血清总胆固醇测定的基质效应研究

目的 评价血清胆固醇常规方法对常见胆固醇参考物质的基质效应和常规方法的校准偏差.方法 用高效液相色谱测定血清总胆固醇的方法为对比方法,用胆固醇氧化酶法的6种常规测定系统为待评方法,测定30个新鲜冰冻人血清和37种制备物的总胆固醇.将两法测定新鲜人血清的结果作直线回归,求得Y预测值双侧95%的允许区间,评价制备物的基质效应.通过分析新鲜冰冻人血清样品常规方法和对比方法结果的差异,评价测定系统的校准偏差.结果 胆固醇制备物的基质效应依品种而异,冰冻血清几乎没有基质效应,冻干血清表现为负基质效应,乙醇基质校准液呈正基质效应.所有系统新鲜冰冻血清测定值同对比方法测定结果均呈较好的直线相关.A,B,E系统显负偏差,C,D,F系统显正偏差,但偏差大多处于临床可接受的范围内,可满足临床需求,个别测定系统需进行改进.结论 在我国血清胆固醇测定系统上,制备物的基质效应普遍存在,部分常规系统存在校准偏差.为实现检验结果的准确性和实验室间的可比性,临床标准化工作势在必行.     

血清尿素测定基质效应研究

目的 评价2007年全国室间质量评价(EQA)临床化学项目材料和13种市售制备物血清尿素测定在7种脲紫外速率法测定系统上的基质效应,并考察这些测定系统的校准偏差.方法 按美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP 14-A2试验方案,同位素稀释气相色谱质谱法作比对方法,7种尿素酶常规方法为待评方法,用比对方法和待评方法同时测定25份新鲜冰冻人血清和EQA材料及市售制备物.考察常规方法和比对方法测定EQA材料(或市售制备物)结果间的数量关系与它们测定新鲜冰冻人血清样品数量关系的一致程度,评价样品的基质效应.考察新鲜冰冻人血清样品常规方法和比对方法结果的差异,评价测定系统的校准偏差.结果 8种EQA材料和3种市售制备物对参加评价的所有测定系统无基质效应,1种市售制备物对所有系统都表现基质效应,其他样品视系统的不同而表现出不同的情况.7种测定系统中的6种都存在不同程度的校准偏差:同直线Y=X相比,系统A的斜率、截距偏差均小于5%,不存在明显校准偏差.系统B、C、D、F、G的斜率偏差小于5%,截距偏差大于5%,存在一定的校准偏差.系统E的斜率和截距偏差均大于5%,表现为存在校准偏差.结论 样品的基质效应和测定系统的校准偏差影响血清尿素测定的准确性和可比性.应充分重视基质效应和校准偏差对临床检验量值溯源的影响.     

血清肌酐测定基质效应的研究

目的 评价血清肌酐测定常规方法的校准偏差及肌酐制备物常在常规方法上的基质效应.方法 根据美国临床实验室和标准化协会(CLSI)EP14-A2评价方案,同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的方法为比对方法,15种常规肌酐测定系统(7种酶法,8种苦味酸法)为待评方法,测定40个新鲜冰冻人血清和36种制备物的肌酐浓度,评价制备物的基质效应和测定系统的校准偏差.结果 大部分商品制备物(29/30)在苦味酸法系统上表现出基质效应,少部分商品制备物(13/30)在部分酶法系统上表现出基质效应.我中心6个制备物在所有15个系统上均未观察到基质效应.所有常规系统新鲜冰冻血清测定值与比对方法测定值间均呈较好的直线相关,所有苦味酸法和部分酶法测定肌酐方法存在校准偏差.结论 基质效应和校准偏差存在于常规肌酐测定方法,必须重视这些因素,提高肌酐测定结果的正确度和可比性.     

