异鼠李素对肺癌的作用及其抗肿瘤机制的初步探讨

目的探讨异鼠李素体内外对肺癌增殖的影响及初步研究其抗肿瘤机制。方法将不同浓度异鼠李素加入体外培养的人A549细胞,用MTT法,^3H-TdR掺入法等测定体外抗瘤活性,用流式细胞仪、彗星电泳、免疫组化等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;采用Lewis细胞C57BL／6鼠移植瘤,观察药物对移植瘤的影响。结果异鼠李素处理A549细胞后,细胞形态出现典型凋亡特征,下调bcl-2基因,PCNA蛋白表达;上调抑癌基因P53、bax及caspase-3基因。实验观察到,异鼠李素在体内也具有明显的抗肿瘤作用,可显著降低癌细胞增殖指数,诱导Lewis肺癌凋亡,其机理可能与下调PCNA和bcl-2的表达,上调caspase-3、bax表达有关。结论异鼠李素抑制肿瘤细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用主要机制之一,是一种有较好前景的抗肿瘤的新型中药单体。     

异鼠李素对人肺癌细胞抑制作用的观察

目的研究异鼠李素对人肺癌YTLMC-90细胞的抑制作用并探讨其作用机制。方法采用细胞生长、克隆形成和^3H—TdR掺入实验,流式细胞术等方法研究异鼠李素对、YTLMC-90细胞增殖和凋亡的作用及其分子机制。结果异鼠李素抑制YTLMC-90细胞的生长和增殖,诱导凋亡,使bcl-2,c—myc、H—ras癌基因表达下降,增强bax、c—fos基因表达。结论异鼠李素可能通过下调bcl-2、c-myc、H-ras基因的表达,增强bax、c—fos基因表达来达到抑制YTLMC-90细胞增殖和生长,诱导凋亡和分化。     

P21蛋白和生存素在美伐他汀诱导人非小细胞肺癌凋亡中的作用

目的 研究P21蛋白和生存素（survivin）在美伐他汀诱导非小细胞肺癌（NSCLC）细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法 应用MTT法检测美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的抑制作用,应用流式细胞仪、透射电镜研究美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用流式细胞仪和RT-PCR检测P21蛋白、P21mRNA、生存素mRNA的表达。结果 MTT试验表明美伐他汀对A549、NCI-H520增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示美伐他汀诱导A549、NCI-H520细胞G0／G1期阻滞;Annexin V结果证实美伐他汀可诱导A549、NCI-H520细胞凋亡,而且凋亡率随剂量的增加而增加。美伐他汀对A549、NCI-H520细胞P21mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降。美伐他汀作用后生存素mRNA表达下降。加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用。结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径诱导NSCLC G0／G1期阻滞,抑制增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制P21蛋白异戊二烯化和下调生存素mRNA表达有关。     

乳腺癌缺失基因1对肝癌生物学行为的影响

目的探讨乳腺癌缺失基因1（deleted in breast cancer 1,DBC1）对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-DBC1的正义表达载体,转染肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测DBC1对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响,采用流式细胞术（FCM）检测DBC1对肝癌细胞SMMC-7721的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果与转染空载体的SMMC-7721细胞相比,pcDNA3.1-DBC1正义表达载体转染上调DBC1的表达,可显著抑制肝癌细胞（SMMC-7721）增殖,升高G1期细胞比例（51.0%vs 64.9%,P=0.002）,降低S期细胞比例（29.7%vs 14.0%,P〈0.001）,诱导细胞凋亡（8.8%vs 24.6%,P〈0.001）。结论 DBC1通过抑制肿瘤细胞增殖,阻滞细胞周期进展,促进细胞凋亡,抑制肝癌的发生和发展。     

外源性肝细胞生长因子对肝癌细胞p16基因表达水平影响

目的 探讨外源性肝细胞生长因子(HGF)能否调控肝癌细胞HEPG2 p16基因的表达水平.方法 以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,根据培养基中HGF的浓度不同,实验分组为:对照组、实验1组和实验2组,采用流式细胞仪(FCM)检测HGF的肝癌细胞生长周期;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HGF对肝癌细胞p16基因表达的影响.结果 HepG2细胞在10 pg/L和50 μg/L HGF的作用下,细胞周期出现明显改变,其中G0/G1期细胞明显多于对照组,而S期细胞减少.经HGF作用后肝癌细胞的p16基因表达上调.结论 HGF通过上调p16表达阻滞细胞分裂于G0/G1期,可能为其抑制人肝癌细胞HepG2的生长作用的重要机制之一.     

