呼吸道合胞病毒刺激体外淋巴细胞转化试验的初步探讨

<正> 继1966年Nowell发现植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)能刺激淋巴细胞出现母细胞转化现象之后,Rchrek证明,加入结核菌素或其纯蛋白衍生物(PPD)作为刺激原,进行淋巴细胞体外培养时也出现转化现象。这种淋巴细胞转化反应,与机体的细胞免疫性有密切关系。PHA为非特异性抗原刺激物,应用淋巴细胞在其刺激后的转化指数作为对机体细胞免疫功能的测定已广泛应用于临床;用特异性刺激因子(如结核菌素、病毒、细菌等)进行特异性淋巴细胞转化试验,国外也有报道。Gupta等应用PPD刺激末梢淋巴细胞,以淋巴母细胞转化指数作为结核性脑膜炎诊断的辅助证据。Scott和Welliver等采用纯化呼吸道合胞病毒(RSV)作为刺激原,应用~3H-胸腺嘧啶掺入法进行RSV特异性淋巴细胞转化试验以观察细胞免疫在RSV感染发病机理的作用,说明特异性抗原在体外刺激淋巴细胞转化可用以测定特异性细胞免疫功能。     

胃癌患者~3H—胸腺嘧啶核苷掺入法淋巴细胞转化试验初步研究

据报道,肿瘤发生发展与机体免疫状态有关,癌肿患者机体免疫状态低下。淋巴细胞对特异性或非特异性刺激原反应能在一定程度上反映机体细胞免疫状态。胃癌是常见消化道恶性肿瘤,我们应用植物血凝素(PHA)刺激淋巴细胞,使其转化为淋巴母细胞,这种转化细胞伴有蛋白质,RNA和DNA合成显著增加,能摄取大     

用氚化胸腺嘧啶核苷滤膜法测定淋巴细胞转化的研究

氚化胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入法测定淋巴细胞转化是常用的试验方法。体外培养淋巴细胞经非特异性刺激原植物血凝素(PHA)作用,T淋巴细胞能转化为淋巴母细胞,这种转化细胞的蛋白质、RNA和DNA合成显著增加。因此,能大量摄取胸腺嘧啶核苷以复制DNA,所以测定血液中淋巴     

结核杆菌抗原活化的γδT细胞的抗肿瘤活性

目的：探讨经结核杆菌抗原特异性活化的γδＴ细胞的抗肿瘤活性。方法：结核杆菌抗原（Ｍｔｂ－Ａｇ）、ＩＬ－２、ＰＨＡ做为刺激原,活化正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,用流式细胞仪分析活化后淋巴细胞的表型,用ＭＴＴ法测定活化淋巴细胞的杀伤活性。结果：Ｍｔｂ体外活化ＰＢＭＣ可于１８天获得大量淋巴细胞,且γδＴ细胞占有较高比例,对肿瘤细胞有较高杀伤活性。结论：用Ｍｔｂ为刺激原可获得大量γδＴ细胞,且在体外     

用不含有丝分裂原的白细胞间素2(LF-IL_2)分离、扩增和克隆小鼠特异性抗肿瘤细胞

过去在过继治疗中,遇到的最大阻障是如何获得足够的同源特异性抗肿瘤细胞。70年代中期,Morgan和Gillis等人发现用有丝分裂原(PHA或ConA)等刺激淋巴细胞所产生的白细胞间素2(IL2),能支持淋巴细胞在体外长期增殖,并保留原有免疫功能。     

基于细胞因子对介导同种异体反应的 T淋巴细胞的测定和富集及扩增

目的对同种异体外周血单个核细胞(PBMNCs)刺激后分泌细胞因子的T淋巴细胞进行测定、富集和扩增,为研究介导同种异体反应的T淋巴细胞提供新的途径.方法利用细胞因子分泌检测方法(CKSA),从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌干扰素-γ(IFN-γ)的T淋巴细胞;并对其进行磁性富集、扩增,再用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测其对原抗原的特异性.结果同种异体PBMNCs刺激后检测到分泌IFN-γ的T淋巴细胞水平较对照组明显升高[(1.12±0.13)% vs (0.23±0.07)%,P<0.05],进一步富集达(67.3±10.5)%,相对倍数为(93.8±22.1)倍.经过富集的细胞能够通过OKT3、抗CD28单抗和IL-2组合,在21～28 d扩增>600倍,扩增后的细胞保留与原相关异基因刺激细胞特异性反应,并具分泌IFN-γ的能力.结论利用CKSA从单细胞水平定量测定到显著升高的由同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN-γ的T淋巴细胞.这些细胞可以被有效地富集和扩增,并保留针对原抗原的特异反应性.     