血清总甘油测定基质效应的研究

目的 评价28种质控血清或校准物在8种总甘油常规检测系统下的基质效应,并评价常规系统校准的准确性.方法 以同位素稀释液相色谱串联质谱测定m清总甘油的方法为对比方法,用甘油氧化酶法的8种常规测定系统为待评价方法,测定20份人新鲜血清和28种制备物中的总甘油.将两法测定人新鲜血清的结果作直线回归,求得Y值双侧95%的预测区问,评价制备物的基质效应.通过分析新鲜血清样本的测定结果评价常规系统校准的准确性.结果 制备物在进口A、B、C系统和国产D系统巾表现正基质效应,进口D系统正、负基质效应均有以正效应为主,国产A、B系统正、负基质效应均以负效应为主,只有1个制备物对国产C系统有较弱的基质效应.同对比方法相比,国产A、D系统存在正校准偏差,进口A、B、C、D和国产B系统1竽在负偏差,国产C系统不存在校准偏差.结论 我国血清总甘油的部分常规检测系统存在校准偏差,部分质控物和校准物存在基质效应.为实现检验结果的准确性和实验室问的可比性,临床标准化工作势在必行.     

血清尿酸测定的基质效应

目的检测21种样本(血清及制备物)的尿酸水平,评价其对13种尿酸常规检测系统的基质效应。方法根据卫生行业标准WS/T356-2011,以同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)为比对方法,将不同厂商生产的13种尿酸检测试剂盒(均为酶法)分别与日立7180全自动生化分析仪组成常规检测系统,并以此为评价方法。样本包括4种校准品、5种室间质量评价(EQA)样本、6种质控品、3种制备物(1种猪血清和2种水溶液制备物)、1种美国国家标准与技术研究院(NIST)的标准参考物质(SRM)909c、2种国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)检验医学参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本,共计21种。用比对方法和评价方法分别测定40份新鲜冰冻血清和上述21种样本。将比对方法和评价方法尿酸测定结果进行直线回归分析,求得Y预测值双侧95%可信区间,评价血清及制备物的基质效应。结果 21种评价样本中有5种基质为新鲜血清或冻干血清的样本(2种EQA正确度验证血清、2种RELA样本和SRM 909c)在所有常规检测系统中均未观察到基质效应。2种校准品(朗道和迪瑞)仅在1种常规检测系统中有基质效应。5种EQA样本中除用于正确度验证的新鲜血清样本外,其他冻干血清样本在较多常规检测系统中存在基质效应。6种质控品中有4种在所有常规检测系统中无基质效应,2种高值质控品显示负基质效应。结论新鲜血清基质样本是可靠的检测样本,可在标准物质制备、质控品制备和EQA中使用。某些校准品在非配套系统中可能存在基质效应而产生校准偏差,因此在使用这些校准品前最好经过基质效应评价或方法验证。     

参考方法在丙氨酸氨基转移酶测定标准化中的应用

目的 调查不同检测系统使用经参考方法赋值的冰冻人血清样本作为校准品进行校准后,不同来源样本丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定结果的可比性与准确性的改变程度.方法 5份经4家候选参考实验室应用不含磷酸吡哆醛的ALT参考方法定值的冰冻人混合血清样本用于评价广州地区10个不同检测系统ALT催化活性结果的可比性与准确性.其中一个样本用作校准品校准各系统.比较校准前后各系统间新鲜血清样本与商品制备物测定结果的变异与偏倚.结果 校准后,各检测系统间新鲜血清测定结果的变异由11.90%～8.60%下降到6.78%～2.30%,偏倚则从-12.52%～-8.44%下降到-3.36%～-0.08%.校准后,常规系统测定新鲜血清结果与参考方法的回归曲线的斜率和截距比校准前更接近1和0;而商品制备物测定结果校准后的斜率和截距则无明显改善.结论 采用定值冰冻人血清样本作为校准品可以改善不同检测系统测定结果的准确性和可比性,但由于基质效应的存在不能改善商品制备物测定结果的可比性.     

选择适合测定系统的酶校准品

目的；研究使用不同的酶校准品校准不同的“仪器／试剂”测定系统的适用性。方法：用Dimension RXL临床生化测定系统和配套试剂以及RXL生化仪与Randox,科华，东菱，中生试剂组成的测定系统分别测定50份新鲜血清和BM cfas,Dade，测定结果，最后进行校正前后的结果比较和校准品可转换性分析。结果：50份新鲜血清校准前后ALT的CV为10．85％和23．07％，AST的CV为10．48％和24．4％，LDH和CV为3．89％和8．62％。CGT的CV22．63％和26．37％。校准后各项目结果的差异没有减小，反而有增大的倾向。结论：临床实验室必须使用适合自己测定系统的校准品才能保证校准结构的准确可靠。     