大黄酸衍生物RH - 01对鼻咽癌KB细胞生长抑制的研究

 目的研究大黄酸衍生物RH-01对鼻咽癌KB细胞的抑制作用.方法体外培养鼻咽癌KB细胞,应用MTT法测定IC50,荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布.结果 RH-01明显抑制KB细胞的生长,半数抑制浓度(IC50)约为(0.67±0.20)μmol/L;0.8 μmol/L RH-01作用24h即可明显诱导KB细胞的凋亡;流式细胞仪检测到细胞周期C2期阻滞明显.结论 RH-01对人类鼻咽癌细胞有极强生长抑制和诱导凋亡作用.     

紫杉醇衍生物对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用

目的：通过体外实验评价紫杉醇衍生物GT对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用。方法：应用MTT法测定GT对Hep-2细胞的增殖抑制作用；通过细胞形态学及流式细胞术考察GT对Hep-2细胞诱导凋亡的作用。结果：MTT实验显示GT对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用；当GT作用细胞后，在光镜下能观察到较为典型的细胞凋亡的形态学变化，如细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧贴于核膜周边，核碎裂、染色质断片化、凋亡小体形成等。流式细胞仪分析结果可见G2／M期的细胞比例明显增加，并出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。结论：GT对Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用，其效果与紫杉醇基本相同，可使细胞分裂阻滞于G2／M期，并诱导肿瘤细胞凋亡，有进一步研究开发的价值。     

槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的 探讨槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的机制. 材料与方法取对数生长期的肝癌Hep-G2细胞,分别与DMEM和含槐耳清膏不同浓度(1 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml,8 mg/ml)的DMEM培养液作用24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测肝癌细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡情况. 结果 MTT比色法检测结果 显示槐耳清膏作用Hep-G2细胞后,随着槐耳清膏药物浓度的增加,肝癌细胞生长抑制率增加,呈量效关系.流式细胞仪检测结果 显示槐耳清膏诱导Hep-G2细胞的凋亡率随着槐耳清膏药物浓度的增加,作用时间的延长,其诱导Hep-G2细胞的凋亡率逐步增加. 结论 槐耳清膏体外能抑制Hep-G2细胞增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡.槐耳清膏对肝癌有治疗作用.     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究

目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。     

低频超声联合顺铂对卵巢癌细胞影响研究

目的探讨低频超声联合顺铂对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人卵巢癌A2780细胞,将其随机分为对照组、低频超声组、顺铂组和联合组。低频超声组给予超声840 k Hz,0.75 W/cm23 min辐照;顺铂组给予顺铂5 n M,培养48 h;联合组给予低频超声+顺铂处理。应用CCK-8检测各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡以及细胞周期。结果与单独应用低频超声或顺铂比较,低频超声联合顺铂抑制人卵巢癌A2780细胞增殖的能力更强,更明显地诱导癌细胞的凋亡以及细胞周期S期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低频超声联合顺铂可抑制人卵巢癌细胞的增殖,诱导癌细胞的凋亡以及细胞周期S期的阻滞作用。     

