病患者和正常人群（P〈0.05）,而后两组之间OPN水平无明显差异（P〉0.05）.血清OPN水平变化与胰腺癌远处转移以及临床分期有关.血清OPN诊断胰腺癌的敏感性和特异性分别为83.0%和61.0%,预测肿瘤远处转移的敏感性和特异性分别为89.0%和57.0%.结论 血清OPN水平检测有助于胰腺癌的诊断、远处转移的预测和临床分期评估.     

胰弹力蛋白酶I和核糖核酸酶检测的临床价值

目的　探讨人胰弹力蛋白酶Ⅰ (Humanpancreaticelastase 1 ,HPE1 )放射免疫测定 (Radioimmunoassay ,RIA)和核糖核酸酶(Ribonuclease ,RNase)活性检测的临床价值。方法　参照Satake等建立的改良HPE1RIA和Thomas等的改良酸溶性产物法检测 82例正常成年人和 2 2 2例各类患者血清并分析结果。结果　 82例健康成人HPE1值为 2 3.8( 3.4ng L) ,RNase活性为 5 7.0 3( 1 2 .1 6 μ ml) ;急性胰腺炎和胰腺癌HPE1 值明显高于其他疾病 (P <0 .0 1 )。联合检测HPE1 、RNase活性可提高胰腺癌的检出率 ( 92 .47% )。结论　HPE1 RIA对急性胰腺炎有诊断价值 ,联合检测HPE1 、RNase活性检测对胰腺癌诊断有一定的临床价值     

血清CA199、CA125和CEA联合检测在胰腺癌诊断中的应用

目的：联合检测不同人群中血清糖蛋白抗原199(CA199)、糖蛋白抗原125(CA125)
和癌胚抗原（CEA）的水平,探讨其对胰腺癌诊断的意义。方法：检测56例胰腺癌患者(胰腺癌组)、56例良性胰腺疾病患者(良性胰腺疾病组)和56 名健康普查者(正常对照组)血清中的肿瘤标志物CA199、CA125和CEA水平,比较各组标志物的阳性率及3种标志物对胰腺癌诊断的敏感性和特异性。结果：胰腺癌组患者血清中CA199、CA125和CEA 的水平明显高于良性胰腺疾病组与正常对照组（P<0.05）。良性胰腺疾病组与正常对照组比较无明显差异。胰腺癌组血清CA199阳性率（87.50%）最高,其次为CEA（71.42%）,CA125的阳性率（60.71%）最低。胰腺癌组3种标志物阳性率显著高于良性胰腺疾病组和正常对照组（P<0.05）,良性胰腺疾病组与正常对照组比较无明显差异。CA199 的敏感性（87.50%）最高,CEA特异性（91.96%）最高。采用平行联合检测法可提高检测的
敏感性(95.12%) 和阴性预测值(90.47%),但特异性和阳性预测值下降;采用系列联合检测法可提高检测的特异性(92.86%) 和阳性预测值(89.19%),但敏感性和阴性预测值降低。结论：联合检测血清CA199、CA125和CEA的水平较单项检测可提高胰腺癌诊断的敏感性和特异性。     

血清miR-21和CA199对胰腺癌临床诊断的应用价值探讨

目的 探讨血清miR-21和CA199对胰腺癌临床诊断的应用价值,为临床应用提供参考依据.方法 选择2015年1月至2016年6月在该院就诊的胰腺癌患者124例(癌症组),良性胰腺疾病患者100例(良性对照组)以及同期健康体检者100例(健康对照组)作为观察对象.采集其空腹静脉血,检测其血清中CA199水平和miR-21的相对表达量,分别评价两个单独应用和联合应用时对胰腺癌的诊断价值.结果 CA199在良性对照组[(33.58±10.72) U/mL]和癌症组[(163.74±48.53) U/mL]患者较健康对照组[(7.83±4.26)U/mL]均有显著升高,miR-21仅在癌症组[(6.77±2.56) U/mL]中有显著高表达(P＜0.05);在单独应用时,miR-21对诊断胰腺癌的敏感度和特异度均优于CA199(P＜0.05);联合应用时,对诊断胰腺癌的应用价值有明显升高(P＜0.05).结论 miR-21是新近发现的一种标志物,其诊断价值优于CA199,两者联合应用有助于提高对胰腺癌的诊断鉴别能力.     

Clinical value of serum immunoreactive trypsin concentration

The clinical value of estimation of serum concentrations of immunoreactive trypsin was evaluated by studying 46 healthy controls, 23 controls in hospital, 44 patients with chronic pancreatic disease, and 184 patients with non-pancreatic conditions in which pancreatic disease commonly enters into the differential diagnosis. Serum trypsin concentration had a log normal distribution in the controls, and the calculated normal range was considerably wider than that previously reported. The concentration was abnormal in only 13 out of 27 patients with chronic pancreatitis and was extremely variable in patients with pancreatic cancer. Abnormal results occurred in 11% of the patients with non-pancreatic disease. Eighteen patients had a subnormal trypsin concentration, of whom six did not have pancreatic disease and 12 had either chronic pancreatitis or pancreatic cancer. There was no correlation between serum trypsin concentration and mean tryptic activity as measured by the Lundh test. Of 11 patients with pancreatic steatorrhoea, only seven had subnormal trypsin concentrations. There results suggest that the serum concentrations of immunoreactive trypsin has a low specificity and sensitivity for pancreatic disease and does no reflect the degree exocrine insufficiency in patients with proved chronic pancreatitis.     

血浆miRNA表达谱与胰腺癌相关性的研究

目的:探讨血浆miRNA的表达水平与胰腺癌发病的关联?方法:通过TLDA(TaqMan low density array )芯片系统筛选24例胰腺癌患者和24例健康对照间差异表达的miRNA,对差异表达miRNA采用实时荧光定量PCR法进行单个样本验证?结果:miR-451和miR-409-3p的表达水平在胰腺癌组和对照组中有显著的差别,P值分别为0.004 1和0.005 7?这2个miRNAs的组合以93.8%的受试工作者曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)将健康对照组和胰腺癌患者组分开(灵敏度为95.8%,特异度为91.7%)?结论:血浆miR-451和miR-409-3p的表达水平可有效区分胰腺癌患者和健康个体?