同种抗原特异性T淋巴细胞克隆方法的建立

目的 建立抗原特异性T淋巴细胞克隆的方法。方法 以供体脾细胞作同种抗原,刺激受体外周血单个核细胞,用有限稀释法进行T淋巴细胞克隆。结果 获得3个T淋巴细胞株。经免疫组化分析,有2个细胞株为CD3^ CD4^-CD8^ 。另一个细胞株为CD3^ CD4^-CD8^-。后者经流式细胞仪分析纯度为97％。抗原特异性检测表明：用供体细胞刺激,克隆T细胞发生增殖作用;用无关个体细胞刺激,无增殖作用。结论 成功地建立了抗原特异性T淋巴细胞克隆方法。     

HBsAg刺激淋巴细胞转化试验在乙型病毒性肝炎疾病中的应用

体外培养的小淋巴细胞在某些非特异性刺激物如植物血凝素(PHA)或各种特异性抗原的刺激下,能够转化为淋巴母细胞,并且发生分裂现象。淋巴细胞转化为母细胞的转化率,可以用细胞涂片法或同位素掺入法测定。由于这种能转化的小淋巴细胞几乎都是T淋巴细胞,因此淋巴细胞转化试验可以作为了解机体细胞免疫功能的方法之一。     

转移因子的免疫学活性及其结构模型

转移因子(TF)被发现二十多年来,一直认为其特征是能够转移特异性细胞免疫反应。但近年来的研究结果提示,TF除具特异性免疫学活性外,还具多种非特异性免疫学活性,如增强或抑制淋巴细胞转化,诱导循环干扰素产生,刺激巨噬细胞释放淋巴细胞激活因子,增加K细胞活性等。     

杭州产商陆素生物学特性的研究

本文报告从杭州商陆鲜根中提取的商陆素(PWM-H)的生物学特性的研究结果.PWM-H具有较强的分裂原活性,能刺激淋巴细胞转化,3H-TdR掺入增高,刺激指数36～76;刺激B淋巴细胞分泌免疫球蛋白,分泌刺激指数2.5～3.0;刺激体外培养的淋巴细胞产生IL-2受体,培养72h后Tac阳性细胞可达40%左右.通过琼脂免疫双扩散试验及聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,证实PWM-H和PWM-西德为性质同一的物质,可用于体外淋巴细胞的研究工作.     

转化淋巴细胞的电子显微镜观察初步报告

机体受到某些抗原(如病毒、某些细菌感染、同种异体器官移植等)刺激时,在外周血液可出现致敏的淋巴细胞。在体外培养时,经特异性或非特异性抗原刺激后,也能使外周血液中部分小淋巴细胞的体积增大,转变成母细胞型的转化淋巴细胞,出现有丝分裂。关于这种细胞的形态、生化和免疫功能已有不少研究报道。我们用电镜进一步观察转化淋     

中国猕猴CD4~+ CD25~+调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应

目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记。将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28单克隆抗体刺激,体外培养7d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应。结果:PPD不仅能引起CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2T淋巴细胞也发生扩增。Tregs不仅能抑制CD3/CD28抗体诱导的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原特异性扩增。结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用。     

电刺激对机体痛阈和细胞中介免疫的影响

对28例针炙科患者合谷穴进行穿皮电刺激,在刺激前后各测痛阈,并取血分离淋巴细胞,进行酸性非特异性酯酶组织化学染色和抗人OK_(T4)单克隆抗体的免疫组织化学染色。结果表明患者经电刺激后痛阈提高明显(P<0.01),淋巴细胞的ANAE-F~+型,OK_(T4)型提高明显(P<0.01),而ANAE—D~+淋巴细胞降低(P相似文献   

第二讲 抗原

抗原是一类能刺激机体的免疫系统,产生抗体试致敏淋巴细胞,并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内、体外发生特异性结合的物质。抗原具有两种性能:①免疫原性,也称抗原性,即刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞的性能;②反应原性,也称免疫反应性,即与相应的抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的性能。同时具备上述两种性能的抗原称完全抗原,如细菌、病毒、动物免疫血清等。只具有免疫反应性而无免疫原性的物质称不完全抗原,也叫半抗原,如大多数多糖和某些药物等。半抗原与体内蛋白质结合,可获得免疫原性,成为完全抗原。     