氧化低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的细胞周期分析

目的 :研究氧化低密度脂蛋白 (0x -LDL)引起血管平滑肌细胞 (VSMCs)凋亡的效应及其凋亡细胞周期分析。方法 :采用电镜、流式细胞仪等观察Ox -LDL诱导VSMCs凋亡的细胞形态学改变及细胞周期变化。结果 :VSMCs在Ox -LDL(2 0mg/L)作用下 ,电镜下见凋亡细胞呈现核固缩凋亡小体的形态学特征。流式细胞仪检测发现Ox -LDL(2 0mg/L)引起细胞凋亡指数明显高于N -LDL(10倍 )。细胞增殖周期分析可见 ,Ox -LDL处理VSMCs 2 4h ,随着浓度的增加 ,G1期细胞百分率逐渐下降 ,而G2 /M期细胞百分率逐渐升高 ,提示Ox-LDL能将细胞阻滞在G2 /M期。结论　OX -LDL能诱导VSMCs凋亡 ,VSMCs的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关。     

蜂毒素对肝癌细胞磷脂酶A_2的影响

目的观察蜂毒素诱导细胞凋亡及对胞质型细胞磷脂酶A2(cPLA2)的影响。方法肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法了解蜂毒素对肝癌细胞增殖的影响,用流式细胞术测定细胞凋亡,采用RT-PCR检测cPLA2的表达。结果蜂毒素在体外能够抑制肝癌细胞的增殖活性,并有诱导细胞凋亡的作用,RT-PCR检测显示,蜂毒素mRNA水平均具有激活cPLA2的作用。结论蜂毒素具有诱导肝癌凋亡及激活cPLA2的生物活性。     

土茯苓提取物对消化道肿瘤细胞的体外作用

目的 探讨土茯苓提取物对消化道肿瘤细胞的体外作用.方法 采用MTS法,观察不同浓度的土茯苓提取物对4种消化道肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞调亡率.结果 土茯苓提取物对Eca-109、SGC-7901和COLO205细胞有增殖抑制作用,抑制率与药物浓度呈正比,对JF305细胞无明显增殖抑制作用.其可诱导Eca-109、SGC-7901细胞S期细胞明显增加,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加.结论 土茯苓提取物对Eca-109和SGC-7901细胞具有抑制增殖、诱导S期细胞增加和诱导细胞凋亡的作用;对COLO205细胞增殖也有一定抑制作用,但对JF305无明显增殖抑制作用.     

索拉非尼联合顺铂抑制肝癌HepG2细胞生长的体外研究

目的探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其可能的分子机制。方法实验细胞分为4组:空白对照组、索拉非尼单药组、顺铂单药组、索拉非尼联合顺铂组。索拉非尼和顺铂单独或联合作用于细胞,以MTT法检测24、48、72、96h时间点药物对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测24、48h时间点的细胞周期与凋亡率。在药物作用后24h,用荧光染料罗丹明123(Rh123)染色细胞,流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),分光光度法检测caspase-3活性。结果索拉非尼及顺铂单独应用对HepG2生长均有抑制作用,且低剂量联合具有协同作用。联合用药可以使细胞周期阻滞于G0/G1期和G2期,且凋亡率明显高于单药组(P<0.05)。单独应用顺铂和索拉非尼均能使线粒体跨膜电位降低,而联合组作用强于单药组(P<0.05)。药物作用后caspase-3活性增高,联合组高于单药组(P<0.05)。结论索拉非尼联合顺铂能更好地抑制肝癌HepG2细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞、线粒体跨膜电位降低及caspase-3活性增加有关。     

紫杉醇对人肝癌细胞株MHCC97-H的细胞形态和周期的影响

目的研究紫杉醇对体外培养肝癌细胞MHCC97-H的细胞形态和细胞周期的影响,初步探讨其作用机制。方法（1）将MHCC97-H传代培养后,给予不同浓度的紫杉醇作用24h,透射电镜观察细胞形态特征;（2）不同浓度的紫杉醇分别作用MHCC97-H12、24、48h后,MTT法检测肝癌细胞的抑制率,并绘制药物浓度-细胞抑制率曲线;（3）不同浓度的紫杉醇作用MHCC97-H48h后,用流式细胞仪测定细胞周期的变化及凋亡情况。结果（1）随着紫杉醇浓度的提高,MHCC97-H的细胞伪足数量减少;（2）紫杉醇对体外培养的MHCC97-H生长具有明显抑制作用,并且存在剂量与时间依赖性;（3）紫杉醇可以将MHCC97-H阻滞于G2-M期,并促进其凋亡。结论紫杉醇可以将MHCC97-H大部分阻滞于G2-M期,并通过诱导肝癌细胞凋亡来协同发挥抗癌作用,同时使肝癌细胞伪足减少来降低其运动能力。紫杉醇可能是有潜力的抗肝癌生长及转移的药物。     