应用罗氏系统向国产试剂/7170A检测TC、TG准确度传递研究

目的探讨应用新鲜冰冻血浆作为国产TC、TG试剂校准品,建立血脂分析系统的可行性。方法按照EP 9-A文件要求和NCEP目标计划,以罗氏系统测定的新鲜血清结果为参考,将其准确度传递到以新鲜混合冰冻血浆为校准品的国产乙试剂/日立7170A的临时分析系统上。结果临时分析系统测定偏差TC:5.82,-0.21,-0.98;TG:20.17,4.79,1.77。TC、TG在中、高水平EA>预期偏差95%可信区间上限,偏差、预期偏差能够被NCEP目标接受。结论可以将罗氏系统测定结果通过新鲜混合冰冻血浆传递,建立可比对国产血脂试剂分析系统。     

重组人肌酸激酶MM同工酶在不同保存基质中的稳定性和互通性观察

目的观察重组人肌酸激酶MM同工酶(CK-MM)在不同基质中的稳定性和互通性,筛选出适合的基质制备校准品用于CK测定的标准化。方法将重组酶分别置于自制类人血清基质、抗冻基质、仿有证参考物配方基质及人血清基质中,用常规测定方法观察重组酶的稳定性;分别采用参考方法、常规方法(罗氏试剂和中生试剂)测定不同基质中的重组酶活性和不同浓度的人血浆总CK活性,观察重组酶在不同方法间的互通性。结果重组酶在自制类人血清基质和仿有证参考物配方基质中-20℃冻存可稳定25d和23d,在抗冻基质中至少可稳定240d。自制类人血清基质和仿有证参考物配方基质中重组酶在参考方法与常规方法间有互通性,人血清基质和抗冻基质中的低值重组酶样品在两方法间具有互通性。结论自制基质和有证参考物配方基质中的重组酶具有较好的稳定性和互通性,初步具备了校准品的基本特点。本研究为进一步研制CK测定的参考品,包括校准品和定值控制品提供了思路。     

天门冬氨酸氨基转移酶“改良参考方法”的建立及其用于测定结果的可比性研究

目的应用不含磷酸吡哆醛的参考方法评价不同实验室间天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定结果的可比性。方法参照国际检验医学溯源联合会（JCTLM）推荐的参考方法及日本临床化学会相关文件,建立不含磷酸吡哆醛的AST参考方法。根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）系列文件对该方法的精密度、正确度、线性范围等性能进行评价。应用该参考方法对新鲜血清进行赋值作为校准品校准广州地区10家实验室的常规检测系统,比较校准前、后新鲜血清、能力验证样本以及市售制备物质测定结果间的偏倚,进行检验结果的可比性评价。结果改良参考方法的批内不精密度〈1%,总不精密度〈2%;检测日本临床化学会酶参考品结果均在其不确定度允许范围内,参加参考实验室网络赋值计划测定结果与均值比较在等效限内。改良AST参考方法分析测量范围上限为413.6 U/L。校准前新鲜血清测定结果与参考方法测定结果之间偏倚〉20%的所有11个测定结果中,有10个测定结果来源于用理论K值计算酶活性的检测系统;校准前新鲜血清组最大偏倚为-25.0%,平均偏倚为9.3%;使用改良参考方法定值的酶校准品校准后,最大偏倚降为12.3%,平均偏倚降为2.1%。而能力验证样本和市售制备物中AST测定结果的平均偏倚在校准前后则变化不大,市售制备物组平均偏倚反而略有升高。结论应用参考方法定值的新鲜血清作为校准品进行校准是实现不同检测系统检验结果一致性和可比性的有效途径,非新鲜血清样本存在不同程度的基质效应。     

Reagent for the enzymatic determination of serum total cholesterol with improved lipolytic efficiency

We describe a sensitive method for quantifying the extent of cholesterol ester cleavage during enzymatic assay of total cholesterol in serum. Lipids are extracted from the assay mixture with chloroform/methanol (1/1 by vol), concentrated, then quantified by "high-performance" thin-layer chromatography. Although with conventional enzymatic reagents for determination of serum total cholesterol the hydrolysis of the cholesterol esters may be incomplete, a new enzymatic cholesterol reagent (Monotest Cholesterol, High Performance, Boehringer Mannheim) gives virtually complete cholesterol ester cleavage (i.e., greater than or equal to 99.5%). Use of this reagent with its improved lipolytic efficiency yields results for serum total cholesterol that are identical to those measured with a candidate reference procedure involving alkaline cholesterol ester saponification.     