从分子生物学角度讨论中西医免疫治疗原理

核酸与免疫机能免疫系统可分为特异性免疫和非特异性免疫系统,特异性免疫包括细胞免疫和体液免疫。淋巴细胞分为B细胞和T细胞,B细胞是不依赖于胸腺细胞,T细胞是依赖于胸腺细胞。人们所熟悉的抗体是体液免疫系统,在抗体形成过程中,核酸起重要作用。例如:B淋巴细胞接受病原物刺激后,首先引起淋巴细胞脱氧核糖核酸(DNA)复制,然后把信息通过信使核糖核酸mRNA传给抗体生成细胞、浆细胞,在生成抗体的浆细胞中有许多RNA和核糖体,通     

淋巴细胞转化试验在白血病和非恶性疾病患者中的初步观察

近一二十年来,由于免疫学的迅速发展,对细胞免疫和体液免疫有了进一步的了解。一般认为,细胞免疫主要担负着肿瘤性疾患、病毒性疾病、霉菌性感染和某些细胞内寄生性细菌所致疾病的免疫。细胞免疫的细胞学基础是胸腺依赖淋巴细胞(T细胞)。当其在体内受到适宜抗原的刺激,则在引流部位淋巴结的胸腺依赖区发生胚变和增殖,产生大量对该抗原具有特异性的免疫淋巴细胞;当其与原抗原接触时,则发生细胞毒作用和释放一系列的淋巴     

氚化胸腺嘧啶核苷掺入法测定 人外周血淋巴细胞转化的影响因素

用氚化胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入法测定有丝分裂原PHA刺激人外周血淋巴细胞转化反应。观察到在PHA浓度为50μg/ml时,5×10~5单个核细胞/ml的转化刺激指数最高。当细胞数继续增加,其刺激指数增加不明显。用自然沉降与密度梯度离心两种方法分离的淋巴细胞对PHA 刺激的反应不同。在无PHA刺激的情况下,自然沉降淋巴细胞的自然转化较密度梯度离心法分离者为高。     

四种卡介苗重组疫苗对小鼠免疫原性的研究

目的研究esat6-卡介苗重组疫苗、mpt64-卡介苗重组疫苗、ag85a-卡介苗重组疫苗、ag85b-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法通过ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。结果以生理盐水、卡介苗为对照,用各卡介苗重组疫苗免疫小鼠后,各组小鼠体重变化与对照组相比差异无统计学意义。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,各组有其特异性抗体产生;ag85a-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗刺激B细胞产生抗体的水平;各卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d时达到最高水平。用不同抗原刺激各组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上,esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高,其它各组之间差异无统计学意义。结论结核分枝杆菌esat6、mpt64、ag85a、ag85b基因在卡介苗中都能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体,均能刺激T淋巴细胞产生细胞免疫。     

酞咪哌啶酮对豚鼠淋巴细胞转化的影响

本文用〔~3H〕-TdR掺入法淋巴细胞转化试验,研究了酞咪哌啶酮对植物血凝素和旧结核菌素刺激下的豚鼠淋巴细胞转化的影响,结果发现酞咪哌啶酮对两种刺激下的淋转都有显著的抑制作用,并以对特异性淋转(旧结核菌素刺激下)之抑制作用更强。因此,酞咪哌啶酮可以作为一种免疫抑制剂应用于临床。     

树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对大鼠原发性肝癌细胞的体外杀伤作用研究

目的　研究负载肿瘤抗原的树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对原发性肝癌细胞的杀伤效应，探讨其用于临床治疗的可行性，并为其应用提供实验依据。方法　联合应用粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子－α等，对大鼠骨髓单个核细胞进行体外诱导，同时加入大鼠原发性肝癌细胞株CBRH-7919细胞匀浆粗提物进行刺激，制备负载肿瘤抗原的树突状细胞后，活化同基因大鼠的脾脏细胞，制备特异性细胞毒性T淋巴细胞，并采用MTT法检测效应细胞对CBRH-7919的杀伤效果，同时与效应细胞对K562的杀伤率进行比较。结果　大鼠骨髓单个核细胞诱导的负载肿瘤抗原的树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对CBRH-7919具有较高的特异性杀伤作用。