p16及其相关基因在急性淋巴细胞白血病中的研究进展

肿瘤的发生是涉及多个基因、多个步骤异常的累积效应。p16抑癌基因及与其作用密切相关的细胞周期调节因子、其它癌基因、抑癌基因共同参与急性淋巴细胞白血病的发病。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失与临床特征相关性的研究

p16基因异常与人类多种肿瘤的发生与发展有关。作者用PCR方法检测了42例小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)p16基因3个外显子缺失状况,初步探讨了pl6基因缺失与小儿ALL的发病、临床表现及预后的相关性。结果表明,p16基因缺失在小儿ALL的发生率为40％,其中1例为exon1单一缺失。T-ALL中p16基因缺失为12/13(92％),远高于B-ALL,后者为5/22(23％),临床高危型ALL pl6基因缺失为17/19(89％),20例标危型ALL均未检测到p16基因缺失。实验证明,pl6基因缺失在小儿ALL(尤其是T-ALL)的发病过程中起重要作用。与临床的相关性研究表明,pl6基因缺失提示预后不良。     

急性白血病p16基因的研究

为研究p16抑癌基因在急性白血病中的变化,用ABC法研究了61例急性白血病细胞表面p16抗原的表达和用多重PCR法研究了51例急性白血病p16基因的结构缺陷。结果发现白血病患者p16抗原的表达明显低于正常人(P<0.001),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)又明显低于急性髓细胞白血病(AML)(P<0.05);但在AML和ALL完全缓解组(CR)和未缓解组(NR),p16抗原表达均无差异(P>0.05)。在30例ALL中仅发现4例p16基因第二外显子纯合子缺失,在21例AML未发现pl6基因的结构变化,说明p16基因的表达缺陷是急性白血病发生和发展中的主要变化,而结构异常并不是其演变中的必需分子事件。     

急性髓系白血病细胞p16基因结构及mRNA表达分析

为了解p16基因在急性髓系白血病(AML)发病中的意义,用PCR-SSCP和Northern blot方法分析了16例AML细胞p16基因结构及mRNA的表达。研究结果表明,16例未发现p16基因的缺失、突变。初治和复发的12例AML的p16 mRNA表达水平明显低于4例长期缓解者及正常对照者。1例p53突变AML的p16 mRNA有明显升高,提示p16基因在AML发病中可能不占重要地位,而在AML细胞抑制正常造血的逐步恶化中起一定作用,在p53突变时,其表达反馈性升高显示一种反馈环路失衡。     

淋巴组织肿瘤中p53、p73基因改变和表达及其意义

目的：探讨淋巴组织肿瘤中p53、p73基因改变和异常表达情况及其意义.方法：采用PCR-SCP法、RT-CR法、REP法、免疫组化法分别检测26例急性淋巴细胞白血病（ALL）、12例多发性骨髓瘤（MM）及12例淋巴瘤（MLs）标本中p53、p73基因改变及异常表达情况.结果：（1）26例ALL中仅有3例检测到p53基因点突变,12例MM标本中2例p53基因突变.未发现p73基因突变;（2）p73mRNA在淋巴组织肿瘤中总的阴性表达率为24%;（3）10例ALL和3例NHL在p73基因外显子1启动子区的CpG岛高甲基化,而正常对照组和12例MM标本均无甲基化存在;（4）对照组p53蛋白均为阴性.26例ALL中,p53蛋白阳性者20例;7例中高度恶性NHL中6例p53蛋白阳性.结论： p53基因在淋巴组织肿瘤中的突变率较低;MLs中p53蛋白表达和恶性程度、临床分期相关;p73mRNA在ALL/NHL中存在较高的阴性表达,,而在MM为阳性表达;p73基因转录失活与p73基因外显子1CpG岛高甲基化有关,不存在基因的突变和缺失;p73基因异常可能在MM的发生、发展中不是一个重要的分子事件.     

儿童急性淋巴细胞白血病p16基因甲基化及表达水平临床意义

目的 探讨p16基因甲基化及表达水平改变在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病机制中的作用.方法 ALL患儿76例,其中初发(uALL)患儿69例、复发(rALL)患儿7例,健康儿童28例纳入对照组.采用荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)检测外周血淋巴细胞p16基因mRNA表达;采用基于SYBR Green的甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测p16基因启动子甲基化水平.结果 ALL患儿淋巴细胞p16基因启动子甲基化水平高于健康儿童,uALL患儿p16基因甲基化水平低于rALL患儿(P＜0.05);ALL患儿p16基因mRNA水平低于健康儿童,uALL患儿p16基因转录水平高于rALL患儿(P＜0.05);p16基因转录水平与其启动子甲基化水平呈负相关关系(r=-0.63,P＜0.05);首次化疗即获完缓解ALL患儿p16基因甲基化水平低于未完全缓解患儿,而p16 mRNA表达水平高于后者(P＜0.05);p16基因低甲基化或高表达水平ALL患儿巩固强化治疗平均缓解时间明显低于p16基因高甲基化或低表达患儿(P＜0.05).结论 p16基因甲基化及表达低下可能与ALL发病有关,p16基因甲基化状态及表达水平检测或可用于儿童ALL预后评估.     