Optimization studies of components in enzymatic cholesterol reagents containing cholesterol oxidase from Nocardia erythropolis,Streptomyces sp,or Pseudomonas fluorescens

Although enzymatic methods for serum cholesterol determination are widely used in clinical laboratories, little is known about the optimization of each component in enzymatic reagents. We investigated the optimal components in the reagents containing cholesterol oxidase isolated from Nocardia erythropolis, Streptomyces sp, or Pseudomonas fluorescens. The optimal components in the reagents are: cholesterol oxidase 250 (Nocardia erythropolis), 250 (Streptomyces sp), or 300 (Pseudomonas fluorescens) U/L, cholesterol esterase 200 U/L, peroxidase 10,000 U/L, sodium cholate 3 mmol/L, 4-aminoantipyrine 0.5 mmol/L, phenol 20 mmol/L, Triton X-100 2 mL/L, and phosphate buffer, pH 7.0. Lower reaction sensitivity and lower cholesterol linearity, <18.1 mmol/L (700 mg/dL), could be obtained by using lower components than those suggested above. Pseudomonas fluorescens were an improper source for cholesterol oxidase; either Nocardia erythropolis or Streptomyces was suitable cholesterol oxidase. We prefer using Streptomyces sp cholesterol oxidase because of its economical cost and longest reagent stability. Sodium cholate must be included in the enzymatic reagent to prevent turbidity. However, sodium cholate of >5 mmol/L will suppress the reaction resulting in low cholesterol linearity. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

Determination of plasma cholesterol: comparison of gas-liquid chromatographic, colorimetric and enzymatic analyses.

The efficacy of methods for plasma cholesterol analyses based on gas-liquid chromatographic (GLC) or enzymatic cholesterol determinations was tested on commercially available standard serum, plasma obtained in a study of an age stratum of the population and on plasma from a number of patients from an out-patient department. These results were compared with colorimetric cholesterol determinations on chloroform/methanol extracts from plasma using the ferric chloride/sulphuric acid reagent. The GLC-based procedure gave values 12% lower than the colorimetric determinations. This discrepancy seemed to be explained, to a marked extent, by the fact that cholesterol metabolites interfere with the colorimetric determinations. The GLC-based method was apparently accurate since it has the advantage of specificity and is easy to standardize with the internal standard technique. Enzymatic total cholesterol analyses gave slightly (2%) lower values than the GLC-based analyses, apparently because of an incomplete hydrolysis of cholesterol esters. Enzymatic analyses of free cholesterol gave similar results to those of the GLC-based method.     

两种试剂测定血清磷的方法对比及偏差评估

目的探讨在生化分析仪上使用A试剂和B试剂检测血清磷(Phosphor)的可行性。方法按照EP 9-A文件提供的方法,每天取临床标本8份,分别用两种试剂测定样本磷,共测定5 d,记录检测结果,并对两种试剂进行偏差评估。结果采用两种试剂测定的血清磷结果的相关系数为0.99,无方法间的离群点,测定结果的偏差在允许误差范围内。结论经过方法对比及偏差评估确定在该实验室使用B试剂代替A试剂是可行的。     

国产试剂在罗氏MODULAR P-800生化分析仪上的应用评价

目的评价国产试剂在罗氏MODULARP-800全自动生化分析仪（简称P-800）上应用的可行性。方法在P-800上同时使用国产试剂[丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）试剂由上海荣盛生物技术有限公司提供;总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、尿素（Urea）试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供]和罗氏原装配套试剂。2种试剂的方法原理、分析类型、试剂组分及试剂剂型均相同。以罗氏原装试剂测定}昆合血清作为量值传递载体,用其校准国产试剂后对cafs校准品赋值,并以赋值后的cafs校准品、国产试剂组成测定系统。对国产试剂进行精密度评价、线性测定、偏差评估以及与罗氏原装配套试剂进行相关性分析,并对2种试剂进行抗干扰能力比较。结果国产试剂无论检测低值还是高值血清其结果批内、批间变异系数（CV）均〈5％。与罗氏原装配套试剂同时检测40份临床样本,二者所测结果基本一致（P〉0．05）,相关系数（r）均〉0．975。国产试剂与罗氏原装配套试剂的比对实验结果在医学决定水平处的偏倚均低于允许误差。2种试剂的抗干扰能力无明显差异,r均〉0．975（P〉0．05）。结论国产试剂与罗氏原装配套试剂相比相关性好、偏差小、精密度较高、线性较宽,对脂浊和黄疸样本有较好的抗干扰能力;其检验结果具有溯源性和可比性,可以替代罗氏原装配套试剂。     