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的 研究小鼠节律基因Period2（Per2）对小鼠乳腺癌细胞（EMT6）的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法 将pcDNA3．1（＋）-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3．1（＋）入细胞的对照组。以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测nr2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 小鼠节律基因nr2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加。结论 本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。     

骨髓基质屏蔽白血病细胞抵抗药物诱导凋亡

目的:探索骨髓基质细胞抑制化疗药物诱导白血病细胞凋亡的可能机制.方法:体外分离培养骨髓基质细胞,与Jurkat细胞共培养.流式细胞仪检测DNR诱导Jurkat 细胞凋亡率和细胞周期分布.结果:共培养后骨髓基质细胞抑制DNR诱导的白血病细胞凋亡,而白血病骨髓基质保护效应强于正常骨髓基质细胞.共培养后Jurkat细胞出现G0/G1期阻滞.结论:G0/G1期阻滞是骨髓基质细胞保护白血病细胞的机制之一,但可能存在较细胞周期阻滞更复杂的机制.     

野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖影响

目的探讨野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖作用的影响及机制。方法采用CCK-8比色法、流式细胞术、Western Blot法检测野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖作用的影响。结果野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间-浓度依赖性;其浓度升高,细胞凋亡增加,G1期细胞增加,S、G2/M期细胞减少,抑制周期蛋白CyclinD1表达降低。结论野生猕猴桃根黄酮提取物可抑制胃癌MKN-49P细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期于G1期,其主要机制可能与抑制周期蛋白CyclinD1表达降低有关。     

60Coγ射线对大鼠星形胶质瘤细胞增殖抑制作用的机理研究

目的 研究^60Coγ射线对大鼠星形胶质瘤细胞的增殖抑制作用的机制。方法 ^60Coγ射线单次照射，分为对照组、4、16和64Gy组。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线。照射后48h采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布，免疫组化法检测P53及P21蛋白的表达。结果 16和64G主y组C6细胞出现明显的增殖抑制。随着吸收剂量的增大，凋亡比例显著增加（P〈0．01），G0／G1期的细胞比例增加，S期的细胞比例降低。野生型p53与p21随着照射剂量增加，表达增强。P53与P21蛋白表达强度呈正相关，相关系数斜率为0．889。结论 γ射线对大鼠星形胶质瘤细胞系C6细胞的增殖抑制通过诱导细胞凋亡和G1期阻滞实现，G1期阻滞的分子调控通路可能为p53-p21通路。     

去氢雌马酚对急性早幼粒白血病NB4细胞的增殖抑制作用及其初步机制研究

目的研究黄酮类化合物去氢雌马酚（dehydroequol）对急性早幼粒白血病NB4细胞的增殖抑制作用,并对其作用机制进行初步研究。方法应用噻唑蓝比色法及台盼蓝计数法观察去氢雌马酚及其结构类似物对不同肿瘤细胞增殖的影响,并应用细胞周期分析及细胞凋亡检测研究去氢雌马酚抑制NB4细胞增殖的机制。结果通过比较去氢雌马酚及其3个结构类似化合物对NB4细胞的增殖抑制作用。发现去氢雌马酚抗肿瘤活性最强,并且去氢雌马酚能显著抑制多种肿瘤细胞增殖,其中对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的抑制作用更显著,并能浓度与时间依赖性地抑制NB4细胞增殖,引起NB4细胞G1期阻滞并诱导细胞凋亡。结论去氢雌马酚对急性早幼粒白血病NB4细胞的增殖有很强的抑制作用,并且通过引起细胞G1期阻滞和诱导细胞凋亡而显著抑制NB4细胞的增殖。