p73基因及其在急性淋巴细胞白血病中的研究进展

p73基因是p53基因家族中发现的一个新成员，是一个新的抑癌基因。由于其特殊的定位及其与p53结构和功能的相似性，人们对其进行了较深入的研究，发现其在急性淋巴细胞白血病（ALL）的发生、发展及预后等方面具有一定意义。本文拟对p73基因的研究进展及在ALL中的表达和意义作一综述。     

儿童急性淋巴细胞白血病患者p73基因异常表达的研究

目的 探讨儿童急性淋巴细胞因病（ALL）发生及发展的机制。方法 应用RT－PCR技术检测61例ALL细胞系和53例儿童ALL患者的p73基因mRNA表达情况，并结合患者的临床资料进行分析。应用DNA甲基化酶谱测定、亚硫酸氢钠修饰的PCR和PCR产物测序等技术对61例ALL细胞系p73基因第1外显子的甲基化进行检测。结果 61个ALL细胞系中p73mRNA阴性表达率为31．1％（61个中19个）；53例原发性儿童ALL患者中，p73 mRNA阴性表达率为26．4％（53例中14例），p73 mRNA阴性表达与ALL无病生存期、总生存期的降低有明显关系。61个ALL细胞系中，39．3％存在p73基因的高甲基化。正常淋巴细胞和不存在p73基因高甲基化的细胞系表达p73 mRNA，大多数高甲基化的细胞系不表达p73 mRNA。结论 儿童ALL患者中p73 mRNA存在较高的阴性表达，其主要机制为p73基因高甲基化，p73基因失活在ALL的发生及发展中起重要作用，p73 mRNA检测对判断儿童ALL患者的预后有一定临床意义。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16和p15基因缺失与转录异常的研究

目的　了解 p16 (MTS1)和 p15 (MTS2 )基因异常与小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)发生的关系。方法　用聚合酶链反应 (PCR)和Southernblot杂交法检测了 2 1例小儿ALL患者骨髓细胞 p16和 p15基因的缺失情况 ;用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测了 19例患儿 p15mRNA表达。结果　经PCR检测 ,p16基因外显子 1,2均缺失者 8例 (38 1% ) ,p15基因外显子1,2均缺失者为 11例 (5 2 3% )。Southernblot检测的结果与PCR的结果相一致。RT PCR检测发现 2例 p15基因不缺失患儿的样品无p15mRNA表达。 结论　p16和p15基因在ALL患儿中存在高频率缺失和转录异常 ,提示这两种基因在ALL患儿的淋巴细胞恶性转化中起重要作用     

宫颈癌组织P16基因突变分析

探讨Ｐ１６基因突变在宫颈癌发生中的作用及基突变的机制，利用点突变检测仪，水平和垂直板电泳对Ｐ１６基因的外显子１，外显子２的ＰＣＲ扩增产物作缺失和点突变发析，结果在２９例临床宫颈癌标本中的有８例发生缺失突变，４例发生点突变，突变率为４１％，其中１例外显子１为不完全缺失突变即有低于３４３ｂｐ的扩增带，Ｐ１６基因的发突变原因是因为其含有“ＣＧ”ＤＮＡ重复顺序，易发生ＤＮＡ重组及易位和重排。     

白血病p16基因失活的研究

为探讨白血病p16基因失活的发生率及其与疾病预后的关系,对48例初发或复发的白血病进行了p16基因失活研究。首先应用多重聚合酶链反应(MPCR)方法扩增p16基因纯合子缺失,然后用限制性内切酶-PCR方法检测p16基因甲基化。研究结果表明,48例患者中有p16基因失活者10例(占20.4％),其中p16纯合子缺失者5例(2例伴有9p丢失),p16基因甲基化者5例。有p16基因失活者,病情进展迅速,治疗效果差,患者在短期内死亡。结论提示:p16基因失活在部分白血病的发生、发展中起重要作用;有p16基因失活者预后较差;p16基因失活的检测对于判断预后具有重要意义。     