Influence of nonspecific reaction on determination of H2O2 using Trinder reagents

BACKGROUND: We examined two enzymatic reagents for cholesterol measurement that contained cholesterol oxidase. One of the reagents gave higher values by up to 11 mg/dl in samples of 109 out of 3119 patients examined. We found that the positive errors were caused by a nonspecific reaction that has not previously been recognized in the determination of H(2)O(2) using Trinder reagents, and we further discovered its mechanism. METHODS: We compared the total cholesterol concentration in 3119 patients between the 2 reagents. By examining the characteristics of the interferrent-susceptible reagent and affected patients' samples, we identified the cause and mechanism of the influence of the nonspecific reaction. RESULTS: The existence of potassium ferrocyanide in the reagent gave rise to positive errors when the concentration of unsaturated iron binding capacity (UIBC) in the patients' sample was <70 microg/dl. Moreover, ceruloplasmin in the patients' sample was found to cause a nonspecific reaction and its influence was proportional to the serum copper concentration. The two types of reagents compared in the present study included buffers with different metal chelating capacities; the one with the lower capacity gave an erroneous measurement. The buffer in the reagent without influence had been acting as a chelating agent. Therefore, the influence of the interferrent-susceptible reagent could be prevented by addition of a chelating agent (e.g. EDTA). CONCLUSIONS: Trinder reagents containing potassium ferrocyanide have been widely used for clinical diagnostic tests such as creatinine, uric acid and so on. These reagents would have similar problems. Some test items might have a greater influence than cholesterol reagent. Physicians should be aware of the risks of diagnostic mistakes due to these errors of measurement.     

甘油三酯和总胆固醇试剂对总胆汁酸检测结果的影响

目的探讨甘油三酯（triglyceride,TG）和总胆固醇（total cholesterol,TC）试剂对血清总胆汁酸（total bile acid,TBA）检测结果的影响及解决办法。方法 2008年1月-2009年10月采用魅力2000全自动生化分析仪,首先单独检测20份血清标本的TBA含量。然后分别检测TC和TG后进行TBA含量检测。最后设定特殊检测程序和清洗程序后再按TC→TBA,TG→TBA顺序进行TBA含量检测。结果单独检测20份血清标本的TBA结果均值为7.2μmol/L;按TC→TBA,TG→TBA顺序检测结果均值分别为13.5μmol/L和14.3μmol/L,单独和组合测量方法测定TBA结果有统计学意义（P〈0.05）。设定特殊检测程序和清洗程序后按TC→TBA,TG→TBA顺序检测结果均值分别为7.4μmol/L和7.5μmol/L,与单独测量TBA结果相比,无统计学意义。结论 TG和TC试剂对TBA检测产生干扰的原因是试剂成分中含有浓度较高的TBA,在魅力2000全自动生化分析仪上,设定特殊检测程序和清洗程序,能有效消除TG、TC试剂对TBA检测的影响。     

A sensitive enzymatic method for the determination of free and esterified tissue cholesterol

An enzymatic assay currently in use in clinical laboratories for quantitating total serum cholesterol has been modified for the determination of microgram quantities of tissue cholesterol. Two types of assays were developed. In the first, more generally useful method, lipids extracted with chloroform/methanol were solubilized by the addition of detergent and assayed for free and total cholesterol using laboratory prepared mixtures of reagents. Although different detergents were effective, it appears that Triton X-100 may be most universally applicable. In the second type of assay, commercially available reagent mixtures were employed for the determination of total cholesterol only. Results of both types of assays compare favorably with determinations using the colorimetric assay on 3β-hydroxysterols recovered from digitonides.