淋巴细胞恶性肿瘤p16基因纯合缺失和突变的研究

为了探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)和急性淋巴细胞白血病(ALL)中p16基因纯合缺失和突变情况,应用聚合酶链反应(PCR)技术与DNA单链构象多态性分析(PCR-SSCP)及DNA测序技术,检测了45例NHL及20例ALL p16基因改变情况。结果发现45例NHL中有4例存在p16基因纯合缺失,占8.9％,20例ALL中有5例存在p16基因纯合缺失,占25％。1例NHL在第2外显子上游第49密码子出现错义突变,由GCC突变为GAC。1例ALL在第2外显子上游65密码子出现错义突变,由GCC改变为GCA。研究结果表明,NHL和ALL中存在一定比例的p16基因纯合缺失,而p16基因突变率较低,提示p16基因纯合缺失在NHL和ALL发生发展中起一定作用。     

TotalPlex gene amplification using bulging primers for pharmacogenetic analysis of acute lymphoblastic leukemia

Genetic polymorphism among patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) is an important factor in the effectiveness and toxicity of anti-leukemic drugs. Genotyping of various polymorphisms that impact the outcome of anti-leukemic drug therapy (pharmacogenetics) presents an attractive approach for developing individualized therapy. We developed an easy and accurate method of analyzing multiple genes using a small amount of DNA, which we termed TotalPlex amplification. We used 16 pairs of specific bulging specific primers (SBS primers) for simultaneous amplification of 16 loci in a single PCR tube. Sixteen single nucleotide polymorphisms (SNPs) (CYP3A4*1B A>G, CYP3A5*3 G>A, GSTP1 313 A>G, GSTM1 deletion, GSTT1 deletion, MDR1 exon 21 G>T/A, MDR1 exon 26 C>T, MTHFR 677 C>T, MTHFR 1298 A>C, NR3C1 1088 A>G, RFC 80 G>A, TPMT 238 G>C, TPMT 460 G>A, TPMT 719 A>G, VDR intron 8 G>A, VDR FokI T>C) that have been implicated in the pharmacogenetics of ALL therapy were analyzed by TotalPlex amplification and SNP genotyping. We successfully amplified specific gene fragments using 16 pairs of primers in one PCR reaction tube with minimal spurious amplification products using TotalPlex amplification coupled to a multiplexed bead array detection system. The genotypes of 16 loci from 34 different genomic DNA (gDNA) samples derived using the TotalPlex system were consistent with the results of several standard genotyping methods, including automatic sequencing, PCR restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis, PCR, and allele-specific PCR (AS-PCR). Thus, the TotalPlex system represents a useful method of amplification that can improve the time, cost, and sample size required for high-throughput pharmacogenetic analysis of SNPs.     

Prevalence of obesity in young adults with acute lymphoblastic leukemia

Summary We studied the hormonal pattern of nine patients with acute lymphoblastic leukemia. The patients were treated with standard therapeutic regimens. They were overweight by a mean of 52% at the end of the consolidation treatment, and this persisted after a followup of 2 years. The only endocrine alteration observed was a moderate decrease in serum testosterone levels in male patients. The other parameters studied were in the normal range. We conclude that prolonged treatment with high doses of corticosteroids, which have a depressive effect on metabolism, was responsible for the obesity.     

儿童急性淋巴细胞白血病AKAP12启动子区域异常甲基化

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中A激酶锚定蛋白12（AKAP12）基因启动子区域CpG岛异常甲基化情况及其与临床病理参数之间的关系。方法用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测儿童ALL患者骨髓和对照骨髓以及淋巴细胞白血病细胞株6T—CEM中AKAP12基因启动子区域CpG岛甲基化状态,并采用亚硫酸盐测序法检测启动子区域发生甲基化的频率。采用荧光定量逆转录PCR（FQ—RT—PCR）检测6T—CEM中,经过甲基化酶抑制剂（5-Aza—CdR）处理后,AKAP12恢复表达的情况。结果32例ALL患者MSP结果显示AKAP12基因甲基化比率为62．5％（20／32）,但与患者的临床病理学参数均无显著相关。经过5-Aza-CdR处理后,可使6T-CEM中AKAP12恢复表达,且表达强度与剂量成正比。结论AKAP12基因启动子的异常甲基化与ALL的发生有密切的联系,AKAP12基因启动子甲基化有望成为一个诊断ALL的分子标志物。     

儿童急性淋巴细胞白血病复发的研究进展

儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的治愈率不断提升,而复发成为ALL诊疗的瓶颈。本文从发病机理、危险分层、治疗进展三方面回顾分析了近十年关于儿童急性淋巴细胞白血病复发的文献。发现部分基因组异常和耐药性相关,成为ALL复发的主要原因之一。早期复发较晚期复发预后要差,且检测微小残留白血病对复发有独立预测作用。治疗手段从化疗和造血干细胞移植发展到分子靶向治疗、细胞治疗和免疫治疗新的层次。所以,正确认识ALL复发的发病机理、依据危险程度分层次进行综合治疗是ALL复发目前诊疗的趋势。